CC BY
9
ISSN 2412-608X. Масличные культуры. Вып. 3 (179), 2019
УДК 631.523:633.854.78
DOI: 10.2523 0/2412-608Х-2019-3-179-27-34
Генотипирование инбредных линий и гибридов подсолнечника селекции Армавирской опытной станции ВНИИМК с помощью микросателлитных локусов
С.З. Гучетль,
кандидат биологических наук Н.И. Зайцев,
доктор сельскохозяйственных наук С.С. Фролов,
кандидат сельскохозяйственных наук
И.Н. Фролова,
старший научный сотрудник
Е.С. Кузнецова,
лаборант-исследователь
Армавирская опытная станция -
филиал ФГБНУ ФНЦ ВНИИМК
Россия, 352925, Краснодарский край, г. Армавир,
пос. Центральная усадьба опытной станции
ВНИИМК
Тел./факс: 8 (86137) 3-13-76 E-mail: [email protected]
Для цитирования: Гучетль С.З., Зайцев Н.И., Фролов С.С., Фролова И.Н., Кузнецова Е.С. Генотипирование инбредных линий и гибридов подсолнечника селекции Армавирской опытной станции ВНИИМК с помощью микросателлитных локусов // Масличные культуры. - 2019. - Вып. 3 (179).-С. 27-34.
Ключевые слова: подсолнечник, линии, гибриды, генотипирование, микросателлитные ло-кусы.
Идентификация линий и гибридов - актуальная задача современной селекции. Цель данной работы - разработка оптимальной системы микросателлитных ДНК-маркеров для генотипирова-ния инбредных линий и гибридов подсолнечника селекции АОС ВНИИМК. Материалом для исследования служили 13 линий (В А 93, В А 760, ВА 761, ВА 4, ВА 6, ВА 384, ВА 389, ВА 317, ВА 325, ВК 21, ВА 337, ВА 737, ВА 812) и 10 гибридов (Барс, Натали, Ирэн, Мэлин, Медас, Арис, Арнеб, Беркут, Арлин, Арими) коллекции подсолнечника АОС ВНИИМК. Восемнадцать пар прай-меров, показавших наличие полиморфизма, были
использованы для генотипирования инбредных линий и гибридов подсолнечника. Наиболее полиморфными локусами были Наг 514, ORS 610 и Наг 1608 (it равное Ъ-А, PIC - от 0,51 до 0,65 и Пе -от 2,04 до 2,85). Локусы Наг 1327 и ORS 1079 имели низкие показатели полиморфизма (Па равное 2, PIC - от 0,14 до 0,25 и Пе - от 1,16 до 1,33). Остальные локусы имели средний уровень полиморфизма (Па равное 2-3, PIC - от 0,36 до 0,50, Пе -от 1,56 до 2,00). Среднее число аллелей на локус составило 2,3. Рассчитанные нами величины характеризуют полиморфизм исследованных образцов коллекции как средний. Анализ электрофоретических спектров 18 полиморфных микросателлитных локусов линий показал индивидуальность аллельного состава каждой из них, кроме линий, являющихся аналогами по отношению друг к другу. Уникальность анализированной группы линий составила 82 %. У большинства локусов наследование ампликонов происходило по кодоминантному типу, но некоторые проявили себя как доминантные: ORS 366, ORS 307, ORS 610, Наг 1442, Наг 432. Все изученные гибриды имели отличающиеся генотипы. Уникальность коллекции гибридов 100 %. Использованные микросателлитные локусы могут рассматриваться как оптимальные для генотипирования инбредных линий и гибридов подсолнечника селекции АОС ВНИИМК.
UDC 631.523:633.854.78
Genotyping of sunflower inbred lines and hybrids
bred at the Armavirskaay experimental station
using SSR-loci.
S.Z. Guchetl, PhD in biology
N.I. Zaitsev, doctor of agriculture
S.S. Frolov, PhD in agriculture
I.N. Frolova, senior researcher
E.S. Kuznetsova, laboratory assistant
Armavirskaay experimental station - a branch of V.S. Pustovoit All-Russian Research Institute of Oil Crops The Central settl. of AOS VNIIMK, Armavir, Krasnodar region, 352925, Russia Tel./fax: 8 (86137) 3-13-76 E-mail: [email protected]
Key words: sunflower, line, hybrid, genotyping, microsatellite loci.
