CC BY
48
ЭПИДЕМИОЛОГИЯ
Эпидемиология
IVh
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
УДК 616.36-002:616.988(470.341)
ГЕНОТИПИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ ВИРУСА ГЕПАТИТА С, ЦИРКУЛИРУЮЩЕГО СРЕДИ НАСЕЛЕНИЯ НИЖЕГОРОДСКОЙ ОБЛАСТИ
Т.Н. Быстрова1, О.В. Корочкина2, Ю.В. Михайлова1, О.С. Карувваккат1,
1 ФГУН «Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. акад. И.Н. Блохиной»,
2ГОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия»
Михайлова Юлия Владимировна - e-mail: gepatit-bystrova@yandex.ru
В настоящей работе рассмотрена генотипическая структура вируса гепатита С среди пациентов инфекционных стационаров Нижегородской области с использованием метода ПЦР с электрофоретической и с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «Real-Time». Показаны значительное разнообразие циркулирующих генотипов, доминирующие субтипы и их неравномерное распределение на исследуемой территории.
Ключевые слова: гепатит С-инфекция, вирус гепатита С, полимеразная цепная реакция, генотипическая структура вируса.
The genotypical structure of the virus of hepatitis C among the patients of infectious hospitals of Nizhny
Novgorod region with the use of the method of polymerase chain reaction with electrophoretic and hybridization-fluorescent detection in the regimen «Real-Time» is given in the article. There are shown the considerable diversity of circulating genotypes, dominating subtypes and their uneven distribution on the examined territory.
Key words: hepatitis C- infection, virus of hepatitis C, polymerase chain reaction,
genotypical structure of virus
Введение сравнении с данными по РФ за период с 1997 по 2009 г.
Повсеместное распространение, исключительно высокая хронизация делают проблему гепатита С (ГС) особенно актуальной. Наиболее детально изучены закономерности течения и развития острых форм ГС, в то время, как именно хронические и скрытые варианты инфекции определяют основную часть эпидемического процесса, социальную значимость и прогноз данной инфекции [1, 2]. Большое влияние на течение инфекционного процесса ГС оказывает значи-^ тельная генетическая гетерогенность вируса, по-разному влияя на особенности течения болезни, эффективность противовирусной терапии, а возможно, и на частоту хрониза-ции инфекции [2-5].
В настоящее время определение генотипов вируса ГС (ВГС) имеет не только клиническое, но и значительное эпидемиологическое значение. Помимо знаний о частоте выявления отдельных генотипов в различных регионах РФ, не менее важным являются исследования динамики генотипического разнообразия ВГС в пределах одной территории, с учетом полного спектра маркеров инфекции, с целью прогнозирования изменений эпидемиологической ситуации, предотвращения дальнейшего распространения инфекции. В частности, доминирование и возможный дальнейший рост доли субтипа 1Ь, который значительно снижает эффективность интерферонотерапии, ведет к увеличению длительно существующих источников ГС-инфекции. В случае создания кандидатной вакцины возможность ее применения и эффективность также будут определяться степенью изученности популяционной структуры ВГС, а именно, знанием превалирующих генотипов.
Цель исследования: изучение структуры генетических вариантов вируса гепатита С, циркулирующих среди населения Нижегородской области.
Материалы и методы
С целью изучения особенностей распространения ГС на основе данных официальной статистики проведен сравнительный анализ динамики заболеваемости манифестным острым (ОГС) и хроническим ГС (ХГС), включая латентную форму инфекции, на территории Нижегородской области в
В сыворотках крови 637 лиц, госпитализированных с предварительным диагнозом: «вирусный гепатит» в стационары различных городов Нижегородской области, определены анти-ВГС методом ИФА. Анти-ВГС-позитивные образцы проверены на наличие РНК ВГС, генотипированы методом ПЦР с различными методами детекции полученных результатов. Использование электрофоретической детекции в агарозном геле, окрашенном бромистым этидием, позволяет дифференцировать 1а, 1в, 2, 3а генотипы ВГС, в то время как гибридизационно-флуоресцентная детекция в режиме «Real-Time» дает возможность дополнительно определять четвертый генотип вируса [3,4]. При изучении 132 историй болезни лиц с заключительным диагнозом: «ХГС» проанализирована структура генотипов вируса в зависимости от давности инфицирования. Пациенты с известным возрастом разделены на 4 группы с интервалом в 10 лет. Полученные данные обработаны в программе Biostat.
Результаты и их обсуждение
Анализ официально регистрируемых данных в период с 1997 по 2009 г. отражает снижение заболеваемости ОГС; а также стабилизацию ХГС в последние годы как по РФ в целом, так и в Н. Новгороде на уровне 37-41%000 и 63-790/0000 соответственно. На протяжении всего периода наблюдения отмечен рост соотношения между показателями ОГС и ХГС (для Н. Новгорода: с 1:0,7 в 1997 г. до 1:52 в 2009 г.). Кроме того, в отличие от некоторых территорий РФ, когда пики заболеваемости острым и хроническим ГС разделены пятью годами, в Н. Новгороде выраженный подъем ОГС сопровождался пиком регистрации ХГС уже через 3 года. Полученные данные свидетельствуют об интенсивности эпи -демического процесса ГС на исследуемой территории, о значительном росте темпов накопления источников инфекции, отражая широкий потенциал нозоформы.
