Научная статья на тему 'Фенотипические и функциональные особенности лимфоцитов периферической крови и иммуногенетическая характеристика больных с диффузным токсическим зобом и узловым эутиреоидным зобом'

Фенотипические и функциональные особенности лимфоцитов периферической крови и иммуногенетическая характеристика больных с диффузным токсическим зобом и узловым эутиреоидным зобом Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
266
35
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
ДИФФУЗНЫЙ ЗОБ / УЗЛОВОЙ ЗОБ / КЛЕТОЧНЫЙ ИММУНИТЕТ / ИММУНОГЕНЕТИКА

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Глазанова Т. В., Бубнова Л. Н., Кузмичев А. С., Зубарева Т. С., Павлова И. Е.

Наблюдается рост числа больных с поражениями щитовидной железы, в том числе аутоиммунными. Цель нашей работы изучение особенностей клеточного иммунитета и иммуногенетических характеристик больных с тиреоидной патологией: диффузным токсическим зобом и узловым зобом (ДТЗ и УЗ). Выявлено снижение относительного содержания CD3+, CD4+, CD8+, CD28+ CD152+ лимфоцитов периферической крови как при ДТЗ, так и при УЗ. При ДТЗ уровень CD95+ клеток значительно повышен, а при УЗ содержание CD16+ и CD25+ клеток оказалось снижено, и пролиферативная активность и способность к продукции TNFα и IL-1β угнетена гораздо значительнее. HLA-маркеры предрасположенности к данным заболеваниям оказались различными.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Глазанова Т. В., Бубнова Л. Н., Кузмичев А. С., Зубарева Т. С., Павлова И. Е.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Phenotypic and Functional Peculiarities of Peripheral Blood Lymphocytes and Immunogenetic Characteristics of Patients with Graves' Disease and Nodular Euthyroid Goiter

The growth of thyroid diseases cases, including autoimmune diseases, is observed. Our purpose was to study the peculiartities of cell immunity and immunogenetic characteristics of patients with thyroid diseases: Graves' disease and nodular goiter (GD and NG). The levels of CD3+, CD4+, CD8+, CD28+ and CD152+ peripheral blood lymphoid subsets were decreased in GD as well as in NG. But CD95+ level was significantly increased in GD, while in NG we observed a decrease in CD16+ and CD25+ cell number, and TNFα and IL-1β producing capacity was disturbed more markedly. HLA-markers of predisposition to these diseases were different in GD and NG. (Med. Immunol, 2000, vol. 2, N 4, pp 385-392)

Текст научной работы на тему «Фенотипические и функциональные особенности лимфоцитов периферической крови и иммуногенетическая характеристика больных с диффузным токсическим зобом и узловым эутиреоидным зобом»

Медицинская иммунология 2000, Т. 2, № 4, стр 385-392 © 2000, СПб РО РААКИ

Оригинальные статьи

ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ С ДИФФУЗНЫМ ТОКСИЧЕСКИМ ЗОБОМ И УЗЛОВЫМ ЭУТИРЕОИДНЫМ ЗОБОМ

Глазанова Т.В., Бубнова Л.Н., Кузмичев А.С., Зубарева Т.С., Павлова И.Е., Розанова О.Е.

Российский НИИ гематологии и трансфузиологии М3 РФ, Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования.

Резюме. Наблюдается рост числа больных с поражениями щитовидной железы, в том числе аутоиммунными. Цель нашей работы - изучение особенностей клеточного иммунитета и иммуногенетических характеристик больных с тиреоидной патологией: диффузным токсическим зобом и узловым зобом (ДТЗ и УЗ). Выявлено снижение относительного содержания CD3+, CD4+, CD8+, CD28+ CD152+ лимфоцитов периферической крови как при ДТЗ, так и при УЗ. При ДТЗ уровень CD95+ клеток значительно повышен, а при УЗ содержание CD16+ и CD25+ клеток оказалось снижено, и пролиферативная активность и способность к продукции TNFa и IL-1Р угнетена гораздо значительнее. HLA-маркеры предрасположенности к данным заболеваниям оказались различными.

