CC BY
606
ЛАБОРАТОРНЫЕ ЖИВОТНЫЕ
Гематологические показатели свободных от патогенной флоры крыс CD (SPRAGUE-DAWLEY) и мышей CD-1 в норме
И.Н. Кравченко, О.Н. Хохлова, Н.Н. Кравченко, А.Н. Пужалин,
И.А. Дьяченко, А.Н. Мурашев
Филиал института биоорганической химии имени академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Пущино
Гематологические показатели лабораторных животных, измеренные в разных лабораториях разными исследователями, существенно отличаются. По-видимому, эта разница обусловлена различными влияниями внешней среды, зависит от способа, момента и места взятия крови, пищевого режима, возраста животного и других факторов. Для получения достоверных и воспроизводимых результатов в исследованиях необходимы стандартные условия содержания животных, поэтому вопросам содержания экспериментальных животных в настоящее время уделяется очень большое внимание. Суммированы гематологические показатели крыс CD (Sprague-Dawley) и мышей СD-1 категории СПФ (свободных от патогенной флоры), которые содержались в стандартных условиях, рекомендуемых для содержания лабораторных грызунов. Показано, что лабораторные животные, содержавшиеся в разных лабораториях в одинаковых стандартных условиях, имеют сравнимый диапазон гематологических показателей.
Ключевые слова: кровь, костный мозг, крысы, мыши.
Из всех видов животных наиболее часто в биомедицинских исследованиях используются мышь (Mus musculus) и крыса (Rattus norvegicus) (67% и 21% соответственно) [12, 14]. Эти виды являются основными объектами доклинических испытаний для установления безопасности потенциальных лекарственных препаратов. Для оценки токсичности новых фармакологических препаратов необходимо комплексное исследование функциональных и морфологических показателей периферической крови и костного мозга экспериментальных животных. Однако в справочной литературе имеется мало данных по гематологии крыс и мышей, и разные авторы приводят различные величины [1, 2, 3, 5, 11]. Кроме того, публикуемые в отечественной литературе данные в основном относятся к животным с неконтролируемым
статусом (генетическим, микробиологическим), содержащихся в вивариях с большой вариацией условий содержания и параметров микроклимата. Однако, в соответствии с международными и российскими правилами проведения доклинических испытаний, экспериментальные животные должны быть обеспечены стандартными условиями содержания, быть здоровыми и обладать определенным генетическим и микробиологическим статусом [7, 13]. Использование лабораторных грызунов категории СПФ снижает вариабельность изучаемых показателей и обеспечивает воспроизводимость и достоверность результатов.
Целью данной работы было обобщение результатов гематологических тестов, выполненных в лаборатории биологических испытаний ФИБХ РАН во время проведения доклинических испытаний на крысах
и мышах с 2003 по 2007 год для выведения референс-значений для показателей крови и костного мозга здоровых животных.
Материал и методы
Лаборатория имеет международную аккредитацию AAALAC (Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care International), подтверждающую высокое качество работы с лабораторными животными. Все манипуляции, проводимые на животных, были рассмотрены и одобрены Институтской комиссией по контролю над содержанием и использованием лабораторных животных.
Данные, включенные в эту публикацию, были получены на контрольных группах крыс CD (n = 116) и мышей CD-1 (п = 124), участвовавших в исследованиях по выявлению субхронической токсичности или специфической активности различных препаратов. Возраст крыс составил 1-1,5 месяцев и 2-5 месяцев (половозрелые), возраст мышей — 2-3 месяца. В мировой практике аутбредные линии CD (Sprague Dawley) и CD-1 наиболее часто используются в испытаниях общей токсичности веществ. Животные были получены из НПП «Питомник лабораторных животных» Филиала института биоорганической химии им. академиков М.М.Шемякина и Ю.А.Ов-чинникова РАН и имели статус СПФ, подтверждаемый сертификатом производителя. В «Питомник лабораторных животных» ядра животных поступали из Charles River Laboratories (USA) в 2001 и 2006 гг.
Все исследования проводились согласно «Правилам лабораторной практики в Российской Федерации» [6] и стандартным операционным процедурам лаборатории.
