CC BY
135
IgY-технологии в медицине. Лечение и профилактика неинфекционных заболеваний
Каплин В.С., Каплина О.Н.
Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», Российская Федерация
Kaplin V.S., Kaplina O.N.
State Research Center of Virology and Biotechnology "Vector",
Russian Federation
IgY-technologies in medicine. Using the yolk birds antibodies in immunotherapy
Резюме. В предыдущем обзоре были описаны варианты использования желточных антител птиц при лечении инфекционных заболеваний. Но такие неинфекционные болезни и поражении как целиакия, ожоги, бронхиальная астма, артриты, ожирение и другие могут значительно снизить своё проявление под действием специфичных желточных антител. В литературе можно найти сведения об успешном применении IgY-антител не только в экспериментах in vitro, но и in vivo на животных и на человеке. Важным моментом при лечении является выбор антигена - это либо цитокины, либо ферменты, либо полисахариды, либо регуляторные белки, инактивация которых снижает или полностью подавляет патологический процесс. Лечение IgY-антителами по сравнению с лечением IgG-антителами не вызывает осложнений, связанных с активацией комплемента, ревматоидного фактора, Fs-рецепторов. В ряде работ для пассивной иммунизации применялись «гипериммунные яйца» - то есть яйца от кур, иммунизированных множеством антигенов. Такой подход требует серьёзного анализа и расширения сфер применения.
Ключевые слова: IgY-антитела, IgY-технологии, желточные антитела, пассивная иммунизация. Summary. In the previous review, variants of the use of yolk antibodies of birds in the treatment of infectious diseases have been described. But such non-infectious diseases and lesions like celiac disease, burns, bronchial asthma, arthritis, obesity and others can significantly reduce their manifestation under the action of specific yolk antibodies. In the literature, one can find Information on the successful use of IgY-antibodies not only in in vitro experiments, but also in vivo in animals and humans. An important point in the treatment is the choice of antigen - either cytokines, or enzymes, or polysaccharides, or regulatory proteins, inactivation of which reduces, or completely suppresses the pathological process. Treatment wtth IgY-antibodies compared with treatment with IgG-antibodies does not cause complications associated with activation of complement, rheumatoid facto, Fs receptors. In a number of works,"hyperimmune eggs" were used for passive immunization - that is, eggs from chickens immunized with a multitude of antigens. This approach requires serious analysis and expansion of the scope of application. Keywords: IgY-antibodies, IgY-technology, yolk antibodies, passive immunization.
Каждый год от неинфекционных заболеваний умирают около 40 миллионов человек, что составляет 70% всех случаев смерти в мире. Это сердечно-сосудистые, раковые, респираторные, аутоиммунные, воспалительные и неврологические заболевания. При этих нарушениях биофармацевтические препараты, в том числе антитела, занимают приоритетное место на рынке медицинских средств. Антитела являются перспективным терапевтическим вариантом, однако они относятся к числу наиболее дорогостоящих терапевтических продуктов. В последние годы большое внимание уделялось антителам от млекопитающих и только менее 2% от общего количества поли-клональных антител, полученных во всем мире, являются ^-антителами. Этот низкий выход продукции в основном является следствием трудностей выделения антител из комплексной матрицы яичного желтка. Хотя, например, в ветеринарии не добиваются высокой очистки 1д\-антител, а используют порошок иммунного желтка, полученный путём сублимации или в распылительной сушилке. Проблемы возникают при производстве медицинских субстанций или препаратов, чистота и стерильность которых являются доминирующим качеством продукта. Развитие ^-технологий в последние
годы привело к разработке дешёвых и эффективных способов выделения и очистки желточных куриных антител от иммунизированных животных. Это даёт надежду на то, что на смену антител млекопитающих придут дешёвые, эффективные и безопасные желточные антитела птиц.
