CC BY
9
DOI: 10.31146/1682-8658-ecg-160-12-25-32
Гуморальный иммунный ответ к липотейхоевым кислотам Clostridium difficile у пациентов с воспалительными заболеваниями кишечника
Абдулганиева Д. И.1, Мухаметова Д. Д.1, Зинкевич О. Д.2, Сафина Н. А.2, Копорулина М. О.2, Одинцова А. Х.3
1 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Казанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации
2 Казанская государственная медицинская академия — филиал федерального государственного бюджетного образовательного учреждения дополнительного профессионального образования «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Министерства здравоохранения Российской Федерации
3 Государственное автономное учреждение здравоохранения «Республиканская клиническая больница Министерства здравоохранения Республики Татарстан»
Humoral immune response to lipoteichoic acids of Clostridium difficile in patients with inflammatory bowel disease
D. Abdulganieva1, D. Mukhametova1, O. Zinkevich2, N. Saphina2, M. Koporulina2, A. Odintsova3
1 Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education "Kazan State Medical University" of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation, department of hospital therapy,
2 Kazan State Medical Academy — Branch Campus of the Federal State Budgetary Educational Institution of Further Professional Education "Russian Medical Academy of Continuous Professional Education" of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation, central scientific research laboratory,
3 State Autonomous Healthcare Institution "Republican Clinical Hospital of the Ministry of Health of the Republic of Tatarstan", gastroenterology department
Для цитирования: Абдулганиева Д. И., Мухаметова Д. Д., Зинкевич О. Д., Сафина Н. А., Копорулина М. О., Одинцова А. Х. Гуморальный иммунный ответ к липотейхоевым кислотам Clostridium difficile у пациентов с воспалительными заболеваниями кишечника. Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2018;160(12): 25-32. DOI: 10.31146/1682-8658-ecg-160-12-25-32
For citation: Abdulganieva D., Mukhametova D., Zinkevich O., Saphina N., Koporulina M., Odintsova A. Humoral immune response to lipoteichoic acids of Clostridium difficile in patients with inflammatory bowel disease. Experimental and Clinical Gastroenterology. 2018;160(12): 25-32. (In Russ.) DOI: 10.31146/1682-8658-ecg-160-12-25-32
Абдулганиева Диана Ильдаровна, д.м.н., профессор, заведующий кафедрой госпитальной терапии Мухаметова Диляра Дамировна, к.м.н., ассистент кафедры госпитальной терапии Зинкевич Олег Данилович, к.б.н., ведущий научный сотрудник ЦНИЛ Сафина Нэлли Ахметовна, к.б.н., старший научный сотрудник ЦНИЛ Копорулина Марина Олеговна, младший научный сотрудник ЦНИЛ Одинцова Альфия Харисовна, к.м.н., заведующий отделением гастроэнтерологии
Diana I. Abdulganieva, D. Med.Sc., professor, head of the department of hospital therapy Scopus Author ID: 39161040600 https://orcid.org/0000-0001-7069-2725
Dilyara D. Mukhametova, PhD, assistant of professor of the department of hospital therapy
Oleg D. Zinkevich, PhD, leading researcher of central scientific research laboratory Scopus Author ID: 6701836792 https://orcid org/0000-0002-6250-1228
Nelli A. Saphina, PhD, senior researcher of central scientific research laboratory Marina O. Koporulina, junior researcher of central scientific research laboratory Alfiya Kh. Odintsova, PhD, head of the department of gastroenterology Scopus Author ID: 8987422400
Резюме
Цель исследования: оценить уровни IgA, IgM и IgG к липотейхоевым кислотам (ЛТК) Clostridium difficile (C. difficile) при воспалительных заболеваниях кишечника (ВЗК).
Материалы и методы. В исследование проспективно было включено 147 пациентов с ВЗК [92 с язвенным колитом (ЯК) и 55 с болезнью Крона (БК)] и 30 здоровых добровольцев. Концентрации сывороточных IgA, IgM и IgG к ЛТК C. difficile оценивали с помощью иммуноферментного анализа.
