ХАРАКТЕРИСТИКА САНИТАРНОГО КАЧЕСТВА МОЛОКА У БОЛЬНЫХ ПИОМЕТРОЙ КОРОВ

Филатова Алёна Владимировна; Тшивале Белизариу Мануэль; Лощинин Сергей Олегович; Авдеенко Владимир Семёнович; Егунова Алла Владимировна

during early postnatal ontogenesis. Izvestia Orenburg State Agrarian University. 2020; 86(6): 171-174.

16. Useful intestinal microflora and its correction with probiotics / K.M. Amirova, I.A. Rodin et al. // International Scientific and Practical Conference of Researchers and Teachers / Stavropol State Agrarian University. Stavropol, 2016. p. 17-25.

17. Respiratory diseases of cattle of viral and bacterial etiology: textbook / A.G. Glotov, T.I. Glotova, I.A. Rodin and others. Krasnodar: KubGAU, 2017. 281 p.

18. Martynenko Ya.N., Rodin I.A., Tishchenko A.S. Improving the prevention of acute intestinal diseases in calves and piglets // Scientific support of the agro-industrial complex: mater. 75th scientific-practical. conf. Krasnodar, 2020. P. 102-104.

19. Influence of some types of pathogenetic therapy on blood composition / D.B. Selyaninov, S.S. Vachevsky, G.V. Osipchuk et al. Veterinaria Kubani. 2012; 4: 20-22.

20. Molov A.A. Karashaev M.F. Dynamics of the electrical activity of the brain and oxygen tension during adaptation of the body to hypoxia. Izvestia Orenburg State Agrarian University. 2021; 88(2): 203-207.

21. Karashaev M.F. Changes in hemodynamics and oxygen regime of the body of calves after hypoxic exposure. Izvestia Orenburg State Agrarian University. 2017; 63(1): 107-110.

22. Karashaev M.F., Shogenov Yu.Kh. Changes in oxygen transport during hypoxia in calves. Vestnik of the Russian agricultural sciences. 2017; 3: 61-63.

Муаед Фрундзевич Карашаев, доктор биологических наук, доцент, [email protected], https://orcid.org/0000-0002-3940-098X

MuaedF. Karashaev, Doctor of Biology, Associate Professor, [email protected], https://orcid.org/0000-0002-3940-098X

Статья поступила в редакцию 10.10.2022; одобрена после рецензирования 31.10.2022; принята к публикации 31.10.2022.

The article was submitted 10.10.2022; approved after reviewing 31.10.2022; accepted for publication 31.10.2022.

-Ф-

Научная статья

УДК 619:618.714:636.22/28

Характеристика санитарного качества молока у больных пиометрой коров

Алёна Владимировна Филатова1, Белизариу Мануэль Тшивале1, Сергей Олегович Лощинин1,

Владимир Семёнович Авдеенко2, Алла Владимировна Егунова1

1 Саратовский государственный университет генетики, биотехнологии и инженерии, Саратов, Россия

2 Санкт-Петербургский государственный университет ветеринарной медицины, Санкт-Петербург, Россия

Аннотация. Изучено влияние гнойного воспаления матки в ранний послеродовый период у высокоудойных коров на санитарное качество молока, степень его пригодности для производства молочнокислых продуктов и сыров после проведения лечебных мероприятий. Показано, что в образцах молока, полученного от больных пиометрой коров после патологических родов, санитарная безопасность снизилась в 2 раза по сравнению с образцами, полученными от клинически здоровых животных. Отмечено снижение общего содержания молочнокислых организмов. На 3-и, 5-е и 7-е сут. содержимое матки при пиометре в 80 % контаминировано микроорганизмами: S. Dysgalactiae - 29,1 %, S.aureus - 26,4 %, Е. coli - 24,2 %, S. agalactiae - 20,3 %. В монокультуре микрофлору выделяли у 12 % коров, а у 88 % - в ассоциациях различных вариантов. У больных пиометрой животных в основном выделялись микроскопические грибы: плесневые - в 29,6 % случаев - A. fumigatus и в 70,4 % случаев дрожжевые - C. albicans и C. crusei.

Ключевые слова: пиометра, санитарное качество молока, бактериологический анализ содержимого матки.

Для цитирования: Характеристика санитарного качества молока у больных пиометрой коров / А.В. Филатова, Б.М. Тшивале, С.О. Лощинин и др. // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2022. № 6 (98). С. 181 - 186.

