CC BY
90экспериментальная и клиническая урология № 1 2019 www.ecuro.ru
Химико-фармацевтическое исследование оригинальных и воспроизведенных препаратов тамсулозина
А.В. Москалев1, А.Г. Огиенко2,3,4, С.А. Мызь2,5, А.А. Огиенко2,6, В.С. Гладких1
1 ООО «ЭОЛ Лабс»
2 Новосибирский Государственный Университет
3 Институт неорганической химии им. А.В. Николаева СО РАН, Новосибирск
4 Лаборатория трансляционной медицины, Новосибирский Государственный Медицинский Университет
5 Институт химии твердого тела и механохимии СО РАН (ИХТТиМ СО РАН)
6 Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН (ИМКБ СО РАН)
Сведения об авторах:
Москалев А.В. - ООО «ЭОЛЛабс», e-mail: andrei.v.moskalev@gmail.com Moskalev A.V. - «EOL Labs» Ltd, e-mail: andrei.v.moskalev@gmail.com
Огиенко А.Г. - Новосибирский Государственный Университет; Институт неорганической химии им. А.В. Николаева СО РАН, Новосибирск; Лаборатория трансляционной медицины, Новосибирский Государственный Медицинский Университет
Ogiyenko A.G. - Novosibirsk State University; A.V. Nikolaev Inorganic Chemistry Institute of Siberian Branch of Russian Academy of Sciences; Translational Medicine Laboratory Novosibirsk State Medical University
Мызь С.А. - Новосибирский Государственный Университет; Институт химии твердого тела и механохимии СО РАН (ИХТТиМ СО РАН)
Myz S.A. - Novosibirsk State University; Institute of Solid State Chemistry and Mechanochemistry of Siberian Branch of Russian Academy of Sciences
Огиенко А.А. - Новосибирский Государственный Университет; Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН (ИМКБ СО РАН)
Ogiyenko A.A. - Novosibirsk State University; Institute of Molecular and Cell Biology of Siberian Branch of Russian Academy of Sciences
Гладких В.С. - ООО «ЭОЛ Лабс»
Gladkikh V.S. - «EOL Labs» Ltd
Доброкачественная гиперплазия предстательной железы (ДГПЖ) является одним из наиболее распространенных заболеваний у мужчин трудоспособного и репродуктивного возраста. Клиническая картина ДГПЖ может быть очень разнообразной, начиная от бессимптомного протекания и заканчивая выраженным нарушением качества жизни. Хотя выраженные клинические проявления обнаруживаются только у 14% мужчин до 40 лет, с возрастом распространенность ДГПЖ резко возрастает [1]. Для многих больных основными объективными проявлениями болезни являются нарушения мочеиспускания - учащение и затруднение, появление императивных позывов и чувство неполного опорожнения мочевого пузыря [2]. Боль и симптомы ирритативного или затрудненного мочеиспускания могут быть обусловлены обструкцией нижних мочевыводящих путей, вызванной, в свою очередь, дисфункцией шейки мочевого пу-
зыря, сфинктера, стриктурой уретры или дисфункциональным мочеиспусканием с высоким уретральным давлением [3]. Таким образом, некоторые формы заболевания связаны с первичным нарушением функции симпатической нервной системы и гиперактивностью альфа-1-адренорецепторов. Турбулентное мочеиспускание с высоким внутриуретральным давлением вызывает рефлюкс мочи в протоки и дольки предстательной железы, который может стимулировать стерильную воспалительную реакцию [4].
Лекарственные средства на основе а1-адреноблокаторов в настоящее активно используются как препараты первого выбора при лечении симптомов со стороны нижних мочевыводящих путей (СНМП). Блокада а1а-адренорецеп-торов приводит к расслаблению гладкомышечных клеток стромы предстательной железы, что приводит к уменьшению симптомов обструкции. Тамсулозин блокирует ala- и ald-адренорецепторы, что позволяет ему эффективно бороться со всеми СНМП, при этом сосу-
дистые осложнения возникают редко в связи с малым влиянием на а1Ь-адренорецепторы. В настоящее время в России активно применяются более девяти Тамсулозин-содержащих препаратов [5], выпускаемых различными производителями. Однако комплексное терапевтическое действие Тамсулозина может быть эффективным только при достижении необходимой концентрации действующего вещества в крови и ее удерживании в течение заданного времени. Одним из ключевых факторов, обеспечивающим необходимую концентрацию препарата, является механизм контролируемого высвобождения. В связи с чем, целью нашей работы было проведение сравнительного исследования физико-химических и фарма-цевтико-технологических характеристик оригинальных и воспроизведенных препаратов тамсулозина.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Объектами исследования являлись оригинальные и воспроизведенные препараты тамсулозина,
экспериментальная и клиническая урология № 1 2019 www.ecuro.ru
выпускаемые в виде капсул («Омник», «Профлосин», «Фокусин», «Там-сулозин-OBL», «Тамсулозин (Вертекс)», «Тамсулозин Канон», «Омсу-лозин», «Тулозин») и таблеток («Ом-ник Окас», «Тамсулозин Ретард»).
Изучение физико-химических характеристик включало исследование гранулометрического состава содержимого капсул методом оптической микроскопии, исследование морфологии пленочного покрытия /материала ядер таблеток и содержимого капсул методом сканирующей электронной микроскопии, исследование фазового состава пленочных оболочек, материала ядер таблеток и содержимого капсул методами порошковой рентгеновской дифракции и рамановской спектроскопии [6].
Анализ фармацевтико-тех-нологических характеристик
Исследование включало анализ внешнего вида таблеток и капсул, определение средней массы и отклонений в массе таблеток и содержимого капсул (ГФ XIII ОФС.1.4.2.0009.15), прочность на раздавливание (ГФ XIII ОФС.1.4.2.0009.15), распадае-мость таблеток и капсул (ГФ XIII ОФС.1.4.2.0013.15), изучение динамики растворения.
Метод сканирующей электронной микроскопии
Метод сканирующей электронной микроскопии (СЭМ) позволяет одновременно исследовать размеры и форму частиц, распределение частиц по размерам, а также получить изображение объекта в широком диапазоне увеличений.
Электронные микрофотографии образцов были получены с использованием настольного сканирующего электронного микроскопа TM-1000 (Hitachi). Для получения проводящей поверхности проводили напыление Au (толщина слоя 8 нм) в вакууме с использованием комплекса для напыления на препараты токопроводящих пленок (JFC-1600 Auto Fine Coater, Jeol).