Ключевые слова: диффузный зоб, узловой зоб, клеточный иммунитет, иммуногеиетика.

Glazanova T.V., Bubnova L.N., Kuzmichev A.S., Zubareva T.S., Pavlova I.E., Rozanova O.E.

PHENOTYPIC AND FUNCTIONAL PECULIARITIES OF PERIPHERAL BLOOD LYMPHOCYTES AND IMMUNOGENETIC CHARACTERISTICS OF PATIENTS WITH GRAVES’DISEASE AND NODULAR EUTHYROID GOITER

Abstract. The growth of thyroid diseases cases, including autoimmune diseases, is observed. Our purpose was to study the peculiartities of cell immunity and immunogenetic characteristics of patients with thyroid diseases: Graves’ disease and nodular goiter (GD and NG). The levels of CD3+, CD4+, CD8+, CD28+ and CD152+ peripheral blood lymphoid subsets were decreased in GD as well as in NG. But CD95+ level was significantly increased in GD, while in NG we observed a decrease in CD16+ and CD25+ cell number, and TNFa and IL-1(3 producing capacity was disturbed more markedly. HLA-markers of predisposition to these diseases were different in GD and NG. (Med. Immunol., 2000, vol.2, N 4, pp 385-392)

патологических процессов, развитие которых определяется генетическими и гормональными факторами, а также факторами внешней среды. В последние годы наблюдается неуклонный рост числа больных с поражениями щитовидной железы, в том числе аутоиммунной природы [1]. Существует мнение, что в их основе лежит генетически индуцированный ан-тиген-специфический дефицит Т-лимфоцитов и, таким образом, вариации в клинических и лабораторных проявлениях данных заболеваний могут

Введение

Заболевания щитовидной железы, в том числе аутоиммунные, относятся к числу многофакторных

Адрес для переписки:

193024, С.-Петербург, ул. 2-я Советская, 16. РосНИИГиТ, лаб. иммупогематологии, Глазановой Т.В.

E-mail: glaz@atrium.cor.neva.ru

быть обусловлены выраженностью исходных нарушений функции Т-супрессорных/цитотоксических клеток [21]. Последние исследования показали, что важным механизмом физиологической и патологической гибели клеток является апоптоз. К заболеваниям, в патогенезе которых важное место принадлежит нарушениям апоптоза, относят многие аутоиммунные заболевания, такие как системная красная волчанка, ревматоидный артрит, инсулинзависимый сахарный диабет, а также заболевания щитовидной железы [8]; а степень экспрессии Баз-антигена может отражать уровень апоптоза в исследуемой ткани [3]. В последнее время внимание исследователей привлекают ко-рецепторные молекулы, в частности С028 и СТЬА-4 (СО 152), и их роль в процессах межклеточных контактных взаимодействий. Через мембранную молекулу СР28 в клетку поступают сигналы, защищающие клетки от активационного апоптоза [7]; ген СТЬА-4 или близко с ним ассоциированный ген (включая СБ28), как было показано, определяет восприимчивость к ДТЗ [23].

В настоящее время установлено, что процессы клеточной активации регулируются целым каскадом ци-токинов: интерлейкинами 1, 2, 6 , фактором некроза опухоли, у-интерфероном и др. В частности, показана роль ТОТ и 1Ъ-1 в развитии патологического процесса в тиреоидной ткани [12,16], тем не менее, не до конца выясненными остаются закономерности изменения синтеза данных цитокинов клетками крови при различных видах поражения щитовидной железы.

Известно, что существует выраженная генетическая предрасположенность к многим аутоиммунным заболеваниям, что подтверждается частотой выявляемое™ при них антигенного сочетания НЬА-А1, В8, БИЗ, определяемого серологически. Наряду с этим установлено, что данный фенотип часто ассоциирован с разнообразными нарушениями иммунного ответа [10]. В то же время, генотипические особенности - а именно, аллельный полиморфизм локусов НЬА-ОЯВ1 и, в особенности, 0(5 - при заболеваниях щитовидной железы различного генеза, а также их связь с изменениями иммунного статуса остаются предметом изучения и обсуждения.

