CC BY
39
Генотипирование изолятов Staphylococcus aureus, выделенных при вспышке эксфолиативного дерматита новорожденных
И. В. Абаев1, Ю. П. Скрябин1, Э. И.. Печерских1, И. П. Мицевич1, Е. В. Мицевич1, О. В. Коробова1, В. А. Гриценко2, Э. А. Светоч1
1 ФБУН «ГНЦ прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора, Оболенск, Россия
2 Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН, Оренбург, Россия
Staphylococcus aureus известен как ведущий инфекционный агент при внутрибольнич-ных инфекциях и самый частый возбудитель инфекций кожи и мягких тканей человека. Цель данного исследования — определение генетической структуры метициллиночувствитель-ных изолятов S. aureus, выделенных от больных детей и носителей (медицинского персонала и посетителей) при локальной внутриболь-ничной вспышке эксфолиативного дерматита. Изоляты S. aureus изучали методами spa-, MLST-, coa- и agr-типирования, а также определяли наличие 11 генов токсинов. Показано, что все изоляты от больных детей идентичны и представляют собой штамм S. aureus t272 (ST121). Особенностью генома данного штамма является наличие двух генов эксфолиативных токсинов eta и etb и кассеты энтеротоксиновых генов egc. Результаты анализа структуры генома штамма S. aureus t272 (ST121) свидетельствуют о клональном родстве этого штамма с циркулирующими во Франции штаммами и о различии со штаммами, циркулирующими в Японии и Китае. Изоляты, выделенные от медицинского
персонала и посетителей, были разделены на 9 генетических вариантов S. aureus. Один изолят, S. aureus t284 (ST121), относится к генетической линии, которая может вызывать стафило-дермию, но в его геноме отсутствуют основные детерминанты вирулентности, ответственные за патогенез инфекции. Остальные выделенные от носителей изоляты относятся к 8 генетическим вариантам S. aureus, которые не выявляются среди штаммов, вызывающих эксфолиативный дерматит. Большинство этих изолятов относится к таким известным клонам S. aureus, как t002 (ST5), t012 (ST30) и t015 (ST45), которые характеризуются повышенной вирулентностью, высокой частотой горизонтального переноса SCC mec-кассет и генов токсинов. Все выявленные в исследовании изоляты S. aureus t012 (ST30) несут ген токсина синдрома токсического шока, часть из них несёт также ген лейкоци-дина Пантона-Валентайна.
Ключевые слова: Staphylococcus aureus, эксфолиативные токсины, эксфолиативный дерматит.
Контактный адрес:
Игорь Валентинович Абаев
Эл. почта: abaev@obolensk.org
Genotyping of Staphylococcus aureus Isolates in Outbreak of Exfoliative Dermatitis in Neonates
I.V. Abaev1, Yu.P. Skryabin1, E.I. Petcherskyh1, I.P. Mitsevitch1, E.V. Mitsevitch1, O.V. Korobova1, V.A. Gritsenko2, E.A. Svetoch1
1 State Scientific Center of Applied Microbiology and Biotechnology, Obolensk, Russia
2 Institute of Cellular and Intracellular Symbiosis, Orenburg, Russia
Staphylococcus aureus is known as the leading pathogen in hospital-acquired infections and the most common cause of skin and soft tissues. The present study aimed to test the genetic background of MSSA isolates obtained from pediatric patients and carriers (medical personnel and visitors) during local outbreak of exfoliative dermatitis. S. aureus isolates were analyzed by spa-, MLST-, coa-, SCC mec- u agr-typing, and 11 toxin- encoding genes were tested. All pediatric patient isolates were identical and have characteristics: S. aureus t272 (ST121). The main genomic features of this strain are genes of exfoliative toxins eta and etb, and the enterotoxin gene cluster. The analysis of the genetic structure of the S. aureus t272 (ST121) demonstrates clonal relationship with the strains circulating in France and the difference with the strains circulating in the Far East region. Isolates obtained from medical personnel
and visitors divided to 9 S. aureus lineages. One isolate, S. aureus t284 (ST121), belongs to the genetic lineage, which can cause exfoliative dermatitis, but specific exfo-liative dermatitis determinants are absent at the same time. The rest were belonging to the 8 genetic variants of S. aureus, which were not detected among strains causing exfoliative dermatitis. Most of the isolates were identified as the known spa types S. aureus: t002 (ST5), t012 (ST30) u t015 (ST45). These genetic lineages are characterized by high-frequency of horizontal virulence gene transfer, which includes SCC mec and toxin genes. All spa type t012 isolates carried toxic shock syndrome toxin gene and some of them carried the gene Panton-Valentine leukocidin.