Метод рамановской спектроскопии
Рамановская спектроскопия -неконтактный и неразрушающий метод анализа, позволяющий сохранить исследуемый образец для повторного многократного анализа с целью подтверждения результата. Для проведения анализа требуется минимальное количество материала, поскольку зондирующее излучение фокусируется в пятно диаметром около 2 мкм. Именно раманов-ская спектроскопия стала стандартным методом идентификации контрафактных лекарственных средств. В США она успешно применяется для контроля процесса производства фармацевтических препаратов в соответствии с требованиями управления по контролю за продуктами и лекарствами (FDA) [6].
Раман-спектры регистрировались на спектрометре LabRAM HR Evolution (Horiba, Франция) оборудованном многоканальным CCD-детектором, охлаждаемым жидким азотом. Спектры возбуждались линией 514 нм Аг+-лазера мощностью около 1 мвт на поверхности образца. Спектры получены в геометрии обратного рассеяния с использованием микроскопа и диаметром пятна лазерного света на поверхности образца около 2 мкм. Спектральное разрешение спектрометра устанавливалось 3,0 см-1.
Порошковая рентгеновская дифракция
Метод порошковой рентгеновской дифракции используется для идентификации различных фаз в их смеси на основе анализа дифракционной картины образца.
Образец (пленочная оболочка/ ядро таблетки; содержимое капсул) тщательно растирали в агатовой ступке и помещали в кювету диф-рактометра Bruker D8 Advance (X = 1.5406 Â). Порошковые дифракто-граммы были записаны в режиме 2© сканирования в интервале 3-60 градусов с шагом 0,01 градуса при комнатной температуре (+20°C).
Отсутствие связанных асбестов в тальке было показано согласно ГФ XIII ФС.2.2.0017.15 «Тальк» (присутствие амфиболов определяют по наличию на дифрактограмме пиков в диапазоне 20: 10,5±0,1°, а присутствие серпентинов -по наличию пиков в диапазонах 20: 12,1±0,1, 24,3 ±0,1°).
Изучение динамики растворения
Тест «растворение» проводили по фармакопее США (USP, Tamsulosin Hydrochloride Capsules, 2016, test 7) в аппарате «лопастная мешалка» (Varian 705 DS, США) со специальным проволочным приспособлением, препятствующим всплыванию капсул. Количество тамсулозина, перешедшего в среду растворения, определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии («МилиХром А-02», ЗАО «Эконова»).
РЕЗУЛЬТАТЫ
На предварительном этапе исследования было проведено сравнение составов лекарственных препаратов тамсулозина, выпускаемых в виде таблеток с контролируемым высвобождением и капсул с модифицированным высвобождением.
Согласно инструкции к препарату [5], основой таблеток «Омник Окас» являются полиэтиленгли-коли. В технологии производства твердых лекарственных форм (в данном случае, таблеток), они относятся к классу «связующих» вспомогательных веществ для таблетиро-вания [7]. Так же их используют как пластификаторы, препятствующие разрушению, и как солюбилизаторы -вспомогательные вещества для улучшения абсорбции активной основы при грануляции плавлением. Следует отметить, что для распадающихся в желудке таблеток с увеличением содержания связующих веществ ухудшается распадаемость таблеток и скорость высвобождения лекарственного вещества [7]. Таким образом, в случае таблеток препарата «Омник Окас» (таблетки В
экспериментальная и клиническая урология № 1 2019 www.ecuro.ru
с контролируемым высвобождением), на основании указанных выше данных следует ожидать некоторых особенностей. Во-первых, значительного превышения прочности таблеток (минимум 3-4-х) относительно рекомендованных минимальных значений (ГФ XIII ОФС.1.4.2.0011.15). Во-вторых, вследствие достаточно высоких температур плавления (65-72°С для полимеров с молекулярной массой >2000) и отсутствия разрыхляющих вспомогательных веществ в рецептуре таблетки (в данном случае в них нет необходимости), все рекомендованные времена в тестах распа-даемости (ГФ XIII ОФС.1.4.2.0013.15) будут существенно превышены. В-третьих, само поведение таблеток в тесте будет отличаться от поведения желудочно-растворимых таблеток («набухание/образование геля /расширение/растворение» вместо распада таблетки и последующего растворения).
Основой таблеток «Тамсулозин Ретард» являются гипромеллоза (гид-роксипропилметилцеллюлоза, ГПМЦ) и микрокристаллическая целлюлоза (МКЦ). МКЦ широко используется в производстве твердых лекарственных форм в основном в качестве наполнителя, также проявляющего связующие и улучшающие скольжение свойства [8]. ГПМЦ, в зависимости от сорта, может использоваться как компонент пленочного покрытия, связующий агент, дизинтегратор, а также как гидрофильный матричный агент. Основным преимуществом матричных таблеток с использованием ГПМЦ является легкость управления профилем растворения с помощью выбора специфического сорта с определенной вязкостью, изменения содержания ГПМЦ в таблетке и размера (и прочности) таблетки.
Пленочное покрытие таблеток обоих препаратов относится к типу желудочно-растворимого, и используется в большей степени для улучшения потребительских качеств таблетки.
Таким образом, полная замена основы таблетки в препарате «Там-
сулозин Ретард» по сравнению с «Омник Окас», в принципе, не является препятствием для создания дженерика со сходным профилем высвобождения, вследствие возможности варьирования достаточно большого количества параметров как самой таблетки (размер/форма/прочность), так и состава таблеточной массы. Однако в связи с меньшей массой таблетки, с меньшей массой твердой дисперсной системы на базе ГПМЦ (являющейся основой матрикса таблетки), и с большей массовой долей тамсу-лозина («Омник Окас»: 0,1607 % (400 мкг/248,85 мг); «Тамсулозин Ретард»: 0,3125% (400 мкг/128 мг)) можно предположить, что величины прочности таблеток будут сильно превышены относительно не только рекомендованных минимальных значений, но и относительно таблеток препарата «Омник Окас».
Сравнение инструкций к препаратам тамсулозина, выпускаемых в форме капсул [5], показал, что все они относятся к типу капсул с модифицированным высвобождением (имеют в составе оболочки или содержимого специальные вспомогательные вещества, предназначенные для изменения скорости или места высвобождения действующих веществ). Классификация по составу основы содержимого капсул (пел-леты/гранулы), выбранных для исследования препаратов дает, возможность разделить их на две группы:
1. В качестве инертной основы используется МКЦ («Омник», «Про-флосин», «Фокусин», «Омсулозин», «Тулозин»)
2. В качестве инертной основы используется сахароза («Тамсуло-зин-OBL», «Тамсулозин (Вертекс)», «Тамсулозин Канон»).
