CC BY
28
УДК 616 - 092 + 616 - 097 - 08
С.Б. Николаев, Н.А. Быстрова, А.И. Конопля
ИММУНОМЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ ЭСПА-ЛИПОНА И ФОСФОГЛИВА ПРИ ОСТРОЙ ГЕМИЧЕСКОЙ ГИПОКСИИ
Курский государственный медицинский университет, 305041, ул. К. Маркса, 3, тел.: 8-(4712)-56-73-99, e-mail: main@kgmu.kursknet.ru, г. Курск
Нарушение энергообеспечения клеток связано с возникающими при острой кровопотере гипоксией тканей, усилением анаэробного гликолиза, истощением резерва углеводов. Индуцируемое гипогликемией ускорение ли-полиза приводит к развитию гиперлипидемии и разобщению окислительного фосфорилирования в митохондриях [9]. Возможности коррекции иммунных нарушений при острой кровопотере изучены в работах ряда авторов [2, 5]. Однако исследование механизмов возникающих при этом нарушений позволяет предлагать более эффективные фармакологические комбинации для влияния на последствия острой гемической гипоксии (ОГГ). Коррекция нарушений биоэнергетических процессов может быть достигнута введением соединений, активирующих этапы метаболизма основных энергоносителей. К числу таких соединений относится эспа-липон, действующим началом которого является а-липоевая кислота. Под ее влиянием происходит усиление окислительного и неокислительного распада глюкозы, активация пен-тозофосфатного цикла, ускорение утилизации липидов. Эффективность иммуномодулирующего действия регуляторов энергетического обмена должна в значительной степени определяться состоянием билипидного каркаса клеточных мембран [5]. Гемическая гипоксия вызывает значительное нарушение их структуры из-за усиления процессов перекисного окисления липидов. Поэтому есть основания ожидать, что применение стабилизаторов клеточных мембран повысит эффективность действия регуляторов энергетического обмена при ОГГ.
Высокой антиоксидантной и мембраностабилизиру-ющей активностью обладают растительные полиненасыщенные фосфолипиды. В клинической практике широкое распространение получил новый препарат с гепатопро-текторной активностью — «Фосфоглив». Входящий в его состав фосфатидилхолин восстанавливает поврежденные мембраны подобно мембранному клею, а натрия глицир-ризинат обладает антиоксидантными и иммуномодули-рующими свойствами.
Данные теоретические предпосылки определили изучение иммунометаболических эффектов сочетанного использования эспа-липона и фосфоглива в условиях ОГГ с предварительным исследованием эффективности изолированного применения каждого из препаратов для объективизации полученных результатов.
Материалы и методы
Исследования выполнены на крысах линии Wistar обоего пола. В контрольные и опытные группы включали по 10 животных одного возраста. ОГГ вызывали по Sapirstein кровопотерей 1,5% массы тела животного [12]. Препараты вводили крысам внутрибрюшинно в дозах: эс-па-липон — 50 мг/кг веса и фосфоглив — 200 мг/кг веса за
Резюме
Острая гемическая гипоксия приводит к развитию вторичного иммунодефицита, усилению перекисного окисления липидов, снижению показателей энергетического и антиоксидантного статуса эритроцитов, индуцирует появление иммуносупрессирующих свойств у легких эритроцитов. Комбинация фосфоглива и эспа-липона при гемической гипоксии нормализует иммунометаболические нарушения, отменяет иммуносупрессирующие свойства легких эритроцитов и индуцирует появление иммуностимулирующей активности у фракции тяжелых клеток.
Ключевые слова: гемическая гипоксия, иммунометабо-лические нарушения, коррекция, фосфоглив, эспа-липон.
S.B. Nikolaev, N.A. Bystrova, A.I. Konoplya
The immunometabolic effects of espa-lipon and phosphogliv in of acute hemic hypoxia
Kursk state medical university, Kursk
Summary
An acute hemic hypoxia results in the development of a secondary immune deficiency, increase of lipid peroxide oxidation, decrease of the indexes of energy and antioxidant erythrocyte's status, induces appearance of the immunosuppressive properties in the light fraction of erythrocytes. Combined introduction of Espa-lipon and Phosphogliv in this case normalizes immunometabolic disturbances, inhibits immunosuppressive properties of the light fraction of erythrocytes and induces appearance of the immunostimulative activity in the heavyweight erythrocyte's fraction.
Key words: hemic hypoxia, immunometabolic disturbances, correction, phosphogliv, espa-lipon.
1 ч до кровопотери и четырехкратно с интервалом в 24 ч после кровопотери. Крыс иммунизировали однократным внутрибрюшинным введением эритроцитов барана на первые сутки после моделирования ОГГ. О выраженности гуморального иммунного ответа и гиперчувствительности замедленного типа на эритроциты барана судили соответственно по количеству антителообразующих клеток в селезенке [4] и разнице масс регионарного и контрлатерального подколенных лимфоузлов на 5 сут после иммунизации [11]. Функциональную активность нейтро-филов крови оценивали по величине индекса активности фагоцитов, который определялся как произведение количества фагоцитированных частиц латекса и процента фагоцитирующих клеток, деленное на число подсчитанных клеток (минимум 100) [4]. В эритроцитах определяли со-
Рис. 1. Иммунометаболические эффекты эспа-липона и фосфоглива при ОГГ Примечания. 1) радиус окружности — показатели интактных крыс,
принятые за 100%; 2) — •--ОГГ; 3)--• — ОГГ + фосфоглив:
4)-----ОГГ эспа-липон; 5) - — ОГГ фосфоглив+эспа-
липон; 6) • — достоверность различий по отношению к группе интактных крыс, р<0,05; 7) все показатели исследовались на 5 сут после моделирования гипоксии.