Key words: Staphylococcus aureus, exfoliative toxins, exfoliative dermatitis.
Введение_
Staphylococcus aureus является одним из наиболее часто встречающихся возбудителей инфекций человека и представляет опасность, прежде всего, как ведущий патоген при внутрибольничных инфекциях и инфекциях кожи и мягких тканей [1]. Учитывая тот факт, что S. aureus является этиологическим агентом более 100 нозологических форм заболеваний, выявление корреляции между клиническими проявлениями стафилококковой инфекции и особенностями структуры генома золотистого стафилококка представляет практический интерес. Тем не менее, попытки установить такую корреляцию между проявлениями различных синдромов заболевания и определенными генетическими маркерами возбудителя, в особенности такими, как гены токсинов, в целом, оказались безуспешными [2].
В то же время, показана связь между генетическими линиями S. aureus и специфическими нозологическими формами стафилококковой инфекции, а также продемонстрирована различная предрасположенность определенных клональных групп S. aureus к модификациям генома посредством горизонтального переноса генов, способствующих повышению вирулентности штаммов и тяжести вызываемой ими патологии [3]. По результатам исследования аллельных вариаций большого числа
различных генов вид S. aureus был разделен на три основных ветви [4]. В состав первой ветви входят крупные клональные группы, названные по наиболее представительным сиквенс-типам: ST5, ST8, ST1 и ST25. Вторая ветвь включает клональные группы ST30-, ST45- и ST22-типов. Третья ветвь представлена сиквенс-типами ST121 и ST151. Даже на таком уровне клональности можно отметить явную корреляцию между определенными генетическими группами штаммов и нозологическими формами заболеваний. Например, при исследовании внутри- и внегоспитальных штаммов возбудителей стафилодермии показано, что более 75% изолятов относятся к клональной группе ST121 [5]. Установление связи между определёнными формами инфекции и типом генетической структуры S. aureus позволяет обоснованно выявлять источники инфекции и, в частности, оценивать вклад бессимптомного носительства S. aureus (которое регистрируется у 30% населения) в возникновение эпидемических вспышек стафилококковой инфекции [6].
В России недостаточно полно исследована попу-ляционная структура клинических метициллино-чувствительных S. aureus (MSSA) и изолятов, выделяемых у здоровых носителей. Для практического здравоохранения несомненную актуальность представляет вопрос о возможной связи между штам-
мами S. aureus, вызвавшими внутрибольничную вспышку инфекции, и штаммами S. aureus, носителями которых является медицинский персонал лечебных учреждений. Медицинские работники как группа носителей S. aureus привлекают наибольший интерес, будучи возможным резервуаром специфических штаммов золотистого стафилококка вследствие частых контактов персонала с источником инфекции. Значение такого резервуара для развития внутрибольничных вспышек инфекции S. aureus исследовано недостаточно. Генетическое типирование штаммов S. aureus, выделенных от больных и медицинского персонала, с учетом современных данных о корреляции между генетическими линиями и нозологическими формами стафилококковой инфекции, позволяет доказательно рассматривать возможную роль носительства S. aureus среди медицинских работников в возникновении внутрибольничных вспышек инфекции.
В данном исследовании представлены результаты молекулярно-генетического анализа изолятов S. aureus, выделенных от больных детей и носителей (медицинского персонала и посетителей) при локальной вспышке эксфолиативного дерматита в одной из клиник г. Оренбурга.