Целиакия
По данным ВОЗ, целиакией страдает около 1% населения земного шара. Целиакия - это хроническое воспалительное заболевание, вызванное употреблением в пищу белка глютена и близких к нему белков злаковых культур (авенин, гордеин и др.) у генетически восприимчивых людей. В настоящее время единственным средством лечения лиц, страдающих целиакией, является строгая пожизненная без глютеновая диета. Однако строгое соблюдение диеты является сложной задачей, поэтому многие пациенты страдают от случайного приё-
ма клейковины. Непреднамеренное воздействие клейковины колеблется от нескольких миллиграмм до 2 г в сутки, чего бывает достаточно, чтобы вызвать симптомы интерстициаль-ного морфологического изменения. Таким образом, существует явная необходимость в разработке безопасной и эффективной терапии для больных целиакией. Пероральный приём желточных куриных антител против глютена является новым методом нейтрализации клейковины и может повысить эффективность безглю-теновой диеты.
Куриный желточный иммуноглобулин является перспективным антителом для профилактики кишечной абсорбции глиадина злаков. Кур породы Белый Леггорн иммунизировали глиадином. В
желтки иммунизированных кур добавляли маннит и сушили в распылительной сушилке. В полученном таким способом порошке сохранялось до 99,9% активности антител. В экспериментах in vitro было показано, что в искусственной желудочной жидкости активность IgY-антител остаётся высокой (82,4%) даже через 2 ч инкубации при 37°С. В экспериментах in vivo мышей линии BALB/с кормили порошком антител и глиадином в соотношении 1:5 (вес/вес). При этом, свободный, не связанный с антителами, глиадин в желудочно-кишечном тракте составлял менее 1% [7]. Позже эти же авторы провели исследование на модели клеточной культуры кишечника Caco-2. Антиглиадиновые IgY-интитела
значительно предотвращали гли-адиновую токсичность на Caco-2, поддерживая целостность кишечника, ингибируя абсорбцию гли-адина и продуцируя провоспали-тельные цитокины TNF- а (фактор некроза опухоли-а) и IL-1ß (интер-лейкин-1 ß) по сравнению со стимулированными глиадином культурами (P<0,05) [8].
Эксперимент Sample D.A. и соавт. [19] проводился на десяти взрослых добровольцах. Для подтверждения целиакии у пациентов были взяты биопсийные пробы. Кроме того, ежедневно проверялся индекс симптомов целиакии, а также уровень ан-тиглиадиновых антител классов IgA/ IgG. Каждому испытуемому выдавалось по 2 капсулы, содержащие IgY-антитела, на приём, но не более 10 капсул в сутки. Средний возраст пациентов составил 43,4 года. Все добровольцы следовали безглютено-вой диете, как минимум, 6 месяцев. Не были выявлены проблемы безопасности. У большинства пациентов было меньше симптомов целиакии (особенно утомляемость, головная боль и вздутие живота), улучшение качества жизни, снижение антител IgA/IgG классов по сравнению с начальным периодом. Планируется более крупное исследование, предназначенное для дальнейшей оценки безопасности и эффективности IgY-терапии.
Таким образом, IgY-антитела могут быть использованы при лечении пациентов, страдающих целиакией, чтобы устранить возможность случайного попадания токсичного глиа-дина с пищей.
Псориаз
Хроническое неинфекционное заболевание, поражающее в основном кожу. В настоящее время предполагается аутоиммунная природа этого заболевания. Duan H., с соавторами [4] попытались определить клеточный источник интерлейкина-8 (IL-8) при псориатических поражениях кожи путём иммуногистохимиче-ского окрашивания. Было установлено, что только нейтрофилы, а не мононуклеарные клетки, макрофаги или кератиноциты являются одним из источников IL8 при псориазе. Основываясь на этих данных, George Q. W. Ye предложил использовать антитела (моноклональные мышиные или поликлональные куриные желточные) антитела и оформил патент на изобретение. По мнению автора патента, куриные желточные антитела против IL-8 человека, могут быть использованы в местном лечении воспалительных заболеваний кожи [5].