Identification of lines and hybrids is an actual task of the modern breeding. The purpose of the present work was to develop an optimal system of microsatellite DNA-markers for genotyping of sunflower inbred lines and hybrids bred at the Armavirskaay experi-
mental station - a branch of V.S. Pustovoit All-Russian Research Institute of Oil Crops (AOS VNIIMK). As an object of the research we used 13 lines (VA 93, VA 760, VA 761, VA 4, VA 6, VA 384, VA 389, VA 317, VA 325, VK 21, VA 337, VA 737, and VA 812) and 10 hybrids (Bars, Natali, Iren, Melin, Medas, Aris, Arneb, Berkut, Arlin, Arimi) from sunflower collection of AOS VNIIMK. We used 18 pair of primers which showed presence of polymorphism to genotype sunflower inbred lines and hybrids. The most polymorphic loci were Har 514, ORS 610 and Har 1608 (na equal 3-4, PIC - from 0.51 to 0.65, ne - from 2.04 to 2.85). Loci Har 1327 and ORS 1079 showed low polymorphism (na equal 2, PIC - from 0.14 to 0.25, ne - from 1.16 to 1.33). The rest loci had a middle level of polymorphism (na equal 2-3, PIC - from 0.36 to 0.50, ne - from 1.56 to 2.00). The average number of alleles per a locus was 2.3. Accounted values characterize polymorphism of studied samples as average. Analysis of electrophoret-ic spectra of 18 polymorphic SSR-loci proved uniqueness of each line alleles, except lines which are analogs of each other. Uniqueness of the studied lines was 82%. The most loci inherited amplicons by co-dominant type but there were also some dominant ones: ORS 366, ORS 307, ORS 610, Har 1442, Har 432. All studied hybrids had discrepant genotypes. Uniqueness of the hybrid collection is 100%. Used SSR-loci can be considered as optimal ones for geno-typing of sunflower inbreds and hybrids developed at AOS VNIIMK.
Введение. Использование молекулярных маркеров дает особые преимущества при оценке генетического разнообразия, для идентификации и определения генетической чистоты сортов, а также для изучения полиморфизма и генетического сходства у основных сельскохозяйственных культур, таких как кукуруза [1], соя [2; 3], рис [4], картофель [5], люцерна [6], сорго [7] и т.д. Уровень полиморфизма и генетических отношений изучали с помощью различных молекулярных маркеров, таких как RAPD (Random Amplification of Polymorphic DNA), RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism), AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) и SSR (Single Sequence Repeats). Из-за своей мультиаллельной и высокополиморфной природы микроса-теллитные маркеры, или SSR, в настоя-
щее время являются предпочтительным методом молекулярной селекции у растений. У подсолнечника (НеИаМкт аппит L.) микросателлиты были особенно информативны при изучении филогенетических взаимоотношений, паспортизации сортов и генетических взаимоотношений между инбредными линиями [8; 9; 10]. Идентификация линий и гибридов - актуальная задача современной селекции. Для идентификации и паспортизации линий и гибридов подсолнечника селекции АОС ВНИИМК ранее были выполнены оптимизация условий ПЦР, подбор микроса-теллитных локусов для создания системы молекулярных маркеров. Некоторые из изученных линий обладали идентичным составом аллелей микросателлитных локусов. Это предполагало дальнейший скрининг SSR-лoкycoв для более точной идентификации генотипов подсолнечника [11]. Цель данной работы - разработка оптимальной системы микросателлитных ДНК-маркеров для генотипирования ин-бредных линий и гибридов подсолнечника селекции АОС ВНИИМК.
Материалы и методы. Материалом для исследования служили 13 линий (ВА 93, ВА 4, ВА 6, ВА 760 [12], ВА 761, ВА 317, ВА 325, ВК 21 ими [13], ВА 337 [14], ВА 384 [15], ВА 389 [16], ВА 737, В А 812) и 10 гибридов (Барс, Беркут, Арими [17], Медас, Мэлин, Натали [18], Ирэн [19], Арнеб [20], Арис [21], Арлин) коллекции подсолнечника Армавирской опытной станции ВНИИМК. Геномную ДНК выделяли из семядольных листьев 5-7-дневных этиолированных проростков подсолнечника с помощью модифицированного метода Saghai-Maroof е1 а1. [22] с использованием СТАВ-буфера. Для проведения ПЦР использовали 25 мкл реакционной смеси следующего состава: 67 мМ трис-НС1, рН 8,8; 16,6 мМ сульфата аммония; 1,5-3 мМ MgCl2; 0,01 % Т\уееп 20; по 0,2 мМ дезоксирибонуклеозидфосфа-тов; по 10 пМ праймеров; 10 нг матричной ДНК и 1 ед. рекомбинантной
термостабильной ДНК. Амплификацию проводили в приборе Терцик (ДНК-технология, Россия). Условия амплификации: начальная денатурация при 96 °С в течение 2 мин; затем 30 циклов при соблюдении температурно-временного режима: отжиг при 55-60 °С в течение 40 с, элонгация - 1 мин при 70 °С, денатурация при 94 °С - 30 с, финальная элонгация -2 мин. В этом исследовании мы использовали 18 праймеров SSR, разработанных N. Paniego et al. и S. Tang et al. [9; 23]. Электрофорез продуктов амплификации проводили в агарозном геле (2 % агароза, 1 х SB-буфер) с использованием камеры для горизонтального электрофореза (SE. 2, ДНК-технология, Россия) в течение 1-1,5 ч при силе тока 60 шА и напряжении 90-100 V. Последующее окрашивание осуществляли бромистым этидием. Визуализацию и документирование результатов электрофореза обеспечивали при помощи трансиллюминатора ECX-F20.M (WILBER LOURMAT, Франция) и фотоаппарата Canon EOS 550D (Япония). Идентификацию и определение размеров аллелей микросателлитных локусов проводили визуально, путём сравнения со стандартным образцом - маркером молекулярной массы 100 Ьр (Сибэнзим, Москва). Для определения различий между линиями подсолнечника данные ПЦР-анализа были обработаны кластерным анализом, методом Ward с помощью пакета программ (Statistica 6.0). Генетические дистанции рассчитаны с помощью Евклидова расстояния.
