CC BY
104
Лечение и профилактика
УДК 619:616.993.192.1
ЭФФЕКТИВНОСТЬ КЕНОКОКСА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ
ЭЙМЕРИОЗЕ ЦЫПЛЯТ
Р.Т. САФИУЛЛИН доктор ветеринарных наук Р.Р. МУРЗАКОВ аспирант
Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им.
К.И. Скрябина, г. Москва, Б. Черемушкинская, 28, e-mail: vigis@,ncport.ru
Испытана эффективность разных концентраций кенококса клинер и КС 5000 против спорулированных ооцист кокцидий на 116 экспериментально зараженных цыплятах-бройлерах. Интенсэффективность кенококса в 2, 4 и 6%-ной концентрации против спорулированных ооцист кокцидий птиц составила 99,65-100 %. Интенсэффективность КС 5000 в 2, 4 и 6%-ной концентрации против спорулированных ооцист кокцидий птиц равна соответственно 65,94 %, 96,87 и 100 %.
Ключевые слова: цыплята, эймериоз, ооцисты, кено-кокс клинер, КС 5000, эффективность.
Эймериоз цыплят широко распространен при напольном содержании птицы и причиняет большой экономический ущерб.
До последнего времени мероприятия при эймериозах кур состояли из назначения препаратов, действующих на эндогенные стадии кокцидий, а из средств дезинвазии использовали 7%-ный раствор аммиака, 2%-ную эмульсию ортохлорфенола, 10%-ный раствор однохлористого йода, 4%-ный раствор едкого натра, которые должны иметь температуру не ниже 80 °С. Однако эффективность отмеченных средств дезинвазии желает лучшего.
Исходя из отмеченного, целью работы было - испытать эффективность кенококса клинер и КС 5000 против ооцист кокцидий птиц по сравнению с базовым препаратом фенолом.
Материалы и методы
Испытание эффективности кенококса клинер и КС 5000 по сравнению с фенолом против спорулированных ооцист кокцидий птиц проводили с октября 2009 г. по январь 2010 г. в два этапа. Первый этап был подготовительным; его проводили в лаборатории Всероссийского НИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина (Москва). Во время второго этапа провели экспериментальное заражение 14-дневных цыплят культурой ооцист эймерий в виварии Всероссийского научно-исследовательский института технологии и птицеводства (г. Сергиев-Посад). В ходе подготовки к работе готовили рабочие растворы с разными концентрациями средств дезинвазии, буферный раствор WSH, средство для консервирования фекалий птиц и все другое, необходимое для проведения исследований.
На подготовительном этапе готовую культуру спорулированных ооцист Eimeria tenella очищали от бихромата калия, использованного в качестве консерванта, путем промывания буфером WSH до тех пор, пока надосадочная жидкость не стала прозрачной, соблюдая следующие параметры: 250 мл, 5 мин, при 20±2 °С. Затем определяли процент споруляции с помощью микро-
скопа и раствор, содержащий ооцисты разбавляли буфером WSH для получения концентрации примерно 2000 спорулированных ооцист/мл. После чего раствор помещали в колбу Эрленмейера соответствующего объема с подходящим магнитом и смешивали на магнитной мешалке.
WSH буфер готовили следующим образом. Сначала приготовили 10%-ный раствор хлорида кальция и 10%-ный раствор сульфата магния, затем 17,5 мл первого и 5 мл второго добавили к 3300 мл дистиллированной воды и ав-токлавировали в течение 15 мин при 120 °С. Измеряли рН приготовленного буфера с помощью прибора Аквилон-410; его показания составили 7,1.
Для осуществления лизис-теста были приготовлены по 50 мл раствора с 2, 4 и 6%-ной концентрацией кенококса клинер и КС 5000; 4%-ным содержанием фенола, а в качестве контроля - WSH.
Приготовленные растворы дезинфектантов и контроль по отдельности помещали в колбу Эрленмейра вместимостью 250 мл и добавляли 50 мл раствора с ооцистами кокцидий в концентрации 2000 ооцист/мл. После этого колбу Эрленмейера помещали на вибростолик со скоростью 100 об./мин на 2 ч. По истечении времени раствор выливали из колбы в пластиковую бутылку с завинчивающейся крышкой (1500 мл), объем доводили до 1500 мл, отстаивали в течение 24 ч при комнатной температуре (20 °С) и сливали до отметки 30 мл. Затем осадок переливали в новую емкость вместимостью 100 мл; пластиковую бутылку несколько раз ополаскивали и объем доводили до 50 мл с использованием WSH.
