Разработка диагностикума эритроцитарного шигеллезного Зонне Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

2014, Т. 4, № 1

Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»

ют главным образом за счет изменения рецепторной специфичности гемагглютинина (НА) с типа связи а2-3 на а2-6, чему способствует аминокислотные замены Q226L и G228S в НА1. Адаптацию вирусов гриппа к клеткам млекопитающих можно смоделировать в лабораторных условиях, например, при смене системы культивирования с куриных эмбрионов на культуру клеток. В работе были изучены два варианта вируса А/Сингапур/1/1957 (Н2К2), имеющих разную рецепторную специфичность. Секвенирование их геномов показало наличие аминокислотных различий в НА1 (Е156К, Q226L, G228S) и нейраминидазе (КА) (К19Т), где вариант EQG имел специфичность а2-3, а вариант KLS — а2-6. Адаптация вирусов к культуре клеток МОСК была проведена путем их 5-кратного пассирования. Секвенирование НА и КА пассажных вариантов выявило их гетерогенность, в связи с чем вирусы далее клонировали методом бляшек, и были получены гомогенные клоны обоих вариантов. Вариант KLS приобрел две дополнительные мутации в НА1 ^158Е и L321P), а вариант EQG — мутацию в НА1 в одном клоне (Р22^) и в НА2 во втором клоне (А96У). Для изучения им-муногенности и кросс-реактивности вирусов мышей заражали интраназально вариантами KLS, KLS-EP, EQG, EQG-S и EQG-V в дозе 1050ЭИД50, после чего на 21 день забирали сыворотки и смывы верхних дыхательных путей. Титры ^А и IgG антител определяли в ИФА. Титры сывороточных IgG антител вариантов KLS и KLS-EP были достоверно выше, чем у варианта EQG, тогда как у вариантов EQG-S и EQG-V — достоверно ниже, чем у EQG. Варианты EQG-S и EQG-V вызывали образование более высоких уровней локальных ^А антител, чем вариант EQG. Использование в качестве антигенов вирусов KLS и KLS-EP выявляло достоверно более высокие титры сывороточных IgG антител, чем антиген EQG. Кроме того, использование антигена EQG-S вместо EQG значительно снижало уровни IgG антител у мышей, иммунизированных вариантами KLS, EQG, EQG-S и EQG-V; это может свидетельствовать, что замена P221S является езсаре-мутацией. Таким образом, рецепторная специфичность вируса гриппа влияет на его иммуногенность и антигенность.

Работа поддержана грантом РФФИ № 14-04-32088 мола.

РАЗРАБОТКА ДИАГНОСТИКУМА ЭРИТРОЦИТАРНОГО ШИГЕЛЛЕЗНОГО ЗОННЕ

О.Ю. Кузнецова1, В.Н. Вербов1, В.Л. Львов2

1ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург 2 ООО «Гритвак», Москва

Ежегодно общее число случаев шигеллезов в мире оценивается в 165 млн. Почти 69% всех случаев заболевания и 61% всех летальных исходов приходится на группу детей младше 5 лет. Серологические методы подтверждения дизентерии являются ускоренными методами диагностики. Один из таких методов — реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).

Цель работы заключалась в разработке эритро-цитарного О-антигенного диагностикума для выявления специфических антител к шигеллам Зонне.

Диагностикум был получен путем сенсибилизации акролеинизированных эритроцитов кур хро-матографически очищенным липополисахаридным

О-антигеном шигелл Зонне в 0,01 М фосфатном буферном растворе, рН 7,2±0,2, (ФБР). Приготовление раствора антигена осуществлялось 2 методами, позволяющими повысить его сенсибилизирующую активность:

1. растворение навески сухого антигена в ФБР с последующей дробной стерилизацией в автоклаве текучим паром при 100°С, давлении 0,9 атм. по 30 мин в течение 3 дней;

2. растворение навески сухого антигена в 8 М растворе мочевины с последующим нагреванием в кипящей воде до полного растворения хлопьев антигена.

Специфическая активность диагностикумов, полученных из различным образом активированных антигенов, определялась методом РПГА с использованием 2 сывороток:

1. сыворотка диагностическая шигеллезная Зонне адсорбированная сухая для РА «Агнолла» в разведении 1:10 (Санкт-Петербургский НИИВС);

2. сыворотка диагностическая шигеллезная Зон-не неадсорбированная сухая из набора реагентов «Диагностикум эритроцитарный шигеллезный Зон-не антигенный, жидкий» в разведении 1:100 (ООО «Био-Диагностика»).

Титры сывороток при постановке с обоими диа-гностикумами совпали (1:1280 и 1:6400 соответственно). Это позволяет ввести в технологический процесс изготовления диагностикума активацию антигена 8 М раствором мочевины.

СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ВИРУСА ГРИППА, ЦИРКУЛИРОВАВШЕГО В ПОПУЛЯЦИИ СВИНЕЙ НА ТЕРРИТОРИИ КАЗАХСТАНА В 2013 г.

Т.В. Кузнецова, Т.И. Глебова, М.Г. Шаменова, Г.В. Лукманова, Н.Г. Кливлеева

РГПИнститут микробиологии и вирусологии КНМОН РК, г. Алматы, Казахстан

Проведено серологическое исследование проб сывороток крови, собранных в 2013 г. от свиней в свиноводческих хозяйствах трех областей Казахстана: Кустанайская, Карагандинская и Восточно-Казахстанская. Всего собрано 83 пробы от животных 2—4-месячного возраста (группа доращивания), из них 34 от свиней Восточно-Казахстанской, 30 — Кустанайской и 19 — Карагандинской областей. Пробы крови тестировали в реакции торможения гемаглютинирующей активности (РТГА) на наличие антител против вируса гриппа: А/Iowa/15/30 (Нsw1N1), А/СаПРогша/07/09 (НШ1) и А/^сошт/ 67/05 (Н3К2). Результат считали положительным при титре гемагглютинации > 1:20.

По данным проведенной РТГА, наибольшее количество положительных образцов зарегистрировано в Кустанайской области — восемь (26,6%), причем все они были серопозитивными к подтипу А/ ^а/15/30 (Нsw1N1) (титр РТГА составил 1:40-1:640). Антитела к вирусам гриппа А/СаП£огша/07/09 (НШ1) и А/Wisconsin/67/05 (Н3К2) отсутствовали.

В пробах крови, собранных от свиней в Восточно-Казахстанской области, антитела к подтипу А/ СаП£огша/07/09 (НШ1) были выявлены в одном образце (3%), четыре пробы (11,7%) оказались серопо-ложительными к штамму А/Wisconsin/67/05 (Н3К2). Титры в РТГА варьировали в пределах 1:40-1:160. Все исследуемые пробы из свиноводческих хозяйств