Идентификация видов эймерий у цыплят мясо-яичной породы Текст научной статьи по специальности «Биологические науки»

appeared to be 18,8-28,5; 10-35 and 10-45% respectively. In the Republic of Mordovia the extensity of Isospora, Eimeria and Balantidium infections were 13,3, 15-23,3 and 7,5-22,5% respectively.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВИДОВ ЭЙМЕРИЙ У ЦЫПЛЯТ МЯСО-ЯИЧНОЙ ПОРОДЫ

Сафиуллин Р.Т., Бондаренко Л.А.

ГНУ ВНИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина

Введение. По данным литературы в кишечнике молодняка кур могут паразитировать 9 видов эймерий. Практическое значения имеют 7 видов эймерий, из которых только 5 видов эймерий имеют широкое распространение и являются высокопатогенными для цыплят. Практические ветработники хорошо знают, что ооцист эймерий всегда можно найти в местах выращивания цыплят. Кроме того, в процессе эволюции они выработали идеальную схему размножения, которая обеспечивает им высокую надежность. Каждый вид птиц имеет только ему присущие виды эймерий. Разные виды паразитов различаются по локализации и тяжести вызываемого ими заболевания. Иногда в кишечнике одной птицы можно обнаружить несколько видов эймерий. Исходя из отмеченного перед собой поставили задачу идентифицировать видовой состав ооцист эймерий у цыплят мясо-яичной породы при напольной технологии содержания.

Материалы и методы. Разных видов эймерий у цыплят идентифицировали при исследовании проб помета и содержимого кишечника, которые исследовали качественными и количественными методами. При качественном методе исследования брали 3 г помета. Переносили в ступки, добавляли 20 мл воды, тщательно размешивали, фильтровали через металлическое сито. Хорошо перемешанный фильтрат переливали в пробирку и центрафугировали при 2000-2500 об/мин в течение 2 мин. Затем надосадочную жидкость сливали, к осадку добавляли 10 мл жидкости состоящей из равных частей насыщенного раствора хлорида натрия и глицерина, размешивали и вновь центрифугировали при 1200-1500 об/мин 2 мин. Металлической петлей (диаметром 8 мм) снимали 3 капли поверхностной

269

пленки, переносили на предметное стекло, накрывали покровным и исследовали. При микроскопии обнаруживали ооцисты эймерий.

При количественном методе наличие ооцист в фекалиях определяли с использованием насыщенного раствора натрия хлористого плотностью 1,18

-5

1/см , а их количество подсчитывали с использованием камеры Мак Мастера. При этом навеску фекалий 1 г помещали в стеклянный стаканчик, заливали 35 мл флотационного раствора и перемешивали палочкой до получения однородной массы и исчезновения комков, по мере размешивания добавляли раствор до объема 30 мл. Взвесь фильтровали через ситечко в другой стаканчик, осадок на ситечке отжимали палочкой. Затем пастеровской или любой другой микропипеткой быстро переносили 0,15 мл взвеси в каждую из шести ячеек камеры, накрывали крышкой и оставляли на 3-5 минут и за отмеченное время имеющиеся ооцисты поднимаются и прилипают к поверхности сетки камеры. При подсчете ооцист пользовались микроскопом МБС и увеличением х100 раз. Из каждой пробы подсчитывали количество ооцист в шести ячейках камеры и выводили среднюю. Поскольку для исследования была отобрана проба 0,15 мл исходной взвеси материала 1:29, то есть 1/200 от 30 мл, чтобы определить количество ооцист эймерий в 1 г помета, выявленное их количество в одной ячейке умножали на 200.

Для выделения ооцист эймерий брали пробы помета (не менее 100 г) от заведомо зараженных цыплят, после установления интенсивности инвазии, а также использовали содержимое кишечника от нескольких павших от эймериоза птиц. Отобранные пробы смешивали, получая объединенную, которую собирали в полиэтиленовый пакет или в хорошо закрывающийся сосуд. До проведения исследований их хранили при комнатной температуре законсервированными в 2,5%-ном растворе бихромата калия.

Патологический материал отбирали при вскрытии павших птиц из патологически измененных частей кишечника.

Из полученных проб выделяли ооцисты. С этой целью помет или содержимое кишечника разводили в водопроводной воде до жидкой консистенции и процеживали через один слой марли или мелкое сито. Полученный фильтрат разливали в центрифужные пробирки (стаканы) и центрифугировали при 2000 об./мин в течение 2 минут. Затем надосадочную жидкость сливали и к осадку добавляли насыщенный раствор поваренной соли. Осадок тщательно перемешивали стеклянной палочкой, и пробирки с флотационным раствором центрифугировали снова, как указано выше. Надосадочную жидкость, содержащую ооцисты, собирали 10-20-граммовым шприцем типа «Рекорд» через иглы в мерный стакан не менее трех-четырех раз из каждого стакана. После очередного сбора ооцист осадок перемешивали, доливали насыщенным раствором соли и вновь центрифугировали. Выделенную культуру эймерий помещали в стеклянный стакан емкостью 2000 мл, заливали водопроводной водой в соотношении 1:20 и ставили на споруляцию в термостат на 4-5 сутки при температуре 26-28 0С. После указанного времени жидкость сливали методом сифона до объема 50-100 мл.