На втором этапе проведено экспериментальное заражение 116 цыплят 14-дневного возраста, свободных от кокцидий, корма которых не содержали противококцидийные препараты. Для контроля концентрации спорулированных ооцист кокцидий (2000 ооцист/мл) в работе использовали камеру Мак Мастера, а для разбавления буфер WSH с таким расчетом, чтобы можно было ввести 1 мл суспензии каждому цыпленку. Для достижения хорошего смешивания материала использовали магнитный смеситель. Цыплят нумеровали, взвешивали и по принципу аналогов разделили на 14 групп по 6-10 цыплят в каждой.
Цыплятам первой, второй и третьей групп задавали по 1 мл суспензии ооцист эймерий, обработанной 2, 4 и 6%-ми растворами кенококса клинер внутрь орально при помощи микропипетки. Цыплятам четвертой, пятой и шестой групп назначали по 1 мл суспензии ооцист эймерий, обработанной 2; 4 и 6%-ми растворами препарата КС 5000 орально с использованием микропипетки. Цыплятам седьмой группы задавали по 1 мл суспензии ооцист эй-мерий, обработанной 4%-ным раствором фенола. По 1 мл буферного раствора WSH получали цыплята восьмой группы, которые и служили контролем.
Следующие шесть групп цыплят по 6 голов в каждой были использованы для биопробы на тест искусственного заражения цыплят и составления гра-дуировочной кривой по установлению зависимости числа выделенных ооцист эймерий от дозы их заражения. Для заражения цыплят использовали исходную культуру спорулированных ооцист Е. (впвПа, которая содержала 2000 ооцист в 1 мл. Предварительно готовили разведение культуры с использованием буфера WSH. Цыплят взвешивали, нумеровали, разделили на 6 групп и содержали в клетках изолированно.
Цыплят 9, 10, 11, 12, 13 и 14-й групп заражали путем дачи внутрь суспензии, содержащей концентрации 2000; 1000; 250; 125; 62 и 15 ооцист/мл в разведении с буфером WSH соответственно.
За время опыта цыплята всех 14 групп находились в аналогичных условиях содержания и имели одинаковый рацион. За цыплятами в течение опыта вели наблюдения за общим состоянием и поведением, приемом корма и воды, видимыми физиологическими изменениями и т. д.
Для определения числа ооцист в фекалиях от цыплят каждой опытной группы отдельно с 6 по 12-е сутки ежедневно собирали весь помет, взвешивали,
добавляли воду до объема 2000 г, смешивали смесителем в течение 5 мин. Пробы для дальнейших исследований отбирали из каждой группы в количестве 25 г, которые консервировали 4%-ным раствором бихромата калия и доводили до однородной массы путем размешивания миксером в емкости с завинчивающейся крышкой и хранили в холодильнике при 4 °С (всего 98 проб).
Наличие ооцист в фекалиях определяли флотационным методом с использованием насыщенного раствора хлорида натрия плотностью 1,18 г/см3, а их число подсчитывали с использованием камеры Мак Мастера. 1 г фекалий помещали в стеклянный стаканчик, заливали 3-5 мл флотационного раствора и перемешивали палочкой до получения однородной массы и исчезновения комков; по мере размешивания доливали раствор до объема 30 мл. Взвесь фильтровали через ситечко в другой стаканчик, осадок на ситечке отжимали палочкой. Затем пастеровской или любой другой микропипеткой быстро переносили 0,15 мл взвеси в каждую из шести ячеек камеры, накрывали крышкой и оставляли на 3-5 мин; за отмеченное время имеющиеся ооцисты поднимаются и прилипают к поверхности сетки камеры. Из каждой пробы подсчитывали число ооцист в шести ячейках камеры и выводили среднее значение за каждый исследуемый день. Чтобы определить число ооцист эймерий в 1 г помета, выявленное их количество в одной ячейке (в нашем случае среднее количество из шести) умножали на 200. Зная общее количество помета по каждой группе цыплят за исследуемые дни (с 6 по 12-й) и число ооцист эймерий в 1 г помета подсчитывали общее число выделенных ооцист за отмеченный период.
Для составления градуировочной кривой проводили анализ линейной регрессии между логарифмическими значениями числа ооцист, которыми цыплята были заражены и общим числом всех выделенных в помете ооцист. Регрессионный анализ проводили с помощью компьютера в программе Excel.
Эффективность кенококса клинер и КС 5000, а также 4%-ной концентрации базового препарата фенола определяли исходя из процента снижения выделения ооцист эймерий после воздействия на них препаратов по сравнению с цыплятами контрольной группы.