Материал и методы
исследования_
В исследовании использовали изоляты S. aureus, выделенные при вспышке эксфолиативного дерматита в 2012 г. в ООКБ № 2 г. Оренбурга, среди них: 14 изолятов от больных детей, 26 — от сотрудников клиники и 5 — от посетителей клиники. Видовую идентификацию бактерий осуществляли с помощью биохимических тестов API Staph (bioMerieux, Франция). Определение профиля антибиотико-чувствительности изолятов S. aureus проводили на агаре Мюллера-Хинтон диско-диффузионным методом в соответствии с рекомендациями МУК 4.2.1890-04 [7] с использованием следующих препаратов: бензилпенициллин, оксациллин, гента-мицин, амикацин, ципрофлоксацин, тетрациклин, эритромицин, клиндамицин, ванкомицин, хлорам-феникол, ко-тримоксазол, рифампицин.
Для генетического анализа в качестве референтных использовали штаммы S. aureus из Американской коллекции типовых культур (ATCC): MRSA252 (GenBank BX571856); MSSA476 (GenBank BX571857); Mu50 (GenBank BA000017); MW2 (GenBank BA000033) и USA300_TCH1516 (GenBank CP000730) и штаммы S. aureus из российской Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ-Оболенск»: В-6833, В-6836, В-6837 и В-6840.
После биохимического исследования все исследуемые образцы изолятов идентифицировали генетическими методами: проводили определение наличия специфического для S. aureus участка гена термостабильной нуклеазы (nuc) [8] и вариабельного участка гена коагулазы (coa) [9] посредством амплификации в ПЦР. Мультилокусное сиквенс-типирование (MLST) штаммов S. aureus, основанное на определении нуклеотидной последовательности 7 генов «домашнего хозяйства» и идентификации аллельного профиля, выполняли с использованием информации, представленной на mlst.net сервере (http://www.mlst.net/). Spa-типирование проводили путем определения нуклеотидной последовательности гена белка А с последующим анализом при использовании базы данных Ridom SpaServer (http://spaserver.ridom.de/). Анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов продуктов амплификации вариабельного региона коагулазного гена (coa-ПЦР-ПДРФ) осуществляли стандартным методом [8]. Coa-ПЦР-ПДРФ паттерны представляли в цифровой записи, где размер ПЦР продукта указан до косой черты, а размеры рестрикционных AluI-фрагментов указаны после косой черты через точку с запятой. Детекцию аллеля гена agr, контролирующего экспрессию бактериальных факторов вирулентности, проводили с помощью амплификации со специфическими праймерами (табл. 1).
Наличие генов лейкоцидина Пантона-Вален-тайна (pvl), лейкоцидинов lukE и lukD, токсина синдрома токсического шока (tst), стафилококковых энтеротоксинов (sea, seb, sec), эксфолиативных токсинов (eta и etb), альфа- и бета-гемолизинов (hema и hemb), маркера кассеты энтеротоксиновых генов egc — гена seo определяли методом ПЦР с помощью специфических праймеров (см. табл. 1).
Для подтверждения наличия в изолятах S. aureus генов эксфолиативных токсинов определяли нук-леотидную последовательность ПЦР-продуктов генов eta и etb. Гомологичный анализ нуклеотид-ных последовательностей проводили с помощью BLAST сервера (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/).