Ожоги
По наблюдениям Спиридонова Т.Г. с соавторами [2], выявлено, что у пациентов с глубокими термическими ожогами достоверно чаще встречается бактериемия, а в гемокультурах
преобладают неферментирующие микроорганизмы - энтеробактерии, стафилококки и грибки. Была изучена динамика уровня липополисаха-ридов (lipopolysaccharide, LPS) гра-мотрицательных бактерий в сыворотке крови больных. Пиковые значения LPS выявляли при глубоких ожогах на 2-4-й неделях после травмы, при этом у выздоровевших больных его уровень постепенно снижался, а перед летальным исходом - резко возрастал, что могло служить прогностическим признаком неблагоприятного исхода ожоговой травмы.
Ma S. и Zhang Y изучали возможность применения IgY-антител против LPS при лечении термических ожогов [17, 18]. Мышам с ожогами третьей степени, покрывающими 30% общей поверхности тела и подвергавшихся воздействию LPS, вводили перорально IgY-антитела или Fab'-фрагменты IgY-антител против LPS. Смертность мышей в обработанных IgY или Fab'-обработанных группах была значительно ниже по сравнению с контрольными группами (без лечения). Уровни LPS, TNF-a и IL-6 в группе, обработанной IgY-антителами, были ниже, чем уровни в контрольной группе. IgY- и Fab'-фрагменты иммуноглобулинов яичного желтка, наработанные против LPS, могут быть использованы для ингибирования и лечения повреждения тканей, вызванного LPS.
По мнению Спиридонова Т.Г. с соавторами [2], наличие глубоких ожогов является фактором риска развития бактериемии и сепсиса. Основными входными воротами для развития системной инфекции является раневая поверхность. Для борьбы с гнойно-септическими осложнениями как нельзя лучше подходят IgY-технологии [1]. Так как круг микроорганизмов, вызывающих сепсис, известен, наработка специфических антител к этим патогенам не представляется сложной задачей, и может быть проведена заранее. IgY-антитела можно вносить местно на раневую поверхность или системно.
Таким образом, IgY-технологии могут быть полезны при лечении ожоговых больных для снижения токсичности LPS и для удаления патогенов с раневой поверхности или системное введение специфических антител в случае сепсиса.
Бронхиальная астма
Это заболевание относится к одной из наиболее сложных проблем современной медицины. Для этой болезни характерно неуклонное прогрессирование процесса с возможным развитием летального исхода. Распространенность бронхиальной астмы значительно возросла в последние четыре десятка лет; по данным ВОЗ, она относится к числу наиболее распростра-
ненных болезней человека: сегодня число болеющих бронхиальной астмой составляет около 300 млн человек. В последние годы достигнут значительный прогресс в фармакотерапии бронхиальной астмы в целом, однако проблема успешного лечения этого заболевания далеко не решена в полной мере. Для купирования спазма бронхов и обеспечения нормальной проходимости дыхательных путей применяются две основные группы лекарственных препаратов: противовоспалительные средства (ингаляционные и системные глюкокортикостероиды; препараты кромолинового ряда) и бронхо-дилятаторы р2-адреномиметики, М-холинолитики, спазмолитики миотропного действия. Однако их использование во многих случаях не предотвращает развитие финальной стадии аллергического воспаления дыхательных путей -необратимой обструкции бронхов и, кроме того, эти препараты имеют серьезные побочные эффекты.
Для изучения астмы, в качестве модели часто используют морских свинок, сенсибилизированных овальбумином. Было показано, что интерлейкин 1р (11-1 в) играет решающую роль в прогрессировании аллергического воспаления дыхательных путей. В ряде работ были предприняты попытки ингибирова-
ния И-1р с помощью специфических куриных желточных антител.
