Идентификация микобактерий, выделенных от больных лепрой Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

ИДЕНТИФИКАЦИЯ МИКОБАКТЕРИЙ, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ

БОЛЬНЫХ ЛЕПРОЙ

Арнаудова Кристина Шотаевна

младший научный сотрудник ФГБУ «НИИЛ» Минздрава России г. Астрахань

Сароянц Людмила Валентиновна

д.м.н., заведующая лабораторно-экспериментальным отделом ФГБУ «НИИЛ» Минздрава России, г. Астрахань

АННОТАЦИЯ

Представлены результаты идентификации микобактерий, выделенных с поверхности кожи больных лепрой. Установлено, что у больных лепрой на коже выявляются, помимо М.1ергае, и другие микобактерии, в частности, М.та1тоеше и М^шт.

ABSTRACT

The results of identification of Mycobacterium from skin surface of leprosy patients have been presented. It has been determined the presence on a skin of leprosy patients besides M.leprae and others Mycobacterium, such as M.malmoense и M.avium.

Ключевые слова: M. leprae, лепра, полимеразно-цепная реакция (ПЦР), гибридизация.

Keywords: Mycobacterium leprae, leprosy, polymerase-chain reaction (PCR), hybridization.

Лепра - хроническое инфекционное заболевание, вызываемое патогенной для человека Mycobacterium leprae, способной поражать кожу и периферические нервы и остается одним из немногих патогенов, некультивируемых на питательных средах. В настоящее время для подтверждения диагноза лепры используют клинический осмотр, гистологические и бактериоскопические методы. Учитывая тот факт, что в возникновении и развитии лепры основную роль играют нарушения клеточного иммунитета, можно предположить, что помимо M.leprae на коже больных лепрой могут персистировать и другие микобактерии. В настоящее время во всем мире отмечается рост заболеваемости микобакте-риозами, наиболее высокий риск развития которых наблюдается у лиц с иммунодефицитами [3]. Род Mycobacterium состоит из нескольких групп микобактерий, среди которых, кроме безусловных патогенов человека, таких как M.leprae, M.ulcerans и M.tuberculosis complex, существует целый ряд условно-патогенных микобактерий. Поэтому целью исследования явилась идентификация микобактерий, выделенных с кожи больных лепрой.

Материалы и методы.

Исследовано 79 образцов: 16 биопсий, 43 скарификата кожи от больных лепрой и 20 скарификатов от здоровых лиц. Экстракцию ДНК проводили автоматическим методом с использованием набора реагентов (GXT DNA/RNA GenoExtractionKit) на станции GenoXtract («HainLifescience», Германия). Принцип выделения заключается в связывание микобактерий с магнитными частицами, происходит лизис и осаждение ДНК на частицах, с последующей сепаратной обработкой остатков клеток, отмывкой и переносом образцов в пробирки. Полимеразно-цепную реакцию (ПЦР) проводили на термоциклерах «Терцик» (НПФ «ДНК-технология», Россия). Амплификация ДНК осуществлялась с использованием комплектов реагентов и праймеров фирмы «HainLifescience» (Германия), основанный на DNA-STRIP технологии: 1. Набор «GenoType Leprae DR», позволяющий молекулярно-генетически идентифицировать M.leprae и ее устойчивость к рифампицину, офлоксацину, дапсону; 2. Набор «GenoType Mycobacterium CM (CommonMycobacteria),

выявляющий 14 видов микобактерий, таких как: M.avium ssp., M.chelonae, M.abscessus, M.fortuitum, M.gordonae, M.marinum/M.ulcerans, M.intracellulare, M.scrofulaceum, M.interjectum, M.kansasii, M.malmoense, M.peregrinum, M.xenopi и комплекс M.tuberculosis и 3. Набор «GenoType Mycobacterium AS», обеспечивающий идентификацию 16 видов редко встречающихся микобактерий: M.simiae, M.mucogenicum, M.goodi, M.celatum, M.smegmatis, M.genavense, M.lentiflavum, M.heckeshornense, M.szulgai/M. intermedium, M.phlei, M.haemophilum, M.kansasii, M.ulcerans, M.gastri, M.asiaticum и M.shimoidei. В зависимости от выбранных праймеров применяли от 30 до 50 циклов амплификации. Гибридизацию амплифицированной ДНК выполняли на автоматическом приборе «GT-Blot-48» («HainLifescience», Германия). Учет результатов осуществлялся визуально с помощью прилагаемого к каждому набору шаблона и в автоматическом сканирующем устройстве «GenoScan» («HainLifescience», Германия).

Результаты исследования.

При использовании праймеров «GenoType LepraeDR» M.leprae идентифицировалась во всех биопсиях, что подтверждалось бактериоскопическими и гистологическими методами. Кроме того, в 4,7% случаев бактериоскопически негативных образцов скарификатов кожи от больных лепрой M.leprae обнаруживалась с помощью ПЦР. В скари-фикатах кожи от здоровых лиц M.leprae не выявлялись ни в одном случае. При использовании праймеров «GenoType Mycobacterium CM» в 3 биопсиях от больных лепрой (18,8%) обнаруживались M.malmoense и в одном случае (6,3%) M.avium. В скарификатах кожи от больных лепрой и здоровых лиц ни один из 14 определяемых набором видов микобактерий не определялся. Таким образом, в результате проведенного исследования установлено, что у больных лепрой, преимущественно в биопсиях, выявляются, помимо M.leprae, и другие микобактерии, в частности M.malmoense и M.avium.

