CC BY
151
Ц1Щ
УДК: 616.233-002-036.11:616.155.340
ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТР0ФИЛ0В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ БРОНХИТЕ
Н.Д. КЛИМЕНКО1 М.Д. ШЕЛЕСТ2
Харьковская медицинская академия последипломного образования,
s)Харьковский национальный медицинский университет
e-mail: kafedra _ag @ mail.ru
Изучена фагоцитарная и бактерицидная активность нейтрофилов периферической крови у больных хроническим бронхитом в стадии обострения. Установлено снижение поглотительной способности нейтрофилов одновременное активацией их кислород-зависимых и кислород-независимых микроби-цидных механизмов в сравнении со здоровыми лицами.
Ключевые слова: хронический бронхит, нейтрофилы, фагоцитоз, НСТ-тест, катионные белки, бактерицидная активность.
Среди заболеваний органов дыхания важное место принадлежит хроническому бронхиту. Актуальность этой проблемы определяется не только ростом заболеваемости, но и не всегда удовлетворительными результатами лечения. Оценка возможных исходов данного заболевания является сложной задачей пульмонологии. Перспективным путем является повышение эффективности прогнозирования течения и исхода хронического бронхита на основании поиска тестов, которые, с одной стороны, максимально отображали бы механизмы воспалительного процесса, а с другой - были бы доступны для использования в клинической практике.
В основе механизмов противоинфекционной защиты лежат сложные взаимоотношения организма хозяина и возбудителя. Полиморфизм и разнообразие факторов защиты определяют ее основные механизмы [2]. Защита организма от инфекции осуществляется путем взаимовли-яющих реакций неспецифической резистентности (врожденного иммунитета) и адаптивного, или приобретенного, специфического, иммунитета.
Сразу после проникновения микроба в организм защита обеспечивается с помощью клеточных и гуморальных факторов естественной резистентности. Участие клеток первичного звена позволяет, по образному выражению А.Н. Маянского, «выиграть время для адаптивной перестройки иммунитета» [5], которую они же и запускают. Основное значение среди клеточных неспецифических механизмов иммунитета принадлежит фагоцитозу. На сегодняшний день известно, что, несмотря на важность поглощения и внутриклеточного переваривания микробов, основную роль в борьбе с микроорганизмами играют внеклеточные бактерицидный и литический эффекты фагоцитов. В процессе фагоцитоза происходит дегрануляция фагоцитов с высвобождением активных форм кислорода и азота, катионных белков, лизосомальных ферментов, которые и осуществляют эти эффекты. Особое значение это имеет в очаге воспаления, в силу чего эмиграция и активация фагоцитов - основной компонент воспаления.
Как известно, основными клетками-эффекторами острого воспаления являются нейтрофилы, хронического - моноциты/макрофаги. В то же время нейтрофилы участвуют в патогенезе и хронического воспаления, особенно в стадии обострения, поэтому исследования функционального состояния нейтрофилов при хроническом воспалении являются важными, в том числе и с точки зрения выработки возможных прогностических критериев течения и исхода процесса.
Исследования последних лет существенно расширили представления о механизмах развития воспалительного процесса в бронхолегочной системе, в основе которых лежит ряд нарушений, в частности дисбаланс цитокинов и угнетение фагоцитарной активности нейтрофилов [8]. Это свидетельствует о значительной декомпенсации функционирования фагоцитирующих клеток и их неспособности сформировать адекватный функциональный ответ на микробные агенты. В экспериментальных исследованиях показано, что при хроническом воспалении фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови зависит от его течения, этиологии, этапа и может быть как повышена, так и снижена [3]. Помимо фагоцитарной функции и в связи с ней фагоциты обладают целым рядом других функций.
Приведенные данные указывают на целесообразность дальнейших исследований функциональной активности нейтрофилов периферической крови при хроническом бронхите.
Цель исследования. Изучение функциональной активности нейтрофилов периферической крови у больных хроническим бронхитом.
Материалы и методы. Обследовано 29 мужчин, больных хроническим бронхитом в стадии обострения, в возрасте от 21 года до 36 лет (средний возраст 28,0±7,0 лет). Длительность заболевания составляла в среднем 4,8±1,7 года.Диагноз ставили на основании комплексного клинического, лабораторного и инструментального обследования.