Контрольные животные получали растворитель согласно способу и режиму введения исследуемых веществ опытным животным: внутривенные инъекции физиологического раствора в хвостовую вену или питьевую воду зондом в желудок. Животных содержали в комнатах барьерного типа
с контролируемыми условиями окружающей среды: температура 18-26 °C, относительная влажность 30-70%, автоматическая смена 12-часового светового периода, 100%-ное вентилирование. Условия содержания соответствуют стандартам, указанным в руководстве The Guide for Care and Use of Laboratory Animals [15]. Животные содержались в поликарбонатных клетках на подстиле из резаной пищевой бумаги, получали автоклавированный стандартный экструдированный корм Агро-1 (Ассорти-ментагро, Россия) и профильтрованную водопроводную воду. Во время исследований мышей содержали по одному животному в клетке площадью 364 см2, крыс — по 5 животных в клетке площадью 1815 см2.
Животных лишали корма на ночь перед сбором крови, оставляя свободный доступ к воде. Массу тела определяли непосредственно перед взятием крови. Забор крови проводили из нижней полой вены, предварительно подвергая животных анестезии в СО2 камере. Гематологические показатели определяли на автоматическом анализаторе Serono Baker System 9010+. Для подсчета лейкоцитарной формулы на окрашенных мазках крови использовали аппаратно-программный комплекс МЕКОС-Ц1 с программой МЕКОС-АМК. Суспензию клеток костного мозга получали из бедренной кости стандартной методикой промывания [9], клеточный состав костного мозга анализировали на мазках, окрашенных по Паппенгейму (идентифицируя не менее 500 клеток). Содержание ретикулоцитов определяли методом суправитальной окраски бриллиантовым крезиловым синим в пробирках[4] .
Для всех данных была применена описательная статистика: подсчитаны среднее значение (Mean) и стандартная ошибка среднего (SEM), которые вместе со значением n, минимальным (Min) и максимальным (Max) значениями представлены в итоговых таблицах. Данные по крысам суммированы согласно двум возрастным кате-
гориям животных. Для определения достоверности отличий между возрастными группами применялся тест Mann-Whitney. Статистический анализ проводился программой Statistica-7.0.
Результаты и обсуждение
Масса тела крыс возрастом 1-1,5 месяцев составила 239 ± 4 г (самцы) и 177 ± 4 г (самки), возрастом 2-5 месяцев — 334 ± 10 г (самцы) и 206 ± 4 г (самки); масса тела мышей возрастом 2-3 месяцев составила 36,1 ± 0,3 г (самцы) и 27,7 ± 0,3 г (самки).
Как видно из полученных результатов, есть некоторые различия в содержании форменных элементов у молодых (1-1,5 месяцев) и половозрелых (2-5 месяцев) самок и самцов крыс CD (см. табл. 1 и 2). Так, у животных обоего пола с достижением по-ловозрелости достоверно растет количество эритроцитов в периферической крови при уменьшении среднего объема эритроцита (MCV) и среднего содержания гемоглобина в эритроците (MCH). При этом уровень гемоглобина и средняя концентрация гемоглобина в эритроците (MCHC) остаются практически неизменными. Кроме того, у взрослых животных обоего пола с увеличением возраста снижается количество тромбоцитов крови, а у самок несколько снижается абсолютное содержание лимфоцитов. Следует отметить, что близкие диапазоны показателей крови и аналогичные тенденции в их изменении с возрастом прослеживаются и у крыс CD питомника Charles River Laboratories [10], где животные также содержатся в стандартных условиях.
Известно, что количество эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов зависит от различных влияний внешней среды, способа, момента и места взятия крови, пищевого режима, возраста животного и других факторов [2, 3]. Так, в крови, взятой из различных участков сосудистого русла, находится далеко не одинаковое количество форменных элементов, особенно лейкоцитов [5]. Кроме того, у конвенциональных живот-
ных, содержащихся в неконтролируемых условиях окружающей среды, часто присутствуют клинические и субклинические формы инфекций и паразитарные инвазии, которые, несомненно, влияют на экспериментальные данные [5, 8]. По-видимому, игнорирование исследователями всех или части этих факторов является основной причиной такой широкой вариации гематологических показателей лабораторных животных, приводимых разными авторами [1, 2, 3, 5, 11]. Следует отметить, что в наших исследованиях мы не наблюдали выраженных сезонных вариаций в содержании форменных элементов крови у лабораторных животных. Не приводится никаких данных о биоритмических изменениях картины крови и у животных питомника Charles River Laboratories [10]. По-видимому, содержание животных в условиях искусственной смены 12-часового светового периода сводит влияние сезонных биоритмов к минимуму. Таким образом, максимально возможная стандартизация экспериментальных условий, применяемая в наших исследованиях: использование категорийных животных, постоянные условия окружающей среды, стандартное выполнение манипуляций с животными — способствует максимальному снижению влияния нежелательных факторов на получаемые данные, обеспечивая их воспроизводимость.