Результаты и обсуждение
Оценку общего состояния опытных цыплят после назначения суспензии ооцист эймерий, обработанной разными концентрациями кенококса клинер, КС 5000, фенолом, а также чистой культурой спорулированных ооцист проводили по данным клинических наблюдений, которые показали наличие угнетенного состояния; они были малоактивны и забивались в кучу. Каких-либо осложнений при назначении суспензии с ооцистами и после нее не отмечено. Со второго дня после начала опыта по данным общеклинических наблюдений цыплята, получавшие суспензию ооцист, обработанную разными препаратами и их концентрациями, чистой культурой спорулированных ооцист и контрольные не отличались друг от друга.
Второе взвешивание опытных и контрольных цыплят проводили через 5 сут после назначения суспензии ооцист. Результаты взвешиваний показали, что цыплята 1, 2 и 3-й групп, которым назначали суспензию ооцист, обработанную различными концентрациями кенококса, имели средний прирост к исходной массе тела 300,4; 348,2 и 366,5 г соответственно. Тогда как средний прирост массы тела цыплят 4, 5 и 6-й групп, которым задавали суспензию ооцист, обработанную разными концентрациями препарата КС 5000, равнялся 329,1; 347,8 и 301 г соответственно.
Цыплята 7-й группы, получавшие суспензию ооцист, обработанную фенолом, имели средний прирост к исходной массе тела 300,4 г, а у цыплят 8-й контрольной группы данный показатель составил 243 г.
Более заметные изменения были выявлены при взвешивании зараженных спорулированной культурой ооцист цыплят. Так, у цыплят 9, 10 и 11 -й групп, которым задавали по 2000, 1000 и 250 ооцист, средний прирост к исходной
массе тела через 5 сут составил 288,8; 263,4 и 270,7 г соответственно. У цыплят 12,13 и 14-й групп, получавших по 125, 62 и 15 спорулированных ооцист, прирост к исходной массе тела был более заметный и составил 349,3; 382,2 и 372,5 г соответственно.
Следует отметить, что показатель прироста к исходной массе тела является интегрированным и свидетельствует, что у цыплят 9, 10 и 11 -й групп инвазионный процесс, вызванный спорулированными ооцистами Е. (впвПа, протекал более интенсивно и оказал свое влияние на прирост массы. Дальнейшие исследования по определению числа выделяющихся с пометом ооцист подтвердили отмеченное - наибольшее число ооцист установлено у цыплят 9 и 10-й групп.
За время опыта пало 4 цыпленка, по одному из 8 и 10-й и два из 2-й группы, которые были подвергнуты вскрытию и копроскопическим исследованиям. При вскрытии павшего цыпленка из 10-й группы (доза заражения 1000 ооцист/мл) обнаружены следующие признаки: видимые слизистые оболочки и мышцы бледные. Слизистая оболочка слепых отростков геморрагически воспалена, красного цвета, местами некротизирована. Со стороны серозной оболочки слепые отростки темно-красного цвета. При исследовании соскобов со слизистой оболочки слепых отростков найдено скопление ооцист.
При вскрытии других павших цыплят таких признаков и самих ооцист кокцидий не находили.
Исследования по выявлению ооцист в фекалиях опытных цыплят, собранных с 6 по 12-е сутки после назначения обработанной дезинфектантами суспензии, показали их наличие в определенном количестве, но не во всех группах. При исследовании опытных цыплят 1 -й группы, которым назначали суспензию ооцист, обработанную 2%-ной концентрацией кенококса, ооцист эймерий в фекалиях находили только через 5 сут. Средний показатель в 1-й камере за период исследований составил 0,07. В 1 г помета обнаружено 14 ооцист или 0,343 % от контроля. Интенсэффективность кенококса в 2%-ной концентрации после воздействия на них препаратом составила 99,65 % (табл. 1).
При исследовании помета от цыплят 2 и 3-й групп, которым задавали суспензию ооцист, обработанную 4 и 6%-ной концентрацией кенококса, ооцист не находили, что свидетельствует о 100%-ной эффективности кенококса в отмеченных концентрациях против ооцист кокцидий птиц.
У цыплят 4-й группы, которые получали суспензию ооцист, обработанную 2%-ной концентрацией препарата КС 5000, ооцист в помете находили через 2, 3, 4 и 7 сутки. Средний показатель в 1-й камере за период исследований составил 6,95. В 1 г помета обнаружено 1390 ооцист (34,06 % от контроля); интенсэффективность составила 65,94 %.