Результаты и обсуждение_
Как известно, вариабельный участок гена коа-гулазы S. aureus содержит различное число тандем-ных повторов длиною в 81 нуклеотид [9]. Согласно доступным базам данных, число тандемных повторов гена coa варьирует от 3 до 9, последовательность тандемных повторов одинаковой размерности различается по локализации сайтов рестрикции для эндонуклеазы AluI. Нуклеотидная последовательность гена coa является надежным марке-
Таблица 1. Олигонуклеотидные праймеры, использованные в работе
№ Праймер Последовательность праймера (5'-3') Мишень Ссылка
1 2 nuc1 nuc2 GCGATTGATGGTGATACGGTT AGCCAAGCCTTGACGAACTAAAGC Ген нуклеазы [9]
3 4 coa1 coa2 ATAGAGATGCTGGTACAGG GCTTCCGATTGTTCGATGC Ген коагулазы [8]
5 6 spa-1113f spa-1514r TAAAGACGATCCTTCGGTGAGC CAGCAGTAGTGCCGTTTGCTT Ген белка А [10]
7 pan ATGCACATGGTGCACATGC
8 9 agr1 agr2 GTCACAAGTACTATAAGCTGCGAT TATTACTAATTGAAAAGTGGCCATAGC Ген, контролирующий экспрессию факторов [11]
10 agr3 GTAATGTAATAGCTTGTATAATAATACCCAG вирулентности
11 agr4 CGATAATGCCGTAATACCCG
12 13 luk-PV-1F luk-PV-2R ATCATTAGGTAAAATGTCTGGACATGATCCA GCATCAAGTGTATTGGATAGCAAAAGC Ген лейкоцидина Пантон-Валентайна [12]
14 15 lukED-F1 lukED-R5 CAGATGTGAAGGGTAGTGGA TCATTATCAGATGTTGCTGTTG Ген лейкоцидина ED [13]
16 eta-F ACTGTAGGAGCTAGTGCATTTGT Ген эксфолиативного [2]
17 eta-R TGGATACTTTTGTCTATCTTTTTCATCAAC токсина А
18 etb-F CAGATAAAGAGCTTTATACACACATTAC Ген эксфолиативного [2]
19 etb-R AGTGAACTTATCTTTCTATTGAAAAACACTC токсина В
20 21 hla-F hla-R GAAGTCTGGTGAAAACCCTGA TGAATCCTGTCGCTAATGCC Ген гемолизина А [14]
22 23 hlb-F hlb-R CAATAGTGCCAAAGCCGAAT TCCAGCACCACAACGAGAAT Ген гемолизина В [14]
24 tst-F ACCCCTGTTCCCTTATCATC Ген токсина синдрома [15]
25 tst-R TTTTCAGTATTTGTAACGCC токсического шока
26 27 sea-F sea-R GGTTATCAATGTGCGGGTGG CGGCACTTTTTTCTCTTCGG Ген энтеротоксина А [15]
28 29 seb-F seb-R GTATGGTGGTGTAACTGAGC CCAAATAGTGACGAGTTAGG Ген энтеротоксина В [15]
30 31 sec-F sec-R AGATGAAGTAGTTGATGTGTAT CACACTTTTAGAATCAACCG Ген энтеротоксина С [15]
32 33 seo-F seo-R AGTTTGTGTAAGAAGTCAAGTGTAGA ATCTTTAAATTCAGCAGATATTCCATCTAAC Ген энтеротоскина О [16]
34 35 mecA mA1 mecA mA2 ACTGCTATCCACCCTCAAAC CTGGTGAAGTTGTAATCTGG Ген тесА [17]
ром генетических линий S. aureus и используется для быстрого типирования клинических изолятов S. aureus методом coa-ПЦР-ПДРФ.
При амплификации вариабельного региона гена coa среди 44 изолятов S. aureus выявили 5 вариантов ПЦР продуктов с количеством тандемных повторов от 4 до 8. При рестрикционном анализе ПЦР продуктов с помощью эндонуклеазы AluI
получили 9 вариантов coa-ПЦР-ПДРФ паттернов (табл. 2). Все 14 изолятов S. aureus, выделенные от 8 инфицированных новорожденных, принадлежали к coa-ПЦР-ПДРФ варианту 838 /324;295;219 (см. табл. 2). К этому же варианту принадлежал один изолят, полученный от медицинского персонала. Среди изолятов, выделенных от сотрудников больницы и посетителей, было выявлено еще 8
Таблица 2. Распределение coa-ПЦР-ПДРФ паттернов при анализе 45 изолятов S. aureus, выделенных от здоровых носителей и от больных
Число изолятов Источник выделения НР С П coa-ПЦР-ПДРФ тип* spa-тип MLST-тип Устойчивость к лекарственным препаратам
14 8 - - 838 /324;295;219 t272 ST-121 Pc+Co +C
1 - 1 - 838 /324;295;219 t284 ST-121 Pc+Co
8 - 5 1 514 /219;214;81 t012 ST30 Pc+Co
4 - 4 676 /295;162;138;81 t002 ST5 Pc+Co
10 - 7 1 676 /676 t015 ST45 Pc+Co +Ak+E+/-
4 - 3 1 676 /243;219;214 t10519 ST ND** Pc+Co +Ak
1 - - 1 595 /300;214;81 t056 ST101 Pc+Co
1 - 1 - 595 /300;295 t731 ST ND** Pc+Co
1 - 1 - 676 /381;214;81 t349 ST25 Pc+Co +Ak
1 - 1 - 838 /381;295;162 t267 ST97 Pc+Co
Примечание. НР - новорожденные; С - сотрудники клиники; П - посетители клиники; *соа-ПЦР-ПДРФ паттерны; ** сиквенс тип не представлен на сервере mlst.net. Препараты: Рс - бензилпенициллин, Со - ко-тримоксазол, С - хлорамфеникол, Ак - амикацин, Е - эритромицин.