Таким образом, достижения иммунологии последних лет способствовали изучению патогенеза и разработке новых методов диагностики и лечения заболеваний, связанных с нарушением иммунитета, в том числе и заболеваний щитовидной железы [1,5]. В то же время, особенности иммунного ответа у больных с тиреоидной патологией изучены недостаточно, особенно, учитывая клиническую гетерогенность данной группы заболеваний, а также тот факт, что окончательный диагноз при этих видах патологии может быть установлен лишь после гистологической верификации. В связи с этим, целью нашей работы стало сравнительное изучение особенностей клеточного иммунитета, осуществляемо-

го лимфоцитами периферической крови, и имму-ногенетической характеристики больных с тиреоидной патологией: диффузным токсическим зобом как примером аутоиммунного поражения и узловым зобом, взятым в качестве заболевания не аутоиммунной природы.

Материалы и методы

Обследовано 115 больных в возрасте от 20 до 72 лет. Первую группу составили пациенты с диффузным токсическим зобом ( ДТЗ ) - 65 человек, вторую - пациенты с узловыми формами зоба (УЗ) - 50 человек. Все диагнозы заболеваний щитовидной железы были подтверждены гистологически. В контрольную группу для иммунологических исследований вошли 35 практически здоровых людей в возрасте от 22 до 65 лет. Группу сравнения по HLA антигенам I класса составили 1011 здоровых доноров Северо-Западного региона, группу сравнения по полиморфизму DRBl-гена - 110 здоровых лиц той же популяции, из которых 78 были типированы по HLA-DQB1 и -DQA1 генам.

Исследование иммунного статуса включало в себя:

1) Оценку содержания основных субпопуляций лимфоцитов с использованием моноклональных антител к Т-клеточным антигенам (CD3, CD4, CD8, CD7), В-клеточным маркерам (CD22), естественным киллерам (CD16), HLA-DR - инвариантной цепи HLA II класса, CD25 - a-цепи рецептора IL-2, ко-рецепторным молекулам (CD28, CD152 (CTLA-4)) и Fas-антигену - “профессиональному” акцептору апоптогенных сигналов - (CD95) (“МедБиоС-пектр, Москва, “Becton Dickinson”) в стандартном лимфоцитотоксическом тесте [6].

2) Определение функциональной активности лимфоцитов периферической крови в реакции бла-стной трансформации на поликлональный митоген

- фитогемагглютинин (ФГА) (“Sigma”) в дозе 5 мкг/ мл радиометрическим методом по включению 3Н-тимидина с последующим учетом на сцинтилляци-онном счетчике (“Ракбета”).

3) Изучение спонтанной и ЛПС-стимулирован-ной продукции TNFa и IL-1(3 мононуклеарными клетками периферической крови, выделенными на фиколле, после их 24-часового культивирования методом иммуноферментного анализа с использованием тест-систем производства НИИ ОЧБ (“Протеиновый контур”, Санкт-Петербург).

Иммуногенетические исследования включали:

1) Серологическое типирование HLA антигенов I класса в стандартном лимфоцитотоксическом комплемент-зависимом тесте (NIH) с использованием набора анти-НЬА-сывороток Российского НИИ гематологии и трансфузиологии (Санкт-Пе-тербург).

2) Определение аллелей НЬЛ-ОЯВІ, В£)А1 и 0£)В1 генов методом полимеразной цепной реакции с помощью наборов реагентов “НПФ ДНК-Технология” (Москва). В серии последовательных амплификаций с панелью сиквенс-специфических праймеров определяли 13 групп аллелей НЬА-ВИВІ-гена, 11 аллелей НЬА-0()В1-гена и 8 аллелей НЬА-Б£)А1-гена. Типирование аллелей каждого из генов проводили в два этапа. Первый - амплификация второго экзона с помощью соответствующих пар праймеров для изучаемых генов из геномной ДНК. Второй - серия амплификаций с панелью специфических праймеров, где в качестве амплифицируемой ДНК использовался продукт первого этапа. Специфичность продукта амплификации оценивали по его длине в соотношении со стандартным маркером длин ДНК (РиС-19), методом горизонтального электрофореза в 3,3 % агарозном геле.

