CC BY
26
Эти результаты позволяют предположить, что в нашей модели БТШ, наряду с их защитной ролыо, выполняют определенную функцию и реализации программ!,I апоптоза. В то же время, выявленная корреляция ПКГ и экспрессии поверхностных БТШ у клеток ЕЬ-4 может являться существенным свойством лимфоцитов, необходимым для своевременной элиминации их короткожи-вуших пулов, индуцированных протективными иммунными реакциями.
Иммунокорригирующая терапия опухолей препаратами цитокинов местно-резорбтивного действия
Протасова С.Ф.1, Киселева И.В.2, Щсканова С.М.1, Жунко В.В.'
1Институт гриппа РАМН,' Институт жашримешпсшъной медицины РА МН, Санкт-Петербург
В настоящее время в нашей стране и за рубежом широко проводится изучение и лечение больных с различными нозологическими формами заболевании, включая онкологические, препаратами рекомбинантных цитокинов. Из зарубежной литературы известно, что не все проводимые исследования заканчиваются удачно. Есть сообщения
о том, что применение концентрированных цитокиновых коктейлей приводит к осложнениям, связанным с некрозом тканей при подкожном и внутрикожном введениях, а в отдельных случаях приводит к гибели больного.
Нами разработана серия новых уникальных препаратов рекомбинантных цитокинов под условным названием “Интерлин”, обладающих местно-резорбтивным действием, которые не имеют побочных эффектов и легко переносятся больными при очевидном терапевтическом эффекте. Препараты серии “Интерлин” были получены на основе комбинации низких доз некоторых рекомбинантных цитокинов - таких, как а-, Р- и у-интерфероны, интерлейкин-1, интерлейкин-2, фактор некроза опухолей-а, активирующих клеточное звено иммунитета.
В условиях эксперимента было изучено влияние цитокиновых мазей па рост карциномы Эрлиха и лимфомы Ь-1210 у белых мышей. Опухолевые клетки вводили животным внутримышечно в заднюю лапу. Показано, что после трехкратного накожного (па область пальпируемой опухоли) нанесения цитокиновой мази количество животных-опу-холеносителей уменьшалось почти в 5 раз по сравнению с этим же показателем в контрольной (нелеченной) группе животных. Противоопухолевы й эффект был достигнут как в случае терапии чувствительной к интерлейкину-2 опухоли (лнмфома Ь-1210), так и в отношении опухоли, известной своей резистентностью к лечению интерлейкином-2 (карцинома Эрлиха). Даже после однократного нанесения цитокиновой мази наблюдался выраженный лечебный эффект. Так, только у 30% леченых животных определялись опухоли, причем диаметр их не превышал 1 см, в то же время в контрольной группе насчитывалось 80% мышей с опухолями, диаметр которых достигал 3-4 см.
В настоящее время начато изучение противоопухолевого действия препаратов серии “Интерлин", содержащих разрешенные для лечения людей иитокины, на ограниченном количестве добровольцев, больных раком. Установлен выраженный иммуностимулирующий, противоопухолевый и обезболивающий эффекты “Ин-терлина”. Уже на первых этапах лечения происходило чрезвычайно быстрое снятие токсикоза и улучшение общего состояния больного. Весьма важным представляется тот факт, что препараты, не оказывая никакою побочного действия, обладают выраженным анальге-зирующим эффектом, что допускает исключить из курса лечения наркотические средства, которые, как известно, угнетают функционирование иммунной системы организма. Показана высокая эффективность “Интер-лина” при комплексном лечении шести больных И-1У стадиями рака разной локализации (рак яичников, шейки матки, легкого, кожи). Так, при лечении рака яичников Ш-1У стадии отмечено значительное уменьшение опухолей и их кальцификация. После краткого (десятидневного) курса его использования при раке шейки матки наблюдалось выраженное редуцирование опухоли. При лечении плоскоклеточного рака кожи достигнуто выздоровление с отсутствием рубцовых изменений. Предоперационная подготовка онкологических больных с помощью “Интерлина” значительно облегчала их послеоперационное состояние. В послеоперационном периоде его применение позволяло значительно сократить сроки пребывания больного в стационаре и перевести его на амбулаторное лечение. Использование “Интерлина” улучшало показатели иммунного статуса у больных, и они легче переносили послеоперационную химио- и лучевую терапию. Применение “Интерлипа” может быть также рекомендовано больным с неоперабельными формами онкологических заболеваний в качестве иммунокорригнрующего средства, приостанавливающего рост опухоли и продлевающего жизнь этим больным.
Полученные результаты расширяют наши знания о свойствах цитокинов, используемых в терапии рака, и позволяют предположить, что простые в приготовлении и относительно дешевые препараты серии “Интерлин”, обладающие обезболивающим действием и не оказывающие никакого побочного эффекта, являются перспективными противоопухолевыми препаратами.
Идентификация лекарственно-индуцированного апоптоза в лейкозных клетках
Соколовская А.А., Заботима Т.Н., Блохин Д.Ю., Барышников АЛО.
