CC BY
8
DOI: 10.24412/2074-5036-2022-4-33-37 УДК: 619:616-006
Ключевые слова: лечебный патоморфоз, гистологическое исследование, фотодинамическая терапия, базальнокле-точный рак, фотосенсибилизатор, Фотодитазин, опухоль, лазер, онкология
Key words: therapeutic pathomorphosis, histological examination, photodynamic therapy, basal cell carcinoma, photosensitizer, photoditazine, tumor, laser, oncology
^Давыдов Е. В.
ГИСТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЛЕЧЕБНОГО ПАТОМОРФОЗА БАЗАЛЬНОКЛЕТОЧНОГО РАКА КОЖИ ПОСЛЕ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ
HISTOLOGICAL EXAMINATION OF THERAPEUTIC PATHOMORPHOSIS OF BASAL CELL SKIN CANCER AFTER PHOTODYNAMIC THERAPY
'Ветеринарная клиника «Росвет» Адрес: 109129, Россия, Москва, улица Текстильщиков, 7
Veterinary clinic "Rosvet" Address: 109129, Russia, Moscow, Tekstilshchikov Street, 7 2ФГБОУ ВО Московский государственный университет пищевых производств, Институт ветеринарии, ветеринарно-санитарной экспертизы и агробезопасности.
Адрес: 125080 Россия, Москва, Волоколамское шоссе, д.11 FGBOU VO Moscow State University of Food Production, the Institute of Veterinary Medicine, Veterinary and Sanitary
Expertise and Agro-safety.
Address: 125080 Russia, Moscow, Volokolamskoe highway, 11
Давыдов Евгений Владимирович, к. вет. н., доцент кафедры «Ветеринарная медицина».
E-mail: dr.DavydovEV@yandex.ru
Davydov Evgeny Vladimirovich, PhD of Veterinary Sciences, Associate Professor of the Department of Veterinary Medicine. E-mail: dr.DavydovEV@yandex.ru
Аннотация. В исследовании был изучен лечебный патоморфоз базальноклеточного рака кожи собак после фотодинамической терапии. Исследование проводилось на шести собаках пород метис, доберман, ротвейлер и стаффордширский терьер, в возрасте от 8 до 12 лет, с базальноклеточным раком кожи головы или туловища, размером от 1,5 до 6 см. Отбор проб биоматериала и гистологическое исследование проводилось до и после сеанса фотодинамической терапии по общепринятым методикам. Ткани заключались в парафиновую среду Гистомикс, срезы окрашивались гематоксилин-эозином по Ван-Гизону. Степень лечебного пато-морфоза определялась по схеме, разработанной Г. А. Лавниковой. Для проведения фотодинамической терапии использовался диодный лазерный аппарат АЛХТ ЭЛОМЕД (ООО «Эломед», Россия) с длиной волны 660±2 нм и мощностью 1,5 Вт. В качестве фотосенсибилизатора применялся Фотодитазин, который вводился внутривенно в дозе 1 мг/кг. Доза лазерного излучения составляла 350-400 Дж/см2. Сеанс лечения переносился животными хорошо, седации или обезболивания не требовалось, побочных эффектов во время облучения не выявлено. После фотодинамической терапии базальноклеточного рака кожи собак с фотосенсибилизатором Фотодитазин, диагностировался лечебный патоморфоз III и IV степени, в 33,3 % и 66,7 % случаев соответственно. Данные результаты лечения свидетельствуют о эффективности ФДТ при лечении базальноклеточного рака кожи собак.
Summary. In this study, the therapeutic pathomorphosis of basal cell carcinoma of the skin of dogs after photodynamic therapy was studied. The study was conducted on six dogs, breeds of Mestizo, Doberman, Rottweiler and Staffordshire terrier, aged 8-12 years, with basal cell carcinoma of the scalp or trunk, ranging in size from 1.5 to 6 cm. Biomaterial sampling and histological examination were carried out before and after the photodynamic therapy session according to generally accepted methods. The tissues were enclosed in a paraffin medium Histomix, the sections were stained with hematoxylin-eosin according to Van Gieson. The degree of therapeutic pathomorphosis was determined according to the scheme developed by G. A. Lavnikova. For photodynamic therapy, a diode laser device ALXT ELOMED (LLC Elomed, Russia) with a wavelength of 660±2 nm and a power of 1.5 watts was used. Photoditazine was used as a photosensitizer, which was administered intravenously at a dose of 1 mg/kg. The dose of laser radiation was 350-400 J/cm2. The treatment session was well tolerated by the animals, anesthesia was not required, no side effects were detected during irradiation. After photodynamic therapy of basal cell skin cancer in dogs with Photoditazine photosensitizer, therapeutic pathomorphosis of the III and IV degrees was diagnosed, in 33.3 % and 66.7 % of cases, respectively. These treatment results indicate the effectiveness of PDT in the treatment of basal cell carcinoma of the skin of dogs.