В связи с тем, что диаметр эритроцита у мышей несколько меньше, чем у крыс, показатели красной крови у мышей отличаются от таковых у крыс в сторону увеличения количества эритроцитов, гематокрита и уменьшения среднего объема эритроцита (MCV) и среднего содержания гемоглобина в эритроците (MCH) (табл. 5). Как и крысы, мыши имеют лимфоцитарный профиль крови [5], но у мышей абсолютное содержание лимфоцитов в периферической крови несколько меньше, чем у крыс.
Картина крови тесным образом зависит от функционального состояния органов
кроветворения и отражает в той или иной степени изменения, происходящие в гемо-поэтической системе. Поэтому для правильного истолкования картины крови большое значение имеет анализ клеточного состава костного мозга. Микроскопический анализ мазков костного мозга необходимо проводить в доклинических токсикологических исследованиях для определения потенциальной гематотоксичности новых лекарственных препаратов. По данным разных авторов, клеточный состав костного мозга крыс и мышей сильно варьирует [2, 9, 11]. По-видимому, результаты зависят от способа получения костного мозга, приготовления мазка и количества анализируемых клеток. В любом случае мазок должен быть приготовлен не позже чем через 2-3 минуты после смерти животного, поскольку клетки костного мозга очень чувствительны и клеточная смерть наступает быстро [9].
Клеточный состав костного мозга крыс СБ и мышей СБ-1 представлен в таблицах 3, 4 и 6. Миелограмма молодых и половозрелых крыс несколько отличается: с достижением половозрелого возраста доля гра-нулоцитов у крыс возрастает, а относительное количество лимфоцитов снижается; лейкоэритробластическое соотношение у самцов с возрастом практически не меняется, у самок немного уменьшается (по
данным разных авторов лейкоэритроблас-тическое соотношение в норме у крыс составляет 1,07-1,93 [9]). У мышей СБ-1 в составе костного мозга не наблюдается существенных межполовых различий (табл. 6); высокое содержание гранулоцитов и лимфоцитов обуславливает более высокое, чем у крыс, лейкоэритробластическое соотношение.
Выводы
Получены ориентировочные ожидаемые величины показателей крови и костного мозга здоровых животных аутбредных линий крыс СБ и мышей СБ-1 категории СПФ, содержавшихся в стандартных условиях. Показано, что лабораторные животные, содержавшиеся в разных лабораториях в одинаковых стандартных условиях, имеют сравнимый, воспроизводимый диапазон гематологических показателей, которые не зависят от сезонных биоритмов. Выявлены отличия клеточного состава периферической крови и костного мозга крыс разных возрастных диапазонов: 1-1,5 и 2-5 месяцев, что важно учитывать при оценке результатов каждого конкретного исследования. Гематологические данные, приведенные в данной статье, помогут исследователям разных лабораторий правильно интерпретировать результаты своих исследований.
Таблица 1
Показатели периферической крови крыс СБ (возраст 1—1,5 мес.)