Original article

Characteristics of the sanitary quality of milk in cows with pyometra

Alena V. Filatova1, Belizariu M. Tshivale1, Sergey O. Loshchinin1,

Vladimir S. Avdeenko2, Alla V. Egunova1

1 Saratov State University of Genetics, Biotechnology and Engineering, Saratov, Russia

2 Saint Petersburg State University of Veterinary Medicine, St. Petersburg, Russia

Abstract. The influence of purulent inflammation of the uterus in the early postpartum period in high-yielding cows on the sanitary quality of milk, the degree of its suitability for the production of lactic acid products and cheeses after therapeutic measures was studied. It was shown that in samples of milk obtained from cows

with pyometra after pathological births, sanitary safety decreased by 2 times compared with samples obtained from clinically healthy animals. A decrease in the total content of lactic acid organisms was noted. On the 3rd, 5th and 7th days. the contents of the uterus with pyometra in 80 % are contaminated with microorganisms: S. Dysgalactiae - 29.1 %, S. aureus - 26.4 %, E. coli - 24.2 %, S. agalactiae - 20.3 %. In monoculture, the microflora was isolated from 12 % of cows, and from 88 % in associations of various variants. In animals with pyometra, microscopic fungi were mainly isolated: mold - in 29.6 % of cases - A. fumigatus and in 70.4 % of cases yeast - C. albicans and C. crusei.

Keywords: pyometra, sanitary quality of milk, bacteriological analysis of the contents of the uterus.

For citation: Characteristics of the sanitary quality of milk in cows with pyometra / A.V. Filatova, B.M. Tshivale, S.O. Loshchinin et al. Izvestia Orenburg State Agrarian University. 2022; 98(6): 181-186. (In Russ.).

Для восстановления процессов в половом аппарате животных после родов, таких, как регенерация эндометрия, возвращение циклической активности яичников, необходим период времени, прежде чем коровы восстановят плодовитость [1]. С О. Лощинин и др. [2] свидетельствуют о том, что одним из факторов, определяющих вероятность заболевания матки, является частота встречаемости факторов риска, которые можно разделить на факторы, связанные с повреждением матки в период выведения плода, метаболическим стрессом или недостатком гигиены в родовой или ранний послеродовой периоды.

В ряде исследований доказано, что бактериальные инфекции эндометрия, вызывающие воспаление матки, распространены у современного молочного скота после родов и приводят к снижению продуктивности и субфертильности [3, 4]. По данным S. Bademkiran с соавт. [4], среди обследованных 97318 коров заболеваемость метритом составляла 21 %, а по данным M. Drillich с соавт. [5], из 1865 коров было поражено 16,9 %, причём степень заболеваемости варьировала в зависимости от породы, страны и молочной продуктивности стада. Интересно, что, по данным M.J.W. Dohmen [6], гигиена родов и раннего послеродового периода является наименее важным фактором в большинстве эпизоотических моделей, определяющих факторы риска развития воспаления dumplex uterus у коров.

По свидетельству M. Feldmann [7], выделенные новые эндометриальные патогенные E. coli были обнаружены от животных с маточными заболеваниями, которые ассоциируют с T. Pyogenes и тяжестью течения воспаления эндометрия, а также клиническими проявлениями заболевания матки [8]. Послеродовые заболевания матки, по материалам S.G. Moore с соавт. [9], связаны с выделением патогенных бактерий, в частности E. coli, Trueperella pyogenes, Fusobacterium necrophorum, Prevotella и Bacteroides.

Исследования J.P. Timothy [10] подтвердили, что T. pyogenes, F. necrophorum и Prevotella действуют синергически, для усугубления вероятности и тяжести течения метрита. Более поздние опыты [11] с использованием аэробных и анаэробных культур подтверждают важность E. coli, Т. pyogenes и анаэробных бактерий в гнойном воспалении матки у коров после отёла. Наиболее

распространёнными патогенными организмами являются S. dysgalactiae, S. aureus, S. Agalactiae и C. Bovis [12]. Есть данные, полученные с использованием флуоресцентных зондов для бактерий и секвенирования генов 16S рибосомной РНК, что в матке существует разреженный микробиом даже во время беременности [13].