Введение
Важную роль для прогнозирования и корректирования лечения животных с онкологическими заболеваниями играет определение критериев эффективности лечения, что позволяет найти наиболее оптимальный подход к терапии. На данный момент в ветеринарной онкологии основным показателем эффективности лечения опухолей является изменение размеров образования и пораженных лимфатических узлов. Данные изменения оценивают согласно методике ВОЗ, диагностируя при этом: прогрессирование заболевания (увеличение более чем на 25 % или появление новых опухолевых очагов), стабилизацию процесса (уменьшение новообразования менее чем на 50 %, или увеличение его не более чем на 25 %), частичную (уменьшение опухолевых очагов на 50 %) или полную (полное исчезновение опухоли) регрессию опухоли, что определяется при помощи клинического осмотра, и инструментальных методов диагностики (рентгенография, УЗИ, МРТ, КТ и пр.) [9, 10]. Следует отметить, что данный подход позволяет оценивать только видимые, макроскопические изменения опухоли и не дает представления о микроскопических метаморфозах. Таким образом для повышения точности определения эффективности лечения помимо клинических необходимо использовать и морфологические методы исследования для оценки лечебного патоморфоза опухоли.
Лечебный патоморфоз - это типовые и стойкие изменения клинических и морфологических проявлений опухоли под воздействием поведенного лечения [4, 7].
По данным Лисаевой А. А. и соавт. при сравнении точности данных физикального, инструментального и микроскопического исследований установлено, что наиболее точным является метод микроскопической оценки опухоли, который позволяет выявить изменения, недоступные при осмотре или применении инструментальных методов диагностики. Макроскопическая оценка размеров опухоли совпадает с микроскопической в 19 % случаев, в 56 % размеры остаточной опухоли преувеличены, а в 25 % - преуменьшены. Это может происходить из-за диф-
фузного фиброза или наличия разрозненных опухолевых клеток, не визуализируемых при осмотре или инструментальными методами диагностики [6]. Так, например, при замещении опухоли соединительной тканью в размере она не меняется, но на микроуровне есть изменение и количество опухолевых клеток уменьшается.
Патоморфологическое исследование лечебного патоморфоза выявляет изменения в опухоли на клеточном уровне: обнаружение апоптоза клеток и дистрофических изменений, вторичные реактивные изменения, кровоизлияния, скопление гемосидерофагов, образование полей некроза, гранулем, очагов фиброза, склероза и очагов воспалительной инфильтрации [4, 5, 7].
Классификация лечебного патоморфоза была разработана как отечественными, так и зарубежными авторами. В России наиболее востребованы классификации Г. А. Лавнико-вой или Е. Ф. Лушникова. За рубежом применяют классификации I. D. Miller и S. Payne, В. Chevallier и D. M. Sataloff и пр [4, 6].
В литературных источниках крайне мало данных о микроскопических изменениях в опухолях домашних животных после фотодинамической терапии (ФДТ) [3], поэтому актуальным является изучение лечебного патоморфоза новообразований после проведения этого метода лечения. Что позволит лучше определить эффективность лечения и изучить особенности воздействия ФДТ на опухолевые ткани.
В ветеринарии фотодинамическая терапия - это новый и относительно малоизученный метод лечения злокачественных и доброкачественных опухолей. Лечебное воздействие при ФДТ возникает за счет фотодинамического эффекта, когда после того как опухоль накопила специальное вещество -фотосенсибилизатор (введенный внутривенно он в течение нескольких часов преимущественно накапливается в опухолевой ткани), ее облучают лучом лазера, попадающим в полосу поглощения фотосенсибилизатора (ФС), при этом последний переходит в возбужденное состояние, происходит фотохимическая реакция с образованием в опухоли активных форм кислорода. Данные вещества
Рис. 1. Базальноклеточный рак кожи собаки до поведения ФДТ, ув. х400.
являются сильными окислителями - за счет этого оказывается цитотоксическое действие на новообразование. Поэтому ФДТ является таргетным методом лечения, так как поражается преимущественно опухолевая ткань и не оказывается выраженного негативного воздействия на окружающие здоровые ткани и организм пациента [1, 2].
Цель исследования - изучить лечебный патоморфоз базальноклеточного рака кожи после фотодинамической терапии. Задачи исследования - провести гистологические исследования базальноклеточного рака кожи собак до и после фотодинамической терапии.
Материалы и методы
Исследование проводилось на шести собаках пород метис, доберман, ротвейлер и стаффордширский терьер, в возрасте от 8 до 12 лет, с базальноклеточным раком кожи головы или туловища, размером от 1,5 до 6 см.