Индекс полиморфного содержания (PIC) [24] и эффективное число аллелей (пе) [25] вычисляли по формулам:
РЮ= 1-EjLiPij2,
где Р - частота j паттерна для локуса i и суммирование распространяется на п паттернов.
ne=i/i:]n=iPij2,
где пе - эффективное число аллелей.
Результаты и обсуждение. Восемнадцать пар праймеров, показавших наличие полиморфизма, были использованы для генотипирования инбредных линий и гибридов подсолнечника селекции Армавирской опытной станции ВНИИМК. Для них была выполнена оптимизация условий ПЦР, при которых продукты амплификации четко визуализировались. Характеристика амплифицированных локусов представлена в таблице 1.
Таблица 1
Характеристика ДНК-локусов, использованных для генотипирования линий подсолнечника АОСВНИИМК
Армавирская ОС ВНР ИМК, 2019 г.
Локус Молекулярный вес продукта (п.н.) PIC Па Пе
Наг 1796 180; 280 0,36 2 1,56
ORS 366 220; 250 0,47 2 1,88
ORS 811 150; 200 0,36 2 1,56
ORS 1287 200; 210 0,47 2 1,88
ORS 307 160; 190 0,36 2 1,56
ORS 1079 450; 480 0,25 2 1,33
ORS 561 410; 500 0,50 2 2,00
ORS 533 170; 175 0,50 2 2,00
Har 1327 195, 205 0,14 2 1,16
Har 1442 0; 165 0,47 2 1,88
ORS5 320; 350 0,42 2 1,72
ORS 559 100; 150 0,50 2 2,00
ORS 815 180; 200 0,47 2 1,88
ORS 1144 136; 177 0,42 2 1,72
ORS 610 170; 180; 190 0,51 3 2,04
Har 432 170; 175; 180 0,37 3 1,64
Har 514 180; 185; 190 0,64 3 2,85
Har 1608 240; 260; 270, 280 0,65 4 2,85
Примечание: Р1С - индекс полиморфного содержания; па - наблюдаемое число аллелей; пе - эффективное число аллелей.
У 14 SSR локусов обнаружено по два аллеля, по три аллеля - у локусов Наг 517, ORS 610 и Наг 432. У локуса Наг 1608 было выявлено четыре аллеля.
Для определения дискриминационного потенциала системы маркеров в пределах использованной группы линий вычисляли такие показатели, как наблюдаемое число аллелей на полиморфный локус (па), ин-
SA Ы Ml ыв
ПАС12 ПЧЭИ
■
Н^ТМ
а^Ч'
ВА -S" ВдМТ НЛ7Э7
ал SM
ВК 21
Генетическая дистанция
деке полиморфного содержания (PiС) и эффективное число аллелей (пе) (табл. 1).
Наиболее полиморфными локусами были Наг 514, ORS 610 и Наг 1608 (па равное 3-4, PIC - от 0,51 до 0,65 и пе -от 2,04 до 2,85). Локусы Наг 1327 и ORS 1079 имели низкие показатели полиморфизма (па равное 2, PIC - от 0,14 до 0,25 и пе - от 1,16 до 1,33). Остальные локусы имели средний уровень полиморфизма (па равное 2-3, PIC - от 0,36 до 0,50, пе - от 1,56 до 2,00) (табл. 1).
Среднее число аллелей на локус составило 2,3, что совпадает с полученным ранее для 12 линий подсолнечника Армавирской опытной станции ВНИИМК [11]. Рассчитанные нами величины характеризуют полиморфизм исследованных образцов коллекции как средний. Анализ электрофоретических спектров 18 полиморфных микросателлитных локусов линий показал индивидуальность аллель-ного состава каждой из них (табл. 2).
Линии В А 760 с В А 761 и ВА 325 с ВК 21, которые являются аналогами по отношению друг к другу, имели идентичные генотипы по 18 локусам. Их идентичность была показана в работе [11] при использовании 11 микросателлитных и 4 изоферментных локусов. Увеличение количества маркерных локусов не выявило различий между данными линиями. Но были идентифицированы линии ВА 93 и В А 760, не показавшие отличий ранее [11] (табл. 2). Уникальность проанализированной группы линий составила 82 %.
Для определения степени сходства между линиями на основе матрицы состояний бинарных признаков был проведен кластерный анализ методом Ward и построена дендрограмма генетических взаимоотношений между изученными линиями (рис. 1).