Несмотря на то, что для всех препаратов основой (носителем) содержащей тамсулозин твердой дисперсной системы [9] являются сополимеры метакриловой кислоты (МАК) и этилакрилата (полиметил-метакрилаты (ПММА)), распределе-
ние этого компонента между ядром и оболочкой в явном виде указано только для препаратов: «Фокусин» (ядро и оболочка), «Тамсулозин-OBL» (только оболочка), «Тамсулозин (Вертекс)» (только оболочка), «Омсулозин» (ядро и оболочка). Помимо использования как компонента оболочек таблеток, ПММА может применяться и в качестве матрицы для создания лекарственных форм, обеспечивающих замедленное высвобождение действующего вещества в организме человека, тем самым продлевая его терапевтический эффект.
Таким образом, уже на основании рассмотренных данных можно сделать следующие предположения:
1. Вследствие практически 10-кратного различия в количестве основы содержащей тамсулозин твердой дисперсной системы препаратов «Омник» (400мкг/42,5мг/рас-пределено по всей грануле) и «Там-сулозин (Вертекс)» (400мкг/4,8мг/ оболочка пеллеты), именно в этом случае следует ожидать значительных различий в количестве высвободившегося тамсулозина в различных контрольных точках от начала испытания.
2. Пеллеты препарата «Тамсу-лозин-OBL» должны иметь наибольшую толщину оболочки (причем действующее вещество может находиться только в оболочке). Необходимость предотвратить растворение оболочки в желудке (требуются ПММА, придающие оболочке желудочно-резистентные свойства) и наличие в составе оболочки ГПМЦ (17,5 % масс.) дает возможность предположить низкое количество высвободившегося тамсулозина на первой контрольной точке через 2 часа после начала испытания (2 часа в 0,1 Н HCl) и превышение на следующей контрольной точке.
Результаты проведенных экспериментов показали, что по показателям подлинности, средней массы и отклонений в массе таблеток / содержимого капсул, различий между всеми исследованными препара-
экспериментальная и клиническая урология № 1 201 9 www.ecuro.ru
тами выявлено не было. Для всех исследованных препаратов не было зафиксировано наличия примесей кристаллических фаз, не соответствующих заявленному составу. Для препаратов, содержащих тальк в составе оболочки таблеток («Тамсуло-зин Ретард») / оболочки (либо пел-леты и оболочки) содержимого капсул препаратов «Омник» (производства ЗАО «ОРТАТ» и ЗАО «ЗиО-Здоровье»), «Профлосин», «Фокусин», «Тамсулозин-OBL», «Тамсулозин Канон», «Омсулозин» и «Тулозин», было показано отсутствие связанных асбестов.
Разрушающая сила для таблеток препаратов «Омник Окас» (122± 10 Н) и «Тамсулозин Ретард» (143±17 Н) превышает минимальное рекомендованное значение (30 Н) для таблеток данных диаметров (09, 07). Вычисленные на основании полученных данных величины прочности таблеток [10, 11] значительно превышают как рекомендо-ванные(0,5 МПа) для данных диаметров («Омник Окас»: в 4 раза (2,0 МПа); «Тамсулозин Ретард»: в 9 раз (4,54 МПа)), так и прочности представленных на российском рынке таблеток некоторых препаратов близкого размера. Вследствие отсутствия полимеров с рН-зависимым высвобождением в рецептурах таблеток, использование подобной твердой дисперсной системы тамсу-лозина на основе «пластификаторов» («Омник Окас»), либо гипро-меллозы («Тамсулозин Ретард») дает возможность модифицировать (пролонгировать) высвобождение там-сулозина только за счет отсутствия «разрыхляющих» вспомогательных веществ и создания таблеток высокой прочности, что должно изменять характер растворения таблеток (медленное «набухание» с последующим медленным растворением вместо быстрого распада таблеток).
Наибольшее значение прочности (среднее значение 22±4 Н) зафиксировано для содержимого капсул препарата «Омсулозин», что может быть связано с наибольшим (среди
всех исследованных препаратов) содержанием полимерной основы (сополимер метакриловой кислоты и этилакрилата, 28,7 масс. %) и наименьшим содержанием МКЦ. Наименьшие значения прочности (средние значения: 6 Н и менее) содержимого капсул зафиксированы для препаратов, содержащих сахарозу в качестве основного (или единственного) компонента «инертных пеллет».
Экспериментами по определению времени распадаемости было показано, что таблетки препаратов «Омник Окас» и «Тамсулозин Ре-
200 300 400 500 600 700 S0O 300 1000
Фокус«!
400 600
1000 1200
Диаметр, мкм
Тамсулозин КАНОН
тард» полностью растворяются через 12 часов после начала эксперимента (через 10 часов после замены среды растворения). Оболочки капсул всех препаратов не имеют желудочно-ре-зистентного покрытия. Пролонгированное высвобождение тамсулозина в этом случае достигается наличием полимерного носителя с рН-зависи-мой растворимостью, входящего в состав самих пеллет, либо их оболочек.
Результаты гранулометрического анализа содержимого капсул представлены на рисунке 1. Для H
& 25
600 1000 Диаметр, мкм
Тамсулозин-OBL
1000 1200
700 500 900 1000 1100 1 200 1500 700 800 900 1000 1100 1200 1300 1400 1500 1500
Диаметр, мкм
Тамсулозин (Вертекс)
Диаметр, мкм
700 800 900 1000 1100 1200 1300
Диаметр, мим
500 500 700 800 900 1000 1100 1200 1 300 1400
Рис. 1. Гранулометрический состав содержимого капсул исследуемых препаратов
экспериментальная и клиническая урология № 1 2019 www.ecuro.ru
группы препаратов с использованием сахарозы в качестве инертной основы («Тамсулозин-OBL», «Там-сулозин (Вертекс)», «Тамсулозин Канон») характерно довольно узкое распределение гранул/пеллет по размерам (размеры 900-1200 мкм). В то же время для препаратов с использованием МКЦ в качестве инертной основы пеллет («Омник», «Профлосин», «Фокусин», «Омсуло-зин», «Тулозин») характерно наличие большего числа пеллет меньшего размера и, как следствие, более широкое распределение по размерам. Данные изменения могут быть связаны с технологическими затруднениями, возникающими на одном или нескольких этапах при использовании пеллет из сахарозы меньшего размера: а) при гранулировании либо подсушивании (раз-рушение/пыление); б) нанесении покрытия (пыление/слипание частиц).
Изменение распределения частиц содержимого капсул по размерам (например, со среднего размера 600 мкм до 1100 мкм) даже при сохранении рецептуры (для любого из препаратов) повлечет за собой изменение профиля высвобождения (снижение) вследствие:
• на ранних стадиях растворения - уменьшения удельной поверхности;
• на поздних стадиях растворения - увеличения радиуса частиц при том же соотношении анионной/нейтральной форм сополимеров (при условии сохранения рецептуры).