Анти-ВГС среди пациентов обнаружены в 32,0±1,8%, что свидетельствует о наличии у них инфекции, вызванной ВГС. В подавляющем большинстве у этих пациентов установлен диагноз ХГС (96,0±1,6%). Как известно, ГС редко диагностируется в фазе острого заболевания, являясь, в основном,
Э п и де м и о ло ги я
хронической инфекцией, что связано с ярко выраженной хрониогенной способностью возбудителя. В отличие от ОГС, когда РНК ВГС обнаружена во всех исследованных случаях, репликативная активность вируса при ХГС составила 76,0±3,5%, свидетельствуя о стадии реактивации инфекционного процесса.
Проведенное генотипирование выявило в Нижегородской области следующие генотипы ВГС: 1b - 42,6±4,0%; 1а -4,1±1,6%; 2 - 4,7±1,7%; 3а - 32,4±3,8%, которые, согласно данным литературы, являются типичными для территории РФ [3-6]. При этом были получены сравнимые результаты генотипирования как при использовании ПЦР с электрофо-резной детекцией, так и в режиме «реального времени». Следует отметить, что применение метода ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией позволяет увеличить аналитическую чувствительность тест-систем (согласно заявленным характеристикам: 100 МЕ/мл для «Real-Time» в сравнении с 103 МЕ/мл при гель-электрофорезе) [3, 7]. Это особенно важно для идентификации образцов, нетипируемых с помощью электрофоретической детекции. Это может быть связано с низкой вирусной нагрузкой (согласно литературным данным - менее 104 МЕ/ мл) и наличием редких микст вариантов генотипов [7, 8]. Применение «Real-Time» позволило сократить число нетипируемых вариантов с 26,5±1,7 до 9,5±2,4%. Образцы, в которых генотип повторно не определялся, требуют дальнейшего анализа методом секвенирования. Кроме того, в 7,0±2,0% установлено наличие микст-генотипов - 1Ь/3а, которые выявлены только с использованием гибридизационно-флуоресцентной детекции. Обнаружение микст вариантов генотипов, возможно, связано с повторным инфицированием другим штаммом вируса.
В отличии от большинства территорий РФ, где наблюдается выраженное преобладание генотипа 1b ВГС, в Нижегородской области субтипы 1b и 3а превалировали в равной мере [9, 10]. Аналогичные данные получены Пахалковой Е.В. (2004), Цыганко Е.В. (2007), Маркиным Н.В. (2004) по Омской, Свердловской и Ростовской области [4-6]. Вместе с тем, выраженная неравномерность эпидемического процесса ГС на исследуемой территории проявилась и в неоднородности генотипической структуры вируса. Так, в отличии от Н. Новгорода и Балахны, где не выявлено различий в частоте обнаружения доминирующих субтипов 1b и 3а, в Дзержинске 1b достоверно преобладал над 3а (p<0,05). Остальные субтипы вируса выявлялись значительно реже и также неравномерно на исследуемой территории. Наибольшая доля микст-генотипов приходилась на лиц, госпитализированных в стационары Н. Новгорода, что составило 70,0±1,5% от общего количества образцов с ^/3а. В Н. Новгороде и Балахне отмечены единичные находки генотипов 1а и 2, которые не циркулируют в Дзержинске. В то же время, именно на больных ГС в г. Дзержинске приходилась наибольшая доля нетипируемых образцов (17,6±3,1%). Все вышесказанное обуславливает необходимость исследования региональных особенностей генотипической структуры ВГС, особенно превалирующих генотипов, для изучения эволюционных проявлений эпидемического процесса ГС в современных условиях на конкретной территории.
Частота обнаружения субтипов 1b и 3а не зависела от формы инфекции и давности заболевания, они одинаково
преобладали как при остром, так и хроническом ГС. Так, при ОГС в 50,0±15,8% выявлен генотип 1Ь и в 40,0±13,4% - 3а.
Частота обнаружения доминирующих генотипов при ХГС составила 43,2±5,2% и 31,8±4,9% соответственно. При этом ХГС отличался значительным разнообразием выявляемых генотипов, включая субтипы 1а (3,4%) и 2 (6,8%), а также микст-генотипов 1Ь/3 (8,0%), ни один из которых не был выявлен в фазе острой инфекции. Обращает на себя внимание, что субтип 1а у больных ХГС начинает выявляться лишь в период 2006-2010 гг.
Среди обследованных лиц 67,0±3,3% составляли мужчины и 33,0±3,3% - женщины. При этом, у женщин 1Ь достоверно преобладал над 3а (р<0,01),а у мужчин данные субтипы превалировали в равной доли. Другие генотипы выявлялись значительно реже и примерно одинаково в обеих группах.