Рисунок 1 - Дендрограмма генетического сходства 13 линий селекции Армавирской ОС ВНИИМК на основе 18 полиморфных SSR-локусов ДНК
Анализ дендрограммы показал, что изученные линии разделились на два кластера, с генетической дистанцией между ними 9,3. В один кластер попали материнские линии В А 93, В А 760, В А 761, ВА 4, ВА 6, а также две отцовские линии В А 384 и В А 389. Второй кластер объединил отцовские линии В А 317, В А 337, ВА 737, ВА 812, ВА 325, ВК 21. Как было отмечено в работе Гучетль С.З. с соавторами [11], объединение линий в кластеры в большей степени зависело от принадлежности к отцовской или материнской линии.
Наследование микросателлитных локусов обычно носит кодоминантный характер. Это в значительной мере обуславливает их использование для паспортизации гибридов, поскольку позволяет определить наличие обоих родительских аллелей в их генотипах. В нашем исследовании у гибридов некоторые из изучаемых локусов проявили себя как доминантные: ORS 366, ORS 307, ORS 610, Наг 1442, Наг 432. У этих гибридов маркерный локус был представлен лишь одним из родительских аллелей. Четыре локуса не выявили полиморфизма: ORS 307, ORS 610, Наг 1442 и Наг 1327. Результаты генотипирования гибридов представлены в таблице 3.
Таблица 2
Аллельные состояния 18 микросателлитных локусов у 13 линий подсолнечника селекции АОС
ВНИИМК
__Армавирская ОС ВНИИМК, 2019 г.
Локус Линия
ВА93 ВА 4 ВА 6 ВА 760 ВА 761 ВА 317 ВА 325 ВК 21 ВА 337 ВА 384 В А 389 ВА 737 ВА 812
Наг 1796 180* 180 280 280 280 280 280 280 280 280 280 180 280
(Жв 366 220 250 250 250 250 220 220 220 220 250 220 220 220
(Жв 811 200 150 150 150 150 150 150 150 150 200 150 200 150
ОЬЮ 1287 210 210 210 210 210 200 210 210 200 200 200 200 210
(Жв 307 160 190 160 160 160 160 160 160 160 190 190 160 160
(Жв 610 170 180 180 180 180 190 180 180 190 180 190 180 190
(Жв 1079 480 480 480 450 450 480 480 480 480 480 480 480 480
(Жв 561 410 410 500 500 500 410 410 410 410 410 500 500 500
(Жв 533 170 175 175 170 170 175 170 170 175 175 175 175 170
Наг 432 175 175 180 175 175 175 175 175 170 175 180 175 175
Наг 514 190 190 185 190 190 180 180 180 180 180 190 180 185
Наг 1327 195 195 205 195 195 195 195 195 195 195 195 195 195
Наг 1442 0 0 0 0 0 165 165 165 165 165 165 165 165
Наг 1608 260 270 260 260 260 270 280 280 270 270 270 240 260
(Жв 5 320 350 320 320 320 350 320 320 350 320 320 350 320
(Жв 559 150 150 150 150 150 100 100 100 100 150 150 100 100
(Жв 815 180 180 180 180 180 200 200 200 200 180 180 200 180
(Жв 1144 136 136 136 136 136 136 177 177 136 177 177 136 136
Примечание: *количество пар иуклеотидных оснований (п.н.) фрагмента ДНК
Таблица 3
Аллельные состояния 18 микросателлитных локусов у 10 гибридов подсолнечника селекции Армавирской ОС ВНИИМК
Армавирская ОС ВНИИМК, 2019 г.
Локус Гибрид
Барс Натали Ирэн Мэлин Медас Арис Арнеб Беркут Арлин Арими
Наг 1796 180/280** 280* 280 180/280 180/280 180/280 280 180/280 280 280
(Жв 811 150/200 150 150/200 150/200 150 150/200 150 150/200 150 150
(Жв 1287 200/210 200/210 200/210 200/210 200/210 200/210 200/210 200/210 210 210
(Жв 1079 480 450/480 450/480 480 480 450/480 450/480 480 450/480 480
(Жв 561 410 500 410/500 500/410 410 500 500 410 500 410
(Жв 533 170/175 175 175 175 175 175 175 170 170 170
Наг 432 175 175 175 180 175 175 180 175 175 175
Наг 514 190/180 180/190 190/180 180/185 180/190 180/190 190 180/190 190 185
Наг 1608 260/270 260/270 260/270 260/270 270 240/260 260/270 260/280 260 280
(Жв 5 320/350 320/350 320 320/350 350 320/350 320 320 320 320
(Жв 559 150/100 150/100 150 150/100 150/100 150/100 150 150/100 150/100 100
(Жв 815 180/200 180/200 180 180/200 180/200 180/200 180 180/200 180 180
(Жв 144 136 136 136/177 136 136 136 136/177 136 177 136 136
(Жв 366 220 220 250 220 250 220 220 220 220 220
Наг 1327 195 195 195 195 195 195 195 195 195 195
Наг 1442 165 165 165 165 165 165 165 165 165 165
(Жв 307 160 160 160 160 160 160 160 160 160 160
(Жв 610 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180
Примечание: *количество пар иуклеотидных оснований (п.н.) фрагмента ДНК. ** гетерозиготные спектры, в которых присутствуют фракции двух разных аллелей
У большинства локусов наследование ампликонов происходило по кодоминант-ному типу. У локусов, находящихся в гетерозиготном состоянии, мы наблюдали оба родительских ампликона (гибрид Арис), в гомозиготном состоянии - один ампликон (гибрид Натали) (рис. 2).