Показатель n Mean SEM Min Max
Самцы
Количество эритроцитов, 106/мкл 10 7,06 0,10 6,65 7,62
Концентрация гемоглобина, г/дл 10 15,9 0,2 14,9 17,3
Гематокрит, % 10 45,4 0,7 42,5 50,1
Средний объем эритроцита (МСУ), фл 10 64,3 0,5 61,4 66,8
Среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН), пг 10 22,5 0,2 21,2 23,5
Концентрация гемоглобина в эритроците (МСНС), % 10 34,9 0,2 34,0 35,8
Количество тромбоцитов, 103/мкл 10 1217 67 700 1429
Количество лейкоцитов, 103/мкл 10 12,1 0,6 8,7 15,6
Нейтрофилы палочкоядерные, % 10 1,2 0,3 0,0 3,0
Нейтрофилы палочкоядерные, 103/мкл 10 0,2 0,0 0,0 0,4
Нейтрофилы сегментоядерные, % 10 4,8 0,6 2,0 8,0
Нейтрофилы сегментоядерные, 103/мкл 10 0,6 0,1 0,2 0,9
Эозинофилы, % 10 0,2 0,2 0,0 2,0
Эозинофилы, 103/мкл 10 0,0 0,0 0,0 0,2
Базофилы, % 10 0,0 0,0 0,0 0,0
Базофилы, 103/мкл 10 0,0 0,0 0,0 0,0
Моноциты, % 10 4,9 0,7 2,0 9,0
Моноциты, 103/мкл 10 0,6 0,1 0,2 1,4
Лимфоциты, % 10 88,9 0,9 86,0 93,0
Лимфоциты, 103/мкл 10 10,7 0,5 7,5 13,4
Самки
Количество эритроцитов, 106/мкл 10 6,98 0,11 6,40 7,52
Концентрация гемоглобина, г/дл 10 15,6 0,2 14,3 16,8
Гематокрит, % 10 44,4 0,7 40,5 47,7
Средний объем эритроцита (МСУ), фл 10 63,6 0,3 62,0 65,3
Среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН), пг 10 22,4 0,2 21,2 23,3
Концентрация гемоглобина в эритроците (МСНС), % 10 35,2 0,2 33,8 36,5
Количество тромбоцитов, 103/мкл 10 1290 56 1043 1610
Количество лейкоцитов, 103/мкл 10 13,7 1,4 7,2 19,2
Нейтрофилы палочкоядерные, % 10 2,0 0,3 1,0 3,0
Нейтрофилы палочкоядерные, 103/мкл 10 0,3 0,0 0,1 0,5
Нейтрофилы сегментоядерные, % 10 2,2 0,7 0,0 7,0
Нейтрофилы сегментоядерные, 103/мкл 10 0,2 0,1 0,0 0,6
Эозинофилы, % 10 0,2 0,1 0,0 1,0
Эозинофилы, 103/мкл 10 0,0 0,0 0,0 0,2
Базофилы, % 10 0,4 0,2 0,0 1,0
Базофилы, 103/мкл 10 0,1 0,0 0,0 0,2
Моноциты, % 10 3,5 0,7 0,0 7,0
Моноциты, 103/мкл 10 0,4 0,1 0,0 0,7
Лимфоциты, % 10 91,7 1,4 84,0 98,0
Лимфоциты, 103/мкл 10 12,7 1,4 6,0 18,6
Обозначения: n - количество животных, Mean - среднее значение, SEM - стандартная ошибка среднего, Min и Max - минимальное и максимальное значения показателей.
Таблица 2
Показатели периферической крови крыс СБ (возраст 2—5 мес.)
Показатель n Mean SEM Min Max
Самцы
Количество эритроцитов, 10є/мкл 51 7,85* 0,10 e,17 9,10
Концентрация гемоглобина, г/дл 51 1e,1 0,1 13,2 17,e
Гематокрит, % 40 4e,1 0,5 39,3 52,2
Средний объем эритроцита (М^), фл 41 59,2* 0,7 49,1 69,9
Среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН), пг 51 20^* 0,2 1e,8 24,3
Концентрация гемоглобина в эритроците (МСНС), % 41 34,9 0,3 30,2 39,9
Количество тромбоцитов, 103/мкл 41 1038* 22 789 1363
Количество ретикулоцитов, % 30 2,3 0,1 1,2 3,5
Количество лейкоцитов, 103/мкл 51 12,1 0,5 5,2 19,0
Нейтрофилы палочкоядерные, % 44 1,e 0,2 0,0 5,0
Нейтрофилы палочкоядерные, 103/мкл 44 0,2* 0,0 0,0 0,5
Нейтрофилы сегментоядерные, % 45 8,7* 0,8 1,0 23,0
Нейтрофилы сегментоядерные, 103/мкл 45 1,0 0,1 0,1 2,5
Эозинофилы, % 43 0,4 0,1 0,0 3,0
Эозинофилы, 103/мкл 43 0,0 0,0 0,0 0,3
Базофилы, % 45 0,1* 0,0 0,0 1,0