Самка крупного рогатого скота имеет ряд защитных механизмов против микробного загрязнения матки и инфекции эндометрия, которые обеспечивают анатомические барьеры для восходящих инфекций, за исключением периода родов и инсеменации. Вопрос о том, может ли резидентная флора влагалища также конкурировать с патогенами, чтобы ограничить заболевание, является спорным [14].

Гнойное воспаление матки имеет бактериальное происхождение и в 80,0 % случаев вызывается пятью видами бактерий - E. coli, S. uberis, S. aureus, S. dysgalactiae и S. Agalactiae [5]. Однако существует целый ряд антимикробных пептидов, гликопротеинов и муцинов в шейке матки, которые противодействуют бактериальному загрязнению и сдерживают рост бактерий.

Целью исследования является установление роли гнойного воспаления матки в ранний послеродовый период у высокоудойных коров в снижении санитарного качества молока.

Материал и методы. Эксперименты выполнены в хозяйствах различных организационно-правовых форм собственности Саратовской и Волгоградской областей, а также Чеченской Республики. Всего под наблюдением находилось 1758 коров.

Микробиологические исследования стерильно полученных образцов маточных выделений осуществлялись путём посева на стандартные среды Эндо, Кода и Сабуро. Видовую принадлежность и их идентификацию осуществляли, руководствуясь «Кратким определителем бактерий Берги» [3], а грибов - методикой Н.А. Спесивцевой [15].

Для определения вида бактерий использовали пластины «Диагностические системы» (г. Нижний Новгород). Определение чувствительности бактерий к антибиотикам проводили методом диффузии в агар. Для лабораторной диагностики использовали микроскопию приготовленных препаратов по грамму и культурную диагностику -путем посева на сусло - агар.

Цифровой материал подвергали биометрической обработке с использованием ПК «Репйит-4».

Результаты и обсуждение. В молоке, полученном от больных пиометрой коров, общая бактериальная обсеменённость была в 2 раза выше, чем в молоке, полученном от клинически здоровых животных. Результаты исследований свидетельствуют о том, что число мезофильных анаэробных лактатсбраживающих микроорганизмов зависит от уровня общей бактериальной обсеменённости молока и состояния половых органов (Р < 0,05).

В смывах с сосков вымени и кожи молочной железы, полученных от больных пиометрой коров, общая бактериальная обсеменённость в 6,2 раза превышала значение показателя у клинически здоровых животных.

Полученный цифровой материал обработан методом биометрии с выведением коэффициента достоверности (табл. 1).

Общая бактериальная контаминация смывов с поверхности сосков вымени и молочной железы у больных пиометрой коров показала, что обсеменённость полученных образцов составляла 337,4 ± 10,35 тыс/см3, что было в 5,01 раза выше (Р < 0,01), чем в группе здоровых коров. У больных пиометрой коров КМАФнМ, КОЕ/см3 молока составляла (4,9 ± 0,03) х 104 (Р < 0,05), что на порядок выше, чем в образцах молока, полученного от клинически здоровых животных - (4,02 ± 0,07)х104. Число мезофиль-

ных анаэробных лактатсбраживающих микроорганизмов находилось в прямой зависимости от уровня общей бактериальной обсеменённости сосков вымени и молочной железы (Р < 0,05) и от патогенности выделенных культур микроорганизмов из половых органов.

Статистический анализ показателей с высокой степенью положительной корреляции указывает на содержание соматических клеток - г = 0,63, лактопероксидазы - г = 0,65 и лактоферина -г = 0,66 для установления непригодности молока при производстве кисломолочной продукции и сыров. Полученный цифровой материал графически отражён на рисунке 1.

Полученный цифровой материал обработан методом биометрии с выведением коэффициента достоверности и графически отражён на рисунке 2.

Таким образом, в результате микробиологических исследований доказано, что условно-патогенная, патогенная микрофлора являются основным фактором, который инициирует воспалительный процесс на слизистых оболочках рогов матки в 25 - 50 % случаев.