Результаты. Выявлено повышение IgA к ЛТК C. difficile при обострении ВЗК (0,12 [0,06; 0,19] мкг/мл; р<0,05) и в ремиссию (0,12 [0,07; 0,18] мкг/мл) по сравнению с контрольной группой (0,009 [0,005; 0,01] мкг/мл). При обострении БК IgA к ЛТК C. difficile был выше по сравнению с группой контроля (р<0,01).
И Corresponding author: Мухаметова Диляра Дамировна Dilyara D. Mukhametova
muhdilyara@gmail.com
Уровень IgM к ЛТК C. difficile также были выше при обострении ВЗК (4,75 [2,48; 7,45 мкг/мл; р<0,001) и в ремиссию (4,69 [2,65; 7,85] мкг/мл; р<0,05), чем в контрольной группе (2,4 [1,5; 4,08] мкг/мл). При ЯК и БК имелись содружественные изменения.
Анализ IgG к ЛТК C. difficile показал, что значения при обострении ВЗК (4,17 [1,34; 6,55] мкг/мл; р<0,0001) и в ремиссию (3,39 [1,42; 5,81] мкг/мл; р<0,01) были выше, чем у здоровых (1,0 [0,89; 1,94] мкг/мл). Аналогичные изменения при ЯК и БК.
У медицинских работников, входивших в группу здоровых добровольцев, изучаемые IgA и IgG превышали показателей лиц, не имеющих отношения к медицине.
Заключение. При ВЗК выявлено значимое повышение уровней IgA, IgM, IgG к ЛТК C. difficile по сравнению со здоровыми добровольцами. Повышение антител было характерно для обострения и ремиссии заболевания.
Ключевые слова: воспалительные заболевания кишечника, язвенный колит, болезнь Крона, Clostridium difficile, C. difficile
Summary
Aim. To evaluate the IgA, IgM and IgG to lipoteichoic acids (LPA) of Clostridium difficile (C. difficile) in inflammatory bowel disease (IBD).
Materials and Methods. We prospectively included 147 patients with IBD [92 with ulcerative colitis (UC) and 55 with Crohn's disease (CD)] and 30 healthy volunteers. The concentration of IgA, IgM and IgG to C. difficile LPA in blood was determined by enzyme immunoassay method.
Results. The level of IgA to LPA of C. difficile was higher in active IBD — 0,12 [0,06; 0,19] mkg/ml, p<0,05) and in remission (0,12 [0,07; 0,18] mkg/ml) compared with in control group — 0,009 [0,005; 0,01] mkg/ml. In active CD the studied IgA were higher than in control group (p<0,01).
The level of IgM to LPA of C. difficile was higher in IBD exacerbation (4,75 [2,48; 7,45 mkg/ml; p<0,001), in remission (4,69 [2,65; 7,85] mkg/ml; p<0,05) than in healthy volunteers (2,4 [1,5; 4,08] mkg/ml; p<0,01). The changes in UC and CD were identical.
The studied IgG was higher in active IBD (4,17 [1,34; 6,55] mkg/ml; p<0,0001) and in remission (3,39 [1,42; 5,81] mkg/ml; p<0,01) than in control group (1,0 [0,89; 1,94] mkg/ml). The changes were similar in UC and CD.
The levels of studied IgA and IgG in healthcare workers among our control group was higher than in the persons not related to medicine.
Conclusions. The levels IgA, IgM and IgG to C. difficile LPA in IBD was significant increase compared with in healthy volunteers. The increase of antibodies was characteristic for active and inactive IBD.
Keywords: inflammatory bowel disease, ulcerative colitis, Crohn's disease, Clostridium difficile, C. difficile
Введение
Воспалительные заболевания кишечника (ВЗК), включающие в себя язвенный колит (ЯК) и болезнь Крона (БК), представляют из себя хронические заболевания желудочно-кишечного тракта. На современном этапе патогенез ВЗК объясняется развитием аномального иммунного ответа к кишечной микробиоте у генетически предрасположенных лиц. Роль инфекций в развитии ВЗК изучалась многими исследователями; кроме того, была описана возможная роль некоторых микроорганизмов в развитии и обострения ЯК и БК. Среди возможных патогенов числится инфекция Clostridium difficile (C. difficile) [1, 2].
