CC BY
8Н. С. Фурса1, М. Е. Жаворонкова1,
Г. Н. Бузук2, М. С. Коротаева1
ХРОМАТОСПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АРБУТИНА В ЛИСТЬЯХ ДЕВЯТИ ВИДОВ РОДА РОДОДЕНДРОН
Ярославская государственная медицинская академия
2Витебский государственный медицинский университет
В статье представлены данные о количественном содержании арбутина в листьях 9 видов рода рододендрон. Наиболее высокое содержание арбутина определено в листьях рододендрона даурского и р. Адамса, а наименьшее — в листьях р. Фори, р. понтийского up. желтого.
ВВЕДЕНИЕ
Растения рода рододендрон (Rhododendron L.) семейства вересковые (Ericaceae Juss.) находят применение в традиционной медицине и гомеопатии. В качестве лекарственного сырья используют листья, у отдельных видов используют также цветки [1].
Среди действующих веществ важное место занимают фенольные соединения, в том числе арбутин, обусловливающий мочегонное и антисептическое действие.
Традиционно количественное определение арбутина производят методикой, в основу которой положено йодометрическое титрование [3]. Вместе с тем она громоздка и длительна.
Одной из наиболее объективных методик для количественного определения арбутина в фитосырье представляется хроматоспектрофотометрия [2, 4]. В ее основе лежит измерение оптической плотности извлечения из лекарственного растительного сырья в УФ-области после очистки извлечения от сопутствующих веществ.
Цель исследования - сравнительный количественный анализ листьев 9 видов рода рододендрон по содержанию арбутина.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В качестве объектов исследования служили листья 9 видов рода рододендрон (р. Адамса - R. adamsii Rehd., р. золотистого - R, aureum Georgi, p. даурского - R. dauricum L., p. жёлтого - R. luteum Sweet, p. кавказского - R. caucasicum Pall., p. понтийского - R. ponticum L., p. Симса - R. simsii Planch., p. Смирнова - R. smirnovii Trautv., p. Фори - R. fauriei Franch. var. bra-chycarpum), собранные в местах естественного произрастания и в условиях интродукции в ботанических садах. Количественное определение арбутина в них нами проведено по хроматоспектрофотометрической методике [2], адаптированной применительно к объектам исследования.
Для определения условий максимального извлечения арбутина нами использованы листья рододендрона желтого (Rhododendron luteum Sweet), заготовленные в Главном ботаническом саду РАН (г. Москва) 5 сентября 2006 г.
РЕЗУЛЬТАТЫИ ОБСУЖДЕНИЕ
Из сравнения спектральных характеристик 70% этанольного извлечения из листьев рододендронов и арбутина-стандарта (фирма «Sigma», США) следует, что арбутин - основной фенологликозид исследуемого сырья.
При разработке методики количественного определения арбутина вначале выявили оптимальные условия экстрагирования арбутина.
Так, наибольший выход арбутина наблюдался при экстракции 70% спиртом этиловым (таблица 1). При исследовании влияния на выход арбутина продолжительности и кратности экстрагирования, а также объема экстрагента, взятого для отдельной экстракции, обнаружено, что больше всего арбутина извлекалось при двукратной экстракции 30 мл 70% этанола продолжительностью 30 мин (таблица 2).
Таблица 1 - Влияние концентрации этилового спирта на выход арбутина из сырья
Концентрация спирта этилового, % X, %
40 1,30
50 0,74
70 1,37
90 1,26
96 0,54
Таблица 2 - Определение оптимальных условий экстракции
Количество экстракций Время одной экстракции, мин Объем экстрагента, мл X, %
2 15 30 0,98
3 15 20 0,82
1 30 60 0,92
2 30 30 1,01
3 30 20 0,90
Кроме того, нами определен выход ровался из сырья с размером частиц до 1
арбутина из сырья различной степени из- мм (таблица 3).
мельченности. Полнее всего он экстраги-
Таблица 3 - Зависимость выхода арбутина от степени измельчения сырья
Размер частиц сырья, мм X, %
Цельное сырье 1,78
5 1,73
3 1,73
2 1,85
1 2,12
С учетом изложенных данных нами проведено количественное определение арбутина в листьях 9 видов рода рододендрон, заготовленных в различных регионах России (таблица 4), по приведенной ниже методике.
Методика количественного определения арбутина в листьях рододендронов
Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещали в коническую колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 30 мл 70% спирта этилового, колбу присоединяли к обратному холодильнику и нагревали при умеренном кипении на водяной бане в течение 30 мин. Извлечение
охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100,0 мл так, чтобы частицы сырья не попадали на фильтр. Операцию повторяли. Извлечение доводили до метки 70% этанолом. После этого 6 мл извлечения помещали в колонку с алюминия оксидом и элюировали 15 мл 70% спирта этилового. Элюат собирали в мерную колбу вместимостью 25,0 мл, доводили объем до метки 70% этанолом и перемешивали.