coa-ПЦР-ПДРФ вариантов, отличных от варианта 838 /324;295;219. Таким образом, на данном этапе типирования только один изолят S. aureus от медицинского персонала мог иметь клональное родство с изолятами, выделенными от больных.
Как известно, spa-типирование позволяет формализовать генотип изолята S. aureus и соотнести его с данными из международных информационных баз и научных публикаций (http://spaserver.ridom. de/). В наших экспериментах при spa-типировании изолятов каждый из coa-ПЦР-ПДРФ типов соответствовал одному spa-типу, за исключением coa-ПЦР-ПДРФ варианта 838 /324;295;219, который показал расщепление: все изоляты от больных принадлежали к spa-типу t272, тогда как единственный изолят варианта 838 /324;295;219, выделенный от медицинского персонала, относится к spa-типу t284 (см. табл. 2).
Для определения MLST типа использовали по одному представителю каждого spa-типа, выявленного в исследовании. Результаты MLST типиро-вания коррелируют с данными spa-типирования, причем для двух spa-типов — t10519 и t731 идентифицированные нами сиквенс-типы отсутствуют в базе данных на сервере saureus.mlst.net.
Изоляты, относящиеся к coa-ПЦР-ПДРФ вариантам с числом изолятов более одного (см. табл. 2), были охарактеризованы по широкому спектру генетических детерминант, ответственных за вирулентность S. aureus. Все изоляты отнесены к MSSA, поскольку при амплификации со специфическими праймерами у них не был обнаружен ген mecA, что подтверждало данные фенотипического исследо-
вания. Все изоляты показали устойчивость к бен-зилпенициллину и ко-тримоксазолу. Изоляты spa-типа t272 показали устойчивость к хлорамфенико-лу, а spa-типов t015, t349 и t10519 — к амикацину (табл. 3).
Как показали результаты комплексного исследования, все 14 изолятов от больных детей идентичны и представляют собой штамм, характеристики которого соответствуют специфическому для эксфолиативного дерматита генетическому варианту S. aureus. Идентифицированный нами штамм S. aureus t272 (ST121), вызвавший вспышку заболевания, содержит гены эксфолиативных токсинов eta и etb и ген seo — маркер кассеты энтеротоксиновых генов egc, локализованной на геномном острове vSAb [16]. Данный штамм несет четвертую аллель гена agr (agr4), регулирующего синтез белковых токсинов и ферментов S. aureus на уровне транскрипции. Аллель регуляторного гена agr тесно связана с типом инфекционного процесса, вызываемого S. aureus, причем вариант agr4 преимущественно ассоциируется с сиквенс-типом ST121. Генетическая характеристика штамма включает следующие маркеры: t272, ST121, agr4, eta, etb, seo, hemA, hemB. Нуклеотидные последовательности генов eta и etb были полностью идентичны известным последовательностям гена eta (GenBank: M17347) и гена etb (GenBank: M17348).