270

Следили за ходом споруляции, для этого через 4 и 5 суток после помещения в термостат культуру ооцист смешивали стеклянной палочкой и несколько капель пипеткой наносили на предметное стекло, накрывали покровным и просматривали под микроскопом. При этом у зрелых ооцист, которые прошли споруляцию, формируются 4 спороцисты с двумя спорозоитами в каждой.

Знание видового состава эймерий в птицехозяйствах имеет большое практическое значение для обоснованной разработки эффективных методов борьбы с заболеванием. Нами были проведены исследования по изучению видового состава эймерий у цыплят кур мясо-яичной породы в условиях племенного птицеводческого завода «Кучинский» Московской области в течение 2012-2013 г.г.

Идентификацию видов эймерий проводили путем исследования 36 проб помета, содержимого кишечника и соскобов с кишечной стенки от павших птиц различного возраста. Для споруляции ооцист помещяли в 2,5%-ный раствор бихромата калия. При низкой интенсивности инвазии видовому определению подвергали не менее 100 ооцист. Локализацию отдельных видов эймерий определяли путем исследования материала полученного из различных частей кишечника. При установления вида эймерий учитывали: форму ооцист, цвет, характер оболочки, наличие или отсутствие микропиле, полярной гранулы, длину и ширину ооцисты, вычисляли индекс нормы (по М.В. Крылову, 1996).

Результаты. При исследовании проб помета по методу Фюллеборна установлено, что ооцисты Eimeria tenella овальной формы, окружены двуконтурной, слегка зеленоватой тонкой оболочкой. На одном конце ооцисты ясно заметно светлое зернышко (полярная гранула), протоплазматическая масса с неправильными очертаниями. Между ней и оболочкой имеется значительное пространство. Нами установлено, что размер ооцист E.tenella находиться в пределах 14,6-31,4х9,6-24,8 мкм, в среднем 23,0х17,2 мкм.

Ооцисты E.acervulina яйцевидные, бесцветные, окружены двуконтурной прозрачной оболочкой. Протоплазменная масса свежих ооцист с гладкими очертаниями. Внутри ооцисты на более заостренном ее конце имеют одну или несколько (2-3) маленьких гранул. Микропилей обычно нет, но иногда встречались формы, имеющие микропили. Размер ооцист 16-19,3х13,2-18,3 мкм в среднем 17,14х14,3 мкм.

Оооцисты E.maxima желтовато-коричневого цвета, чаще имеют яйцевидную и реже овальную форму. Оболочка слегка шероховатая, на узком конце находиться микропиле и полярная гранула. Остаточного тела ни в ооцисте, ни в спороцистах нет. По данному признаку ооцисты этого вида сравнительно легко дифференцируются от других видов эймерий кур. Средний размер ооцист 20,7х30,5 мкм.

Видовую идентификацию ооцист кокцидий проводили в условиях паразитологического отдела ВНИВИП г. Ломоносов и установлено, что в племенном птицеводческом заводе «Кучинский» Московской области,

271

встречаются следующие виды эймерий: E. tenella - 75%, E. acervulina - 10%, E.maxima - 15%.

Заключение. В племенном птицеводческим заводе «Кучинский» у цыплят кур мясо-яичной породы нами были определены 3 вида эймерий, наибольшее количество изучаемых паразитов было представлено видом: E.tenella-75%, следующий вид E. acervulina-\0% и E. maxima-15%. Смешанная инвазия в данном хозяйстве была представлена совместным паразитированием E. tenella + E.acervulinaи E. tenella + E.maxima.

Литература: 1. Бакулин В.А. Болезни птиц.-С. Петербург, 2006.-686с. 2. Вершинин И.И. Кокцидиозы животных и их дифференциальная диагностика. -Екатеринбург, 1996.-264с. 3. Кириллов А.И. Кокцидиозы птиц.-М., 2008.-230с. 4. Крылов М.В. Определитель паразитических простейших. -С.-Петербург, 1996. Зоологический институт РАН.-693с. 5. Сафиуллин Р.Т. и др.

Экспериментальная модель эймериоза цыплят, вызванная Eimeria tenella.

Диаграмма

Identification of Eimeria species in chickens of meat-egg breed. Safiullin R.T., Bondarenko L.A. All-Russian K.I. Skryabin Scientific Research Institute of Helminthology.

Summary. At poultry husbandry plant Kuchinsky one determined 3 Eimeria species in chickens of meat-egg breed: Eimeria tenella (the maximum number of the tested parasites), E. acervulina (10%) and E. maxima (15%). At the farm the mixed infection was represented by parasitizing of E. tenella + E. acervulina and E. tenella + E. maxima.

272