У цыплят 5-й группы, получавших суспензию ооцист, обработанную 4%-ной концентрацией КС 5000, ооцисты в помете выделяли через 2, 3, 4 и 6 сутки в количестве от 0,16 до 3 в камере, что в среднем составило 0,64. В 1 г помета обнаружено 128 ооцист (3,13 % от контроля). Интенсэффективность КС 5000 в 4%-ной концентрации против ооцист кокцидий птиц составила 96,87 %.
При исследовании проб помета от цыплят 6-й группы, получавших суспензию ооцист, обработанную 6%-ной концентрацией КС 5000, ооцист не находили, что свидетельствует о 100%-ной эффективности препарата в отмеченной концентрации.
У цыплят 7-й группы, которым назначали суспензию ооцист, обработанную 4%-ной концентрацией фенола (базовый препарат), ооцист в помете находили во все сроки исследований. В 1 г помета обнаружено 1192 ооцист (29,21 % от контроля). Интенсэффективность фенола в 4%-ной концентрации против ооцист кокцидий составила 70,79 %.
Цыплята 8-й группы, которые получали буфер WSH без ооцист, служили незараженным контролем и во все сроки исследований оставались свободными от инвазии.
1. Эффективность препаратов против ооцист кокцидий птиц
Номер Обнаружено ооцист в сроки исследований (сутки) после Средний Число В % от кон- ИЭ, %
груп- назначения препаратов показатель в ооцист в 1 троля
пы 1 2 3 4 5 6 7 1-й камере г помета
1 - - - - 0,5 - - 0,07 14 0,343 99,65
2 - - - - - - - - - - 100
3 - - - - - - - - - - 100
4 - 9,2 11,5 11,2 - - 16,8 6,95 1390 34,06 65,94
5 - 0,33 3,0 0,33 - 0,16 - 0,64 128 3,13 96,87
6 - - - - - - - - - - 100
7 0,16 19,5 8,7 2,5 1,16 1,0 8,7 5,96 1192 29,21 70,79
8 - - - - - - - - - - -
9 0,16 23,2 38,2 17,5 29,5 13,0 21,5 20,4 4080
10 2,7 52,3 46,5 29,8 15,2 49,2 45,0 34,4 6880
11 0,33 14,5 10,7 11,3 3,8 9,2 12,2 8,9 1780
12 0,33 14,6 8,8 10,5 4,0 6,5 8,8 7,65 1530
13 - 2,7 3,8 3,8 2,5 3,7 6,7 3,31 662
14 - 0,16 0,83 0,5 0,16 0,16 1,5 0,47 94
Цыплята 9-й группы, получавшие по 2000 спорулированных ооцист/мл, во все сроки исследований с пометом выделяли 0,16-38,2 ооцист в камере. В 1 г помета в этой группе обнаружено 4080 ооцист. Данный показатель использован как исходный при расчете процента снижения числа ооцист или интенсэффективности испытанных в опыте препаратов.
При исследовании помета от цыплят 10-й группы, которым задавали по 1000 спорулированных ооцист/мл во все сроки находили ооцист. Число ооцист в 1 г помета по данной группе составило 6880.
Сравнивая между собой показатели 9 (2000 ооцист/мл) и 10-й групп (1000 ооцист/мл), можно предположить, что спорулированные ооцисты кок-цидий в кишечнике цыплят 10-й группы имели наилучшую приживаемость, о чем свидетельствуют результаты ежедневных исследований помета. Для цыплят 14-дневного возраста с целью экспериментального заражения оптимальной была доза 1000 ооцист/мл.
Цыплята 11 и 12-й групп (зараженный контроль), получавшие по 250 и 125 ооцист/мл, во все сроки исследований с пометом выделяли ооцисты. В 1 г помета у цыплят этих групп число ооцист составило 1780 и 1530 соответственно.
У цыплят 13 и 14-й групп, которым назначали по 62 и 15 ооцист/мл соответственно, в первый срок исследований (через 6 сут) ооцист в помете не находили. В другие сроки исследований у цыплят 13-й группы число ооцист колебалось от 2,5 до 6,7. Число ооцист в 1 г помета составило 6,62. У цыплят 14-й группы в помете обнаружено незначительное количество ооцист - 94 экз. в 1 г помета.
Таким образом, установлена линейная зависимость между дозой заражения и числом выделяемых с пометом ооцист (табл. 2).
Уравнение, описывающее градуировочную кривую имеет вид:
у = А + Вх,
где у - кривая общего числа ооцист в помете; х - кривая дозы заражения; А и В -коэффициент регрессии (рис. 1).