Базофилы, 103/мкл 45 0,0* 0,0 0,0 0,2
Моноциты, % 43 4,1 0,3 1,0 9,0
Моноциты, 103/мкл 43 0,5 0,0 0,1 1,0
Лимфоциты, % 45 84,2* 1,1 67,0 97,0
Лимфоциты, 103/мкл 45 10,0 0,5 4,4 16,9
Самки
Количество эритроцитов, 10е/мкл 45 7,50’ 0,11 e,00 9,00
Концентрация гемоглобина, г/дл 45 15,5 0,2 12,8 17,7
Гематокрит, % 35 43,3 0,e 36,1 49,9
Средний объем эритроцита (М^), фл 35 58,4’ 0,e 51,9 e5,3
Среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН), пг 45 20,8’ 0,3 17,2 25,0
Концентрация гемоглобина в эритроците (МСНС), % 35 35,8 0,4 30,1 40,7
Количество тромбоцитов, 103/мкл 35 10e8’ 29 737 1460
Количество ретикулоцитов, % 30 2,1 0,1 1,3 2,8
Количество лейкоцитов, 103/мкл 44 10,2’ 0,e 3,9 21,2
Нейтрофилы палочкоядерные, % 45 1,6 0,2 0,0 5,0
Нейтрофилы палочкоядерные, 103/мкл 45 0,2’ 0,0 0,0 0,9
Нейтрофилы сегментоядерные, % 45 7,3’ 0,e 2,0 19,0
Нейтрофилы сегментоядерные, 103/мкл 45 0,7’ 0,1 0,1 2,1
Эозинофилы, % 45 0,4 0,1 0,0 2,0
Эозинофилы, 103/мкл 45 0,0 0,0 0,0 0,2
Базофилы, % 45 0,1 0,0 0,0 1,0
Базофилы, 103/мкл 45 0,0 0,0 0,0 0,2
Моноциты, % 45 3,e 0,4 0,0 9,0
Моноциты, 103/мкл 45 0,4 0,0 0,0 1,6
Лимфоциты, % 45 87,0’ 0,9 69,0 98,0
Лимфоциты, 103/мкл 44 8,8’ 0,e 3,5 18,4
* p < 0,05 относительно самцов возрастом 1-1,5 мес. по тесту Mann-Whitney. ' p < 0,05 относительно самок возрастом 1-1,5 мес. по тесту Mann-Whitney.
Таблица 3
Морфологический состав костного мозга крыс СБ (возраст 1-1,5 мес.)
Показатель n Mean SEM Min Max
Самцы
Недифференцированные бласты, % 10 0,2 0,0 0,0 0,4
Все гранулоциты,% 10 38,9 1,0 35,0 44,4
Нейтрофильные промиелоциты,% 10 1,6 0,2 1,0 3,0
Нейтрофильные миелоциты, % 10 4,0 0,3 3,0 e,0
Нейтрофильные метамиелоциты, % 10 7,0 0,4 4,0 9,0
Нейтрофилы палочкоядерные, % 10 16,7 0,8 12,0 20,0
Нейтрофилы сегментоядерные, % 10 5,0 0,4 3,0 8,0
Эозинофилы (всех генераций), % 10 4,1 0,3 3,0 e,0
Базофилы (всех генераций), % 10 0,5 0,1 0,0 1,0
Все эритрокариоциты,% 10 38,5 0,8 33,0 42,0
Лимфоциты, % 10 20,8 0,9 16,0 25,0
Моноциты, % 10 1,3 0,2 0,e 2,0
Плазматические клетки, % 10 0,3 0,1 0,0 0,e
Ретикулярные клетки, % 10 0,1 0,0 0,0 0,4
Лейкоэритробластическое соотношение 10 1,59 0,0e 1,4 2,0
Индекс созревания нейтрофилов 10 0,59 0,03 0,4 0,8
Самки
Недифференцированные бласты, % 10 0,3 0,0 0,2 0,4
Все гранулоциты,% 10 46,2 1,7 38,0 55,0
Нейтрофильные промиелоциты,% 10 1,1 0,1 1,0 2,0
Нейтрофильные миелоциты, % 10 5,5 0,3 4,0 7,0
Нейтрофильные метамиелоциты, % 10 9,0 0,4 7,0 11,0
Нейтрофилы палочкоядерные, % 10 20,8 1,0 14,0 25,0
Нейтрофилы сегментоядерные, % 10 2,9 0,5 1,0 e,0
Эозинофилы (всех генераций), % 10 6,1 0,e 4,0 10,0
Базофилы (всех генераций), % 10 0,8 0,1 0,4 1,0
Все эритрокариоциты,% 10 29,2 0,8 24,0 32,0
Лимфоциты, % 10 23,4 1,2 18,0 28,0
Моноциты, % 10 0,7 0,1 0,4 1,0
Плазматические клетки, % 10 0,2 0,0 0,0 0,4
Ретикулярные клетки, % 10 0,1 0,0 0,0 0,2
Лейкоэритробластическое соотношение 10 2,43 0,12 2,1 3,1
Индекс созревания нейтрофилов 10 0,e8 0,04 0,5 0,9
Таблица 4
Морфологический состав костного мозга крыс СБ (возраст 2—5 мес.)