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием пакета прикладных программ Біагізілса 4.5. Величины выражали

в виде М ± ш, где М - среднее арифметическое, а ш - стандартная ошибка. Достоверность различий между сравниваемыми величинами определяли по критерию I Стьюдента и по критерию %2, для иммуногенетических исследований, кроме того, определяли величину относительного риска (Ш1) и этиологической или превентивной фракций (ЕР, РБ).

Результаты

Абсолютный уровень лейкоцитов и процентное содержание лимфоцитов в периферической крови больных с тиреоидной патологией не отличались от показателей контрольной группы. В связи с этим в дальнейшем при анализе полученных данных мы использовали лишь показатели относительного содержания изученных лимфоидных субпопуляций. Результаты исследования субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови представлены в табл. 1, 2 и 3. Как следует из приведенных данных, в обеих изученных группах больных отме-

Табл. 1. СУБПОПУЛЯЦИИ С03+, С04+, СЭ8+, С07+ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ ДТЗ И УЗ

Группа СйЗ+ (%) С04+ (%) С08+ (%) С07+ (%)

ДТЗ 46,8 ±1,9" 25,6 ±1,5" 21,7 ±1,5* 32,3 ± 2,0

УЗ 45,3 ± 2,1“ 25,5 ± 1,6" 20,9 ± 1,3” 34,0 ± 2,0

Контроль 61,3 ± 0,9 36,2 ± 0,9 25,1 ± 0,8 37,4 ± 2,3

Р УЗ-ДТЗ >0,05 >0,05 >0,05 >0,05

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

* р<0,05, различия по сравнению с контролем ** р<0,01, различия по сравнению с контролем

Табл. 2. СУБПОПУЛЯЦИИ ОЯ", СР16+, Сй25+, С022+ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ ДТЗ И УЗ

Г руппа ОГГ (%) Сй16+ (%) СР25+ (%) С022+ (%)

ДТЗ 20,5+1,56* 22,1± 1,64 21,2 ± 1,91 19,3 ± 1,45

УЗ 20,4 ± 2,0* 20,3 ± 1,8* 17,6 ± 1,8" 19,9 ± 1,5

Контроль 25,5 ± 0,9 24,8 ± 1,5 24,6 ± 1,4 22,1 ± 0,8

Р УЗ-ДТЗ >0,05 >0,05 <0,05 >0,05

* р<0,05, различия по сравнению с контролем ** р<0,01, различия по сравнению с контролем

Табл. 3. СУБПОПУЛЯЦИИ СР95+, Сй28+, СР152+ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ ДТЗ И УЗ

Группа С095+ (%) С028+ (%) СР152+ (%)

ДТЗ 36,9 ± 3,7” 15,6 ± 3,6* 6,2 ± 1,75***

УЗ 16,4 ± 1,5 17,5 ± 3,8' 8,3 ± 1,5***

Контроль 13,9 ± 1,1 25,5 ± 3,4 25,2 ± 3,0

Р УЗ-ДТЗ <0,005 >0,05 >0,05

* р<0,05, различия по сравнению с контролем

** р<0,01, различия по сравнению с контролем

чалось снижение относительного содержания CD3 , CD4 и CD8 лимфоцитов (табл. 1), в большинстве случаев носившее достоверный характер, а уровень CD7 лимфоцитов при изученной патологии практически не отличался от такового в норме.

Из результатов, представленных в табл. 2, видно, что содержание клеток с фенотипом HLA-DR достоверно снижено в обеих группах, тогда как число лимфоцитов, несущих рецептор к IL-2 (CD25 ), а также естественных киллеров (CD16 ) достоверно снижено в группе больных узловым зобом, тогда как при ДТЗ отмечается лишь тенденция к их снижению.

Содержание клеток, несущих CD95 (табл. 3), повышено почти в 3 раза в группе больных ДТЗ и близко к нормальному у больных УЗ. Изучение содержания CD28 hCD152 клеток (табл. 3) показало их снижение в обеих изученных группах, для CD 152 различия носили статистически значимый характер.