Таким образом, уже только изменение гранулометрического состава повлечет за собой необходимость корректировки рецептуры для обеспечения заданного профиля высвобождения. Полное же изменение списка используемых вспомогательных веществ повлечет за собой необходимость решения многопараметрической задачи подбора носителей и порядка их смешивания, растворителей для увлажнения, физико-химических характе-
ристик комбинации сополимеров (сюда же включаем необходимость определения соотношения сополимеров), размера и прочности инертных гранул (при их использовании), состава и физико-химических характеристик оболочки.
На основании полученных данных можно предположить, что подобие составов препаратов «Ом-ник», «Профлосин», «Фокусин» и распределения содержимого капсул по размерам дает возможность более простого решения задачи по обеспечению заданного профиля высвобождения тамсулозина из этих дженериковых аналогов и так же более простой способ влияния на высвобождение тамсулозина на первой контрольной точке (снижение): использование для создания пленочной оболочки преимущественно анионной формы сополимеров МАК. В свою очередь, наличие меньшего числа частиц большего размера, при содержании включающей тамсулозин твердой дисперсной системы на основе сополимеров МАК только в составе оболочки («Тамсулозин-OBL» и «Тамсулозин (Вертекс)») делает обеспечение требуемого профиля высвобождения более сложной задачей. Дополнительное же пропитывание инертных пеллет раствором тамсулозина (для чего необходимо подобрать органический растворитель, с котором растворимость сахарозы отлична от 0; в противном случае дополнительное пропитывание приведет только к пыле-нию и неравномерному содержанию тамсулозина) с целью обеспечить высвобождение в отделах желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) с высокими значениями рН, мы считаем маловероятным вследствие того, что оно не только не гарантирует пролонгированного высвобождения (хорошая растворимость сахарозы), но и повлечет за собой:
• необходимость использования только анионной формы сополимеров в рецептуре оболочки пеллет для предотвращения их рас-
творения в желудке. Следствием этого будут близкие к 0% значения величин высвобождения на первой контрольной точке и почти полное высвобождение во второй контрольной точке, либо
• необходимость использования двухслойного покрытия либо комбинации сополимеров в анионной и нейтральной формах для обеспечения отличного от 0% высвобождения в желудке, опять же с последующим быстрым высвобождением во второй контрольной точке.
Таким образом, на основании результатов экспериментов по определению гранулометрического состава, по определению прочности содержимого каспул и анализа составов пеллет исследованных препаратов, в случае препарата «Там-сулозин (Вертекс)» следует ожидать значительных различий в количестве высвободившегося тамсуло-зина на первой контрольной точке после смены буфера (2 часа в фосфатном буфере) (существенное превышение либо практически полное высвобождение).
Исследование с использованием метода сканирующей электронной микроскопии показало, что ядра таблеток препарата «Там-сулозин Ретард» отличаются от ядер таблеток «Омник Окас» практически плоскими поверхностями сколов и отсутствием межзерновых трещин, что свидетельствует о применении существенно больших усилий прессования и подтверждается большими, чем для таблеток «Ом-ник Окас», значениями прочности таблеток.
Исследование содержимого капсул показало, что гранулы/пел-леты всех исследованных препаратов имеют пленочную оболочку, даже в случаях, когда это явно не указано в инструкциях к препаратам. Наименьшую толщину пленочной оболочки имеют гранулы препарата «Омник» (производства ЗАО «ОРТАТ» и ЗАО «ЗиО-Здо-ровье») (~ 3 мкм) и пеллеты пре-
экспериментальная и клиническая урология № 1 201 9 www.ecuro.ru
парата «Тулозин» (5 мкм). Наибольшую толщину пленочного покрытия (до 50 мкм) имеют пел-леты препарата «Тамсулозин-OBL» (рис. 2).
Анализ внутреннего строения гранул/пеллет позволяет разделить препараты на 3 группы (рис. 2):
1. Умеренно-плотная волокнистая структура (все препараты, содержащие МКЦ в качестве инертного наполнителя);
2. Однородная плотная структура с наличием небольшого количества полостей («высохшая паста»): «Тамсулозин (Вертекс)»;
3. Неоднородное строение гра-нул/пеллет в направлении от центра к поверхности: кристаллы (сферо-низованные, 10-20 мкм) в центре, однородная плотная структура на
поверхности: «Тамсулозин-OBL», «Тамсулозин Канон».
Основой инертных пеллет групп 2 и 3, согласно инструкциям к препаратам, является сахароза. Вероятно, причиной неоднородного строения является меньшее количество увлажняющего агента (вода) при изготовлении инертных пеллет в случае препаратов «Тамсулозин-OBL», «Тамсулозин Канон». С использованием метода рамановской спектроскопии было проведено исследование неоднородности строения гранул/пеллет в направлении от центра к поверхности препаратов «Тамсулозин-OBL» и «Тамсулозин Канон», которое показало, что наблюдавшиеся на снимках СЭМ сферизованные кристаллы относятся к фазам сахарозы и крахмала, входящих в состав «инертных пеллет»
этих препаратов. Материал пеллет препарата «Тамсулозин (Вертекс)» был идентифицирован как сахароза.
Испытание «Растворение» предназначено для определения количества действующего вещества, которое в условиях, указанных в фармакопейной статье или нормативной документации, за определенный промежуток времени должно высвобождаться в среду растворения из твердой дозированной лекарственной формы. Испытание «Растворение» проводится при контроле качества лекарственной формы для подтверждения постоянства ее свойств и надлежащих условий производственного процесса.
По результатам теста «Растворение» препараты «Профлосин» и «Фо-кусин» имеют сходные профили Н
Рис. 2. Характерные микрофотографии содержимого капсул препаратов «Омник» (ЗАО «ОРТАТ») (А), «Омник» (ЗАО «ЗиО-Здоровье») (Б), «Профлосин» (В), «Фо-кусин» (Г), «Омсулозин» (Д), «Тулозин» (Е), «Тамсулозин-OBL» (Ж), «Тамсулозин (Вертекс)» (З), «Тамсулозин Канон» (И). Масштабный отрезок 50 мкм
экспериментальная и клиническая урология № 1 2019 www.ecuro.ru
высвобождения и достоверно отличаются от препарата «Омник» (рис. 3). Так, на основании низких значений высвобождения тамсулозина в первой контрольной точке («Проф-лосин»: 1,4%, коэффициент вариабельности 50%; «Фокусин»: 0,7%; коэффициент вариабельности 57%), можно предположить более позднее начало действия этих препаратов. Кроме того, быстрое высвобождение при смене среды растворения (содержимое капсулы попадает в отделы ЖКТ с высокими рН (кишечник)) и резкий рост концентрации тамсулозина (десятки раз по сравнению с 2,8-кратным в случае «Омник») увеличивает вероятность побочных эффектов (токсического действия) вследствие возможного превышения минимальной токсической концентрации [7].