Функциональное состояние нейтрофилов периферической крови изучали по их фагоцитарной, кислород-зависимой, кислород-независимой и общей бактерицидной активности. Фагоцитарную активность определяли в тесте с латексом. Вычисляли фагоцитарный индекс (ФИ) и фагоцитарное число (ФЧ). Определение кислород-зависимой бактерицидной активности (общей окислительно-восстановительной, или метаболической, активности) проводили в спонтанном тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) по методу Стюарта в модификации Б.С. Нагоева. Кислород-независимую бактерицидную активность определяли на основании цитохимического выявления катионных лизосомальных белков (КЛБ) по методу М.Г. Шу-бича. Для дополнительной характеристики НСТ-теста и количества КЛБ в обоих случаях рассчитывали суммарный цитохимический коэффициент реакции (ЦХК) [7]. Также рассчитывали суммарную бактерицидную активность нейтрофилов (БАИ) по формуле С.А. Гусевой[4].
Исследование проводили при поступлении больного в стационар. Контрольную группу составили 20 практически здоровых лиц аналогичного возраста и пола.
Полученные данные обрабатывали с помощью программы «8ТАТ18Т1СА-6,0». Рассчитывали средние арифметические значения (М) и стандартные отклонения (ш). Достоверность изученных показателей определяли с помощью 1:-критерия Стьюдента. Показатели считали достоверными при р£0,05.
Результаты исследований и их обсуждение. У 10% больных хроническим бронхитом в стадии обострения выявлен лейкоцитоз: общее количество лейкоцитов (ОКЛ) в крови составляло больше 9,0x109 г/л, с лейкоцитарной формулой нейтрофильного типа, с ядерным сдвигом влево, до палочкоядерных нейтрофилов. У 42% пациентов ОКЛ было в пределах 7,0-9,0x09 г/л и у 48% - до 7,0x109 г/л.
При изучении фагоцитарной активности нейтрофилов крови было установлено, что ФИ у обследуемых больных на 24% (р<0,05) ниже, чем у здоровых лиц. ФЧ ниже соответственно на 52% (р<0,05) (табл. 1). Значения показателей фагоцитарной активности у обследуемых больных уменьшились до нижней границы физиологической нормы для здоровых лиц.
Таблица 1
Функциональная активность нейтрофилов периферической крови у больных хроническим бронхитом (М±т)
Показатели Контрольная группа Больные хроническим бронхитом
ФИ, % 61,54*3,87 4б,34±2,18*
ФЧ, ед. 6,39*0,63 3,07*0,27*
НСТ-тест, % 32,23*5,16 52,69*4,31*
КЛБ, % 76,42*5,54 89,28*2,63*
Примечание: * - достоверно в сравнении с контрольной группой, р < 0,05.
Таким образом, в нашем исследовании наблюдалось угнетение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови при хроническом бронхите, а именно снижение поглотительной способности фагоцитов.
Что касается внутриклеточных бактерицидных факторов, то установлено, что происходит значительная активация внутриклеточных микробицидных систем нейтрофилов. Активность кислород-зависимых механизмов в спонтанном НСТ-тесте достоверно превышала (на 38%, р<0,05) показатели здоровых лиц. ЦХК НСТ-теста у больных хроническим бронхитом достоверно увеличивался - до 69,57±6,43 у.е. против 48,4%±4,7б у.е. в контрольной группе (на 30%, р<0,05). НСТ-тест интегрально характеризует активность внутриклеточных кислород-зависимых антимикробных систем фагоцитов. Спонтанный НСТ-тест позволяет оценить степень антигенного раздражения гранулоцитов крови в этих условиях функционирования организма. Полученные данные свидетельствуют об адекватном ответе нейтрофилов на воспалительный процесс по данному параметру.
Применительно к кислород-независимым механизмам микробицидной активности установлено, что у больных хроническим бронхитом наблюдался значительно больший процент КЛБ-зависимых нейтрофилов и соответствующий ЦХК в сравнении с показателями практически здоровых лиц. Так, количество клеток с гранулами, которые содержат КЛБ, было на и% (р<0,05) больше, а ЦХК реакции на КЛБ увеличивался до 212,6±8,75 у.е. против 119,2б±7,0б у.е. (на 44%, р<0,05). По своей природе КЛБ являются модификаторами дыхательных и ферментативных процессов в фагоците, медиаторами воспаления, обладают цитотоксической, хе-мотаксической и иммуномодулирующей активностью, повышают проницаемость сосудов [і, 6]. Высокий уровень КЛБ в фагоцитах свидетельствует о значительной бактерицидности фагоцитов, активации механизмов завершённости фагоцитоза и является прогностическим признаком благоприятного течения воспалительного процесса. По данным И.И. Долгушина [і], количество антимикробных пептидов может быть использовано в качестве маркера системной активации фагоцитарной системы.