C. difficile - анаэробная грамположительная спо-рообразующая, токсин-продуцирующая бацилла, которая вызывает кишечные симптомы, которые
варьируют от легкого диарейного синдрома до развития тяжелого колита. За последние десятилетия резко возросло инфицирование C. difficile [2].
При этом хорошо известно, что C. difficile является одной из частой оппортунистической инфекции, сопровождающая ВЗК. К факторам риска развития инфекции C. difficile также относят частые и длительные госпитализации, антибиотикотерапию, терапию стероидами, прием иммуномодуляторов, антисекреторных препаратов и пожилой возраст [3, 4].
Неоднозначность взаимовлияния инфекции C. difficile и течения ВЗК требует дальнейших исследований в этой области. Изучение содержания антител к липотейхоевым кислотам (ЛТК) клеточной стенки C. difficile может способствовать уточнению роли данной инфекции в патогенезе ВЗК.
Материалы и методы
В работу проспективно было включено 147 пациентов с ВЗК (92 пациента с ЯК и 55 пациентов с БК) и 30 здоровых добровольцев. Здоровые добровольцы
были без клинических и лабораторных признаков воспалительных процессов в организме и заболеваний кишечника, 15 из них медицинские работники
(практикующие врачи, ординаторы, интерны) и 15 человек, не имеющих отношения к медицине.
Постановку диагноза, классификацию больных c ЯК и БК проводили в соответствии с клиническими рекомендациями по диагностике и лечению взрослых пациентов с ЯК [5] и БК [6]. У всех исследуемых была исключена активная инфекция C. difficile, были отрицательные результаты анализа кала на токсины А и В C. difficile. Средний возраст пациентов с ЯК составил 38,18±1,23 лет, с БК - 28,04±2,11 лет и в контрольной группе - 30,13±1,53.
Тяжесть ЯК оценивали по индексу активности ЯК (индекс клиники Мейо): ремиссия заболевания наблюдалась у 5 пациентов, легкая степень обострения - 28, умеренная - 43, тяжелая - 16; по индексу активности БК (индекс Бэста): ремиссия заболевания выявлена у 11 пациентов, легкая степень обострения - 15, умеренная - 16, тяжелая - 13.
У всех исследуемых был определен уровень антител класса IgA, IgM и IgG к ЛТК C. difficile. У 62 пациентов с ВЗК (46 с ЯК и 16 с БК) уровень изучаемых антител оценивали повторно через 10 дней на фоне терапии и улучшения самочувствия.
Концентрации IgA, IgM и IgG к ЛТК C. difficile оценивали с помощью иммуноферментного анализа (ИФА). Подготовка сыворотки крови включала: венепункцию срединной локтевой вены с забором 9 мл крови в апирогенные пробирки, покрытые мелкодисперсным антикоагулянтом К3 этилендиамин-тетрауксусной кислотой (ЭДТА), ее выдерживание в течении 30 мин при комнатной температуре, далее центрифугирование при 3000 об/мин в течение 15 мин, отделившуюся сыворотку отбирали стерильным шприцем и хранили в морозильнике при -20°С
до сбора всей коллекции. Концентрацию антител выражали в мкг/мл.
Тест-систему для определения антител к ЛТК изготавливали самостоятельно. Биомассу Clostridium difficile дезинтегрировали с помощью ультразвукового дезинтегратора в ацетатном буфере (рН 4,0). ЛТК экстрагировали дважды с помощью раствора хлороформ-метанол-вода в соотношении 1:1:1. После экстракции водную фазу ЛТК подвергали вакуумному выпариванию в токе азота, затем лиофильно высушивали.
Планшеты (Nunk) сенсибилизировали ЛТК (12,5 мкг/мл) в бикарбонатном буфере (рН 9,6), затем промывали и блокировали 0,05% раствором альбумина. ИФА проводили по стандартной методике с использованием конъюгатов кроличьих антител к А, М, G человека фирмы «Полигност».
Чувствительность для IgA - 0,003 мкг/мл, для IgM -0,008 мкг/мл, для IgG - 0,006 мкг/мл.