Для препаратов «Омсулозин» и «Тулозин» также характерны низкие величины высвобождения тамсуло-зина на первой контрольной точке («Омсулозин»: 5,3 %, коэффициент вариабельности 19%; «Тулозин»: 7,2%, коэффициент вариабельности 7%), укладывающиеся, тем не менее, в рекомендованный (ШР) диапазон величины высвобождения для первой контрольной точки (5^25 %).
Таким образом, только препараты «Омник», «Омсулозин» и «Ту-лозин» успешно проходят тест рас-
творения и соответствуют рекомендованным (USP) значениям высвобождения активного ингредиента.
В работе [12], посвященной разработке прецизионного экспресс-метода определения высвобождения тамсулозина с использованием ВЭЖХ, было показано полное отсутствие высвобождения там-сулозина из оригинального препарата «Omnic» даже при выдерживании в течение 12 часов в кислой среде (pH=1,2). Этим авторы работы [12] объясняют длительный период достижения максимальной концентрации тамсулозина в плазме крови (tmax ~ 6 часов, здоровые добровольцы) при его быстрой адсорбции из ЖКТ, о чем сообщалось в обзоре C.I. Dunn с соавт. [13]. Следует отметить, что все дженерико-вые аналоги препарата «Омник» с преимущественным использованием МКЦ в качестве инертной основы имеют сходные с «ранним» препаратом «Omnic» профили высвобождения (рис. 3) [12]. Мы предлагаем этому следующее объяснение: накопленные за первые 10 лет применения оригинального препарата данные (эффективность, фар-макокинетические параметры, наличие и частота побочных эффектов, так же как и корреляции между этими параметрами) привели к необходимости изменения профиля
высвобождения тамсулозина из содержимого капсул «Омник». Следует отметить простоту и изящность решения поставленной задачи: в данном случае профиль высвобождения однозначно задается изменением соотношения «нейтральной» и «анионной» форм используемых сополимеров [14,15]. Для подтверждения данной гипотезы необходимо сравнить полученный в данной работе профиль высвобождения тамсулозина из капсул препарата «Омник» (РФ), с профилями высвобождения тамсу-лозина из капсул препаратов <^1о-тах®» или «Отшс®» (ЕС / США).
Параметры высвобождения тамсулозина из капсул препаратов с преимущественным использованием сахарозы в качестве инертной основы («Тамсулозин-OBL», «Тамсу-лозин (Вертекс)», «Тамсулозин Канон») не соответствуют рекомендованным (ШР) значениям высвобождения активного ингредиента (рис. 4). Таким образом, все препараты этой группы не проходят тест растворения.
Например, высвобождение там-сулозина на первой контрольной точке через 2 ч от начала испытания соответствует рекомендованному только для капсул препарата «Тамсулозин (Вертекс)» (24,3%; рекомендованный диапазон: 5^25 %). В
Рис. 3. Сравнение профилей высвобождения тамсулозина из капсул препаратов с преимущественным использованием МКЦ в качестве инертной основы, полученных в данной работе, с данными, полученными для препарата «Omnю» [12]. Рекомендованные параметры высвобождения тамсулозина (согласно USP) отмечены темно-синими штрихами
Рис. 4. Сравнение профилей высвобождения тамсулозина из капсул группы препаратов, с использованием сахарозы в качестве инертной основы, с препаратом «Омник», и с данными, полученными для препарата «Omnic» [12]. Рекомендованные параметры высвобождения тамсулозина (согласно USP) отмечены темно-синими штрихами
экспериментальная и клиническая урология № 1 2019 www.ecuro.ru
случае препаратов «Тамсулозин-OBL» и «Тамсулозин Канон» значения высвобождения тамсулозина на первой контрольной точке существенно ниже (~ 1 %) и выше (44%) рекомендованных. Для препарата «Тамсулозин-OBL» высвобождение тамсулозина во второй контрольной точке существенно превышает рекомендованное (рис. 4). Для препаратов «Тамсулозин (Вертекс)» и «Тамсулозин Канон» полное высвобождение тамсулозина было зафиксировано уже во второй контрольной точке (2 ч после замены среды на рН=7,4; рекомендовано: 44^66%): 111,0 и 100,7%, соответственно. Одним из объяснений превышения измеренной величины высвобождения тамсулозина над заявленной дозировкой для препарата «Тамсу-лозин (Вертекс)» может быть очень малое количество основы содержащей тамсулозин твердой дисперсной системы (практически в 10 раз меньше относительно препарата «Омник»). В таком случае изменение массы сополимера на 1 мг приведет к относительной ошибке в 2,3% для препарата «Омник» и 21% -для «Тамсулозин (Вертекс)». В случае препарата «Тамсулозин Канон» было дополнительно определено высвобождение тамсулозина через 1 час после замены среды на рН=7,4: величина высвобождения (86,9%) также оказалась на уровне рекомендованной величины высвобождения в третьей контрольной точке (10 ч после замены среды на рН=7,4; рекомендовано: не менее 80%). Вследствие быстрого высвобождения тамсулозина, мы предполагаем, во-первых, увеличение вероятности побочных эффектов вследствие резкого роста концентрации тамсуло-зина в плазме крови пациентов за счет быстрого высвобождения при смене среды растворения (содержимое капсулы попадает в отделы ЖКТ с высокими рН (кишечник)), а во-вторых, наименьшую эффективность препаратов «Тамсулозин (Вертекс)» и «Тамсулозин Канон» среди исследованных в данной ра-
боте препаратов вследствие возможного быстрого выведения там-сулозина.
ОБСУЖДЕНИЕ
В основе клинической эффективности действующего вещества тамсулозин гидрохлорид лежит его способность селективно блокировать постсинаптические а1-адрено-рецепторы гладких мышц предстательной железы, шейки мочевого пузыря, простатической части уретры [16,17]. Это взаимодействие снижает тонус гладких мышц, что облегчает отток мочи и одновременно уменьшает симптомы обструкции и раздражения, связанные с ДГПЖ. Воздействие приводит к облегчению мочеиспускания, снижению болевого синдрома, устранению никтурии и, как следствие, улучшению качества сна и повышению качества жизни пациента [18]. Значительно меньше выражена у тамсулозина способность блокировать а1Ь-адренорецепторы гладких мышц сосудов. Поэтому действие на системное артериальное давление (АД) при поддержании в крови нормативной концентрации незначительно, что особенно важно для пациентов пожилого возраста. Внезапное резкое снижение артериального давления не только приводит к повышению нагрузки на сердечнососудистую систему, но и вызывает резкую слабость, вплоть до обморока, что для возрастных пациентов означает риск травмы или перелома [19].
