CC BY
12
ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ УГЛЕВОДОВ В ОРГАНАХ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ ТРЕМАТОД СЕМЕЙСТВА PARAMPHISTOMATIDAE (FISCHOEDER, 1901)
НачеваЛЛ., Гребенщиков В.М., Бибик О.И, Маниковская Н.С., Степанова М.Г.* ФБГО ВО «Кемеровский государственный медицинский университет» МЗ РФ
^Донецкий национальный медицинский университет им.М.Горького
Введение. Углеводы являются самым важным источником энергии для трематод. В связи с тем, что сосальщики паразитируют в организме хозяина в анаэробной среде, то углеводный обмен идёт по пути Эмбдена-Мейергофа [4], что объясняет их адаптивность к паразитированию. Изучались разные виды трематод на наличие в них гликогена, как основного энергетического субстрата [3]. Проводили гистохимические исследования разных тканях и органах трематод до и после действия антигельминтиков и установлено на наличие и распределение кислых гликозаминогликанов. Было определено, что воздействие разных антигельминтиков проявляется изменениями гистохимической реактивности тканей F. hepatica и Р. cervi при реакциях АС, ТС и Шик-реакции, что указывает на нарушение физиологического состояния гельминтов [1, 2].
Материалы и методы. Были набраны трематоды семейства Paramphistomatidae, (Fischoeder, 1901): Paramphistomum ichikawai, (Fukui, 1922), Paramphistomum cervi (Zeder, 1790), Liorchis scotiae (Willmott, 1950), из рубца крупного рогатого скота; Calicophoron calicophorum (Fischoeder, 1901), из преджелудка крупного рогатого скота.
Мариты были фиксированы в спирт-формалине по Шафферу и 10% нейтральном формалине. Обрабатывали трематод по общепринятой гистологической методике и заливали в парафин. Срезы толщиной 5-6 мкм окрашивали. Для определения мукопротеидов и гликогена использовали ШИК-реакцию по Мак Манусу. Контрольные срезы проводили с диастазой и амилазой слюны. Кислые гликозаминогликаны определяли окраской альциановым синим (АС) по Стидмену и Моури при pH 3.0 и 2.2 и толуидиновым синим (ТС) pH 4,2. Для оценки результатов проводили метилирование, деметилирование и сульфатирование по Муру и Шенбергу.
Результаты. Гистохимическое изучение углеводов в репродуктивных органах трематод показали неравномерное распределение мукопротеидов и гликогена, а также различное содержание углеводных веществ у каждого вида трематод семейства Paramphistomatidae. Основные запасы гликогена в диффузной и гранулярной формах были выявлены в паренхиме марит. В органах женской половой системы наибольшее количество гликогена в виде мелких зёрен обнаружено в желточных фолликулах и яйцах каликофор, а у
ззз
парамфистом, лиорхов гликоген в желточных клетках не обнаружен, но вокруг желточников в паренхиме выявляли зерна гликогена. В то же время отмечено, положительная ШИК-реакция была в желточных клетках и яйцах парамфистом, но это за счет мукопротеидов. В стенках матки гликоген был обнаружен в зернистой форме у каликофор и парамфистом, в незначительном количестве он встречался в диффузной форме в полости матки. Окрашивание при ШИК-реакции у всех видов трематод было достаточно интенсивное в стенке матки, максимально это было выражено в её эпителиальном слое. В яичниках изученных трематод наиболее интенсивная окраска при Шик-реакции наблюдалась пристеночно и в стенке железы. В цитоплазме клеток -овогониев и ооцитов у каликофор и парамфистом ШИК-реакция была положительной, но зерен гликогена не было выявлено. В клетках тельца Мелиса гликоген был обнаружен в незначительном количестве, в виде мелких зёрен у парамфистом и каликофор. Такие же мелкие зёрна выявляли и в стенках семяприёмников только у каликофор. Содержимое семенников обычно почти не окрашено, за исключением сформированных