При сравнении между собой показателей, полученных в группах пациентов с ДТЗ и УЗ, статистически достоверные различия установлены для CD25 и CD95 клеток, уровень которых был ниже при УЗ.

Изучение пролиферативной активности моно-нуклеарных клеток в реакции бластной трансфор-

мации на ФГА (табл. 4) показало, что спонтанная пролиферация снижена по сравнению с таковой у здоровых лиц в обеих изученных группах. Ответ на ФГА незначительно снижен при ДТЗ и выраженно угнетен у больных УЗ (между группами ДТЗ и УЗ имеются достоверные различия). Полученные результаты свидетельствуют о нарушении пролиферативной активности лимфоцитов при изученной патологии, в особенности выраженном при узловом зобе.

Данные, представленные в табл. 5, свидетельствуют, что в группе больных УЗ спонтанная продукция TNFa и IL-lß достоверно повышена по сравнению с показателями в контрольной группе. У больных ДТЗ спонтанная продукция этих цитокинов также повышена, хотя и не столь значительно. В группе больных УЗ также отмечается выраженное снижение стимулированной продукции TNFa. В результате, индексы стимуляции, рассчитываемые как отношение стимулированной ЛПС к нестимулированной продукции цитокина, оказались значительно снижены при обеих изученных патологиях, однако, в значительно большей степени - при УЗ (руз.д-п< 0,005), что свидетельствует о более выраженном угнетении способности к продукции IL-lß и TNFa при этом заболевании.

Табл. 4. СПОСОБНОСТЬ ПЕРИФЕРИЧЕСКИХ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК БОЛЬНЫХ ДТЗ И УЗ К БЛАСТНОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ НА ФГА

Группа РБТЛ

Спонтанная пролиферация (имп/мин) ФГА- пролиферация (имп/мин) индекс стимуляции

ДТЗ 826 ± 156* 21837 ± 5550 29,7 ±11,7

УЗ 751 ± 136* 5895 ± 1099* 10,1 +6,1

Контроль 1276 ± 169 34067 ± 5207 31,4 ± 6,4

Р УЗ-ДТЗ >0,05 <0,0001 <0,01

* р<0,05, различия по сравнению с контролем Табл. 5. СПОСОБНОСТЬ ПЕРИФЕРИЧЕСКИХ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК БОЛЬНЫХ ДТЗ И УЗ К ПРОДУКЦИИ ЦИТОКИНОВ

Группа TNFa IL-1ß

Спонтанная продукция (пг/мл) Индекс стимуляции Спонтанная продукция (пг/мл) Индекс стимуляции

ДТЗ 93 ± 25* 13,1 ± 3,5" 285 + 118* 19,9 ± 4,9*

УЗ 192 + 43' 3,6 ± 0,92** 236 ± 71* 4,7 + 1,01"

Контроль 43,6 ± 20,8 53,7+ 11,5 32,3 ± 12,8 35,5 + 5,9

Р УЗ-ДТЗ >0,05 <0,01

>0,05 <0,005

* р<0,05, различия по сравнению с контролем ** р<0,01, различия по сравнению с контролем

Табл. 6. ОСОБЕННОСТИ РАСПРВДЕЛЕНИЯ HLA-СПЕЦИФИЧНОСТЕЙ I и II КЛАССОВ У БОЛЬНЫХ ДТЗ и УЗ

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

HLA- специфичность Частота встречаемости в группе здоровых (%) Частота встречаемости в группе больных ДТЗ (%) X2 (сравн. с контролем) Частота встречаемости в группе больных УЗ (%) t (сравн. с контролем) X2 (сравн. УЗ и ДТЗ)

А1 22,4 43,5 14,56*** 26,1 0,35 5,53*

В8 14,8 27,4 7,04” 10,9 0,55 6,79**

В14 5,5 8,1 0,69 15,2 7,35“ 1,36

DRB1 *03 16,4 37,5 9,87" 11,4 0,62 9,07* *

DQB1 *0201 24,4 39,6 3,47' 17,5 0,72 5,30*

DQA1 *0102 26,9 39,6 2,34 52,5 7,55" 1,53

DQB1'0502/04 15,4 15,1 0 37,5 7,33" 6,15*

DQB1 0501 26,9 3,8 11,68'" 7,5 6,16' 0,62

* - р<0,05, различия по сравнению с контролем ** - р<0,01, различия по сравнению с контролем