В экспериментах использовались морские свинки с аллергической астмой, вызванной ингаляцией аэрозольного овальбумина. В качестве отрицательного контроля были использованы животные, обработанные физиологическим раствором, а в качестве положительного контроля - животные, обработанные будесонидом. Экспериментальным морским свинкам была произведена ингаляция 0,1% раствора желточных ^-антител против Ыр. Было показано, что аллергическое воспаление легочных тканей было уменьшено в экспериментальной группе по сравнению с контрольным. Применение 1дУантител против И11 р значительно уменьшало уровни 11-1 р, 114, 11-8, 11-13, Т^-а, TGF-1р и 1дЕ (Р<0,05). Ингаляция аэрозольного ^-111 р ингибирует патологические реакции в легочных тканях морских свинок с аллергической астмой. Ингибирующая активность может быть связана с уменьшением количества эозинофилов и нейтрофилов и снижением уровней воспалительных цитоки-нов и 1дЕ [12].
Комбинированное введение 1д\-антител против И-1р и TNF-а более эффективно ингибирует аллергическое воспаление у морских свинок с аллергическими ринитами, вызванными овальбумином, что было показано в экспериментах Guo-Zhu Н. и
соавт. и Wei-Xu H. и соавт. [9, 21]. Результаты этих исследований показали, что уровни IL-1ß, IL-5, IL-9, IL-13, 11=18, IL-22, IL-33, TNF-a, TGF-1 ß и IgE в периферической крови и назальной жидкости значительно снижались в течение 2-8 часов по сравнению с контрольной группой.
Таким образом, блокада IL-1ß и TNF-a путем интраназальной ин-стилляции специфических антител против IL-1 и TNF-a может быть потенциальной альтернативной стратегией профилактики и лечения аллергического ринита.
Рак
Одно из первых сообщений о возможности использования IgY-антител при лечении рака желудка появилось в 1997 г. Авторы иммунизировали кур белком Р110, извлечённым из клеток MGC-803 рака желудка. Результаты показали, что полученные антитела могут специфично связоваться с опухолевыми клетками желудочно-кишечного тракта. Эти IgY-антитела могут стать важным носителем для противоопухолевых препаратов и применяться совместно с другими препаратами [23].
Ранее было показано, что a-энолазы была обнаружена у 65% пациентов с немелкоклеточным раком легкого. Leu S.J., и соавт. [16] получили и описали поликлональные антитела против a-энолазы от иммунизированных кур. Далее вариабель-
ные гены тяжелой и легкой цепей IgY кур были выделены из В-клеток селезенки и амплифицированы для создания фаговых библиотек антител. Их связывающая специфичность к белку a-энолазы была подтверждена в ИФА, проточной цито-метрии и в иммунофлюоресценции.
Эти поликлональные scFv-фраг-менты IgY-антител могут быть полезными при разработке молекулярных диагностических и терапевтических средств для лечения рака легких в будущем.
Ожирение
Ожирение является медико-социальной проблемой во всём мире. Оказывает влияние на возникновение и течение сердечно-сосудистых заболеваний (атеросклероз, гипертоническая болезнь, инфаркт миокарда и т.д.), онкологических заболеваний, эндокринных нарушений (сахарный диабет) и к снижению продолжительности жизни. Для профилактики ожирения в клинике используют сибутрамин (меридиан) и орлистат (ксеникал), которые уменьшают абсорбцию в кишечнике продуктов липолиза путем ингибирова-ния липазы поджелудочной железы. Препараты имеют побочное действие, выражающееся в расстройстве желудка. Альтернативным ингибитором липазы поджелудочной железы являются куриные желточные антитела, наработанные против
липазы, фермента, расщепляющего жиры. Эксперименты проводились как in vitro, так и in vivo в мышиной модели ожирения с высоким содержанием жиров. Антилипазные IgY блокировали активность липазы. При этом значительно уменьшался вес внутрибрюшинных жировых тканей, эпидидимальных, брыжеечных, забрюшинных и периренальных жировых тканей и количеств печеночного общего липида, триглицеридов и холестерина. Это сопровождалось значительным увеличением фекальной экскреции триглицеридов в отсутствие диареи [11, 20].
Ингибирование поджелудочной липазы с использованием антили-пазной IgY является эффективным средством против ожирения из-за связанного с этим увеличения экскреции триглицеридов в фекалиях.
