CC BY
18
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
Инфекция и иммунитет
следуемые значения снижались. Определение рецепторов к IL-2 и IL-4 и TNF на мембране лимфоцитов во все сроки исследования были в пределах контрольных значений.
Таким образом, наибольшее повышение уровня моноцитов и нейтрофилов экспрессирующих рецепторы к IL-2, IL-4 и TNF наблюдалось на 5—14 сутки в процессе формирования иммунного ответа у белых мышей при вакцинации В. abortus 19 BA.
КЛИНИКО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ГЛПС В САНКТ-ПЕТЕРБУРГЕ ПО ДАННЫМ СПб КИБ им. С.П. БОТКИНА ЗА 2011-2013 гг.
М.Е. Котов1, Е.В. Куликова1, А.Г. Шевалдин1, Л.Р. Городничева2
1ГБОУ ВПО Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова МЗ РФ 2ГБУЗ Клиническая инфекционная больница им. С.П. Боткина, Санкт-Петербург
Проанализированы 50 историй болезни пациентов с геморрагической лихорадкой с почечным синдромом (ГЛПС), находившихся на стационарном лечении в КИБ им. С.П. Боткина в 2011—2013 гг. Возраст больных составил от 24—77 лет (47,5±2,2 года). Преобладали мужчины (70%) трудоспособного возраста 24—59 лет (76%). У всех больных диагноз был подтвержден с помощью МФА или ИФА. У 88% установлен диагноз среднетяжелой формы, у 8% — тяжелой формы ГЛПС. В пригородную зону выезжали 68% больных, из них 28% не исключали контакта с грызунами. Преимущественно ГЛПС регистрировали в осенний период (36% в октябре).
На догоспитальном этапе предварительный диагноз ГЛПС был установлен лишь в 4 случаях. Частым диагнозом при направлении в стационар были ОРВИ (54%), у 5 пациентов подозревали пневмонию, у двух — псевдотуберкулез. У 94% больных наблюдалась фебрильная лихорадка, интоксикационный синдром проявлялся общей слабостью (90%), головной болью (56%), миалгиями (54%). Частые жалобы на кашель (30%) и гиперемия зева (52%) по-видимому определяли ошибочный диагноз ОРВИ. Вместе с тем, дискомфорт в пояснице и снижение остроты зрения, типичные для ГЛПС, отмечали соответственно 44 и 24% пациентов. Болезненность при поколачивании по пояснице выявили у 44% больных, снижение суточного диуреза — у 32%. У 6 больных обнаружена негеморрагическая сыпь и только у одного выявили петехии на переходной складке нижнего века. По данным УЗИ диффузные изменения интерстиция паренхимы почек обнаружены у 68%, увеличение печени — у 62% пациентов. Креатинин был повышен у 60% больных. Средний уровень креатинина сыворотки при поступлении составил 0,191+0,027 ммоль/л. Число тромбоцитов в среднем составило 172,4+19,8 х 109/л. При тяжелой форме ГЛПС отмечено более значимое снижение тромбоцитов (143,2+52,2 х 109/л), наиболее выраженная протеинурия и гематурия.
Таким образом, диагностика ГЛПС в неэндемичном регионе с преобладанием среднетяжелых форм (отсутствие клинических проявлений геморрагического синдрома) представляет сложную задачу. Вместе с тем, очевидна недооценка данных эпидемиологического анамнеза, типичных признаков поражения почек и снижения остроты зрения при ГЛПС.
ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ ВИДОВ DIROFILARIA REPENS И DIROFILARIA IMMITIS МЕТОДОМ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ
Е.Ю. Криворотова, С.А. Нагорный, А.В. Алешукина, С.О. Коршунов
ФБУН Ростовский НИИ микробиологии и паразитологии Роспотребнадзора, г. Ростов-на-Дону
Идентификация видовой принадлежности паразитов предопределяет успешную работу специалистов в диагностике и лечении пациентов. Определение микроорганизмов до вида с помощью масс-спектрометрии с матрично-активированной лазерной десорбцией/ионизацией (MALDI-TOF MS) хорошо изучено и широко используется в практике. В меньшей степени протеомный анализ применяется как таксономический инструмент для идентификации многоклеточных организмов. Определение вида членистоногих с использованием MALDI-TOF MS исследовано для дрозофил, мокрецов, мухи цеце и других насекомых.
Цель исследования: проверка возможности дифференциации видов Dirofilaria repens и D. immitis методом масс-спектрометрии.