Анализ полученных материалов свидетельствует о том, что общей закономерностью изменений в молоке, полученном от больных пиометрой коров, по сравнению со здоровыми животными является понижение содержания иммунглобулина М в 1,75 раза и снижение иммуноглобулиновой фракции G в 1,52 раза. В то же время в секрете

1. Микробиологические показатели контаминации микроорганизмами в образцах смывов вымени и молока коров, больных гнойным воспалением матки (X ± Sx)

Показатель, гол. Контаминация вымени микроорганизмами, тыс/см3 КМАФнМ, образцов молока, полученного от коров, КОЕ/см3 Мезофильные, анаэробные и лактатсбраживающие микроорганизмы в образцах молока, м.к/см3

Пиометра, n = 8 337,4 ± 10,35 ** (4,9 ± 0,03) х 104* 92,6 ± 7,92*

Животные без патологии, n = 3 77,3 ± 15,4 (4,02 ± 0,07) х 104 161,6 ± 5,52

Примечание: * Р < 0,05; ** Р < 0,01; здесь и далее.

_-_-_-_-_-.Н 576,4

шшшшшшшшшшшшшшшшшшщ

* rnrnrnrnrnrnrnrnrnrnrnrnrnrnrnrnrnrnrnm

i 3565,8

i 3797,5

о и

500

1000

1500

2000

2500

3000

3500

4000

4500

0

Г_~_~1 клиническая нормальная инволюция ГтТтТтт метрит пиометра

(n = 15) (n = 18) (n = 19)

Рис. 1 - Графическое изображение показателей количества соматических клеток в секрете молочной железы у коров при заболевании гнойным воспалением матки

900 800 700 600 500 400 300 200 100 0

875,2

974,2

323,1

343,9

Ж

Лактопероксидаза, УЕ

Лактоферин, мкг/мл

Г7П пиометра (п = 19) и гнойно-катаральный эндометрит (п = 8)

Рис. 2 - Графическое изображение показателей лактопероксидазы и лактоферина в секрете молочной железы у коров при гнойном воспалении матки

молочной железы больных коров выявлено повышение содержания у-лактоглобулина в 1,02 раза, снижение процента фракций Р-лакгоглобулина в 1,06 раза и повышение а-лактоальбумина в 1,18 раза (табл. 2).

Следовательно, у лактирующих коров при заболевании пиометрой в молочной железе проявляется активация клеточной защиты и фактора неспецифической локальной резистентности лактоферина. Полученный цифровой материал отражён в таблице 3.

Установлено, что у коров, больных гнойным воспалением матки, в секрете вымени достоверным изменениям с высокой степенью корреляции подвергается содержание каталазы и оксипролина. Стабилизация лактогенеза при гнойном заболевании бывшего гравидного рога матки обусловливает необходимость регулярного опорожнения вымени и притока из крови свежих нейтрофилов, участвующих в фагоцитозе микроорганизмов и выделяющих интенсивно фермент, о чём свидетельствует повышение его активности.

Следовательно, полученные результаты позволяют по показателям секрета молочной железы проводить контроль за течением гнойного воспалительного процесса в матке коров и эффективностью лечения пиометры, с одной стороны, и прогнозировать пригодность такого молока для производства сыров, с другой. Деструкция лакто-генной ткани при воспалительных заболеваниях репродуктивных органов у высокопродуктивных коров способствует высвобождению биологически активных веществ, обеспечивающих высокий уровень локальной неспецифической резистентности. В опытных образцах кислотообразование происходило быстрее на 5,0 - 15,0 %, чем в контрольных образцах.

Полученный цифровой материал обработан методом биометрии с выведением коэффициента достоверности и отражён в таблице 4.

Молоко, полученное от больных пиометрой коров, имеет сниженное количество молочнокислых организмов во всех образцах после первых суток хранения. Из проб молока больных коров чаще всего выделяли пси-хотрофные и мезофильные микроорганизмы, что составляло 88,63 % от общего количества выделенных бактерий. Кислотность в образцах, сквашенных Lactobacillus bulgarus, была выше на 12,0 - 13,3 %, чем в контрольных образцах. Жизнеспособность клеток симбиотического сочетания была на порядок ниже (2,5^106 против 2,5^107), чем в контрольных образцах молочнокислого продукта.

При этом основные показатели молока не соответствовали гигиеническим требованиям безопасности и пищевой ценности молочных продуктов и продуктов питания на молочной основе, а также его технологическим свойствам при выработке кисломолочных продуктов (табл. 5).