Сердечная недостаточность
При лечении сердечной недостаточности часто используют препараты, полученные из наперстянки, которые обладает специфическим кардиотоническим действием. Действие препаратов наперстянки развивается после некоторого латентного периода. (ликозиды наперстянки медленно выделяются из организма, в связи с чем, они оказывают кумулятивное действие. Эти гликозиды имеет узкий терапевтический индекс. Именно поэтому применение препаратов из наперстян-
ки (дигитоксин и дигоксин) могут сопровождаться передозировками и отравлениями. Время для отмены токсичности дигоксина составляет 30-45 минут. Использование специфических к дигоксину антител может справиться с этой задачей. На практике используют овечьи антитела против дигоксина. Чтобы снизить иммуногенность этих антител, их обрабатывают папаином и получают Fab- фрагменты с меньшей молекулярной массой. Анализ фармако-кинетики взаимодействия дигоксина и Fab фрагментов антител овцы показал, что концентрация свободного дигоксина падает почти до нуля в течение нескольких минут после введения анти-дигоксина-Fab [3]. Но цена этого препарата довольно высока. Одна из компаний, занимающихся разработкой био-терапевтических продуктов, приступила к выпуску антител класса IgY(AFc) (укороченные желточные антитела уток) против дигоксина. Это антитела короче куриных на 2 домена, они не взаимодействуют ни с комплиментом, ни с ревматоидным фактором, ни с Fc-фрагментами других иммуноглобулинов, ни с бактериальными белками А, G и L. IgY(AFc)- антитела значительно дешевле овечьих анти-дигок-сина-Fab, в их производстве не требуется ферментативной обработки папаином. IgY(AFc)- антитела являются противоядием для специфиче-
ского лечения опасной для жизни передозировки дигоксина.
Артриты
Миллионы людей во всем мире страдают поражением суставов, которое негативно влияет на их физическое и психическое здоровье и качество их жизни. В настоящее время наиболее распространена иммуноге-нетическая теория возникновения артритов, согласно которой предполагается наличие генетически обусловленного дефекта иммунной системы, приводящего к патологической реакции на провоцирующие факторы. Greenblatt H. C., и соавт. изучали напиток, полученный из специально вакцинированных кур, в его способности модулировать симптомы пациентов с остеоартритом, ревматоидным артритом или псориатическим артритом. У пациентов наблюдалось статистически значимое улучшение (P<0,05), которое было отмечено с 30 и 60 день после начала исследования. Улучшение по-прежнему наблюдалось даже после того, как пациенты прекращали принимать продукт в течение 30 дней. В сочетании с терапевтическими режимами, ежедневное введение иммунных препаратов может обеспечить безопасное и эффективное дополнительное лечение для улучшения состояния артритных симптомов [6].
Xing R. и соавт. получали яичный порошок от кур, многократно имму-
низированных 26 кишечными бактериальными патогенами человека и тестировали на модели артрита у крыс. Животным вводили различные дозы антител один раз в день в течение 20 дней. Анализ полученных данных показал, что наблюдалось снижение воспалительная активность и отёка лапы при перораль-ном в ведении IgY-антител, при этом значительно уменьшалось воспаление на 51-80%. [ипериммунное яйцо может быть полезным для того, чтобы играть значительную аддитивную роль в лечении хронического ревматоидного артрита или других хронических воспалительных заболеваний благодаря его противовоспалительной активности [22].
Ишемическая болезнь
Ишемическая болезнь сердца является основной причиной смерти в развитых странах. Исследования на животных показали, что ежедневное добавление «гипериммунного яйца» (см. «Артриты») в рационе питания может уменьшить риск сердечно-сосудистых заболеваний. Двойное слепое исследование проводилось на добровольцах с начальными уровня общего холестерина более 180 мг/ дл. В качестве биологической добавки использовался напиток, содержащий IgY-антитела от гиперим-мунизированных кур. В ходе исследования добровольцы осуществляли программу физических нагрузок. В
конце исследования общий уровень холестерина в контрольной группе возрос, тогда как в экспериментальной группе, не показал никаких существенных изменений в общем холестерине. Более того, отношение общего холестерина к липопротеи-дам высокой плотности увеличилось в контрольной группе, но осталось в основном неизменным в группе потребления гипериммунного яйца [14].