Гельминтов D. repens и D. immitis многократно отмывали в физрастворе, гомогенизировали механически и ультразвуком. Для улучшения качества спектра проводили экстракцию в 20 мкл 70% муравьиной кислоты. Затем в пробирку добавляли аналогичное количество (20 мкл) 50% ацетонитрила. Гомогенаты центрифугировали при 13 000 оборотах в минуту в течение 2 мин 1 мкл супернатанта наносили на стальную пластину (Bruker Daltonics) в 2-х последовательностях. Мишень сушили в течение нескольких минут при комнатной температуре. Затем на каждый образец наносили 1 мкл матрицы (CHCA), просушивали и помещали в прибор MALDI-TOF MS для анализа. В общей сложности 16 образцов были подвергнуты MALDI-TOF MS анализу.
Профили масс белков получены с использованием Microflex LT MALDI-TOF MS (Bruker Daltonics) с программным обеспечением FlexControl (Bruker Daltonics). Профили полученного спектра визуализированы с помощью программного обеспечения Flex analysis 3.3 (Bruker Daltonics).
Качество спектров и интенсивность спектральных пиков согласуется у всех образцов одного вида. Профили спектров, полученные из белков дирофиля-рий, отличаются, что делает возможным дифференцировать по белковому профилю D. repens и D. immitis.
MALDI-TOF MS обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами определения видов: подготовка образца сравнительно проста; не требуются дорогостоящие расходные материалы и генетическая информация об организмах, рабочий процесс автоматизирован.
ИММУНОГЕННОСТЬ И КРОСС-РЕАКТИВНОСТЬ ВИРУСОВ ГРИППА С РАЗЛИЧНОЙ РЕЦЕПТОРНОЙ СПЕЦИФИЧНОСТЬЮ НА МОДЕЛИ МЫШЕЙ
В.А. Кузнецова, С.А. Кузнецова, И.Н. Исакова-Сивак
ФГБУ НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН, Санкт-Петербург
Известно, что вирусы гриппа птиц и человека имеют сродство к сиаловым рецепторам типа а2-3 и а2-6 соответственно. Возможность размножаться в клетках млекопитающих птичьи вирусы получа-
2014, Т. 4, № 1
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
ют главным образом за счет изменения рецепторной специфичности гемагглютинина (НА) с типа связи а2-3 на а2-6, чему способствует аминокислотные замены Q226L и G228S в НА1. Адаптацию вирусов гриппа к клеткам млекопитающих можно смоделировать в лабораторных условиях, например, при смене системы культивирования с куриных эмбрионов на культуру клеток. В работе были изучены два варианта вируса А/Сингапур/1/1957 (Н2К2), имеющих разную рецепторную специфичность. Секвенирование их геномов показало наличие аминокислотных различий в НА1 (Е156К, Q226L, G228S) и нейраминидазе (КА) (К19Т), где вариант EQG имел специфичность а2-3, а вариант KLS — а2-6. Адаптация вирусов к культуре клеток МОСК была проведена путем их 5-кратного пассирования. Секвенирование НА и КА пассажных вариантов выявило их гетерогенность, в связи с чем вирусы далее клонировали методом бляшек, и были получены гомогенные клоны обоих вариантов. Вариант KLS приобрел две дополнительные мутации в НА1 ^158Е и L321P), а вариант EQG — мутацию в НА1 в одном клоне (Р22^) и в НА2 во втором клоне (А96У). Для изучения им-муногенности и кросс-реактивности вирусов мышей заражали интраназально вариантами KLS, KLS-EP, EQG, EQG-S и EQG-V в дозе 1050ЭИД50, после чего на 21 день забирали сыворотки и смывы верхних дыхательных путей. Титры ^А и IgG антител определяли в ИФА. Титры сывороточных IgG антител вариантов KLS и KLS-EP были достоверно выше, чем у варианта EQG, тогда как у вариантов EQG-S и EQG-V — достоверно ниже, чем у EQG. Варианты EQG-S и EQG-V вызывали образование более высоких уровней локальных ^А антител, чем вариант EQG. Использование в качестве антигенов вирусов KLS и KLS-EP выявляло достоверно более высокие титры сывороточных IgG антител, чем антиген EQG. Кроме того, использование антигена EQG-S вместо EQG значительно снижало уровни IgG антител у мышей, иммунизированных вариантами KLS, EQG, EQG-S и EQG-V; это может свидетельствовать, что замена P221S является езсаре-мутацией. Таким образом, рецепторная специфичность вируса гриппа влияет на его иммуногенность и антигенность.