о ^ s ^ О —■
'О ci S m 'О ., "О
m a t-. t^ g
<< S < < 5. < b¿
Рисунок 2 - Электрофоретические спектры продуктов амплификации ДНК у гибридов подсолнечника Натали, Арис и их родительских линий по л оку су ORS 811.
OK - отрицательный контроль. M - маркер молекулярного веса 100 пн
Несмотря на наличие мономорфных локусов, все изученные гибриды имели отличающиеся генотипы. Уникальность коллекции гибридов 100 %.
Таким образом, в результате проведенных исследований показано, что система маркеров из 18 пар микросателлитных локусов выявляет полиморфизм фракций ам-плифицированной ДНК. Дискриминационный потенциал системы маркеров в пределах использованной группы линий характеризуется как средний. Уникальность проанализированной коллекции линий Армавирской опытной станции ВНИИМК составила 82 %, гибридов - 100 %. Использованные микросателлитные локу-сы являются оптимальными для генотипи-рования инбредных линий и гибридов подсолнечника селекции АОС ВНИИМК.
Список литературы
1. Carvalho KP., Ruas С.F., Ferreira JAi., Moreira R.M.P. and Ruas P.M. Genetic diversity among maize (Zea mays L.) landraces assessed by RAPD markers // Genetics and Molecular Biology. -2004. - V. 27. - Is 2. - P. 228-236.
2. Рамазанова C.A., Гучетлъ C.3., Челюстни-кова Т.А., Антонова Т.С. Полиморфизм микросателлитных локусов ДНК у сортов сои селекции ВНИИМК // Современные проблемы научного обеспечения производства подсолнечника. Сб. докл. междунар. науч.-практ. конф., посвященной 120-летию со дня рождения академика B.C. Пу-стовойта. - Краснодар, 2006. - С. 234-239.
3. Nari'el J.M., Fehr W.R., Chu W., Grant D. and Shoemaker R.C. Simple sequence repeat diversity among soybean plant introductions and elite genotypes // Crop Sci. - 2000. - V. 40. - P. 1452-1458.
4. Супрун II.IL, Ковалев B.C., Коротенко Т.Л., Степанов II.В., Лободина Е.В Анализ генетических взаимосвязей сортов риса из разных эколого-географических групп с использованием SSR-мар-керов // Биотехнология и селекция растений. -2019. -Т. 2,-№ 1.-С. 7-15.
5. Solano Solis J., Morales UUoa D, Anabalon Rodriguez L. Molecular description and similarity relationships among native germplasm potatoes (5o-lanum tuberosum ssp. tuberosum L.) using morphological data and AFLP markers // Electron. J. Biotechnol. [online], - 2007. - V. 10 (3). - P. 436-143.
6. Смоленская С.Э., Квасова Э.В., Редина O.E. Тестирование полиморфизма в сортах и инбредных линиях многолетней люцерны // Вестник ВОГиС. - 2008. - Т. 12. - № 4. - С. 629.
7. Smith J.S.C., Kresovich S., Hopkins M.S., Mitchell S.E., Dean R.E., Woodman W.L., Lee M. and Porter K. Genetic diversity among elite sorghum inbred lines assessed with simple sequence repeats // Crop Sci. - 2000. - V. 40. - P. 226-232.
8. Solodenko A., Sivolap Y. Genotyping of Helian-thus based on microsatellite sequences. // Helia. -2005.-V. 28 (42).-P. 19-26.
9. Paniego N., Eschaide M., MunozM., Fernandez L., Tor ales S., Faccoi P., Fuxan /., Carrera M., Zan-domeny R., Suarez E. and Hopp H. Microsatellite isolation and characterization in sunflower (Hehan-thus annuus L.) // Genome. - 2002. - V. 45. - P. 34-13.
10. Гучетлъ C.3., Челюстникова T.A., Антонова T.C., Рамазанова С.А. Микросателлитные локусы как маркеры для идентификации и сертификации линий и гибридов подсолнечника селекции ВНИИМК // Масличные культуры. Науч.-тех. бюл. ВНИИМК. - 2007. - Вып. 2 (1з7). - С. 27-32.