Статистический анализ результатов работы выполнен с использованием программ Microsoft Excel и Statistica 12. Характер распределения изучали при помощи метода частотных таблиц и критерия Шар-ко-Уилса. Описание признаков, имеющих нормальное распределение, представлено в виде M±m, где M -среднее арифметическое, m - стандартная ошибка среднего значения; для признаков с распределением отличным от нормального результаты представлены в виде Me [Q^ Q3], где Me - медиана, Qj и Q3 - первый и третий квартиль соответственно. Для парного сравнения использовали независимый t-критерий Стьюдента и критерий Манна-Уитни; корреляционный анализ проводили с использованием ранговой корреляции Спирмена), полученные различия считали статистически значимыми при p<0,05.
Результаты
При ВЗК было отмечено повышение уровня IgA к ЛТК C. difficile (0,01 [0,006; 0,02] мкг/мл по сравнению с контрольной группой 0,009 [0,005; 0,01] мкг/мл (р<0,01). После распределения выборки больных на обострение и ремиссию ВЗК стало
очевидным, что повышение антител IgA к ЛТК C. difficile было как при обострении (0,12 [0,06; 0,19] мкг/мл; р<0,05), так и в ремиссию заболевания (0,12 [0,07; 0,18] мкг/мл) по сравнению с контрольной группой (Рис. 1).
0,26 0,24 0,22 0,20 0,18 0,16 0,14 1 0,12 ^ 0,10 I 0,08 ^0,06 0,04 0,02 0
-0,02
p<0,05
- i- gggg
контроль
ремиссия ВЗК
р Median 125%-75% обострение ВЗК IMin-Max
Рисунок 1.
Уровень антител класса IgA к ЛТК C. difficile при ВЗК
Рисунок 2.
Показатели сывороточных IgA к ЛТК C. difficile при ЯК и БК
0,26
0,24
0,22
0,20
0,18
2
Y 0,16
2
0,14
u е 0,12
■О
и 0,10
^:
1— 0,08
< 0,06
га
0,04
0,02
0
-0,02
p<0,01
Т
¿¡р s Н нр Ш
• Median
контроль ремиссия ЯК обострение ЯК ремиссия БК обострение БК щ25%-75%
jMin-Max
Таблица 1
IgA, IgM и IgG к ЛТК C. difficile при обострении и ремиссии БК и ЯК
Примечание:
* р<0,01,
** р<0,001 по сравнению с контрольной группой
Исследуемые антитела к ЛТК C. difficile, мкг/мл Контроль, n=30 ремиссия ЯК, n=7 обострение ЯК, n=84 ремиссия БК, n=11 обострение БК, n=44
Уровень ^А 0,009 0,015 0,01 0,012 0,013
[0,005; 0,01] [0,006; 0,02] [0,006; 0,017] [0,005; 0,015] [0,009; 0,02]*
Уровень IgM 2,4 [1,5; 4,08] 6,12 [2,70;8,38]** 4,77 [2,90;6,55]** 3,38 [1,87; 6,61] 4,53 [2,19; 8,67]*
УровеньIgG
1,0 [0,89; 1,94]
3,77 [1,22; 7,77]*
4,16 [3,02; 6,46]*
3,23 [1,42; 4,71]*
5,35 [3,12; 7,13]**
После распределения пациентов по нозологиям выявлено, что при обострении БК уровень сывороточных IgA к ЛТК C. difficile был выше (0,013 [0,009; 0,02]) по сравнению с группой здоровых добровольцев (0,009 [0,005; 0,01] мкг/мл; р<0,01) (Рис. 2). Изменения при ЯК не были статистически значимыми (Таблица 1).
С увеличением степени тяжести ЯК выявлена тенденция к повышению уровня IgA к ЛТК C. difficile: при легкой степени тяжести 0,008 [0,006; 0,016] мкг/мл было меньше, чем при средней степени 0,009 [0,004; 0,014] мкг/мл и тяжелой степени 0,013 [0,007; 0,026] мкг/мл. Аналогичная тенденция выявлена и при БК: при легкой степени тяжести было 0,012 [0,008; 0,015] мкг/мл, при средней - 0,015 [0,009; 0,023] мкг/мл и при тяжелой - 0,013 [0,009; 0,04] мкг/мл.
В зависимости от локализации и течения ВЗК значимой разницы уровней IgA между подгруппами БК и ЯК не выявлено.