Гистологическое исследование проводилось до и после сеанса фотодинамической терапии. Для забора биоматериала опухоли использовалась Панч (при помощи инструмента Dermo punch (Sterylab, Италия)) или инцизионная биопсия по общепринятым методикам [9]. Полученный материал фиксировали в 10 %-ном растворе формалина в течение трех дней.
Проводка проб и заключение в парафиновую среду Гистомикс поводилась на аппарате гистологической проводки карусельного
Рис. 2. Базальноклеточный рак кожи собаки после поведения ФДТ - лечебный патоморфоз IV степени, ув. х 100.
типа HistoMaster 2052 (Formafix, Германия). Парафиновые блоки нарезались на роторном микротоме Accu-cut SRM 200 (Sakura, Япония). Окрашивание срезов осуществлялось гематоксилин-эозином по Ван-Гизону с заключением под канадский бальзам (PanReac Applichem, Испания) [8, 9].
Препараты исследовали на микроскопе Motic 1806 led (Motic, Испания), при увеличении х100, х200, х400 и при необходимости на х1000 (с иммерсией) [8].
Определение лечебного патоморфоза проводили по схеме, разработанной Г. А. Лавни-ковой, в которой выделяется четыре степени изменений:
I степень лечебного патоморфоза - не отмечается заметных изменений в общей структуре опухоли, имеются только несвойственные данному новообразованию полиморфизм, дистрофия клеток и подавление митозов.
II степень - в опухоли отчетливо видны очаги регрессивных изменений различного характера и выраженные дистрофические изменения в клетках, несмотря на сохранение основной массы паренхимы.
III степень - выражено нарушается структура опухоли за счет фиброзного замещения, обширного некроза или круглоклеточной инфильтрации, проявляющиеся в разных опухолях в неодинаковой степени. На этом фоне определяются остатки опухоли в виде разрозненных групп паренхиматозных клеток,
обычно с резкими дистрофическими изменениями.
IV степень (полный патоморфоз) - полное исчезновение паренхиматозных элементов опухоли, иногда могут определяться «следы» бывшей опухоли в виде гранулем вокруг роговых масс, очагов некроза, лишенных клеточных элементов, или «озер» слизи [4, 5, 6].
При проведении фотодинамической терапии в качестве генератора лазерного излучения использовался диодный лазерный аппарат с длинной волны 660±2 нм и мощностью 1,5 Вт, производства АЛХТ ЭЛОМЕД (ООО «Эломед», Россия). Облучение проводилось световодом для наружного облучения. В качестве фотосенсибилизатора применялся Фотодитазин (регистрационный номер ЛС-001246 от 10.02.2006).
Методика фотодинамической терапии заключалась в следующем: животному в вену предплечья (v. cephalica) устанавливался периферический внутривенный катетер 18-20G. После чего проводилась инфузия раствора Фотодитазин, в дозе 1 мг/кг (в разведении 1:20 на 0,9% растворе натрия хлорида) при помощи капельной системы. Затем накопление фотосенсибилизатора в опухолевой ткани происходило в течение 2,5 часов, все это время животное находилось в затемненном помещении для предотвращения спонтанной активации ФС. Далее животное укладывалось таким образом, чтобы был хороший доступ к опухоли, и проводилось облучение, при этом лазерный луч направлялся перпендикулярно к новообразованию. Для того чтобы в зону облучения попадали возможные микроскопические опухолевые очаги, облучение проводилось с захватом окружающих опухоль тканей. Доза лазерного излучения составляла 350-400 Дж/см2.
Результаты исследования
До проведения фотодинамической терапии проводилась биопсия опухоли, как для постановки окончательного диагноза, так и для точки отсчета при оценке лечебного па-томорфоза. На рисунке 1 представлена микроскопическая картина базальноклеточного рака кожи собаки до поведения ФДТ: высоко-
клеточное эпителиальное образование кожи, построенное из эпителиальных тяжей различного размера, эпителиальные структуры окружены слабо или умеренно развитой фиброзной стромой с очагами смешанной воспалительной инфильтрации. Эпителиальные клетки базалиоидные, на периферии расположены палисадно, наблюдается формирование немногочисленных первичных фолликулов. Клеточный полиморфизм умеренный, митозы встречаются с 2-3 в 10 полях зрения.
Фотодинамическая терапия поводилась по вышеописанной методике. Сеанс лечения переносился животными хорошо, седации или обезболивания не требовалось, побочных эффектов во время облучения не выявлено. Через 5-7 дней после облучения отбирались образцы ткани опухоли.
Гистологическое исследование материала после терапии показало наличие лечебного патоморфоза III и IV степени. При этом лечебный патоморфоз III степени наблюдался у двух животных с первичными опухолями размером 4-6 см, что выражалось наличием дистрофических изменений в клетках опухоли, инфильтрация нейтрофилами, присутствие очагов некроза.