# - р<0,05, различия между ДТЗ и УЗ ## - р<0,01, различия между ДТЗ и УЗ

Результаты иммуногенетических исследований, представленные в табл. 6, позволили установить, что НЬА маркером генетической предрасположенности к развитию ДТЗ являются аллели 011В1*03, гапло-тип НЬА-А1,В8, находящийся в неравновесном сцеплении с этой специфичностью, а также сочетание в генотипе специфичности ОКБ 1*03 с аллелями Б()В1*0201 и 0£)А1*0501. В отличие от больных ДТЗ, в группе больных УЗ отмечено повышение частоты встречаемости антигена НЬА В14, а частота встречаемости аллелей БИВ 1*03 не отличалась от таковой в популяционном контроле. Кроме того, отличительной особенностью для больных УЗ явилась повышенная частота встречаемости аллелей 0£)В1*0502/04. При сопоставлении частот встречаемости перечисленных специфичностей в изученных группах больных нами установлено, что они достоверно различаются для антигенов НЬА А1 и В8, аллелей 011131*03, БЦВ 1*0201 и группы аллелей Б()В1*0502/04.

При этом частота встречаемости одного из наиболее распространенных в нашей популяции аллелей Б()В1*0501 снижена как у больных ДТЗ, так и у больных УЗ. Принимая во внимание величину превентивной фракции (РР = 0,218 при ДТЗ и РР=0,210 при УЗ), можно предположить протектив-ную роль аллеля 0£)В 1 *0501 в отношении развития данных заболеваний.

Обсуждение

Изучение содержания периферических Т-лим-фоцитов и их основных субпопуляций представлялось важным, так как многими исследованиями доказана их роль в развитии аутоиммунных процессов в щитовидной железе. Показанное в табл. 1 сни-

жение относительного содержания CD3 , CD4 и CD8 лимфоцитов свидетельствует о наличии в периферической крови больных с поражениями щитовидной железы проявлений Т-клеточного иммунодефицита, вероятно, носящих вторичный характер и имеющих сходство при УЗ и ДТЗ. Кроме того, выявленное снижение числа клеток с фенотипом CD4 по-видимому, отражается на процессах программированной гибели клеток, так как именно эти клетки представляют собой основу антигензависи-мого апоптоза [7].

Для реализации процесса апоптоза Fas-положи-тельньгх клеток необходимо взаимодействие их с клетками, несущими Fas-лиганд, каковыми в периферической крови являются, как известно, CD8 и CD16 лимфоциты. Учитывая, что одним из механизмов развития многих аутоиммунных заболеваний является нарушение процессов апоптоза, обнаруженное нами у больных ДТЗ повышение количества CD95 клеток на фоне снижения уровня CD8 и тенденции к снижению CD 16 лимфоцитов, является подтверждением этого нарушения при аутоиммунных поражениях щитовидной железы. Возможно, усиление экспрессии молекулы CD95 приводит к повышению содержания растворимых форм Fas-антигена, препятствующих связыванию соответствующих клеток с Fas-лигандом. Это предположение находит подтверждение и в литературе, где описано усиление выработки растворимой формы Fas-антигена при системной красной волчанке [4] и у не леченых больных ДТЗ [13]. Кроме того, известно, что точечные мутации в цитоплазматическом домене “гибели” Fas могут отменять способность Fas к передаче апоптотичес-кого сигнала, не нарушая его экспрессии на мембране [18].