Следует отметить, что изолят coa-ПЦР-ПДРФ варианта 838 /324;295;219, выделенный от медицинского персонала, представляет собой штамм S. aureus t284 (ST121), отличный от штамма, вызвавшего вспышку эксфолиативного дерматита. Его
Таблица 3. Молекулярно-генетическая характеристика изолятов S. aureus разных s^a-типов, выделенных от здоровых носителей и от больных
Гены токсинов
Spa-тип agr-тип pvl lukE-D tst eta etb hema hemb sea seb sec seo
t272 4 - - - + + + + - - - +
t284 4 - + - - - + + - - - -
t012 3 +/- - + - - - + + - - -
t002 2 - + - - - + + + - - -
t015 1 - - - - - + - - - + -
t10519 1 - + - - - + - - - + -
Примечание. agr-тип - аллель гена, контролирующего экспрессию факторов вирулентности, pvl - лейкоцидин Пантон-Вален-тайна; lukE-D - лейкоцидины lukE и lukD; tst - токсин синдрома токсического шока; eta - эксфолиативный токсин А; etb - эксфолиативный токсин B; hema - гемолизин A, hemb - гемолизин B; sea, seb, sec - стафилококковые энтеротоксины A, B и C соответственно; seo - стафилококковый энтеротоксин, подобный О.
характеристика — t284, ST121, agr4, hemA, hemB, luke-D, что позволяет утверждать отсутствие кло-нальной связи между этим штаммом и штаммом, вызвавшим вспышку, на основании различий по пяти независимо наследуемым генетическим маркерам, таким как spa-тип, гены eta, etb, seo и lukE-D, причем три из них — гены eta, etb и seo относятся к основным детерминантам вирулентности для эпидемических линий золотистого стафилококка, связанных со стафилодермией.
Способность штаммов S. aureus продуцировать эксфолиативные токсины ETA и ETB — основной признак патогена, который ассоциируется со ста-филодермией. Эксфолиативные токсины селективно переваривают десмоглеин 1, одну из молекул десмосом — клеточных структур, ответственных за межклеточные адгезионные контакты в эпителии [18]. Большинство штаммов золотистого стафилококка, которые вызывают стафилодермию, кодируют либо ETA, либо ETB. Эксфолиативные токсины ETA и ETB серологически различны, причем гены данных токсинов имеют различную локализацию: eta кодируется геномом фага, а etb кодируется геномом большой трансмиссивной плазмиды. Для обоих токсинов используются близкие, но, тем не менее, различающиеся системы контроля продукции этих белков [19].
Показано, что штаммы S. aureus, вызывающие такую форму стафилодермии, как буллезное импетиго, чаще коррелируют с ETA, а штаммы, связанные с эксфолиативным дерматитом — с ETB [5]. Анализ штаммов S. aureus, ответственных за ста-филодермию в Японии и Китае, показал отсутствие в этих странах вариантов, кодирующих одновременно ETA и ETB [20-22]. В то же время во Франции при анализе коллекции из 283 штаммов, ответственных за стафилодермию, комбинация
генов eta-etb встречается более чем в 50% случаев [5]. Аналогичные данные получены в независимом исследовании с другой коллекцией штаммов, связанных со стафилодермией во Франции [23]. Идентифицированный нами штамм S. aureus t272 (ST121) принадлежит к большому клональному кластеру spaCC159 ST121, который ответственен за 75% случаев эксфолиативного дерматита в Европе [5].
Изоляты, выделенные от медицинского персонала и посетителей, за исключением клона S. aureus t284 (ST121), относятся к 8 генетическим вариантам S. aureus, которые, по данным литературы, не выявляются среди штаммов, вызывающих эксфолиативный дерматит. Большинство изученных изолятов от носителей распределяется в три генетических варианта, которые относятся к известным клонам S. aureus: t002 (ST5), t012 (ST30) и t015 (ST45). Данные клоны характеризуются повышенной вирулентностью, высокой частотой горизонтального переноса SCCmec -кассет и генов токсинов. Именно эти клоны фактически являются предшественниками крупных клональных групп, в состав которых входят наиболее опасные эпидемические клоны метицил-линорезистентных штаммов S. aureus (MRSA) и MSSA [24, 25]. Только для клональных типов ST5, ST30 и ST45 характерно наличие одновременно циркулирующих штаммов с различными типами SCCmec-кассет. Генетические линии, принадлежащие к клонам t002 (ST5) и t012 (ST30), часто несут ген лейкоцидина Пантона-Валентайна (pvl), причем это относится как к MRSA, так и MSSA. В нашем исследовании все выявленные изоляты t012 (ST30) несут ген токсина синдрома токсического шока tst, часть из них несёт также ген pvl (см. табл. 3).