Эти результаты показывают, что гипериммунное яйцо может благотворно изменить регулирование уровней липопротеинов сыворотки и тем самым уменьшить возможность сердечно-сосудистых заболеваний.
Открытие белка Niemann-Pick (NPC1L1) и его роли в регуляции уровня холестерина в крови больных ишемической болезни является важным в понимании этиологии этого заболевания. Уровень холестерина в крови жестко регулируется на уровне биосинтеза, абсорбция в кишечнике и билиарный и фекальной экскреции. Поглощение холестерина в кишечнике играет критическую роль в регуляции холестерина в крови. Примерно 36% снижения холестерина в крови может быть достигнуто при полном ингибировании кишечного поглощения холестерина [10]. При этом белок NPC1L1 играет ключевую роль в поглощении холестерина в кишечнике. Kim D.H. и соавт. [15] провели эксперимент по
ингибированию белка NPC1L1 с помощью куриных желточных антител. В качестве антигена использовался генно-инженерный вариант белка. Функциональный порошок яичного желтка, содержащий антитело против NPC1L1, был испытан в эксперименте по снижению уровня холестерина у самцов крыс, находящихся на гиперхолестеринемиче-ской диете. В рацион контрольных животных входил только холестерин без иммунного порошка, а экспериментальные животные получали холестерин с добавлением иммунного порошка в разных дозах 0,1, 1,0 и 5,0%. Анализ полученных данных показал, что количество фекального холестерина у экспериментальных крыс увеличилось 2,5 раза по сравнению с контрольными животными. Кроме того, было отмечено снижение общего холестерина в сыворотке и в печени. Эти антитела не оказывают отрицательного влияния на рост и здоровье крыс.
Функциональный порошок яичного желтка может быть полезной диетической добавкой для снижения уровня холестерина в сыворотке, и его следует рассматривать как эффективное функциональное питание.
Наркотики
Создание вакцин против психотропных средств (морфина, люминала, кокаина веронала, аминазина, галлюциногенов и др.) стало
важным направлением в лечении и профилактике наркомании. На смену иммунологической защиты от инфекции приходит иммунологическая защита от вредных химических соединений. Токсические эффекты химических веществ можно ослабить не только активной иммунизацией, но и пассивной, т. е. вводя в организм соответствующую антисыворотку или её гамма-глобулиновую фракцию. Циркулируя в крови, эти антитела специфически связывают поступающие фармакологические вещества и препятствуют их попаданию в клетки-мишени. Антитела к наркотикам не только увеличивают устойчивость организма к токсическим дозам, но и подавляют стремление к потреблению наркотиков. Таким образом, открываются новые возможности не только для высокоспецифической профилактики и терапии отравлений, но и для борьбы с наркоманией.
Jennifer B. Treweek и Kim D. Janda в своей работе использовали моно-клональные человеческие F (ab ') 2 и Fab- фрагменты против кокаина mAb GNCgzk с высоким уровнем аффинности. Исходя из их исследований, можно сказать, что эти антитела предотвращали летальность от воздействия наркотика в дозе LD50 у значительной части иммунизированных мышей, несмотря на существенный молярный избыток препарата. В частности, эти антитела смягчили тяжесть преморбидного поведения. Эта способность означает раннюю блокаду тяжёлой токсичности наркотика. Пассивная вакцинация лекарственными специфическими антителами представляет собой жизнеспособную стратегию лечения состояния передозировки кокаина [13].
К сожалению, данных об использовании желточных антител птиц при инактивации наркотиков в доступной литературе обнаружить не удалось.