При анализе антител класса IgM к ЛТК C. difficile установлено, что в группе ВЗК уровень антител (4,19 [2,23; 7,7] мкг/мл) был выше, чем в контрольной группе (2,4 [1,5; 4,08] мкг/мл; р<0,01). При этом повышение наблюдалось и при обострении (4,75 [2,48; 7,45 мкг/мл; р<0,001) и в ремиссию заболевания (4,69 [2,65; 7,85] мкг/мл; р<0,05). При этом статистическая разница между группой ремиссии и обострения ВЗК отсутствует (Рис. 3).
Обнаруженная тенденция сохранилась и при распределении на фенотипы ВЗК - повышение IgM к ЛТК C. difficile наблюдалось и при обострении БК
(4,53 [2,19; 8,67] мкг/мл; р<0,01), а также в ремиссию (6,12 [2,70;8,38] мкг/мл; р<0,001) и при обострении ЯК (4,77 [2,90; 6,55] мкг/мл; р<0,001) по сравнению с контрольной группой (2,4 [1,5; 4,08] мкг/мл) (Рис. 4).
С увеличением тяжести ЯК выявлена тенденция увеличения уровня IgM к ЛТК C. difficile - при легкой степени было 4,6 [2,9; 5,56] мкг/мл, при средней - 4,72 [2,59; 6,19] мкг/мл и тяжелой - 4,77 [2,9; 6,56] мкг/мл. При БК подобная тенденция выявлена не была.
Установлена тенденция более высоких значений уровня IgM к ЛТК C. difficile (7,12 [2,44; 9,57] мкг/ мл) при илеоколите БК, чем при изолированном колите (3,77 [2,06; 6,86] мкг/мл) и илеите (4,3 [1,95; 7,45] мкг/мл). В зависимости от протяженности поражения ЯК разница в уровнях IgM к ЛТК C. difficile не выявлена.
В группе хронического непрерывного течения ВЗК показатели IgM были максимальными. При хроническом непрерывном течении ЯК уровень IgM к ЛТК C. difficile составил 5,44 [3,59; 8,66] мкг/ мл, хроническом рецидивирующем - 4,77 [2,9; 5,95] мкг/мл, при остром - 4,42 [2,39; 6,36] мкг/мл. При хроническом непрерывном течении БК уровень IgM к ЛТК C. difficile был 7,74 [3,98; 9,3] мкг/мл, хроническом рецидивирующем - 3,98 [2,04; 8,67] мкг/мл, при остром - 4,81 [3,87; 6,24] мкг/мл.
Анализ уровня IgG к ЛТК C. difficile показал, что при ВЗК значение (4,04 [1,35; 6,45] мкг/мл) было выше, чем у контрольной группы (1,0 [0,89; 1,94] мкг/мл; р<0,01). Повышение было как в ремиссию
35
30
25
20
15
e
43
U ъи
£ 10
-5
p<0,05
ЙЙ и
Рисунок 3.
Уровень антител класса ^М к ЛТК C. difficile при ВЗК
контроль
ремиссия ЯК
обострение ЯК
Median Щ25%-75% Min-Max
5
0
35
30
25
20
е
тз U ^:
15
10
-5
p<0,01
p<0,001
p<0,001
Рисунок 4.
Показатели сывороточных IgМ к ЛТК C. difficile при ЯК и БК
контроль
ремиссия ЯК обострение ЯК ремиссия БК обострение БК
Median 5125%-75% Min-Max
5
0
ВЗК (3,39 [1,42; 5,81] мкг/мл; р<0,01), так и при обострении (4,17 [1,34; 6,55] мкг/мл; р<0,0001) по сравнению с контрольной группой (1,0 [0,89; 1,94] мкг/ мл) (Рис. 5).
При ЯК и БК наблюдалась аналогичная картина - уровень IgG к ЛТК C. difficile при обострении ЯК (4,16 [3,02; 6,46] мкг/мл; р<0,001) и БК (5,35 [3,12; 7,13] мкг/мл; р<0,001), также и в ремиссию ЯК (3,77 [1,22; 7,77] мкг/мл; р<0,01) и БК (3,23 [1,42; 4,71] мкг/ мл; р<0,01) был статистически значимо выше показателя контрольной группы (1,0 [0,89; 1,94] мкг/ мл) (Рис. 6).