Зараженность инокулята ооцист, обработанных дезинфектантом, можно рассчитать исходя из инвазионной дозы (ГО) и инокулированной дозы (тос. Б) с помощью уравнения:
т
Инвазионность (%) =-/ 100
пюс.Б
Эффективность дезинфектанта может быть выражена в процентной доле от обнаруженных ооцист:
Эффективность (%) = 100 - зараженность (%)
Для определения интенсэффективности использованных дезинфектантов или процента снижения числа ооцист использовали формулу:
КОк-КОд
ИЭ =-х 100,
КО к
где ИЭ - интенсэффективность препарата, %; КОк - число ооцист у цыплят контрольной группы; КОд - число ооцист у цыплят, получавших обработанные дезин-фектантом ооцисты.
Определяем интенсэффективность кенококса в 2%-ной концентрации:
4030-14 ИЭ =-х 100 = 99,65 %.
4090
В концентрациях 4 и 6 % кенококс против ооцист кокцидий показал 100%-ную эффективность. Препарат КС 5000 в 2%-ной концентрации против ооцист кокцидий проявил 65,94%-ную интенсэффективность.
2. Показатели по группам цыплят (зараженный контроль)
Контроль доз Кривая дозы Кривая выде-
Число спорулиро- Фактическое число спо- Число ооцист, выде- Число ооцист, вы- заражения (х) ленных в поме-
ванных ооцист, рулированных ооцист, ленных с пометом (в деленных с поме- те ооцист (у)
введенных цыпля- введенных цыплятам камере Мак-Мастера) том (показатель
там DVG)
15 16 94 413882 1,17609126 5,61687654
62 66 662 2868446 1,81954394 6,45764668
125 133 1530 7068600 2,12385164 6,84933341
250 243 1780 8659700 2,38560627 6,93750285
1000 1167 6880 28483200 3,06707086 7,454588779
2000 2001 4080 18535440 3,30124709 7,26800220
Рис. 1. Зависимость числа выделяемых с пометом ооцист от дозы заражения
В 4%-ной концентрации интенсэффективность КС 5000 составила 96,87 %. В 6%-ной концентрации КС 5000 показал против ооцист кокцидий птиц 100%-ную эффективность. Взятый нами в качестве базового препарата фенол 4%-ный проявил против ооцист эймерий 70,79%-ный эффект.
Таким образом, в результате проведенных исследований установлена наибольшая эффективность кенококса клинер в 4%-ной концентрации.
Литература
1. Акбаев М.Ш. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. - М., 1998. - 743 с.
2. Вершинин И.И. Кокцидиозы животных и их дифференциальная диагностика. - Екатеринбург, 1996. - 264 с.
3. Колабский Н.А., Пашкин П.И. Кокцидиозы сельскохозяйственных животных. - Л., 1974. -159 с.
4. Крылов М.В. Определитель паразитических простейших. - СП: Зоологический институт РАН, 1996. - 693 с.
5. Методические рекомендации по оценке антгельминтиков в ветеринарии. - М., 1986. - 46 с.
6. Методические рекомендации по борьбе с эймериозами и изоспорозами животных. - М., 1994. - 30 с.
7.МашковскийМ.Д. Лекарственные средства. - М., 1993. - 685 с.
8. Сафиуллин Р.Т., Забашта А.П. Эффективность и экономичность мон-лара, кокцисана и элонкограна при эймериозе цыплят // Тр. Всерос. ин-та гельминтол. - М., 2002. - Т. 38. - С. 30-35.
9. Сафиуллин Р.Т., Нифонтова Т.А. Кокцидиозы пушных зверей // Ветеринария. - М., 2009. - № 3. - С. 30-35.
10. Черепанов А.А. Методические рекомендации по испытанию средств дезинвазии в ветеринарии. - М., 1999. - 16 с.
Efficiency of kenocox at experimental eimeriosis of chickens R.T. Safiullin, R.R. Murzakov
Efficiency of different concentration of kenocox cleaner and К8 5000 against sporulated oocysts of Coccidia on 116 experimentally infected chickens-broilers is tested. Intensefficiency of kenocox in 2, 4 and 6 % concentration against sporulated oocysts of Coccidia at birds has made 99,65-100 %. Intensefficiency of КС 5000 in 2, 4 and 6 % concentration against sporulated oocysts of Coccidia at birds has made 65,94 %, 96,87 and 100 % respectively.
Keywords: chickens, eimeriosis, oocysts, kenocox cleaner, К8 5000, efficiency.