сперматозоидов, которые иногда образуют достаточно большие скопления на выходе из семенников. Но в стенках семенников ШИК-реакция проявляется гораздо сильнее. Наиболее интенсивное окрашивание среди мужских половых органов, наблюдается в семенных пузырьках. После проведения контрольных реакций с амилазой и диастазой слюны окраска их содержимого значительно ослабевает или исчезает совсем, что является свидетельством накопления в сперматозоидах диффузного гликогена. Кислые гликозаминогликаны обнаруживали при реакции с ТС при рН раствора 4,2 в стенках половых желез - яичнике и семенниках и в мембранах клеток, которые составляют их цитоархитектонику. А также достаточно интенсивно окрашивалась стенка матки и оболочка яиц на начальных этапах развития, когда ещё нет скорлуповой оболочки. После проведения контрольной реакции с гиалуронидазой, это окрашивание исчезало, что свидетельствует о наличии в мембранах клеток и стенках органов гиалуроновой кислоты, которая играет роль полупроницаемого фильтра при транспорте веществ из кишечника в паренхиму гельминта. При окрашивании с альциановым синим и проведением соответствующих контролей выявлено скопление гексозаминогликанов в полости матки вокруг развивающихся яиц, в семяприемнике, в желточных фолликулах у парамфистомат. В связи с тем, что эта реакция давала положительный эффект при низких значениях рН раствора, что это сульфатированного типа вещества. Это подтверждают соответствующие контрольные реакции. Как правило, гликозаминогликаны обнаруживаются в органах половой системы трематод в виде рыхлой массы и всегда занимают объемное пространство. По своим химическим свойствам они гидрофильны и соответственно притягивают большое количество воды, даже если концентрация гликозаминогликанов низкая, то они по консистенции напоминают гель. Способность кислых гликозаминогликанов притягивать воду даёт возможность в репродуктивных органах трематод в матриксе вокруг их
клеток, создавать тургор, что противодействует их сжатию. А соединительнотканные волокна в то же время противодействуют растяжению.
Заключение. Гистохимические исследования показали, что гликоген присутствует в органах половой системы и является основным энергетическим ресурсом у парамфистоматид. Гликоген в незначительных количествах поступает туда, по мере надобности, из окружающей паренхимы, где сосредоточены его основные запасы. Кислые гликозаминогликаны способствуют созданию защитного матрикса для клеточных структур половых органов трематод.
Литература: 1.Бибик О.И.//Рос. паразитол. журнал. - 2008. - № 1. - С. 99-106. 2.Бибик О.И., Начева Л.В.//Там же. - 2008. - № 3. - С. 72-76. З.Гребенщиков В.М., Начева Л.В.//Актуал. мед.-биол. пробл. паразитологии: Сб. докл. межрег. науч.-практ. конф. с междунар.участием, посвящ. 60-летию со дня основ, каф. и 90-летию со дня рожд. проф., д.б.н. Е.Д. Логачева. Кемерово, 2016.-С. 91-98. 4.Шульц P.C., Гвоздев Е.В.//Основы общей гельминтологии, 1976.-Т. 3. - Изд. «Наука», М., - 245 с.
Histochemical study of carbohydrates in the reproductive system of Trematodes attributed to Paramphistomatidae (Fischoeder, 1901) family.
Nacheva L.V., Grebenshchikov V.M., Bibik O.I., Manikowskay N.S. Stepanova M.G. Kemerovo State Medical University, Donetsk M. Gorky National Medical University.
Summary. Histochemical studies have shown that glycogen is present in the organs of the reproductive system and is the main energy resource of Paramphistomum. Glycogen in small quantities comes, as needed, from the surrounding parenchyma, where its main stocks are concentrated. Acidic glycosaminoglycans contribute to the creation of a protective matrix for cellular structures of sexual organs of Trematodes.