держание малонового диальдегида [1], уровень АТФ [3] и активность глутатионредуктазы [8]. В сыворотке крови оценивали активность маркеров цитолиза гепатоцитов
— аланинаминотрансферазы и гаммаглутамилтранспеп-тидазы [7]. Иммуномодулирующие свойства легкой и тяжелой фракций эритроцитов [6] (ЛЭ — d<1,079 г/см3; ТЭ
— d>1,117 г/см3) крыс, подвергнутых острой гемической гипоксии (КПОГГ), определяли путем трехкратного (с интервалом в 24 ч) внутривенного введения (по 108 кл./ кг массы) интактным аллогенным реципиентам, которых иммунизировали эритроцитами барана в последний день введения аллогенных эритроцитов. Достоверность статистических различий средних арифметических величин оценивалась с помощью однофакторного дисперсионного анализа ANOVA, критерия Ньюмена-Кейлса и Стью-дента с поправкой Бонферрони.
Результаты исследования
У КПОГГ установлена супрессия формирования гуморальной и клеточной форм иммунного ответа, угнетение функциональной активности нейтрофилов, усиление перекисного окисления липидов, снижение уровня АТФ в эритроцитах и появление маркеров цитолиза гепато-цитов. Фосфоглив не влиял на величину показателей, характеризующих оксидантный и энергетический статус эритроцитов КПОГГ, проявлял гепатопротекторные свойства и обладал умеренной иммуностимулирующей активностью. Эспа-липон нормализовал только энергетический статус эритроцитов, уменьшал проявления цито-литического синдрома гепатоцитов, не влияя на процессы перекисного окисления липидов и иммунный статус при острой гемической гипоксии. У КПОГГ, получавших эспа-липон и фосфоглив одновременно, показатели метаболического состояния эритроцитов, гепатоцитов и иммунной реактивности не отличались от контроля (рис. 1).
Рис. 2. Влияние эритроцитов КПОГГ, получавших эспа-липон и фосфоглив, на формирование иммунного ответа у интактных крыс
Примечания. По оси абсцисс: 1) — контроль; 2) — эритроциты КПОГГ; 3) — эритроциты КПОГГ, получавших фосфоглив; 4) — эритроциты КПОГГ, получавших эспа-липон; 5) — эритроциты
КПОГГ, получавших фосфоглив и эспа-липон. По оси ординат: % по отношению к группе интактных животных; * — достоверность различий (цифра указывает, по отношению к какой группе), р<0,05.
Острая гемическая гипоксия индуцирует появление иммуносупрессирующих свойств у ЛЭ и не влияет на иммуномодулирующую активность тяжелых клеток. ЛЭ КПОГГ, получавших фосфоглив, при аллогенном переносе супрессировали развитие обеих форм иммунного ответа и угнетали функциональную активность нейтро-филов в такой же степени, как и клетки КПОГГ, не получавших препарат. ТЭ КПОГГ, получавших фосфоглив, увеличивали фагоцитарную активность нейтрофилов и не влияли на иммунную реактивность, индуцированную эритроцитами барана. Эспа-липон уменьшал иммуносуп-рессирующие свойства ЛЭ КПОГГ и не влиял на свойства тяжелых клеток. При совместном введении фосфоглива и эспа-липона ЛЭ теряли иммуносупрессирующие свойства, а тяжелые приобретали способность стимулировать развитие гуморального и клеточного иммунного ответа, фагоцитарную активность нейтрофилов при аллогенном переносе (рис. 2).
Результаты и обсуждение
Результаты сочетанного использования двух препаратов показали, что фосфоглив оказывает селективное влияние на протективную активность эспа-липона в отношении функций иммуноцитов и эритроцитов при острой гемической гипоксии. Эти свойства обусловлены стабилизацией клеточных мембран фосфогливом, а, следовательно, и более эффективной работой связанных с ними ферментов, являющихся точкой приложения а-липоевой кислоты: фосфоглив и эспа-липон только при совместном применении нормализовали не только энергетический статус эритроцитов, но и показатели, характеризующие их про- и антиоксидантный баланс. Одной из составляющих иммунокорригирующего эффекта изученной комбинации является нивелирование энергетического дисбаланса иммуноцитов в условиях гипоксии, а второй не менее важной — изменение свойств клеток микроокружения — эритроцитов. Комбинация эспа-липона и фосфог-лива предотвращает появление иммуносупрессирующих свойств у ЛЭ и индуцирует появление иммуностимулирующей активности у тяжелых. Это свидетельствует о том, что эффекты данной комбинации в определенной степени опосредуются эритроцитами. При кровопотере в сыворотке появляются маркеры цитолиза гепатоцитов. Известно, что разрушение печеночных клеток сдвигает баланс метаболических иммунорегуляторных сигналов, генерируемых гепатоцитами, в сторону иммуносупрессии, реализующейся на уровне «гепатоцит — эритроцит» [9, 10]. Поэтому одним из механизмов иммуномодуляции исследуемой комбинации в условиях гемической гипоксии может быть ее гепатопротекторная активность.