Как известно, CD28 и CD 152 -молекулы являются ко-репцепторами во взаимодействиях Т-клеток с антиген-представляющими клетками и, таким образом, участвуют в процессах антигенного распознавания. Через мембранную молекулу CD28 в клетку поступают сигналы, защищающие клетки от активационного апоптоза, отсутствие же или нарушение костимуляции через молекулу CD28 может приводить к развитию апоптоза. Молекулы CD 152 могут как усиливать, так и угнетать вторичный сигнал Т-клеткам, полагают, что они служат проводниками сигналов, подавляющих пролиферацию Т-хелперов и способствующих развитию их апоптоза [8]. Полученные нами данные подтверждают наличие взаимосвязи между количеством клеток с маркерами CD95 с CD28 и CD152 лимфоцитами, что, во-первых, находится в соответствии со взглядами на процессы ко-рецепторных взаимодействий, и, во-вторых, свидетельствует о нарушении процессов межклеточных взаимодействий при аутоиммунных заболеваниях щитовидной железы.

При изучении продукции мононуклеарными клетками периферической крови TNFa и IL-lp (табл. 5), нами было показано, что в изученных группах больных выявляется повышенная способность к спонтанной продукции TNFa и IL-ip, тогда как ЛПС-индуцированная продукция цитокинов, в особенности, при оценке индексов стимуляции, оказалась сниженной как при ДТЗ, так и при УЗ. Наличие повышенной спонтанной продукции цитокинов in vitro в обследованных группах может свидетельствовать о предсуществующей активации иммуно-компетентных клеток при изученной патологии. Тогда как ответ на индуктор in vitro, отражающий способность лимфоцитов отвечать in vivo на антигенную стимуляцию, оказался угнетен. Отражением повышенной способности мононуклеарных клеток больных с тиреоидной патологией к синтезу TNFa является, по-видимому, и обнаруживаемый некоторыми авторами его высокий уровень в крови пациентов с ДТЗ [2].

Известно, что TNFa и IL-1(3 играют важную роль в развитии аутоиммунных заболеваний щитовидной железы. Так, наряду с IL-2 и IFNy они участвуют в регуляции продукции аутоантител [17], стимулируют пролиферацию антиген-специфических Т- и В-лимфоцитов, образующих клоны к различным антигенным эпитопам, а также - синтез глико-заминогликанов в ретроорбитальных фиброблас-тах, способствуя развитию офтальмопатии при ДТЗ [15]. При ДТЗ, и, в значительно меньшей степени, при УЗ, TNFa и IL-1 усиливают аберрантную экспрессию молекул адгезии и HLA II класса на поверхности тиреоцитов [9,20], что может способствовать запуску аутоиммунных процессов в щитовидной железе, и, кроме того, TNFa модулирует функционирование и пролиферацию фолликулярных

клеток щитовидной железы [11]. Повышенная способность к спонтанной продукции TNFa и 1Ь-1Р, выявленная нами при изученной патологии, свидетельствует о том, что выработка данных цитокинов продолжается и на этапе уже развившегося поражения щитовидной железы.

Изучение особенностей распределения НЬА-специфичностей I и II класса показало ряд выраженных различий в частоте встречаемости некоторых из них у изученных групп больных (табл. 6). Так, при ДТЗ оказалась повышенной частота встречаемости гаплотипа НЬА-А1,В8 и группы аллелей 011В1*03, тогда как при УЗ данной особенности не установлено. Группа аллелей НЬА-011В1 *03 является маркером генетической предрасположенности ко многим аутоиммунным заболеваниям (инсулинзависимый сахарный диабет, синдром Съегрена, системная красная волчанка, аутоиммунная тром-боцитопения). Объяснение этого факта, по-видимому, заключается в особенностях биохимической структуры рецепторов, кодируемых аллелями данной группы. Как известно, НЬА-молекулы образуют карманы в пептид-связывающем участке, биохимическая структура которых может иметь решающую роль в определении - какой из антигенных пептидов будет связан [19]. Поэтому НЬА-ассоци-ированность аутоиммунных заболеваний может рассматриваться как механизм предпочтительного связывания аутоантигенных пептидов и представления их потенциально аутореактивным клеткам. Этот участок должен быть высоко аффинным, но низкоспецифичным по отношению к антигенам [22]. Такими свойствами в большой мере обладают аллели НЬА-Б11В1*03, чем, видимо, и объясняется их связь с развитием многих аутоиммунных заболеваний.