11. Гучетлъ С.З., Фролов С.С., Зайцев Р.К, Кузнецова Е.С. Паспортизация линий и гибридов подсолнечника селекции Армавирской опытной станции ВНИИМК: подбор оптимальных ДНК локусов и условий ПДР // Масличные культуры. Науч.-тех. бюл. ВНИИМК. - 2017. - Вып. 3 (171). -С. 23-28.
12. Деревенец В.Н., Дудка Н.З., Зайцев H.IL, Мамонов II. Ф., Фролов С.С., Фролова II.H. Подсолнечник ВА 760 : Патент РФ на селекционное достижение № 6982 от 30.07.2013 г., по заявке № 54188/8953101 с датой приоритета 19.04.2010 г.;
заявитель и патентообладатель - ГНУ Армавирская опытная станция ВНИИМК.
13. Демурин Я.Н., Пихтярёеа A.A., Борисен-ко О.М., Зайцев Н.И., Фролов С. С. Подсолнечник ВК 21 ИМИ : Патент РФ на селекционное достижение № 7503 от 03.09.2014 г., по заявке № 8853881 с датой приоритета 28.11.2011 г.; заявитель и патентообладатель - ГНУ ВНИИМК.
14. Деревенец В.Н., Зайцев Н.И., Мамонов И.Ф., Мамонова Р.Н., Фролов С.С., Фролова И.Н. Подсолнечник ВА 337 : Патент РФ на селекционное достижение № 6080 от 01.09.2011 г., по заявке № 54394/9154699 с датой приоритета 02.12.2008 г.; заявитель и патентообладатель - ГНУ Армавирская опытная станция ВНИИМК.
15. Деревенец В.Н., Дудка КЗ., Зайцев Н.И., Илюхин Д.В., Фролов С.С., Фролова И.Н. Подсолнечник В А 384 : Патент РФ на селекционное достижение № 7880 от 03.06.2015 г., по заявке № 60715/8757285 с датой приоритета 06.12.2012 г.; заявитель и патентообладатель - ФГБНУ «Армавирская опытная станция ВНИИМК им. B.C. Пусто войта».
16. Демурин Я.И., Деревенец В.И., Зайцев НИ, Фролов С.С., Фролова И.Н. Подсолнечник ВА 389 : Патент РФ на селекционное достижение № 10044 от 03.06.2015 г., по заявке № 66498/8559160 с датой приоритета 12.12.2014 г.; заявитель и патентообладатель - ФГБНУ ФНЦ ВНИИМК.
17. Демурин Я.Н., Пихтярёеа A.A., Борисен-ко ОМ., Трембак E.H., Пикалова H.A., Лукомец В.М., Зайцев Н.И., Фролов С.С. Подсолнечник АРИМИ: Патент РФ на селекционное достижение № 7391 от 29.05.2014 г., по заявке № 8853879 с датой приоритета 28.11.2011 г.; заявитель и патентообладатель - ГНУ ВНИИМК.
18. Деревенец В.И., Дьяков А.Б., Зайцев НИ, Мамонов И.Ф., Фролов С.С., Фролова И.Н. Подсолнечник НАТАЛИ : Патент РФ на селекционное достижение № 66849 от 11.03.2013 г., по заявке № 55707/8954285 с датой приоритета 02.12.2010 г.; заявитель и патентообладатель - ГНУ Армавирская опытная станция ВНИИМК.
19. Деревенец В.И., Дудка Н.З., Зайцев НИ, Илюхин Д.В., Мамонов И.Ф., Фролов С. С., Фролова И.Н. Подсолнечник ИРЭН : Патент РФ на селекционное достижение № 8319 от 16.03.2016 г., по заявке № 60717/8757286 с датой приоритета 06.12.2012 г.; заявитель и патентообладатель -ФГБНУ «Армавирская опытная станция ВНИИМК им. B.C. Пустовойта».
20. Демурин Я.И., Деревенец В.И., Зайцев НИ, Фролов С. С., Фролова И.Н. Подсолнечник АРНЕБ : Патент РФ на селекционное достижение № 9576 от 19.03.2018 г., по заявке № 66500/8559161 с датой приоритета 12.12.2014 г.; заявитель и патентообладатель - ФГБНУ «Армавирская опытная станция ВНИИМК им. B.C. Пустовойта».
21. Демурин Я.И., Деревенец В.И., Зайцев НИ, Свиридов H.H., Фролов С.С., Фролова И.Н. Подсолнечник АРИС : Патент РФ на селекционное
достижение № 9704 от 13.06.2018 г., по заявке № 68250/8457277 с датой приоритета 23.11.2015 г.; заявитель и патентообладатель - ФГБНУ «Армавирская опытная станция ВНИИМК им. B.C. Пустовойта».
22. Saghai-Maroof М.А., Soliman К.М., Jorgen-sen R A., Allard R. W. Ribosomal DNA spacer-length polymorphisms in barley: Mendelian inheritance, chromosomal location, and population dynamics // PNAS, USA. - 1984. - V. 81. - P. 8014-8018.