Таким образом, выявленное в данном исследовании преобладание прототипов наиболее опасных эпидемических клонов золотистого стафилококка среди циркулирующих у медицинского персонала клиники штаммов S. aureus, указывает на необходимость систематических исследований по определению ведущих клональных типов S. aureus в клинических учреждениях различных регионов страны. Наличие таких данных позволит оценить возможное эпидемическое значение циркулирующих у медицинского персонала штаммов S. aureus и своевременно предпринимать меры к предотвращению возникновения стафилококковых инфекций в клинических учреждениях.
Результаты нашей работы подтверждают высокую разрешающую способность метода при анализе вспышек на местах. Быстрый и дешевый метод coa-ПЦР-ПДРФ анализа может быть полезен для выявления связи между изолятами S. aureus, выделенными от больных детей и от носителей (медицинского персонала), при локальной вспышке экс-фолиативного дерматита. Данный метод позволяет резко сузить круг исследуемых изолятов в пределах нескольких часов. Дорогостоящие и затратные по времени методы spa-типирования и MLST обладают несомненной ценностью для эпидемиологического анализа, но, как показали наши исследования, эти методы фактически дублируют результаты coa-
Литература
1. Lowy F. D. Staphylococcus aureus infections. N Engl J Med 1998; 339(8):520-32.
2. Jarraud S., Mougel C., Thioulouse J., et al. Relationships between Staphylococcus aureus genetic background, virulence factors, agr groups(alleles), and human disease. Infect Immun 2002; 70(2):631-41.
3. Wehrhahn M. C., Robinson J. O., Pascoe E. M., et al. Illness severity in community-onset invasive Staphylo-coccus aureus infection and the presence of virulence genes. J Infect Dis 2012; 205(12):1840-8.
4. Monecke S., Slickers P., and Ehricht R. Assignment of Staphylococcus aureus isolates to clonal complexes based on microarray analysis and pattern recognition. FEMS Immunol Med Microbiol 2008; 53(2):237-51.
5. Lamand V., Dauwalder O., Tristan A., et al. Epidemio-logical data of staphylococcal scalded skin syndrome in France from 1997 to 2007 and microbiological characteristics of Staphylococcus aureus associated strains. Clin Microbiol Infect 2012; 18(12):E514-21.
6. Wertheim H. F., Melles D. C., Vos M. C., et al. The role of nasal carriage in Staphylococcus aureus infections. Lancet Infect Dis 2005; 5(12):751-62.
7. МУК № 4.2.1890-04 Методические указания. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. М., 2004.
ПЦР-ПДРФ анализа. Следует отметить, что при дифференциации штамма S. aureus t272 (ST121), вызвавшего вспышку эпидемического дерматита, и штамма S. aureus t284 (ST121), выделенного от медицинского персонала, ценность методов coa-ПЦР-ПДРФ и MLST оказалась идентичной, при несопоставимых требованиях к подготовке персонала, стоимости анализа и временным затратам на исследование.
Заключение_
При внутрибольничной вспышке эксфолиа-тивного дерматита новорожденных выявлен высокоспецифичный для этой формы стафилодер-мии генетический вариант S. aureus t272 (ST121). Результаты анализа молекулярно-генетической структуры штамма S. aureus t272 (ST121) демонстрируют его клональное родство со штаммами, циркулирующими во Франции, и отличие от штаммов, циркулирующих в Японии и Китае. Представляется практически важным проведение дальнейших исследований по выявлению и анализу вызывающих стафилодермию штаммов в различных регионах страны, что позволит оценить эпидемическую обстановку по данной инфекции в РФ и соотнести ее с известными данными для других стран мира.
8. Hookey J. V., Richardson J. F., Cookson B. D. Molecular typing of Staphylococcus aureus based on PCR restriction fragment length polymorphism and DNA sequence analysis of the coagulase gene. J Clin Microbiol 1998; 36(4):1083-9.
9. Zhang K., Sparling J., Chow B. L., et al. New quadri-plex PCR assay for detection of methicillin and mupi-rocin resistance and simultaneous discrimination of Staphylococcus aureus from coagulase-negative staphylococci. J Clin Microbiol 2004; 42(11):4947-55.