С.А.Гусевой предложен интегральный показатель БАН, который отображает суммарную бактерицидную активность с учетом активности двух систем нейтрофилов: кислородной и бескислородной [4]. В нашем исследовании при расчете БАН установлено, что при хроническом бронхите этот показатель составляет i8,57±0,43 у.е., что в 3,03 раза (р < 0,05) больше, нежели у здоровых лиц (6,12±о,об у.е.). Полученные результаты свидетельствуют о значительной активации микробицидных процессов в нейтрофилах периферической крови.
Поскольку по другим параметрам функциональная активность нейтрофилов, напротив, повышается, обнаруженное снижение поглотительной способности нейтрофилов, по-видимому, связано с недостаточностью опсонизирующих факторов. К опсонинам относятся молекулы антител (преимущественно IgG и IgM классов), фрагменты компонентов комплемента — СзЬ, C4b, C5b, Bb, белки острой фазы и др. Не исключено также, что при хроническом воспалении возможна диссоциация показателей функциональной активности нейтрофилов. Как известно, хроническое воспаление характеризуется утратой воспалительной реакцией своей эволюционной защитно-приспособительной функции и превращением ее в самостоятельный патогенный фактор, лежащий в основе многих хронических заболеваний.
Проведенные исследования показали, что изучение внутриклеточных компонентов нейтрофилов при хроническом бронхите дает дополнительную информацию о развитии патологического процесса и расширяет диагностические возможности с точки зрения объективной оценки факторов неспецифической резистентности, которые играют важную роль при воспалительных процессах.
Выводы.
1. У больных хроническим бронхитом в стадии обострения установлено снижение поглотительной способности нейтрофилов периферической крови одновременно с активацией их кислород-зависимых и кислород-независимых микробицидных механизмов.
2. Учитывая простоту выполнения и высокую воспроизводимость, цитохимические тесты можно рекомендовать для практического использования в клинических условиях с диагностической и прогностической целью, а также для оценки состояния неспецифической резистентности у больных хроническим бронхитом.
Литература
1. Долгушин, И.И. Нейтрофилы и гемостаз / И.И. Долгушин, О.В. Бухарин.- Екатеринбург, 2001. - 254 С.
2. Железникова, Г. Ф. Инфекция и иммунитет: стратегии обеих сторон / Г. Ф. Железникова // Медицинская иммунология. — 2006. — Т. 8, № 5-6. — С. 597-614.
3. Клименко, Н.А. Фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови крыс в зависимости от течения и этиологии воспаления / Н.А. Клименко, С.В. Татарко // Досвід і проблеми застосування сучасних морфологічних методів досліджень органів і тканин у нормі та при діагностиці патологічних процесів : наук.-практ. конф., Тернопіль, 24-25 травня 2007 р. : зб. матер, конф. - Тернопіль : Укрмед-книга, 2007. - С. 54-55.
4. Клінічна та лабораторна імунологія/ за ред. Л.В. Кузнецової, В.Д. Бабаджана, В.М. Фролова. -Київ: Полиграф плюс, 2012. - 922 с.
5. Маянский, А. Н. НАДФН-оксидаза нейтрофилов: активация и регуляция / АН. Маянский // Цитокины и воспаление. — 2007. — Т. 6, № 3. — С. 3"13-
6. Никулин, Б.А. Оценка и коррекция иммунного статуса / Б.А. Никулин. - М.: Геотар Медиа, 2007. - 374 с.
7. Посібник з лабораторної імунології / Л.Є. Лаповець, Б.Д. Луцик, Г.Б. Лебедь, В.М. Акимова. -Львів, 2008. - 268 с.
8. Platz, J. Microbial DNA induces a host defense reaction of human respiratory epithelial cells / J. Platz, C. Beisswenger // The Journal of Immunology. — 2004. — Vol. 173, N 2. — P. 1219-1223.
FUNCTIONAL ACTIVITY OF PERIFERAI BLOOD NEUTROPHILS IN CHRONIC BRONCHITIS
N.A. KLIMENKO1 MA SHELEST2
a) Kharkiv Medical Academy of Postgraduate Education
-> Kharkiv National Medical University
e-mail: kafedra_ag @ mail.ru
The phagocyte and bactericide activities of peripheral blood neutrophils have been studied in patients with chronic bronchitis exacerbation. A reduction in ingestion activity of neutrophils with simultaneous activation of their oxygen-dependent and oxygen-independent bactericide mechanisms in comparison to healthy people has been established.
Keywords: chronic bronchitis, neutrophils, phagocytosis, NBT-test, cationic proteins, bactericide activity.