Выраженный терапевтический эффект проявляется приблизительно через 2 недели от начала лечения при ежедневном применении, т.е. прием препарата имеет накопительный эффект. Однако, терапевтическое воздействие тамсулозина с учетом накопительного эффекта возможно только при соблюдении трех условий:
1. Отсутствие вредных примесей и соответствие заключенной в таблетки/капсулы лекарственной
формы заявленному составу и химическому строению/полиморфной модификации/энантиомеру действующего вещества;
2. Поддержание содержания препарата в крови выше минимальной терапевтической дозы до следующего приема препарата (принимается 1 раз в сутки). Данный эффект достигается за счет замедленного высвобождения действующего вещества из лекарственной формы [20];
3. Поддержание содержания препарата в крови НЕ выше максимальной рекомендованной дозы. Превышение содержания вещества в крови приводить к серьезным нежелательным эффектам, начиная от влияния на тонус гладкой мускулатуры сосудов и незначительной слабости и астении, и вплоть до резкого изменения давления и обмороков. Данный эффект обеспечивается желудочно-резистентными свойствами оболочки (таблеток и капсул), а также замедленным высвобождением и всасыванием [20] действующего вещества из лекарственной формы в тонком кишечнике.
При нарушении любого из данных условий, препарат в лучшем случае не сможет оказывать полноценного терапевтического воздействия, а в худшем - его прием приведет к возникновению серьезных неблагоприятных последствий для организма. Например, использование субстанции сильденфила цитрата ненадлежащего качества (вредные примеси) может существенно увеличить риск возникновения серьезных побочных эффектов [21]. Известны также примеры рацемических препаратов, в которых один из стереоизомеров обладал сильным токсическим эффектом, что приводило к трагическим случаям. Например, R-талидомид является мощным транквилизатором, в то время как S-талидомид обладает тератогенным действием и представляет наибольшую опасность на ранних стадиях беременности [22]. И
экспериментальная и клиническая урология № 1 2019 www.ecuro.ru
Вероятность появления ребенка с физическими деформациями появляется после приема всего одной таблетки талидомида в этот промежуток времени (т.н. «Талидомидная катастрофа», 1960-е годы).
Замедленное высвобождение действующего вещества в ЖКТ обеспечивается в случае тамсуло-зина специально созданной для данного действующего вещества лекарственной формой. Замена любого из компонентов данной сложной сбалансированной твердой дисперсной системы «действующее вещество - полимерные носители -другие вспомогательные вещества» приведет к изменению всей модели и потребует не только корректировки остальных параметров для сохранения аналогичных с оригинальным препаратом фармакокине-тических свойств, но и проверки устойчивости вновь созданной композиции в течение всего срока хранения в условиях переменной температуры/влажности и т.д. Ранее на примере такролимуса, широко используемого иммунодепрессанта, применяемого при пересадке органов, было показано, что кристаллизация из аморфного состояния происходит чаще в случае дженери-ков, содержащих действующее вещество в виде физической смеси с полимерами, а не в виде твердой дисперсной системы [23]. С увеличением степени кристалличности критически уменьшается раствори-
мость [24], что может привести к резкому падению эффективности при использовании первоначальных доз без мониторинга концентрации такролимуса в крови и, таким образом, к отторжению пересаженного органа.
Разработка нового дизайна препарата возможна, однако является сложной многопараметрической задачей. Как правило, исходя из зарубежного опыта разработки сложных моделей препаратов, это требует большого количества времени, средств, фармакологических и клинических исследований [25,26]. В результате успешных разработок высокотехнологичных препаратов научные результаты подобной работы являются самодостаточными для публикации и принимаются высокорейтинговыми журналами [27-29]). В случае исследованных дженериков тамсулозина нам не удалось обнаружить в научной литературе статей по разработке нового дизайна препарата с замедленным высвобождением ни для одного из них. Надежным способом, позволяющим подтвердить эффективность «измененной» лекарственной формы, являются клинические исследования. Однако для регистрации дженериков они не являются обязательными. Можно предположить, что в отсутствии обязательных процедур контроля, рынок РФ получает препараты, произведенные по наиболее дешевому дизайну.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В отличие от препаратов с преимущественным использованием МКЦ в качестве инертной основы (все препараты зарубежного производства), для которых характерны подобные ранней версии препарата «Отшс» [12] профили высвобождения (пролонгированное высвобождение), все препараты с использованием сахарозы в качестве инертной основы (производство локализовано в РФ) имеют статистически различимые профили высвобождения, не эквивалентные ни ранней версии препарата «Отшс», ни препарату «Омник», производство которого локализовано в РФ. Таким образом, вопрос о том, являются ли воспроизведенные препараты «Тамсу-лозин-OBL», «Тамсулозин (Вертекс)», «Тамсулозин Канон» фармацевтически и терапевтически эквивалентными оригинальному является актуальным и открытым. Согласно полученным результатам следует ожидать существенного снижения фармакологической эффективности, и, как следствие, терапевтического потенциала этих препаратов и для доказательства их безопасности и эффективности необходимо проведение дополнительных исследований (напр., сравнительные фармакокинетические исследования с привлечением здоровых добровольцев). □
Авторы выражают благодарность д.х.н. Б.А. Колесову за запись КР-спектров.
Резюме:
Лекарственные средства на основе а1-адреноблокаторов в настоящее активно используются как препараты первого выбора при лечении симптомов со стороны нижних мочевыводящих путей (СНМП). Блокада а1а-адренорецепторов вызывает расслабление гладкомышечных клеток стромы предстательной железы, что приводит к уменьшению симптомов обструкции. Тамсулозин
Summary:
Chemical-pharmaceutical analysis of original and generic tamsulosin preparations
A.V. Moskalev, A.G. Ogiyenko, S.A. Myz', A.A. Ogiyenko, V.S. Gladkikh
Drugs based on a1-adrenergic blockers are currently used as a first line of treatment for lower urinary tract symptoms (LUTS). Blockage of ala-adrenergic receptors leads to relaxation of smooth
Ключевые слова: тамсулозина гидрохлорид, альфа-адреноблокаторы, доброкачественная гиперплазия предстательной железы, корректор уродинамики, инструментальные методы исследования, оригинальные и воспроизведенные лекарственные препараты, эквивалентность.
tey words: tamsulosin hydrochloride, alpha-blockers, benign prostatic hyperplasia, urodynamics corrector, instrumental methods of research, original and reproduced drugs, equivalence.
DOI 10.29188/2222-8543-2019-11-1-32-42
экспериментальная и клиническая урология № 1 201 9 www.ecuro.ru
блокирует ala- и ald-адренорецепторы, что позволяет ему эффективно бороться со всеми СНМП, при этом сосудистые осложнения возникают редко, в связи с малым влиянием на alb-адренорецепторы.