Различия в частоте обнаружения доминирующих генотипов выявлены только у лиц 50 лет и старше, где 1Ь достоверно преобладал над 3а (62,9±8,2% и 8,6±3,7% соответственно). В остальных возрастных группах 1Ь и 3а превалировали в равной мере. Следует отметить, что у лиц старше 30 лет наблюдалась тенденция к равномерному увеличению доли 1Ь с возрастом (с 22,5±6,6% в 30 лет до 63,0±8,2% у лиц старше 50 лет (р<0,01)) и снижению удельного веса 3-го генотипа (с 50,0±7,9% до 9,0±4,7% соответственно (р<0,01)). Аналогичные данные по возрастному распределению доминирующих генотипов получены Шустовым А.В (2003) среди населения Новосибирской области [11].
Выводы
1. Несмотря на снижение официальных показателей заболеваемости, полученные данные свидетельствуют о высокой ^
интенсивности латентного компонента эпидемического процесса ГС на территории Нижегородской области, о значительном росте темпов накопления источников инфекции, отражая широкий потенциал нозоформы.
2. Использование ОТ-ПЦР с детекцией в режиме «реального времени» не только позволяет увеличить чувствительность методики, но и дифференцировать большее число генотипов вируса.
3. Генотипическое разнообразие изолятов ВГС на территории Нижегородской области ограничено четырьмя генотипами: 1а, 1Ь, 2 и 3а.
4. Показано превалирование в равной доле субтипов 1Ь и 3а независимо от формы инфекции и давности заболевания.
5. Частота обнаружения микст-генотипов 1Ь/3 составила 7,0±2,0% случаев.
6. Наблюдение за динамикой генотипической структуры ВГС должно являться необходимой составляющей эпидемиологического надзора за гепатит С- инфекцией на каждой ^ конкретной территории.
ЛИТЕРАТУРА
1. Шляхтенко Л.И., Мукомолов С.Л., Сулягина Л.Г. и др. Пути совершенствования эпидемиологической диагностики вирусных гепатитов В и С. Мир вирусных гепатитов. 2006. № 1. С. 2-10.
2. Иванова Т.Г., Яковчук Е.М., Высоцкий В.С. и др. Проблемы вирусных гепатитов в современный период. Сборник трудов всерос. НПК «Современные проблемы эпидемиологии. Перспективные средства и методы лабораторной диагностики и профилактики актуальных инфекций». СПб. 2010. С. 215.
3. Гущин А.Е., Носкова О.М., Шипулин Г.А. Разработка набора реагентов «АмплиСенс ИСУ-генотип» для определения субтипов 1а, 1Ь, 2а, 3а вируса гепатита С. Вопросы вирусологии. 2003. № 3. С. 45-48.
ЭПИДЕМИОЛОГИЯ
ЭПИДЕМИОЛОГИЯ
Эпидемиология
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
4. Пахалкова Е.В., Утянская И.Г. Распространение субтипов ВГС на территории Омска и Омской области. Сборник трудов V Всерос. НПК «Генодиагностика инфекционных болезней». М. 2004. Т. 1. С. 261-265.
5.Цыганко Е.В., Ковалев С.Ю. Распределение генотипов вируса гепатита С в г.Екатеринбурге: динамика эпидемиологического процесса. Сборник трудов 6-й Всерос. НПК с межд. участием «Молекулярная диагностика-2007». М. 2007. Т. 1. С. 279-283.
6. Маркин Н.В., Цема Н.И. и др. Распределение субтипов вируса гепатита С в Ростовской области. Сборник трудов V Всерос. НПК «Генодиагностика инфекционных болезней». М. 2004. Т. 1. С. 249-250.
7.Орлов С.Т., Неверов А.Д., Михайловская Г.В. и др. Разработка и апробация тест-системы «АмплиСенс ИСУ-генотип-РРТ» на клиническом материале
и контрольных панелях ОСМР. Сборник трудов 6-й Всерос. НПК с межд. участием «Молекулярная диагностика-2007». М. 2007. Т. 1. С. 320-323.
8. ПЦР в режиме реального времени. Под. ред. Ребрикова Д.В. М.: БИНОМ, 2009. 215 с.
9. Мукомолов С.Л., Калинина О.В. Молекулярная эпидемиология вирусных гепатитов. Мир вирусных гепатитов. 2003. № 12. С. 5-13.
10. Калинина О.В. Молекулярно-генетическая характеристика вариантов вируса гепатита С, циркулирующих в Санкт-Петербурге. Автореф.дис....кан. биол. наук. СПб. 2000. 23 с.
11. Шустов А.В. Генотипическое разнообразие изолятов и молекулярная вариабельность вируса гепатита С у Населения Новосибирской области. Автореф.дис....кан. биол.наук. Кольцово. 2003. 22 с.