Показатель n Mean SEM Min Max
Самцы
Недифференцированные бласты, % 20 0,2 0,0 0,2 0,2
Все гранулоциты,% 20 52,3* 0,8 44,8 58,0
Нейтрофильные промиелоциты,% 20 1,4 0,1 1,0 2,0
Нейтрофильные миелоциты, % 20 4,9* 0,2 3,0 e,0
Нейтрофильные метамиелоциты, % 20 12,3* 0,3 10,0 15,0
Нейтрофилы палочкоядерные, % 20 19,1* 0,5 15,0 24,0
Нейтрофилы сегментоядерные, % 20 8,9* 0,5 5,0 13,0
Эозинофилы (всех генераций), % 20 5,1* 0,2 3,0 e,0
Базофилы (всех генераций), % 20 0,8* 0,1 0,4 2,0
Все эритрокариоциты,% 20 37,5 0,7 30,0 43,0
Лимфоциты, % 20 7,5* 0,2 e,0 9,0
Моноциты, % 20 0,7* 0,0 0,4 1,0
Плазматические клетки, % 20 0,7* 0,1 0,0 1,0
Ретикулярные клетки, % 20 0,e* 0,0 0,4 1,0
Лейкоэритробластическое соотношение 20 1,63 0,05 1,3 2,2
Индекс созревания нейтрофилов 20 0,e7 0,02 0,5 0,8
Самки
Недифференцированные бласты, % 20 0,2 0,0 0,2 0,4
Все гранулоциты,% 20 52,9’ 0,9 45,4 61,0
Нейтрофильные промиелоциты,% 20 1,6’ 0,2 1,0 3,0
Нейтрофильные миелоциты, % 20 4,8 0,2 4,0 7,0
Нейтрофильные метамиелоциты, % 20 12,2’ 0,4 10,0 15,0
Нейтрофилы палочкоядерные, % 20 19,0 0,e 14,0 27,0
Нейтрофилы сегментоядерные, % 20 9,2’ 0,7 4,0 14,0
Эозинофилы (всех генераций), % 20 5,4 0,3 2,0 7,0
Базофилы (всех генераций), % 20 0,9 0,1 0,4 2,0
Все эритрокариоциты,% 20 35,3’ 1,1 27,0 43,0
Лимфоциты, % 20 8,9’ 0,e 7,0 18,0
Моноциты, % 20 0,9’ 0,1 0,4 2,0
Плазматические клетки, % 20 0,8’ 0,1 0,0 2,0
Ретикулярные клетки, % 20 0,9’ 0,1 0,4 2,0
Лейкоэритробластическое соотношение 20 1,83’ 0,09 1,3 2,e
Индекс созревания нейтрофилов 20 0,e7 0,02 0,5 0,9
* p < 0,05 относительно самцов возрастом 1-1,5 мес. по тесту Mann-Whitney. ' p < 0,05 относительно самок возрастом 1-1,5 мес. по тесту Mann-Whitney.
Таблица 5
Показатели периферической крови мышей СБ-1 (возраст 2—3 мес.)