Атипичные микобактерии попадают на кожу человека из природных источников, в том числе из почвы, воды, пыли [2]. Микобактерии часто обнаруживаются у живот-

ных, однако передача их от животного к человеку не доказана. Нет доказательств передачи атипичных микобакте-рий от человека к человеку. При обследовании населения Астраханской области Л.А. Винник показал, что на сенси-тины из M.scrofulaceum реагировали 39% населения области, M.battey - 32%, M.avium - 23%, M.kansasii - 3,6% и M.marinum - 2,4% [1]. В работе J.I. Salem, P.G. Filho и др. [4] при исследовании смывов рук 290 здоровых лиц, проживающих в Бразилии, и 36 биопсий от больных лепрой показано, что M.avium-intacellulare обнаруживалась в 11,1% биопсий от больных лепрой и в 7,8% случаев у здоровых. Большинство атипичных микобактерий маловирулентны для человека. У лиц с нормальным иммунитетом заболевание развивается только при массивном заражении или при попадании возбудителя непосредственно в поврежденные ткани. Наличие у больных лепрой, сопутствующей мико-бактериальной флоры может способствовать диссеминиро-ванию процесса на коже.

Таким образом, применение молекулярно-генетических методов для идентификации микобактерий показало высокую чувствительность обнаружения возбудителя лепры по сравнению со стандартными бактериоскопическими методами,

Список литературы

1. Винник, Л.А. Туберкулез и лепра: две тени прошлого? / Л. А. Винник. - Астрахань. 1997. - 128 с.

2. Katoch, V. Infections due to non-tuberculous mycobacteria (NTM) / V. Katoch // Ind. J. Med. Res. - 2004. - Vol. 120. - P. 290-304.

3. Richter, E. Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis infection in a patient with HIV, Germany / E. Richter, J. Wessling, N. Lugering // Emerg. Infect. Dis. - 2002. -Vol. 8. - P. 729-731.

4. Salem, J.I. Isolation and characterization of mycobacteria colonizing the healthy skin / J.I. Salem, P.G. Filho, V. Levy-Frebault et al. // Acta Lepr. - 1989. - Vol. 7. - P. 18-20.

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЕ В РАННИЙ ПЕРИОД ПОСЛЕ МЕСЯЧНОГО ПРЕБЫВАНИЯ В ВЫСОКОГОРЬЕ КЫРГЫЗСТАНА

Слынько Татьяна Николаевна

к.м.н., доцент кафедры гистологии, эмбриологии, цитологии, Кыргызско-Российского Славянского университета,

г.Бишкек, Кыргызстан

АННОТАЦИЯ

Изучали морфофункциональные изменения в щитовидной железе при сочетанном действии алкоголя и деадаптации. ABSTRACT

We studied the morphological changes in the thyroid gland in the combined effect of alcohol and deadaptation. Ключевые слова: деадаптация, алкоголь, щитовидная железа.

Keywords: deadaptation, alcohol, thyroid gland.

Актуальность: Приступив к активному практическому освоению новых сред обитания, человечество вынуждено пребывать в условиях измененной газовой среды [4, с.3; 2, с. 10;]. После месячной адаптации к высокогорью при спуске в долину развивается ряд изменений: ослабление резистентности организма, круглоклеточные инфильтрации и некрозы паренхимы [1, с. 332], более высокий уровень обмена веществ [3, с. 54]. Щитовидная железа является основным регулятором основного и энергетического обмена. Целью исследования явилось изучение изменений в щитовидной железе при сочетанном действии алкоголя в ранний период деадаптации.

Материал и методы исследования: Материалом для исследования служили беспородные белые крысы-самцы (тср = 180гр). Контроль - животные в период деадаптации после месячного пребывания в условиях высокогорья; опыт- животные, после месячного пребывания в высокогорье при действии алкоголя. Объектом исследования служила щитовидная железа, забор кусочков ткани производили на 3, 7 сутки исследования. Фиксировали в 10 % нейтральном

формалине, парафиновые срезы окрашивали гематоксилин-эозином и по Ван Гизон. В качестве морфометрических показателей, для изучения функционального состояния щитовидной железы были исследованы: 1) высота тиреоидно-го эпителия - показатель секреторной активности железы; 2) объем ядра - показатель, отражающий биосинтетическую (гормонопродуцирующую) тиреоидную функцию; 3) площадь фолликулов как интегральный показатель морфо-функционального состояния железы; 4) площадь фолликулярного коллоида, характеризующая состояние резерва гормональных веществ; 5) индекс активации или показатель накопления коллоида (соотношение диаметра фолликула к высоте эпителия).

Результаты и обсуждение: на 3 сутки деадаптации при действии этилового спирта капсула щитовидной железы была хорошо развита и образована коллагеновыми волокнами, фиброцитами, сосудами и нервными окончаниями. Внутрь от капсулы отходили трабекулы, которые делили железу на дольки. В хорошо развитых трабекулах залегали сосуды и нервные волокна. Паренхима щитовидной железы