На основе анализа корреляционных связей между показателями резистентности молочной железы неспецифического характера удалось установить, что у больных пиометрой коров

2. Показатели секрета молочной железы у больных пиометрой коров (X ± Sx)

Показатель Клинически здоровые (n = 35) Больные пиометрой (n = 20)

Общий белок, % 3,28 ± 0,09 3,23 ± 0,18

Альбумины, % 16,6 ± 0,16 17,0 ± 0,12**

a-лактоальбумин, % 12,6 ± 0,21 14,9 ± 0,43*

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Р-лактоглобулин, % 48,4 ± 0,32 45,3 ± 0,32*

у-лактоглобулин, % 6,45 ± 0,23 6,6 ± 0,24**

Иммуноглобулины:

G, мг/мл 5,76 ± 0,12 3,78 ± 0,09**

М, мг/мл 0,23 ± 0,19 0,17 ± 0,03*

3. Показатели секрета молочной железы у коров при заболевании пиометрой (X ± Sx)

Показатель Клинически здоровые (n = 35) Больные пиометрой (n = 20)

Оксипролин свободный, % оп 5,78 ± 0,7 3,72 ± 0,6*

Активность каталазы, сек 350,5 ± 42,7 6,57 ± 0,6**

4. Физико-химические параметры молока больных коров гнойным воспалением матки (X ± Sx)

Показатель Больные пиометрой (n = 20) Клинически здоровые (n = 35)

Кислотность, °Т 19,00 ± 0,09* 16,80 ± 0,11*

Плотность, кг/м3 1032,7 ± 11,2 1028,7 ± 10,9

Жир, % 3,88 ± 0,06 4,14 ± 0,05

СОМО, % 8,42 ± 0,03* 8,37 ± 0,03*

Лактоза, % 4,38 ± 0,07 4,61 ± 0,07*

Сычужная свертываемость, мин. 45,5 ± 1,19* 40,3 ± 3,43*

5. Изменение энергетической и пищевой ценности молока, полученного от здоровых и больных пиометрой коров (X ± SX)

Показатель молока Больные пиометрой (n = 20) Клинически здоровые (n = 35)

Процент соответствия пищевой ценности молока

Белок 4,00 ± 0,02 4,11 ± 0,02

Жир 4,12 ± 0,02 4,76 ± 0,01*

Лактоза 1,05 ± 0,01 1,11 ± 0,01*

Энергетическая ценность

ккал 70,22 ± 0,04 74,79 ± 0,05*

кДж 3013,2 ± 2,13 3062,8 ± 2,06**

имела место положительная корреляция между количеством соматических клеток и концентрацией лактоферина в молоке.

Вывод. Пиометра у высокоудойных коров сопровождается повышением микробного и грибкового фона матки, который представлен разнообразными ассоциациями патогенных и условно-патогенных микроорганизмов и микроскопических грибов.

У больных гнойным воспалением коров содержимое матки в 82 % случаев контаминировано различными микроорганизмами: S. dysgalactiae -29,1 %, S. aureus - 26,4 %, Е. coli - 24,2 %, и S. agalactiae - 20,3 %. Смывы с сосков вымени и поверхности молочной железы, полученные от больных пиометрой коров, показали превышение общей бактериальной обсеменённости в 6,2 раза больше, чем смывы, полученные от клинически здоровых животных. Установлена отрицательная корреляция в средней степени между содержанием лактоферина и уровнем активности лактопероксидазы.

В образцах молока, полученного от больных коров, установлены санитарные и биохимические изменения, поэтому ставятся под сомнение его пищевые и энергетические свойства и пригодность для производства кисломолочных продуктов и сыров.

Материалы исследования необходимо учитывать при назначении лечебных процедур больным пиометрой животным, корректировке проведения лечебно-профилактических мероприятий и ограничений использования полученного молока для производства кисломолочной продукции и сыров.

Список источников

1. Информативные методы диагностики заболеваний молочной железы и матки в ранний пуэрперальный период / В.Д. Кочарян, В.С. Авдеенко, Г.С. Чижова,

Ж.Ш. Ушакова // Известия Нижневолжского агроунивер-ситетского комплекса: Наука и высшее профессиональное образование. 2020. № 3 (59). С. 308 - 317.

2. Лощинин С.О., Авдеенко В.С., Альмтаев Э.А Патологические роды и физиологическое состояние новорождённых телят // Ветеринария сельскохозяйственных животных. 2020. № 1. С. 33 - 36.