Показатель n Mean SEM Min Max
Самцы
Количество эритроцитов, 10е/мкл 57 9,10 0,11 7,32 10,81
Концентрация гемоглобина, г/дл 5e 15,7 0,3 4,5 18,5
Гематокрит, % 54 51,0 0,e 41,6 61,7
Средний объем эритроцита (М^), фл 54 56,1 0,e 35,e e4,0
Среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН), пг 5e 17,5 0,2 14,4 20,0
Концентрация гемоглобина в эритроците (МСНС), % 53 31,0 0,3 2e,2 3e,2
Количество тромбоцитов, 103/мкл 53 1275 29 8ee 1770
Количество ретикулоцитов, % 9 2,e 0,2 1,8 3,3
Количество лейкоцитов, 103/мкл 53 7,e 0,4 2,9 16,2
Нейтрофилы палочкоядерные, % e1 3,7 0,4 0,0 13,0
Нейтрофилы палочкоядерные, 103/мкл 55 0,2 0,0 0,0 0,8
Нейтрофилы сегментоядерные, % e1 8,8 0,7 0,0 21,0
Нейтрофилы сегментоядерные, 103/мкл 54 0,7 0,1 0,0 2,1
Эозинофилы, % e2 1,5 0,2 0,0 7,0
Эозинофилы, 103/мкл 55 0,1 0,0 0,0 0,9
Базофилы, % e0 0,2 0,1 0,0 1,0
Базофилы, 103/мкл 54 0,0 0,0 0,0 0,2
Моноциты, % e3 3,1 0,3 0,0 8,0
Моноциты, 103/мкл 5e 0,2 0,0 0,0 1,3
Лимфоциты, % e2 81,9 1,1 59,0 9e,0
Лимфоциты, 103/мкл 52 5,9 0,4 1,1 15,2
Самки
Количество эритроцитов, 10е/мкл e1 8,97 0,12 e,3e 10,68
Концентрация гемоглобина, г/дл e1 15,7 0,2 12,0 18,2
Гематокрит, % 58 50,1 0,5 39,6 57,0
Средний объем эритроцита (М^), фл 58 5e,4 0,5 49,2 e5,4
Среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН), пг e1 17,5 0,2 15,2 23,3
Концентрация гемоглобина в эритроците (МСНС), % 58 31,2 0,4 24,9 3e,3
Количество тромбоцитов, 103/мкл 57 1073 29 e12 1509
Количество ретикулоцитов, % 10 2,0 0,3 0,7 4,3
Количество лейкоцитов, 103/мкл 5e 9,0 0,5 2,1 18,3
Нейтрофилы палочкоядерные, % 53 3,1 0,3 0,0 7,0
Нейтрофилы палочкоядерные, 103/мкл 50 0,2 0,0 0,0 0,8
Нейтрофилы сегментоядерные, % 55 9,5 0,8 1,0 25,0
Нейтрофилы сегментоядерные, 103/мкл 50 0,7 0,1 0,1 2,0
Эозинофилы, % 54 1,9 0,3 0,0 7,0
Эозинофилы, 103/мкл 49 0,1 0,0 0,0 0,e
Базофилы, % 53 0,1 0,0 0,0 1,0
Базофилы, 103/мкл 49 0,0 0,0 0,0 0,1
Моноциты, % 55 3,4 0,3 0,0 9,0
Моноциты, 103/мкл 51 0,3 0,0 0,0 0,8
Лимфоциты, % 54 82,0 0,9 63,0 95,0
Лимфоциты, 103/мкл 50 e,4 0,4 1,7 13,2
Таблица 6
Морфологический состав костного мозга мышей СБ-1 (возраст 2—3 мес.)
Показатель n Mean SEM Min Max
Самцы
Недифференцированные бласты, % 55 0,3 0,0 0,0 0,e
Все гранулоциты,% 55 5e,8 0,7 39,0 ee,0
Нейтрофильные промиелоциты,% 55 1,2 0,1 0,e 2,0
Нейтрофильные миелоциты, % 55 5,5 0,3 2,0 12,0
Нейтрофильные метамиелоциты, % 55 11,6 0,3 e,0 17,0
Нейтрофилы палочкоядерные, % 55 27,1 0,4 20,0 33,0
Нейтрофилы сегментоядерные, % 55 e,9 0,5 1,0 15,0
Эозинофилы (всех генераций), % 55 5,7 1,2 2,0 69,0
Базофилы (всех генераций), % 55 0,1 0,0 0,0 0,4
Все эритрокариоциты, % 55 23,0 0,e 14,0 33,0
Лимфоциты, % 55 18,5 0,8 8,0 32,0
Моноциты, % 55 1,3 0,1 0,4 4,0
Плазматические клетки, % 55 0,1 0,0 0,0 0,4
Ретикулярные клетки, % 55 0,2 0,0 0,0 0,4
Лейкоэритробластическое соотношение 55 3,50 0,13 2,0 e,1
Индекс созревания нейтрофилов 55 0,54 0,02 0,3 0,8
Самки
Недифференцированные бласты, % 49 0,2 0,0 0,0 0,4
Все гранулоциты,% 49 55,7 0,e 46,8 63,8
Нейтрофильные промиелоциты,% 49 1,1 0,1 0,0 3,0
Нейтрофильные миелоциты, % 49 4,4 0,2 2,0 10,0
Нейтрофильные метамиелоциты, % 49 10,7 0,4 e,0 17,0
Нейтрофилы палочкоядерные, % 49 27,0 0,4 21,0 33,0
Нейтрофилы сегментоядерные, % 49 7,3 0,5 1,0 17,0
Эозинофилы (всех генераций), % 49 5,0 0,3 1,0 10,0
Базофилы (всех генераций), % 49 0,0 0,0 0,0 0,2
Все эритрокариоциты, % 49 23,1 0,8 14,0 40,0
Лимфоциты, % 49 20,1 0,9 e,0 31,0
Моноциты, % 49 1,0 0,0 0,0 2,0
Плазматические клетки, % 49 0,1 0,0 0,0 0,8
Ретикулярные клетки, % 49 0,1 0,0 0,0 0,4
Лейкоэритробластическое соотношение 49 3,58 0,15 1,5 e,1
Индекс созревания нейтрофилов 49 0,49 0,02 0,3 1,0
Литература
1. Гуськова Т.А. Токсикология лекарственных средств. — М., 2003.