Однако эффективное терапевтическое воздействие препаратов данной группы возможно только при условии достижения и удерживания необходимой концентрации лекарственного вещества в крови в течение заданного времени. Данные характеристики определяются свойствами лекарственной формы в не меньшей, а нередко, в большей степени, чем свойствами самого действующего вещества. На них очень сильно влияет выбор вспомогательных веществ, определяющих профиль высвобождения. Характеристики лекарственной формы могут радикально изменяться при замене одного из вспомогательных веществ, растворителя, из которого получают форму, а также вследствие изменения температурного режима без последующей оптимизации состава или нарушениях технологии производства. Целью данной работы было проведение сравнительного исследования физико-химических и фармацевтико-технологических характеристик препаратов на основе тамсулозина гидрохлорида, используемых в настоящее время в России (капсулы: «Омник», «Профлосин», «Фокусин», «Тамсулозин-OBL», «Тамсулозин (Вертекс)», «Тамсулозин Канон», «Омсулозин» и «Тулозин»; таблетки: «Омник Окас», «Тамсулозин Ретард»). Исследовались общие характеристики таблеток и капсул (сравнение составов лекарственных форм (используемые наполнители и носители), подлинность, средняя масса таблеток/содержимого капсул и ее однородность, прочность на раздавливание, распадаемость), морфология пленочного покрытия и материала ядер таблеток и содержимого капсул, гранулометрический состав содержимого капсул, химический и фазовый состав материала таблеток и капсул, а также профили высвобождения тамсулозина. Было показано, что изменение составов некоторых воспроизведенных препаратов по сравнению с оригинальным приводит к значительным изменениям их физико-химических свойств, что коррелирует со значительными различиями в динамике высвобождения тамсулозина. Установленные отличия потенциально могут влиять на эффективность терапевтического действия лекарственной формы и нуждаются в дальнейшем изучении in vivo.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
muscles in prostatic stroma which leads to a decrease in obstruction symptoms. Tamsulosin blocks ala- and ald-adrenergic receptors, which allows it to effectively diminish all LUTS, while circulatory adverse events are rare because of its low activity towards alb-adrenergic receptors.
However, therapeutic efficacy of drugs belonging to this group is possible only when required serum drug concentration is reached and maintained for a necessary period of time. These characteristics are defined by properties of a pharmaceutical form no less, or sometimes even more than by properties of an active ingredient itself. They are influenced by a choice of excipients which define drug release profile. Properties of a pharmaceutical form may radically change after substitution of one excipient by another, after substitution of solvent used for this pharmaceutical form, due to altered temperature regimen without following optimization of composition or manufacturing flaws.
The aim of this research was to perform a comparative study of physical, chemical, pharmaceutical and technological characteristics of drugs based on tamsulosin hydrochloride currently prescribed and used in Russia (capsules: «Omnic», «Proflosin», «Focusin», «Tamsulosin-OBL», «Tamsulosin Vertex», «Tamsulosin Canon», «Omsulosin» and «Tulosin»; tablets: «Omnic Ocas», «Tamsulosin Retard»). General characteristics of tablets and capsules (comparison of composition, fillers and carriers, authenticity, mean mass of tablets and capsule contents, homogenicity, resistance to crushing, disintegration) were studied, as well as morphology of film coating, core material of tablets and capsule contents, chemical and phase composition of tablets and capsules and tamsulosin release profile.
It was shown that modifications made to composition of certain generic drugs led to significant changes in their physical and chemical properties when compared to original drug, which correlated with significant changes in tamsulosin release profile.
An observed difference may potentially influence therapeutic activity of a pharmaceutical form and requires further in vivo studies.
Authors declare lack of the possible conflicts of interests.
ЛИТЕРАТУРА
1. Атаманова Е.А., Андрюхин М.И., Макаров О.В. Прогностическое значение кровотока предстательной железы у больных острой задержкой мочеиспускания на фоне доброкачественной гиперплазии предстательной железы. Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Медицина 2014;(3): 52-57.
2. Урология. Российские клинические рекомендации. [под ред. Ю.Г. Аляева, П.В. Глыбочко, Д.Ю. Пушкаря] 2017. 544 с.
3. Братчиков О.И., Тюзиков И.А., Шумакова Е.А., Гресь А.А., Чураев С.А. Клинико-уродинамическая эффективность и безопасность различных режимов фармакотерапии у мужчин с симптомами нижних мочевых путей/доброкачественной гиперплазией предстательной железы в зависимости от андрогенного статуса. Тихоокеанский медицинский журнал. 2016;1; (63):29-32.
4. Сивков А.В., Ощепков В.Н., Кешишев Н.Г., Шкабко О.В. Опыт лечения пациентов с хроническим неинфекционным простатитом.
Медицинский Совет. 2011 ;(7-8):65-68.
5. Официальный электронный ресурс «Государственный Реестр Лекарственных Средств» (http://grls.rosminzdrav.ru) Минздрава России.
6. Руководство по инструментальным методам исследования при разработке и экспертизе качества лекарственных препаратов [под ред. С.Н. Быковского, И.А. Василенко, М.И. Харченко, А.Б. Белова, И.Е. Шохина, Е.А. Дориной]. М.: Перо, 2014.
7. Меньшутина Н.В., Мишина Ю.В., Алвес С.В. Инновационные технологии и оборудование фармацевтического производства. Т1. М.: Издательство БИНОМ, 2012, 328с.
8. Аутлов С.А., Базарнова Н.Г., Кушнир Е.Ю. Микрокристаллическая целлюлоза: структура, свойства и области применения (обзор). Химия растительного сырья 2013;(3):33-41.
9. Leuner C, Dressman J. Improving drug solubility for oral delivery using solid dispersions. Eur J Pharm and Biopharma, 2000; 50(1): 47-60.
экспериментальная и клиническая урология № 1 201 9 www.ecuro.ru
ЛИТЕРАТУРА
10. Fell JT, Newton JM. Determination of tablet strength by diametral compression test. J Pharma Sci, 1970;59:688-691.
11. Pitt KG, Heasley MG. Determination of the tensile strength of elongated tablets. Powder Technology, 2013;238:169-175.
12. Aboul-Enein H.Y., Hussein R.F., Radwan M.A., Yusuf A., Al-Ahmadi W., Al-Rawithi S. Tamsulosin dissolution from pharmaceutical dosage forms using an automated HPLC system. J Liquid Chromatography & Related Technologies 2003;26(7):1109-1116.
13. Dunn CJ, Matheson A, Faulds DM. Tamsulosin - A review of its pharmacology and therapeutic efficacy in the management of lower urinary tract symptoms. Drugs Aging 2002;19(2):135-161.