В группе тяжелого ЯК уровень IgG к ЛТК C. difficile был максимальным и имел тенденцию к снижению со снижением тяжести - при тяжелом ЯК был 3,25 [1,11; 7,96] мкг/мл, при среднем - 3,6 [1,07; 6,33] мкг/мл и легком - 4,12 [1,42; 6,38] мкг/мл. Подобная тенденция также наблюдалась при БК - тяжелый БК - 5,31 [1,1; 7,17] мкг/мл, при
среднем - 6,33 [4,18; 7,55] мкг/мл и легком - 4,49 [3,1; 5,76] мкг/мл.
Анализ уровня антител IgG к ЛТК C. difficile в зависимости от локализации ВЗК показал, что при ЯК с увеличением протяженности поражения выявлена тенденция к увеличению уровня антител - при проктите было 3,38 [1,33; 6,28] мкг/ мл, при левостороннем колите - 3,68 [0,96; 6,45] мкг/мл и при тотальном колите - 6,25 [1,5; 24,19] мкг/мл. При илеоколите БК уровень IgG к ЛТК C. difficile (6,36 [4,04; 14,07] мкг/мл) был статистически значимо выше, чем при колите Крона (4,04 [1,13; 5,39 мкг/мл; р<0,05].
Различия в зависимости от различного варианта течения ЯК и БК не выявлены.
На фоне терапии и улучшения самочувствия отмечалась тенденция к снижению изучаемых антител. Уровень IgA к ЛТК C. difficile до лечения был при обострении ЯК 0,01 [0,006; 0,018] мкг/
Рисунок 5.
Уровень антител класса IgG к ЛТК C. difficile при ВЗК
80 70 60 50 40
е
S 30
I— ^ 20 y
J? 10 0 -10
p<0,0001 p<0,01
контроль
Median 25%-75%
ремиссия ВЗК обострениеВЗК JMin-Max
Рисунок 6.
Показатели сывороточных IgG к ЛТК С C. difficile при ЯК и БК
80
70
60
50
40
30
20
10
p<0,01
p<0,001
p<0,001
p<0,01
контроль
ремиссия ЯК обострение ЯК ремиссия БК
Median обострение БК ®25%-75% Min-Max
0
Рисунок 7.
IgA, ^М и IgG к ЛТК C. difficile у медицинских работников
10
2 6
"О
е
4
U ъи I—
y 2
p<0,001
p<0,001
1,6 [0,98
3,04 [2,12 3,27]
5,13]
1,94 [1,24
0,89 [0,78; 0,93] Big
3,85]
0,013 [0,011; 0,015]
X
"fe.
"Нй.
% \
Median
25%-75%
Min-Max
8
0
мл и в динамике - 0,007 [0,004; 0,017] мкг/мл; при обострении БК - 0,013 [0,009; 0,014] мкг/мл и в динамике - 0,008 [0,007; 0,012] мкг/мл. Уровень IgM к ЛТК C. difficile при обострении ЯК - 5,06 [2,7; 7,67] мкг/мл и в динамике - 4,27 [1,72; 8,41] мкг/мл; при обострении БК - 5,19 [2,18; 7,55] мкг/мл и в динамике - 3,37 [2,4; 7,32] мкг/мл. Аналогичная тенденция выявлена и для уровня IgG к ЛТК C. difficile при БК - при обострении было 4,61 [3,38; 5,68] мкг/мл и на фоне терапии - 4,51 [1,61; 6,52] мкг/мл.
Иммунный ответ к C. difficile коррелировал с клинической картиной и лабораторными показателями. При ЯК с увеличением Ig А к C. difficile частота стула уменьшается (r= -0,23; p<0,05), консистенция стула становится менее жидкой (r= -0,27; p<0,05); увеличивается уровень общего Ig A (r=0,33; p<0,05), уровень у-глобулинов в крови (r=0,31; p<0,05). С увеличением возраста пациентов с ЯК увеличивается уровень Ig G к ЛТК C. difficile
(r=0,24; p<0,05). При БК с увеличением Ig M к ЛТК C. difficile консистенция стула становится менее жидкой (r= -0,29; p<0,05).