2. ЗападнюкИ.П., ЗападнюкВ.И., ЗахарияЕ.А., Западнюк Б.В. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте. — Киев: Вища школа, 1983.
3. Каркищенко Н.Н. Основы биомоделирования. — М. : Изд-во ВПК, 2004.
4. Луговская С.А., Морозова В.Т., Почтарь М.Е., Долгов В.В. Лабораторная гематология. — Москва 2002.
5. Никитин В.Н. Атлас клеток крови сельскохозяйственных и лабораторных животных. - М, 1949.
6. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации № 267 от 19.06.2003 «Правила лабораторной практики в Российской Федерации».
7. Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. — М., 2005.
8. Baker, D.G. Natural pathogens of laboratory mice, rats, and rabbits and their effects on research // Clin. Microbiol. Rev., 11:231-266, 1998.
9. Bolliger A.P. Cytologic evaluation of bone marrow in rats: indications, methods, and normal morphology // Vet. Clin. Path., vol.33. No. 2, pp.58-67, 2004.
10. Charles River Laboratories. Clinical Laboratory Parameters for Crl:CD(SD) Rats. March, 2006. Internet resource (February, 2008): http:// www.criver.com/flex_content_area/documents/ rm_rm_r_clinical_parameters_cd_rat_06.pdf
11. CriswellK.A., Bleavins M.R., ZielinskiD., et al. Comparison of flow cytometric and manual bone marrow differentials in Wistar rats // Cytometry, vol. 32, pp.18-27,1998.
12. Krinke G.J. The Laboratory Rat. — Academic Press, 2000.
13. OECD Principles of Good Laboratory Practice. ENV/MC/CHEM(98)17 // Environment Directorate Organisation for Economic Cooperation and Development, Paris, 1998.
14. Suckow M.A., Danneman P., Brayton C. The Laboratory Mouse. — CRC Press, Boca Raton, FL, 2001.
15. The Guide for Care and Use of Laboratory Animals. — LAR publication, National Academy Press, 1996.
HEMATOLOGICAL CHARACTERS OF NORMAL SPECIFIC PATHOGEN-FREE CD
(SPRAGUE-DAWLEY) RATS AND CD-1 MICE
I.N. Kravchenko, O.N. Khokhlova, N.N. Kravchenko, A.N. Puzhalin,
I.A. Dyachenko, A.N. Murashev
Branch of Shemyakin & Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistry RAS, Pushchino
Hematological characters of laboratory animals measured in different laboratories by different investigators are varied essentially. Apparently, this difference is caused by various influences of environment, depends on the way, moment and a place of blood sampling, dietary, animal age and somr other factors. Standard conditions of animals maintenance are necessary for valid and reproducible research data, therefore much attention now is given to the experimental animals care and use. This paper summarizes hematological characters of CD (Sprague-Dawley) rats and CD-1 mice which had SPF-status (specific pathogen-free) and were housed in standard conditions recommended for laboratory rodents maintenance. It is shown, that laboratory animals housed at different facilities but in the same standard conditions have comparable range of hematological characters.
Key words: blood, bone marrow, rats, mice.