23. TangS., YuJ.K., Slabaugh M.D., Shintani D.K., Knapp S.J. Simple sequence repeat мар of the sunflower genome // Theor. and Appl. Genet. - 2002. - No. 105.-P. 1124-1136.
24. Использование ПЦР-анализа в генетико-селекционных исследованиях // Научно-методическое руководство / Под ред. Сиволапа Ю.М. -Киев: Аграрна наука, 1998. - 156 с.
25. Айала Ф., Кайгер Д. Современная генетика. Т. 3. -М.: Мир, 1988.-332 с.
References
1. Carvalho V.P., Ruas C.F., Ferreira J.M., Moreira R.M.P. and Ruas P.M. Genetic diversity among maize (Zea mays L.) landraces assessed by RAPD markers // Genetics and Molecular Biology. -2004. - V. 27. - Is. 2. - P. 228-236.
2. Ramazanova S.A., Guchetl' S.Z., Chelyustniko-va T.A., Antonova T.S. Polimorfizm mikrosatellit-nykh lokusov DNK u sortov soi selektsii VNIIMK // Sovremennye problemy nauchnogo obespecheniya proizvodstva podsolnechnika. Sb. dokl. mezhdunar. nauch.-prakt. konf., posvyashchennoy 120-letiyu so dnya rozhdeniya akademika V.S. Pustovoyta. - Krasnodar, 2006. - S. 234-239.
3. Narvel J.M., Fehr W.R., Chu W., Grant D. and Shoemaker R.C. Simple sequence repeat diversity among soybean plant introductions and elite genotypes // Crop Sci. - 2000. - V. 40. - P. 1452-1458.
4. Suprun I.I., Kovalev V.S., Korotenko T.L., Ste-panov I.V., Lobodina E.V Analiz geneticheskikh vzaimosvyazey sortov risa iz raznykh ekologo-geograficheskikh grapp s ispol'zovaniem SSR-mar-kerov // Biotekhnologiya i selektsiya rasteniy. - 2019. -T. 2. - № 1. - S. 7-15.
5. Solano Solis J., Morales Ulloa D, Anabalon Rodriguez L. Molecular description and similarity relationships among native germplasm potatoes (So-lanum tuberosum ssp. tuberosum L.) using morphological data and AFLP markers // Electron. J. Biotechnol. [online], - 2007. - V. 10 (3). - P. 436-443.
6. Smolenskaya S.E., Kvasova E.V., Redina O.E. Testirovanie polimorfizma v sortakh i inbrednykh liniyakh mnogoletney lyutserny // Vestnik VOGiS. -2008.-T. 12.-№4.-S. 629.
7. Smith J.S.C., Kresovich S., Hopkins M.S., Mitchell S.E., Dean R.E., Woodman W.L., Lee M. and Porter K. Genetic diversity among elite sorghum
inbred lines assessed with simple sequence repeats // Crop Sci. - 2000. - V. 40. - P. 226-232.
8. Solodenko A., Sivolap Y. Genotyping of Heli-anthus based on microsatellite sequences. // Helia. -2005.-V. 28(42).-P. 19-26.
9. Paniego N., Eschaide M., Munoz M., Fernandez L., Torales S., Faccoi P., Fuxan I., Camera M., Zandomeny R., Suarez E. and Hopp H. Microsatellite isolation and characterization in sunflower (Helian-thus annuus L.) // Genome. - 2002. - V. 45. - P. 34-43.
10. Guchetl' S.Z., Chelyustnikova T.A., Antonova T.S., Ramazanova S.A. Mikrosatellitnye lokusy kak markery dlya identifikatsii i sertifikatsii liniy i gibridov podsolnechnika selektsii VNIIMK // Maslichnye kul'tuiy. Nauch.-tekh. byul. VNIIMK. -2007. - Vyp. 2 (137). - S. 27-32.
11. Guchetl' S.Z., Frolov S.S., Zaytsev R.N., Kuznetsova E.S. Pasportizatsiya liniy i gibridov podsolnechnika selektsii Armavirskoy opytnoy stantsii VNIIMK: podbor optimal'nykh DNK lokusov i usloviy PTsR // Maslichnye kul'tury. Nauch.-tekh. byul. VNIIMK. - 2017. - Vyp. 3 (171). - S. 23-28.
12. Derevenets V.N., Dudka N.Z., Zaytsev N.I., Mamonov I.F., Frolov S.S., Frolova I.N. Podsolnechnik VA 760 : Patent RF na selektsionnoe dostizhenie № 6982 ot 30.07.2013 g., po zayavke № 54188/8953101 s datoy prioriteta 19.04.2010 g.; zayavitel' i patentoobladatel' - GNU Armavirskaya opytnaya stantsiya VNIIMK.
13. Demurin Ya.N., Pikhtyareva A.A., Borisen-ko O.M., Zaytsev N.I., Frolov S.S. Podsolnechnik VK 21 IMI : Patent RF na selektsionnoe dostizhenie № 7503 ot 03.09.2014 g., po zayavke № 8853881 s datoy prioriteta 28.11.2011 g.; zayavitel' i patentoobladatel' - GNU VNIIMK.