Обнаружен интересный факт по результатам изучения уровня сывороточных антител контрольной группы. Установлено повышение уровня IgA, IgM и IgG к ЛТК C. difficile у медицинских работников по сравнению с людьми, не имеющими отношение к медицине (Рис. 7). IgA к ЛТК C. difficile у медицинских работников был выше в 2,6 раза (0,013 [0,011; 0,015] мкг/мл), чем в контрольной группе (0,005 [0,004; 0,006] мкг/мл) (р<0,001). Уровень IgM к ЛТК C. difficile у медицинских работников составил 3,04 [2,12; 5,13] мкг/мл и в группе сравнения - 1,6 [0,98; 3,27] мкг/мл (р>0,05). IgG к изучаемому антигену у медработников был 1,94 [1,24: 3,85] мкг/мл и в группе контроля - 0,89 [0,78; 0,93] мкг/мл (р<0,001). Отличия по полу и возрасту выявлены не были.
Обсуждение
При анализе сывороточных антител нами установлено, что при ВЗК было статистически значимым повышение уровня IgA (р<0,01), IgM (р<0,01), IgG (р<0,01) к ЛТК C. difficile по сравнению со здоровыми людьми.
При этом повышение сывороточных антител наблюдалось и при обострении и в ремиссию ВЗК -выявлено повышение IgA к ЛТК C. difficile при обострении ВЗК (р<0,05); повышение IgM к ЛТК C. difficile при обострении ВЗК (р<0,001) и в ремиссию заболевания (р<0,05); повышение IgG к ЛТК C. difficile при обострении (р<0,0001) и в ремиссию ВЗК (р<0,01).
При ЯК и БК имелись содружественные изменения. Отмечено статистически значимое повышение антител IgM, IgG к ЛТК C. difficile при обострении (р<0,001) и ремиссии ЯК (р<0,001 и р<0,01 соответственно). Схожее повышение уровня IgA, IgM, IgG выявлено в ремиссию (р<0,01 для IgG) и при обострении БК (р<0,01 для IgA, IgM и р<0,001 для IgG).
При этом у наших пациентов не было оппортунистической инфекции (отрицательные результаты к токсину А и В). До сих пор нет однозначного мнения, участвует ли C. difficile в возникновении ВЗК или повышается вторично на фоне воспаления в слизистой кишечника [2]. Согласно современным представлениям, C. difficile может участвовать в патогенезе ВЗК. Полученные нами данные подтверждают, что данный микроорганизм может обсуждаться в качестве возможного триггера дисбаланса иммунного ответа, приведшего к развитию воспаления в кишечнике [1, 2].
С увеличением тяжести заболевания нами выявлена тенденция к повышению уровня IgA, IgM, IgG к ЛТК C. difficile при обострении ЯК и БК. Согласно литературным данным, при наличии инфекции C. difficile у пациентов с ВЗК имеется более выраженные изменения состава кишечной микробио-ты, что также сопровождается более выраженной тяжестью ВЗК [7].
При толстокишечном и при более протяженном поражении ВЗК наблюдались более высокие значение сывороточных антител к ЛТК C. difficile. С увеличением протяженности поражения ЯК выявлена тенденция к увеличению уровня IgG к ЛТК C. difficile. При илеоколите БК уровень IgM и IgG (р<0,05) к ЛТК C. difficile был значимо выше, чем при колите Крона.
Выявленные корреляционные связи изучаемых антител с клинической картиной и лабораторными показателями указывают на взаимосвязь с активностью заболевания. Также нами установлено, что с увеличением возраста пациентов с ЯК увеличивается уровень Ig G к ЛТК C. difficile (r=0,24; p<0,05). Пожилой возраст (старше 65 лет) является доказанным фактором риска развития инфекции C. difficile [8].
В структуре контрольной группы, половина которой была связана с практической медициной, выявлены высокие значения антител к C. difficile. Уровень IgA и IgG у медицинских работников превышал показателей лиц, не имеющих отношения к медицине. Полученные данные свидетельствуют о том, люди, работающие в практической медицине, имеют более высокий риск встречи с C. difficile, чем лица не имеющие отношения к медицине. Согласно проведенным исследованиям группы ученых во главе с E. van Nood, посвященной изучению распространенности колонизации инфекции Clostridium difficile у медицинских работников, выявлено, что последние имеют высокую подверженность к заражению и в 23% случаев выявлялись токсины А и В C. difficile, а в 59% высевалась культура C. difficile из кожных покровов [9].