Таким образом, в представленных данных показана возможность использования специфических желточных антител птиц при лечении таких заболеваний, как целиакия, псориаз, ожоговые травмы, бронхиальная астма, рак, ожирение, сердечная недостаточность, артриты, ишемическая болезнь, отравление наркотиками. При таком лечении невозможна передозировка, риск побочных явлений снижен практически до нуля. При инактивации токсических поражений результат появляется через несколько минут. Стоимость IgY-антител в десятки раз ниже, чем стоимость IgG-антител млекопитающих. Использование IgY-технологий в иммунотерапии неинфекционных заболеваний является весьма перспективным направлением в медицине.
ЛИТЕРАТУРА
1. Каплин В.С., Каплина О.Н. // Медицинские новости. - 2017. - №3. - С. 33-38.
2. Спиридонова Т. Г., Смирнов С. В., Лазарева Е. Б. и др. // Неотложная медицина. - 2011. - № 1. - С. 18-21.
3. Chan B. S. H. and Buckley N. A. // Clinical Toxicology. - 2014. - Early Online. - P. 1-13.
4. Duan H., Koga T, Kohda F et al. // J. Dermatol
Sci. - 2001. - Vol. 26. № 2. P.119-124.
5. George Q.W. Ye. // Application number US 10 .2002. - 200,515. Claimed 23.
6. Greenblatt H. C., Adalsteinsson O., and Kagen L. // Journal of Medicinal Food. - 1998. - Vol. 1. № 3. - P. 171-179.
7. Gujral N., Lobenberg R., Suresh M., et al. // J Agric Food Chem. - 2012. - Vol. 60, №12, - P. 3166-3172.
8. Gujral N., SuhJW., Sunwoo H.H. // BMC Immunol.
- 2015. - Vol.16. № 1. P. 1-11.
9. Guo-Zhu H., Xi-Ling Z., Zhu W. et al. // Int. Immu-nopharmacol. - 2015. - Vol. 25. № 1. - P. 155-161.
10. Gylling H., Miettinen TA. // Atherosclerosis. -1995. - Vol. 117. - P. 305-308.
11. Hirose M, Ando T Shofiqur R et al. // Nutrition & Metabolism. - 2013 - Vol. - 10. № 1. - P. 70.
12. Hu W.X., Xiang Q., Wen Z. et al. // Molecular Immunology. - 2014. - Vol. 58. № 1. - P. 39-149.
13. Jennifer B. Treweek and Kim D. Janda. // Mol. Pharmaceutics. - 2012. - Vol. 9. № 4 - P. 969-978.
14. Karge W.H., Deluca J.P., Marchitelli L.J. et al. // J. Med. Food. - 1999. - Vol. 2. №2. P. - 51-63.
15. Kim D.H., Choi M.R., Hong J.E. et al. // Food Sci. Biotechnol. - 2015. - Vol. 24. № 1. - P. 217-223.
16. Leu S.J., Lee YC., Shih NY et al. // Vet Immunol Immunopathol. - 2010. - Vol. 137. № 3-4. - P. 251-260.
17. MaS., Zhang Y// Protein J. - 2010. - Vol. 29. № 7. - P. 475-480.
18. Ma S., Zhang Y // Journal Home. - 2011. - Vol 10. № 29 . P. 5677-5682.
19. Sample D.A., Sunwoo H.H., Huynh H.Q. et al. // Dig Dis Sci. - 2017. - Vol. 62. № 5. P. 1277-1285.
20. Tarigan R, Kusumorini N. and Manalu W. // Pakistan Journal of Nutrition - 2016. - Vol. 15. №7. -P.625-632.
21. Wei-Xu H., Wen-Yun Z., Xi-Ling Z. et al. // Mediators of Inflammation. Vol. - 2016 - Article ID 3128182. P.
22. Xing R, Iyer S.V., Adalsteinsson O., et al. // Presented at The 225th ACS National Meeting. -2003.
- New Orleans, LA, March - P. 23-27.
23. Yang J., Jin Z., Yu Q, et al. // Chin J. Biotechnol. -1997 - Vol.13. № 2 - P 85-90.