Полученные нами результаты согласуются с данными о выраженной иммунометаболической эффективности совместного применения энергизаторов и антиоксидантов при физических нагрузках, голодании, отравлении гепатотроп-ными и гемолитическими ядами [5, 9]. Опираясь на литературные данные, при сопоставлении действия исследуемой комбинации препаратов с эффектом других фармсредств при ОГГ, можно отметить, что она превосходит по эффективности ретинола ацетат, филлохинон, лизоцим; сочетание лизоцима и филлохинона, лизоцима и менадиона, рибоксина и мексидола, рибоксина и гипоксена; и сопоставима с комбинацией рибоксина и кудесана, эссенциале и кудесана [2, 5]. При этом достоинствами указанной комбинации являются несколько точек приложения, что позволяет более эффективно корригировать нарушения, возникающие при ОГГ.
Выводы
1. ОГГ супрессирует гуморальную и клеточную формы иммунитета, угнетает функциональную активность нейтрофилов, усиливает перекисное окисление липидов и снижает показатели энергетического статуса эритроцитов, сопровождается развитием биохимического синдрома цитолиза гепатоцитов.
2. ОГГ индуцирует появление иммуносупрессирую-щих свойств у легких эритроцитов и не влияет на имму-номодулирующую активность тяжелых клеток.
3. Сочетанное использование фосфоглива и эспа-ли-пона нормализует иммунометаболические нарушения, развивающиеся при острой гемической гипоксии, отменяет иммуносупрессирующие свойства легких эритроцитов и индуцирует появление иммуностимулирующей активности у тяжелых клеток.
Литература
1. Бенисевич В.И., Идельсон Л.И. Образование перекисей непредельных жирных кислот в оболочке эритроцитов при болезни Маркиафава-Микели // Вопр. мед. химии. - 1973. - Т.19, №6. - С. 596-599.
2. Бровкина И.Л., Рыбников В.Н. Иммунометаболические эффекты, вызываемые лизоцимом, при острой кровопотере // Патол. физиол. и эксперим. терапия. -2004. - №2. - С. 14-16.
3. Виноградова И.Л., Багрянцева С.Ю., Дервиз Г.В. Метод одновременного определения 2,3-ДФГ и АТФ в эритроцитах // Лаб. дело. - 1980. - №7. - С. 424-426.
4. Фримель Г. и др. Иммунологические методы. - М., 1987. - 472 с.
5. Лазарева Г. А. и др. Иммунометаболические эффекты регуляторов энергетического обмена при нарушении гомеостаза. - Курск, 2006. 329 с.
6. Кобзев Т.В., Троицкая Н.А., Куприенко В.И. Методика разделения эритроцитов на возможные группы // Патология системы крови и кровообращения: сб. науч. тр. - Симферополь, 1978. - С. 49-51.
7. Лабораторные методы исследования в клинике: справ. [под ред. В.В. Меньшикова]. - М.: Медицина, 1987. - 365 с.
8. Макаренко Е.В. Комплексное определение активности супероксиддисмутазы и глутатионредуктазы в эритроцитах больных с хроническими заболеваниями печени // Лаб. дело. - 1988. - №11. - С. 48-50.
9. Прокопенко Л. Г. и др. Окислительный, энергетический и иммунный гомеостаз (нарушение и коррекция).
- Курск, 2003. - 336 с.
10. Прокопенко Л.Г., Конопля Н.А., Утешев Б.С. Влияние эссенциале и рибоксина на иммуносупрессирующие свойства тромбоцитов и эритроцитов при токсическом поражении печени // Эксперим. и клинич. фармакология.
- 2001. - Т. 64, №4. - С. 37-41.
11. Федосеева В.Н. и др. Руководство по иммунологическим и аллергологическим методам в гигиенических исследованиях. - М., 1993. - 319 с.
12. Sapirstein L.A., Sapirstein E.H., Bredemeyer A. Effect of hemorrhage on the cardiac output and its distribution in the rat // Circ. Res. - 1960. - Vol. 8. - P.135-148.
Координаты для связи с авторами: Николаев Сергей Борисович — канд. мед. наук, врач-хирург Курской областной больницы, тел. 8-(4712)-35-93-30, e-mail: nsb-kursk@yandex.ru; Быстрова Наталья Анатольевна
- доктор мед. наук, профессор кафедры биологической химии КГМУ, тел.: 8-(4712)-58-81-43; Конопля Александр Иванович — доктор мед. наук, профессор, проректор по учебной работе КГМУ, тел.: 8-(4712)-58-81-52.
□□□