Работа поддержана грантом РФФИ № 14-04-32088 мола.
РАЗРАБОТКА ДИАГНОСТИКУМА ЭРИТРОЦИТАРНОГО ШИГЕЛЛЕЗНОГО ЗОННЕ
О.Ю. Кузнецова1, В.Н. Вербов1, В.Л. Львов2
1ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург 2 ООО «Гритвак», Москва
Ежегодно общее число случаев шигеллезов в мире оценивается в 165 млн. Почти 69% всех случаев заболевания и 61% всех летальных исходов приходится на группу детей младше 5 лет. Серологические методы подтверждения дизентерии являются ускоренными методами диагностики. Один из таких методов — реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).
Цель работы заключалась в разработке эритро-цитарного О-антигенного диагностикума для выявления специфических антител к шигеллам Зонне.
Диагностикум был получен путем сенсибилизации акролеинизированных эритроцитов кур хро-матографически очищенным липополисахаридным
О-антигеном шигелл Зонне в 0,01 М фосфатном буферном растворе, рН 7,2±0,2, (ФБР). Приготовление раствора антигена осуществлялось 2 методами, позволяющими повысить его сенсибилизирующую активность:
1. растворение навески сухого антигена в ФБР с последующей дробной стерилизацией в автоклаве текучим паром при 100°С, давлении 0,9 атм. по 30 мин в течение 3 дней;
2. растворение навески сухого антигена в 8 М растворе мочевины с последующим нагреванием в кипящей воде до полного растворения хлопьев антигена.
Специфическая активность диагностикумов, полученных из различным образом активированных антигенов, определялась методом РПГА с использованием 2 сывороток:
1. сыворотка диагностическая шигеллезная Зонне адсорбированная сухая для РА «Агнолла» в разведении 1:10 (Санкт-Петербургский НИИВС);
2. сыворотка диагностическая шигеллезная Зон-не неадсорбированная сухая из набора реагентов «Диагностикум эритроцитарный шигеллезный Зон-не антигенный, жидкий» в разведении 1:100 (ООО «Био-Диагностика»).
Титры сывороток при постановке с обоими диа-гностикумами совпали (1:1280 и 1:6400 соответственно). Это позволяет ввести в технологический процесс изготовления диагностикума активацию антигена 8 М раствором мочевины.
СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ВИРУСА ГРИППА, ЦИРКУЛИРОВАВШЕГО В ПОПУЛЯЦИИ СВИНЕЙ НА ТЕРРИТОРИИ КАЗАХСТАНА В 2013 г.
Т.В. Кузнецова, Т.И. Глебова, М.Г. Шаменова, Г.В. Лукманова, Н.Г. Кливлеева
РГПИнститут микробиологии и вирусологии КНМОН РК, г. Алматы, Казахстан
Проведено серологическое исследование проб сывороток крови, собранных в 2013 г. от свиней в свиноводческих хозяйствах трех областей Казахстана: Кустанайская, Карагандинская и Восточно-Казахстанская. Всего собрано 83 пробы от животных 2—4-месячного возраста (группа доращивания), из них 34 от свиней Восточно-Казахстанской, 30 — Кустанайской и 19 — Карагандинской областей. Пробы крови тестировали в реакции торможения гемаглютинирующей активности (РТГА) на наличие антител против вируса гриппа: А/Iowa/15/30 (Нsw1N1), А/СаПРогша/07/09 (НШ1) и А/^сошт/ 67/05 (Н3К2). Результат считали положительным при титре гемагглютинации > 1:20.
По данным проведенной РТГА, наибольшее количество положительных образцов зарегистрировано в Кустанайской области — восемь (26,6%), причем все они были серопозитивными к подтипу А/ ^а/15/30 (Нsw1N1) (титр РТГА составил 1:40-1:640). Антитела к вирусам гриппа А/СаП£огша/07/09 (НШ1) и А/Wisconsin/67/05 (Н3К2) отсутствовали.
В пробах крови, собранных от свиней в Восточно-Казахстанской области, антитела к подтипу А/ СаП£огша/07/09 (НШ1) были выявлены в одном образце (3%), четыре пробы (11,7%) оказались серопо-ложительными к штамму А/Wisconsin/67/05 (Н3К2). Титры в РТГА варьировали в пределах 1:40-1:160. Все исследуемые пробы из свиноводческих хозяйств