Оптическую плотность данного раствора измеряли на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 285 нм в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм. Раствором сравнения служил 70% спирт этиловый,
пропущенный через колонку с алюминия оксидом. Подготовка хроматографической колонки: 2,0 г алюминия оксида нейтрального для хроматографии (Ь40/250) фирмы «ЬасЬета» (Чехия), промытого водой, очищенной до нейтральной реакции, помещали в стеклянную колонку диаметром 1,5 см и высотой 25 см и промывали 10 мл 70% этанола.
Содержание арбутина в сырье вычисляли по следующей формуле:
где А - оптическая плотность исследуемого раствора;
Е%м - удельный показатель поглощения арбутина-стандарта, равный 72,23 [4, 5];
а - аликвота, мл;
т - навеска сырья, г;
К - коэффициент неполного элюирования, равный 1,14 [4, 5].
Метрологическая характеристика количественного определения арбутина по данной методике приведена в таблице 4.
vio/\-A X100 X 25 X K
\%) 7^1% '
E\CM X m X a
Таблица 4 - Метрологическая характеристика количественного определения арбутина
n f X S2 S Sx P, % t ^ f AX є, %
8 7 1,75 0,0041 0,06З9 0,0226 95 2,З6 0,05 З,05
Ошибка количественного определения Результаты количественного определе-
арбутина в среднем составила 3,05%. ния обобщены в таблице 5.
Таблица 5 - Содержание арбутина в листьях 9 видов рода рододендрон
Вид Место сбора Дата сбора X, %
P. даурский (R. dauricum L.) г. Переславль-Залесский (Ярославская обл.), дендросад 30.09.2005 г. 12,80
P. Адамса (R. adamsii Rehd.) Окрестности г. Иркутска Июль 2005 г. 12,21
P. кавказский (R. caucasicum Pall.) Карачаево-Черкесская республика, Даутское ущелье 26.07.2006 г. 5,72
P. Золотистый (R. aureum Georgi) Окрестности г. Иркутска Июль 2005 г. 5,58
P. Смирнова (R. smirnovii Trautv.) г. Санкт-Петербург, ботанический сад БИЛ Май 2006 г. 5,14
P. Симса (R. simsii Planch.) Комнатное растение Январь 2006 г. 3,19
P. Фори (R. fauriei Franch.) var. короткоплодный (R. brachycarpum) г. Москва, ГБС РАН 05.09.2006 г. 2,75
P. Понтийский (R. ponticum L.) г. Санкт-Петербург, ботанический сад БИН Май 2006 г. 2,66
P. Желтый (R. luteum Sweet) г. Москва, ГБС РАН 05.09.2006 г. 2,02
Примечание. Видырасположены в порядке убывания содержания арбутина
Из данных, приведенных в таблице меньшее - в листьях р. Фори, р. понтий-
5, видно, что наиболее высокое содержа- ского и р. желтого.
ние арбутина определено в листьях рододендрона даурского и р. Адамса, а наи-
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Выявлены оптимальные условия экстрагирования арбутина, положенные в основу методики его хроматоспектрофотометрического определения в листьях 9 видов рода рододендрон.
Наиболее высокое содержание арбутина определено в листьях рододендрона даурского и р. Адамса, а наименьшее -в листьях р. Фори, р. понтийского и р. желтого.
SUMMARY
N.S. Fursa, M.E. Zhavoronkova,
G.N. Buzuk, M.S. Korotaeva ARBUTIN LEVELS IN THE LEAVES OF SEVERAL SPECIES OF THE GENUS RHODODENDRON By the chromatospectrophotometric method the highest content of arbutin was determined in the leaves of Rhododendron dauri-cum and R. adamsii and the lowest one in the leaves of R. fauriei var. brachycarpum, R. ponticum and R. luteum.
ЛИТЕРАТУРА
1. Виды рода рододендрон - потенциальные лекарственные растения: особенности применения, биологически активные вещества органической природы, макро- и микроэлементы / М.Е. Жаворонкова [и др.]; Естествознание и гуманизм: сб. науч. работ / Современный мир, природа и человек; под ред. Н. Н. Ильинских. - Томск, 2007. - Т. 4, № 1. - С. 40 - 44.
2. Хроматоспектрофотометрическое определение арбутина в листьях Bergenia crassifolia (L.) Fritsh / П.Б. Лубсандоржиева [и др.] // Хим. фарм. журн. - 2000. - № 5. -С. 38 - 40.
3. Государственная фармакопея СССР. XI изд. Вып. 2. - М.: Медицина, 1990. - 400 с.
4. Онегин, С.В. Выявление объективной и разработка наиболее достоверной методики количественного определения арбутина в траве вереска обыкновенного / С.В. Онегин, Н.С. Фурса // Современные вопросы фармакогнозии: Межвуз. сб. науч. тр. с международ. участием, посвященный 20-
летию кафедры фармакогнозии / ЯГТУ; под ред. Н.С. Фурсы. - Ярославль, 2004. -С. 235 - 248.
5. Белоусов, М.В. Фармакогностическая характеристика и биологическая активность представителей семейства вересковые (Ericaceae) флоры Сибири и Дальнего Востока: автореф. ... дис. докт. фармац. наук / М.В. Белоусов; Томск, 2004. - 38 с.
Поступила 05.05.2009 г.