10. Schouls L. M., Spalburg E. C., van Luit M., et al. Multiple-locus variable number tandem repeat analysis of Staphylococcus aureus: comparison with pulsed-field gel electrophoresis and spa-typing. PLoS ONE 2009; 4(4):e5082.
11. Gilot P., Lina G., Cochard T., Poutrel B. Analysis of the genetic variability of genes encoding the RNA III-activating components Agr and TRAP in a population of Staphylococcus aureus strains isolated from cows with mastitis. J Clin Microbiol 2002; 40(11):4060-7.
12. Makgotlho P. E., Kock M. M., Hoosen A., et al. Molecular identification and genotyping of MRSA isolates. FEMS Immunol Med Microbiol 2009; 57(2):104-15.
13. Takano T., Higuchi W., Otsuka T., et al. Novel characteristics of community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains belonging to multilo-
cus sequence type 59 in Taiwan. Antimicrob Agents Chemother 2008; 52(3):837-45.
14. Fei W., Hongjun Y., Hong-bin H., et al. Study on the hemolysin phenotype and the genetype distribution of Staphylococcus aureus caused bovine mastitis in Shandong dairy farms. Intern J Appl Res Vet Med 2011; 9(4):416-21.
15. Mehrotra M., Wang G., Johnson W. M. Multiplex PCR for detection of genes for Staphylococcus aureus entero-toxins, exfoliative toxins, toxic shock syndrome toxin 1, and methicillin resistance. J Clin Microbiol 2000; 38(3):1032-35.
16. Xie Y., He Y., Gehring A., et al. Genotypes and toxin gene profiles of Staphylococcus aureus clinical isolates from China. PLoS One 2011; 6(12): e28276.
17. Okuma K., Iwakawa K., Turnidge J. D., et al. Dissemination of new methicillin-resistant Staphylococcus aure-us clones in the community. J Clin Microbiol 2002; 40(11):4289-94.
18. Nishifuji K., Sugai M., Amagai M. Staphylococcal exfoliative toxins: «molecular scissors» of bacteria that attack the cutaneous defense barrier in mammals. J Dermatol Sci 2008; 49(1):21-31.
19. Kato F., Kadomoto N., Iwamoto Y, Bunai K., Komatsu-zawa H., Sugai M. Regulatory mechanism for exfoliative toxin production in Staphylococcus aureus. Infect Immun 2011; 79(4):1660-70.
20. Nakaminami H., Noguchi N., Ikeda M., et al. Molecular epidemiology and antimicrobial susceptibilities of 273 exfoliative toxin-encoding-gene-positive Staphylococcus aureus isolates from patients with impetigo in Japan. J Med Microbiol 2008; 57(Pt 10):1251-8.
21. Yamaguchi T., Yokota Y., Terajima J., et al. Clonal association of Staphylococcus aureus causing bullous impetigo and the emergence of new methicillin-resistant clonal groups in Kansai district in Japan. J Infect Dis 2002; 185(10):1511-6.
22. Shi D., Higuchi W., Takano T., et al. Bullous impetigo in children infected with methicillin-resistant Stap-hylococcus aureus alone or in combination with methi-cillin-susceptible S. aureus: analysis of genetic characteristics, including assessment of exfoliative toxin gene carriage. J Clin Microbiol 2011; 49(5):1972-74.
23. Yamasaki O., Yamaguchi T., Sugai M., et al. Clinical manifestations of staphylococcal scalded-skin syndrome depend on serotypes of exfoliative toxins. J Clin Microbiol 2005; 43(4):1890-3.
24. Enright M. C., Robinson D. A., Randle G., Feil E. J., Grundmann H., Spratt B. G. The evolutionary history of methicillin-resistant Staphylococcus aureus(MRSA). Proc Natl Acad Sci U S A 2002; 99(11):7687-92.
25. Gomes A. R., Westh H., de Lencastre H. Origins and evolution of methicillin-resistant Staphylococcus aureus clonal lineages. Antimicrob Agents Chemother 2006; 50(10):3237-44.