У четырех собак с БКРК размером от 1,5 до 3,5 см наблюдался лечебный патоморфоз IV степени, рисунок 2: обширные диффузные очаги некроза с множественными очагами инфильтрации деструктивными нейтро-филами.
Обсуждение результатов
Различная степень лечебного патоморфо-за вероятно связана как с размерами новообразования, так и с особенностью протекания фотодинамического эффекта в тканях опухоли, на что влияет антиоксидантная защита клеток, концентрация кислорода в тканях и пр.
Заключение
После фотодинамической терапии базальноклеточного рака кожи собак с фотосенсибилизатором Фотодитазин, на 5-7 сутки диагностировался лечебный патоморфоз III и IV степени, в 33,3 % и 66,7 % случаев соответственно. Данные результаты лечения
свидетельствуют о эффективности ФДТ при лечения базальноклеточного рака кожи собак. Необходимы дальнейшие исследования в данном направлении.
Список литературы
1. Давыдов Е. В. Изменение биохимических и гематологических показателей крови собак при онкологических заболеваниях после фотодинамической терапии / Е. В. Давыдов, Б. В. Уша, Т. О. Марюшина, Г. М. Крюковская, Ю. С. Немцева // Аграрный вестник Верхневолжья. 2021. № 4 (37). С. 38-41.
2. Давыдов Е. В. Опыт комбинированного использования фотосенсибилизаторов при фотодинамической терапии / Е. В. Давыдов // Российский биотерапевтический журнал. 2013. Т 2. С. 26.
3. Давыдов Е. В. Изучение ультраструктурных изменений в клетках рака молочной железы кошек при фотодинамической терапии / Е. В. Давыдов, Б. В. Уша, Т. О. Марюшина, Ю. С. Немцева // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. 2021. Т. 4(52). С. 40-42.
4. Краевский Н. А. Патологоанатомическая диагностика опухолей человека. Руководство для врачей в 2-х томах. // Н. А. Краевский, А. В. Смольянников,
Д. С. Саркисов. М.: Медицина. Том 1. Изд. 4, перераб. и доп. 1993. 686 с.
5. Лавникова Г. А. Гистологический метод количественной оценки терапевтического повреждения опухоли: методические рекомендации / Г. А. Лавникова. М., 1979. 13 с.
6. Лисаева А. А. Лечебный патоморфоз злокачественных опухолей: клинические и морфологические критерии. Классификации. Прогностическое значение лечебного патоморфоза при раке молочной железы и других опухолях / А. А. Лисаева, Я. В. Вишневская, Е. М. Рощин, Д. В. Комов, И. В. Колядина // Опухоли женской репродуктивной системы. 2011. № 4. С. 19-24.
7. Лушников Е. Ф. Учение Я. Л. Рапопорта о па-томорфозе: прошлое и настоящее / Е. Ф. Лушников, А. Ю. Абросимов // Архив патологии. 2013. Т. 75. № 4. С. 62-67.
8. Aughey E. Comparative Veterinary Histology with Clinical Correlates / E. Aughey, F. L. Frye. CRC Press. 296 p.
9. Morris J. Small Animal Oncology / J. Morris, J. Dobson // Blackwell Science. 2001. 316 p.
10. WHO Handbook for Reporting Results of Cancer Treatment. Geneva, 1979.
■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■¡■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■а!
I КАК ОФОРМИТЬ ПОДПИСКУ НА ЖУРНАЛ? !
| А. Через подписной каталог |
| Индекс в каталоге «Газеты. Журналы» Агентства «Роспечать» - 33184 |
| Б. Через редакцию журнала |
| Банковские реквизиты для оплаты подписки |
1 по безналичному расчету для юридических лиц: |
| ЧОУДПО «Институт Ветеринарной Биологии» |
| ИНН 7802196720 КПП 781301001 \
| Р/с 40703810400000000022 в АО «Горбанк», г. Санкт-Петербург |
| К/с 30101810200000000814 БИК 044030814 |
| В поле «Назначение платежа» указать: I
| «Предоплата за подписку на журнал «Актуальные вопросы |
| ветеринарной биологии» на 2023 г. согласно инф. письму б/н I
| от 03.09.18 г. НДС не облагается. Адрес подписки: ...» |
| Стоимость редакционной подписки на 2023 год: =
| 2400 рублей. |
= Адрес редакции: Санкт-Петербург, ул. Ораниенбаумская, 3-Б. =
j Т./ф. (812) 232-55-92, т. 927-55-92. |
| E-mail: virclin@mail.ru; www.invetbio.spb.ru |
.................Ill..............................................................................................................Ill.....................................