Таким образом, у пациентов с ВЗК на всех стадиях заболевания выявлено повышение всех классов антител: IgA, IgM и IgG к ЛТК C. difficile, что свидетельствует об особой роли этого микроорганизма в патогенезе воспалительных заболеваний кишечника.
Литература | References
1. Azimi T. The role of bacteria in the inflammatory bowel disease development: a narrative review / T. Azimi, M. J. Nasiri, A. S. Chirani et al. // APMIS.- 2018. -№ 126(4).- Р. 275-283.
2. Nitzan O. Clostridium difficile and inflammatory bowel disease: Role in pathogenesis and implications in treatment /O. Nitzan, M. Elias // World J Gastroenterol.-2013.- № 19(43).- Р. 7577-7585.
3. Maharshak N. Clostridium difficile infection in hospitalized patients with inflammatory bowel disease Prevalence, risk factors, and prognosis / N. Maharshak, I. Barzilay, H. Zinger et al. // Medicine.- 2018.- № 97 (5).- Р. e9772.
4. Rezapour M. Clostridium difficile co-infection in inflammatory bowel disease is associated with significantly increased in-hospital mortality / M. Rezapour, A. Galoo-sian, B. Liu et al. // Eur J Gastroenterol Hepatol.- 2018.-№ 30(9).- Р. 1041-1046.
5. Ивашкин В. Т. Рекомендации Российской гастроэнтерологической ассоциации и Ассоциации ко-лопроктологов России по диагностике и лечению взрослых больных язвенным колитом / В. Т. Ивашкин, Ю. А. Шелыгин, Д. И. Абдулганиева и др. // Рос. журн. гастроэнтерол. гепатол. колопроктол.- 2015.-№ 1.- Р. 48-65.
Ivashkin V. T., Shelygin Yu.A, Abdulganiyeva D. I. et al. Guidelines of the Russian gastroenterological association and Russian Association of Coloproctology on diagnostics and treatment of ulcerative colitis in adults. Russian Journal of Gastroenterology, Hepatology, Coloproctology. 2015;25(1):48-65. (In Russ.)
6. Ивашкин В. Т. Рекомендации Российской гастроэнтерологической ассоциации и Ассоциации колопрок-тологов России по диагностике и лечению болезни Крона / В. Т. Ивашкин, Ю. А. Шелыгин, Д. И. Абдулганиева и др. // Колопроктология.- 2017.- № 2(60).-С. 7-29.
Ivashkin V. T., Shelygin Yu.A., Abdulganiyeva D. I. et al. Clinical guide of russian association of gastroenterology and russian association of coloproctology on diagnostics and treatment of crohn's disease. Koloproktologia. 2017;2(60):7-29.
7. Sokol H. Specificities of the intestinal microbiota in patients with inflammatory bowel disease and Clostridium difficile infection / H. Sokol, S. Jegou, C. McQuitty // Gut Microbes. - 2018. - № 9(1).- Р. 55-60.
8. Ивашкин В. Т. Рекомендации Российской гастроэнтерологической ассоциации по диагностике и лечению Clostridium difficile-ассоциированной болезни / В. Т. Ивашкин, Н. Д. Ющук, И. В. Маев и др. // Рос журн гастроэнтерол гепатол колопроктол.- 2016.-№ 26(5).- С. 56-65.
Ivashkin V. T., Yushchuk N. D., Mayev I. V., et al. Diagnostics and treatment of Clostridium difficile-associated disease: Guidelines of the Russian gastroenterological association. Russian Journal of Gastroenterology, Hepatology, Coloproctology. 2016;26(5):56-65. (In Russ.) https://doi.org/10.22416/1382-4376-2016-26-5-56-65
9. Nood E. V. Asymptomatic carriage of Clostridium difficile among HCWs: do we disregard the doctor? / E. V. Nood, K. van Dijk, Z. Hegeman et al. // Infect Control Hosp Epidemiol.- 2009.- № 30(9).- Р. 924-925.