14. Palmieri GF, Michelini S, Di Martino P, Martelli S. Polymers with pH-dependent solubility: Possibility of use in the formulation of gastroresis-tant and controlled-release matrix tablets. Drug Develo Industrial Pharmacy 2000;26(8):837-845.
15. Palmieri GF, Bonacucina G, Di Martino P, Martelli S. Spray-drying as a method for microparticulate controlled release systems preparation: Advantages and limits. I. Water-soluble drugs. Drug Develo Industrial Pharmacy 2001;27(3):195-204.
16. Neill MG, Shahani R, Zlotta AR. Tamsulosin oral controlled absorption system (OCAS) in the treatment of benign prostatic hypertrophy. Ther Clin Risk Manag 2008;4(1):11-18.
17. Schulman CC, Cortvriend J, Jonas U, Lock TM, Vaage S, Speakman MJ. Tamsulosin: 3-year long-term efficacy and safety in patients with lower urinary tract symptoms suggestive of benign prostatic obstruction: analysis of a European, multinational, multicenter, open-label study. European Tamsulosin Study Group. Eur Urol 1999;36(6):609-620.
18. Djavan B., Milani S., Davies J., Bolodeok J. The Impact ofTamsulosin Oral Controlled Absorption System(OCAS) on Nocturia and the Quality of Sleep: Preliminary Results of a Pilot Study. Eur Urol Sup 2005;(4):61-68. doi:10.1016/j.eursup.2004.12.001
19. Michel MC, Korstanje C, Krauwinkel W, Shear M, Davies J, Quartel A. Cardiovascular Safety of the Oral Controlled Absorption System (OCAS) Formulation ofTamsulosin Compared to the Modified Release (MR) Formulation. Eur Urol Sup 2005;(4):53-60.
20. Prasaja B, Harahap Y, Lusthom W, Setiawan EC, Ginting MB, Hardiyanti, Lipin. A bioequivalence study of two tamsulosin sustained-release tablets in Indonesian healthy volunteers. Eur J Drug Metab Phar-macokinet 2011;36(2):109-113.
21. Keizers PHJ, Wiegard A, Venhuis BJ. The quality of sildenafil active substance of illegal source. JPharm Biomed Anal 2016;131:133-139.
22. Ali I, Gupta VK, Aboul-Enein HY, Singh P, Sharma B. Role of racemization in optically active drugs development. Chirality 2007;19(6):453-463.
23. Trasi N.S., Purohit H.S., Taylor L.S. Evaluation of the Crystallization Tendency of Commercially Available Amorphous Tacrolimus Formulations Exposed to Different Stress Conditions. Pharm Res. 2017;34(10):2142-2155.
24. Zidan A.S., Rahman Z., Sayeed V., Raw A., Yu L., Khan M.A. Crys-tallinity evaluation of tacrolimus solid dispersions by chemometric analysis. Int J Pharm 2012;423(2):341-350.
25. Lipinski C.A., Lombardo F., Dominy B.W., Feeney P.J. 2001. Experimental and computational approaches to estimate solubility and permeability in drug discovery and development settings. Adv Drug Deliv Rev 2001;46:3-26.
26. Wang J, Urban L, 2004. The impact of early ADME profiling on drug discovery and development strategy. Drug Discovery World Fall 5: 73-86.
27. Dosio F, Brusa P, Crosasso P, Arpicco S, Cattel L. Preparation, characterization and properties in vitro and in vivo of a paclitaxel-albumin conjugate. J Control Release 1997;47(3):293-304.
28. Hawkins MJ, Soon-Shiong P, Desai N. Protein nanoparticles as drug carriers in clinical medicine. Adv Drug Deliv Rev 2008;60(8):876-885.
29. Desai N. Challenges in Development of Nanoparticle-Based Therapeutics. Aaps J. 2012;14(2):282-295.
REFERENCES (1-8)
1. Atamanova E.A., Andryuhin M.I., Makarov O.V. Prognosticheskoe znachenie krovotoka predstatel'noj zhelezy u bol'nyh ostroj zaderzhkoj mocheispuskaniya na fone dobrokachestvennoj giperplazii predstatel'noj zhelezy [Prognostic value of blood flow in prostate in patients with benign prostatic hyperplasia with urine retention].Vestnik Rossijskogo universiteta druzhby narodov. Seriya: Medicina 2014;(3): 52-57 (In Russian)
2. Urologiya. Rossijskie klinicheskie rekomendacii [Urology. Russian clinical guidelines] [Edit. Yu.G. Alyaev, P.V. Glybochko, D.Yu. Pushkar] 2017;544 s (In Russian)
3. Bratchikov O.I., Tyuzikov I.A., SHumakova E.A., Gres' A.A., CHuraev S.A. Kliniko-urodinamicheskaya ehffektivnost' i bezopasnost' razlichnyh rezhimov far-makoterapii u muzhchin s simptomami nizhnih mochevyh putej/dobrokach-estvennoj giperplaziej predstatel'noj zhelezy v zavisimosti ot androgennogo statusa [Clinical and urodynamic efficacy and safety of different modes of pharmacotherapy for men with LUTS/BPH depending of their androgenic status]. Tihookeanskij medicinskij zhurnal 2016;1 (63):29-32 (In Russian)
4. Sivkov A.V., Oshchepkov V.N., Keshishev N.G., SHkabko O.V. Opyt lecheniya pacientov s hronicheskim neinfekcionnym prostatitom [Treatment of patients with chronic non-infectious prostatitis]. Medicinskij Sovet 2011;(7-8):65-68 (In Russian)
5. Oficial'nyj ehlektronnyj resurs «Gosudarstvennyj Reestr Lekarstvennyh Sredstv» (URL: http://grls.rosminzdrav.ru) Minzdrava Rossii (In Russian)
6. Rukovodstvo po instrumental'nym metodam issledovaniya pri razrabotke i ehkspertize kachestva lekarstvennyh preparatov / [Edit. S.N. Bykovskiy, I.A. Vasilenko, M.I. Harchenko, A.B. Belov, I.E. SHohin, E.A. Dorina]. M.: Pero, 2014 (In Russian)
7. Men'shutina N.V., Mishina YU.V., Alves S.V. Innovacionnye tekhnologii i oborudovanie farmacevticheskogo proizvodstva. T1. M.: Izdatel'stvo BINOM, 2012, 328 s (In Russian)
8. Autlov S.A., Bazarnova N.G., Kushnir E.YU. Mikrokristallicheskaya cel-lyuloza: struktura, svojstva i oblasti primeneniya (obzor). Himiya rastitel'nogo syr'ya 2013;(3): 33-41 (In Russian)