Российский Онкологический научный центр им. Н.Н.Блохина, РАМН, Москва
Существенный прогресс в познании феномена апоптоза или программированной клеточной смерти
связан с возможностью идентифицировать апоптоз различными морфологическими, морфометрическими, цитометрическими и биохимическими методами. Применение данных методой позволяет регистрировать апоптоз, вызванный различными стимулами - например, противоопухолевыми препаратами или другими апоптоз-индуцируюшими агентами. Известно, что моноклональные антитела (MICA) ainn-I-'as и ант и-АРО-1, после связывания с поверхностным клеточным рецептором, также индуцируют апоптоз в опухолевых клетках.
Целью работы являлась идентификация программированной клеточной смерти различными методами при индукции химиотерапевтическими препаратами и моноклональными антителами IPO-4 (Anti-CD95) в опухолевых клетках.
Материалы и методы. Исследована способность доксорубицина, этопозида, цисплатина, циклоплотама и моноклональных антител 1РО-4 индуцировать апоптоз in vitro в Т-клеточной неходжкинской злокачественной лимфоме человека линии Jurkat. Клетки (5*105 клеток/мл) инкубировались в среде RPMI-1640 с 10% ТЭС и антибиотиками в течение 4-24-48 часов при 37°С в атмосфере 5% СО, в присутствии различных концентраций препаратов. Индукция апоптоза оценивалась нами по появлению популяции клеток с гиподиплоид-пым набором ДНК (окраска пропидиумом йодидом -PI), методом TUNEL (TdT-mediated dUTP nick end labeling), выявляющего клетки с одно- и двухнитевыми разрывами ДНК, характерными для ранней стадии апоптоза и методом с использованием антикоагулянта Annexin V-F1TC. Регистрация апоптоза проводилась на проточном цитофлюориметре FACScan. (BECTON DICKINSON, США)
Результаты. Используемые препараты индуцировали апоптоз в зависимости от времени и концентраций препаратов. Максимальный процент апоптозных клеток зарегистрирован при индукции доксорубицином 0,5 ng/ in! —48 ч„ цисплатином 40 j.im —48 ч„ этопозидом 10 |ig/ml —48 ч., циклоплатамом 10 pg/ml -24 ч. Использование Annexin V-FITC и PI позволило нам зарегистрировать три популяции клеток при индукции апоптоза МКА IPO-4. Так, после 4 часов индукции МКА определяются живые клетки (неокрашенные), клетки, окрашенные только Annexin V-F1TC —ранняя стадия апоптоза и клетки, окрашенные Annexin V-F1TC и PI — поздняя стадия апоптоза или некротические клетки.
Заключение. Оценка программированной клеточной смерти данными методами подтверждает способность химиотерапевтических препаратов индуцировать апоптоз в опухолевых клетках, что, в свою очередь, может оказаться одним из прогностических факторов в определении чувствительности опухолей к цитотоксическим препаратам и оптимизировать курс химиотерапии. Применение новейших методов регистрации апоптотических клеток позволяет существенно отличить некроз от апоптоза. Кроме того, высокая эффективность данных мето-
дов регистрации апоптоза позволит ответить на ряд вопросов в изучении молекулярных механизмов трансдуции апоптотического сигнала.
Механизм действия иммунотоксинов на основе моноклональных антител к высокомолекулярному меланомо-ассоциированному антигену и А-субъединиц растительных токсинов
Торосян Н.А., Новиков К.Н., Кондратьева Т.Д.,
Егорова С.Г.
Московский государственный университет им. М.В.Ломоносова,
Москва, Россия
В течение последнего десятилетия было синтезировано значительное количество иммунотоксинов. Результаты, полученные в экспериментах на клеточных культурах, показали высокую избирательную цитотоксическую активность большинства препаратов. Накопленный опы т позволяет определить ряд новых подходов в синтезе и применении цитотоксических конъюгатов. Между тем, актуальной остается проблема создания “идеального” иммунотоксина путем оптимизации эффективности действия его составляющих. Изучение механизмов действия на клетки-мишени позволит создавать более эффективные ИТ.
Цель работы: Изучение механизма действия иммунотоксинов.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
1 .Разработка оптимальной схемы выявления клеток, содержащих фрагментированную ДНК.
2. Оценка вклада апоптоза в цитотоксическое действие иммунотоксинов.
Материалы и методы. Получены иммунотоксины на основе моноклональных МА225.28 изотипа 1»С2а против высокомолекулярного меланомо-ассоциированного антигена (любезно предоставленные нам проф. Солдано Ферронс, Нью-Йоркский медицинский колледж) и А-це-пей растительных токсинов вискумина и рицина.
В работе была использована клеточная линии меланомы человека РМ 30 любезно, предоставленная членом датского онкологического общества Киркиным А.Ф.
Окраска клеточного ядра для флуоресцентной микроскопии проводилась с использованием флуоресцентного красителя Ноесй^С.
Для цитофлуориметрического метода использовалась окраска при помощи пропидиума йодида.
Результаты. Для проведения исследований, связанных с инициацией апоптоза в клетках-мишенях при помощи полученных ранее иммунотоксинов, использовали методы цитофлуориметрии и флуоресцентной микроскопии. Клетки-мишени предварительно инкубировали в присутствии токсических агентов в течение 4, 8,12,16,24 часов, после чего проводилось окрашивание и оценка результа-