14. Derevenets V.N., Zaytsev N.I., Mamonov I.F., Mamonova R.N., Frolov S.S., Frolova I.N. Podsolnechnik VA 337 : Patent RF na selektsionnoe dostizhenie № 6080 ot 01.09.2011 g., po zayavke № 54394/9154699 s datoy prioriteta 02.12.2008 g.; zayavitel' i patentoobladatel' - GNU Armavirskaya opytnaya stantsiya VNIIMK.
15. Derevenets V.N., Dudka N.Z., Zaytsev N.I., Ilyukhin D.V., Frolov S.S., Frolova I.N. Podsolnechnik VA 384 : Patent RF na selektsionnoe dostizhenie № 7880 ot 03.06.2015 g., po zayavke № 60715/8757285 s datoy prioriteta 06.12.2012 g.; zayavitel' i patentoobladatel' - FGBNU «Armavirskaya opytnaya stantsiya VNIIMK im. V.S. Pustovoyta».
16. Demurin Ya.N., Derevenets V.N., Zaytsev N.I., Frolov S.S., Frolova I.N. Podsolnechnik VA 389 : Patent RF na selektsionnoe dostizhenie № 10044 ot 03.06.2015 g., po zayavke № 66498/8559160 s datoy prioriteta 12.12.2014 g.; zayavitel' i patentoobladatel' -FGBNU FNTs VNIIMK.
17. Demurin Ya.N., Pikhtyareva A.A., Borisen-ko O.M., Trembak E.N., Pikalova N.A., Lukomets V.M., Zaytsev N.I., Frolov S.S. Podsolnechnik ARIMI: Patent RF na selektsionnoe dostizhenie №
7391 ot 29.05.2014 g., po zayavke № 8853879 s datoy prioriteta 28.11.2011 g.; zayavitel' i patentoobladatel' - GNU VNIIMK.
18. Derevenets V.N., D'yakov A.B., Zaytsev N.I., Mamonov I.F., Frolov S.S., Frolova I.N. Podsolnechnik NATALI: Patent RF na selektsionnoe dostizhenie № 66849 ot 11.03.2013 g., po zayavke № 55707/8954285 s datoy prioriteta 02.12.2010 g.; zayavitel' i patentoobladatel' - GNU Armavirskaya opytnaya stantsiya VNIIMK.
19. Derevenets V.N., Dudka N.Z., Zaytsev N.I., Ilyukhin D.V., Mamonov I.F., Frolov S.S., Frolova I.N. Podsolnechnik IREN : Patent RF na selektsionnoe dostizhenie № 8319 ot 16.03.2016 g., po zayavke № 60717/8757286 s datoy prioriteta 06.12.2012 g.; zayavitel' i patentoobladatel' - FGBNU «Armavirskaya opytnaya stantsiya VNIIMK im. V.S. Pustovoyta».
20. Demurin Ya.N., Derevenets V.N., Zaytsev N.I., Frolov S.S., Frolova I.N. Podsolnechnik ARNEB : Patent RF na selektsionnoe dostizhenie № 9576 ot 19.03.2018 g., po zayavke № 66500/8559161 s datoy prioriteta 12.12.2014 g.; zayavitel' i patentoobladatel' - FGBNU «Armavirskaya opytnaya stantsiya VNIIMK im. V.S. Pustovoyta».
21. Demurin Ya.N., Derevenets V.N., Zaytsev N.I., Sviridov N.N., Frolov S.S., Frolova I.N. Podsolnechnik ARIS : Patent RF na selektsionnoe dostizhenie № 9704 ot 13.06.2018 g., po zayavke № 68250/8457277 s datoy prioriteta 23.11.2015 g.; zayavitel' i patentoobladatel' - FGBNU «Armavirskaya opytnaya stantsiya VNIIMK im. V.S. Pustovoyta».
22. Saghai-Maroof M.A., Soliman K.M., Jorgen-sen R A., Allard R.W. Ribosomal DNA spacer-length polymorphisms in barley: Mendelian inheritance, chromosomal location, and population dynamics // PNAS, USA. - 1984. - V. 81. - P. 8014-8018.
23. Tang S., Yu J.K., Slabaugh M.D., Shintani D.K., Knapp S.J. Simple sequence repeat mar of the sunflower genome // Theor. and Appl. Genet. - 2002. -No. 105.-P. 1124-1136.
24. Ispol'zovanie PTsR-analiza v genetiko-selektsionnykh issledovaniyakh // Nauchno-metodicheskoe rukovodstvo / Pod red. Sivolapa Yu.M. - Kiev: Agrarna nauka, 1998. - 156 s.
25. Ayala F., Kayger D. Sovremennaya genetika. T. 3. -M.: Mir, 1988.-332 s.
Получено: 14.05.2019 Принято: 16.09.2019 Received: 14.05.2019 Accepted: 16.09.2019