3. Метрит у коров бактериальной этиологии и его терапия антибактериальными препаратами / Н.В. Родин, Г.М. Фирсов, В.А. Агальцов, В.С. Авдеенко // Научная жизнь (Саратов). 2020. Т. 15. № 3 (103). С. 434 - 442.

4. Presence of bacteria in the endometrium and plac-entomes of pregnant cows / C.C. Karstrup, K. Klitgaard, T.K. Jensen et al. Theriogenolgy. 2017; 99: 43-47.

5. Treatment of chronic endometritis in dairy cows with an intrauterine application of enzymes: A field trial / M. Drillich, D. Raab, M. Wittke, W. Heuwiese. Theriogenology. 2005; 63(7): 1811-1823.

6. The relationship between bacteriological and clinical findings in cows with subacute/chronic endometritis / M.J.W. Dohmen, J.A.C.M. Lohuis, Gy. Huszenicza et al. Theriogenology. 1995; June: 1379-1388.

7. Feldmann M., Emming S., Hoedemaker M. Treatment of chronic bovine endometritis and factors for treatment success. Deutsche Tierarztliche Wochenschrift. 2005; 112(1):10-16.

8. Defining postpartum uterine disease in cattle / I.M. Sheldon, G.S. Lewis, S. Le Blanc, R.O. Gilbert. Theriogenology. 2006; 65(8): 1516-1530.

9. Hot topic: 16S rRNA gene sequencing reveals the microbiome of the virgin and pregnant bovine uterus / S.G. Moore, A.C. Ericsson, S.E. Poock et al. J Dairy Sci. 2017; 100: 4953-4960.

10. Risk factors for clinical endometritis in postpartum dairy cattle / Timothy J. Potter, Javier Guitian, John Fishwick et al. Theriogenology. 2010; 74(1): 127-134.

11. Sannmann I., Heuwieser W. Technical note: interobserver, and test-retest reliabilities of an assessment of vaginal discharge from cows with and without acute puerperal metritis. J Dairy Sci. 2015; 98: 5460-5466.

12. Diversity and health status specific fluctuations of intrauterine microbial communities in postpartum dairy cows / K. Wagener, I. Prunner, H. Pothmann et al. Vet. Microbiol. 2015; 175: 286-293.

13. Antioxidant dynamics in the live animal and implications for ruminant health and product (meat/milk) quality: role of vitamin E and selenium / Surinder S. Chauhan, Pietro Celi, Eric N. Ponnampalam, Brian J. Leury. Animal Production Science. 2014; 54 (10): 1525-1536.

14. Sheldon I.M., Owens S.E. Postpartum uterine infection and endometritis in dairy cattle. Anim. Reprod. 2017; 14(3): 622-629.

15. Comparison of Pelargonium sidoides, Placebo and Antibiotic Treatment of Chronic Endometritis in Dairy Cows: A Field Trial / S. Bademkiran, D. Kurt, B. Yokus, R. Celik. Journal of Animal and Veterinary Advances. 2009; 8(4): 788-793.

References

1. Informative methods for diagnosing diseases of the mammary gland and uterus in the early puerperal period / V.D. Kocharyan, V.S. Avdeenko, G.S. Chizhova, Zh.Sh. Ushakova. Proceedings of Nizhnevolzhskiy agrouni-versity complex: science and higher vocational education. 2020; 59(3): 308-317.

2. Loshchinin S.O., Avdeenko V.S., Almtaev E.A. Pathological births and the physiological state of newborn calves. Veterinary of agricultural animals. 2020; 1: 33-36.

3. Metritis in cows of bacterial etiology and its therapy with antibacterial drugs / N.V. Rodin, G.M. Firsov, V.A. Agaltsov, V.S. Avdeenko. Scientific life (Saratov). 2020; 103(15-3): 434-442.

4. Presence of bacteria in the endometrium and plac-entomes of pregnant cows / C.C. Karstrup, K. Klitgaard, T.K. Jensen et al. Theriogenolgy. 2017; 99: 43-47.

5. Treatment of chronic endometritis in dairy cows with an intrauterine application of enzymes: A field trial / M. Drillich, D. Raab, M. Wittke, W. Heuwiese. Therio-genology. 2005; 63(7): 1811-1823.

6. The relationship between bacteriological and clinical findings in cows with subacute/chronic endometritis /

M.J.W. Dohmen, J.A.C.M. Lohuis, Gy. Huszenicza et al. Theriogenology. 1995; June: 1379-1388.