Гаплотип НЬА-А1, В8, ОЯВ1*03 является широко распространенным среди европейского населения и ассоциирован с нарушениями иммунного ответа у здоровых лиц (показано снижение способности клеток продуцировать 1Ь-2, а также клеточную и растворимую форму его рецептора, №N7 и 1Ь-5, снижение активности НК-клеток при сохранном их количестве, снижение пролиферативного ответа на митогены) [10,14]. Как показано выше, в наших исследованиях у пациентов с ДТЗ, почти половина из которых обладала специфичностями А1, В8, ОЯБРОЗ, либо их сочетаниями, обнаружено сниженное количество СБЗ , СБ4 , СБ8 , тенденция к снижению содержания клеток с а-цепыо рецептора 1Ь-2, естественных киллеров, и пролиферативного ответа на ФГА, что может свидетельствовать о связи иммунных нарушений при аутоиммунных заболеваниях щитовидной железы с системой НЬА.

Иммуногенетические особенности узлового зоба к настоящему времени изучены не столь широко, как

таковые диффузного токсического зоба. Нами выявлен ряд ассоциаций между специфичностями ло-кусов DQA1 и DQB1 и развитием данной патологии. Отсутствие же различий в распределении аллелей HLA-DRB1 у больных УЗ по сравнению с группой контроля, с одной стороны, свидетельствует об отсутствии HLA-ассоциаций с данным заболеванием в локусе DR, а с другой стороны - подтверждает отсутствие аутоиммунного компонента в патогенезе этой группы заболеваний щитовидной железы. Кроме того, установлены различия в распределении некоторых DRB1- и DQ-специфичностей для больных ДТЗ и УЗ (табл. 6).

Таким образом, у больных УЗ и ДТЗ нами установлены изменения соотношения субпопуляций лимфоцитов в периферической крови и их функциональной активности. Ряд выявленных нарушений носит однонаправленный характер для обеих изученных патологий (снижение относительного содержания CD3 , CD4 , CD8 , CD28 CD152 ). Однако имеется ряд различий. Так, уровень клеток, несущих поверхностный Fas-антиген, значительно повышен при ДТЗ и не изменен при УЗ, тогда как при узловом зобе, в отличие от диффузно-токсичес-кого, содержание естественных киллеров и клеток с рецептором для IL-2 оказалось снижено, а пролиферативная и цитокин-продуцирующая способность угнетена гораздо значительнее. Кроме того, иммуногенетические маркеры предрасположенности к данным заболеваниям оказались различными.

Следовательно, проведенные исследования свидетельствуют о том, что как аутоиммунные поражения щитовидной железы (ДТЗ), так и не аутоиммунные (УЗ), сопровождаются значительными нарушениями клеточного иммунитета, проявляющимися преимущественно в угнетении большинства изученных показателей, более выраженном при УЗ; тогда как в развитии ДТЗ, помимо указанных иммунных нарушений, важную роль играют иммуногенетические факторы.

Список литературы

1. Аристархов В.Г., Кирилов Ю.Б., Строев Е.А. Проблема выбора лечения при аутоиммунных заболеваниях щитовидной железы. Рязань. - 1998. - 121с.

2. Благосклонная Я.В., Кетлинский С.А., Красильникова Е.И. с соавт. Содержание фактора некроза опухоли а и ИЛ-1 в сыворотке крови пациентов при аутоиммунных заболеваниях щитовидной железы. // Проблемы эндокринологии. - 1998. - Т 44,N4. - С. 22 - 24.

3. Мельнов С.Б., Дударенко О.И., Савицкий

В.П., Барышников А.Ю. Экспрессия антигена АРО-1/FAS у детей, больных раком щитовидной железы, проживающих на загрязненных радионуклида-

ми территориях. // Иммунология.- 1998,- № 2.-

С.52-54.

4. Никонова М.Ф., Буланова Е.Г., Станислав М.Л. с соавт. Различная готовность к развитию апоптоза активированных Т-лимфоцитов в норме и при системной красной волчанке. // Иммунология. - 1997.

- № 4.- С.21-24.

5. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Вторичные иммунодефициты. Клиника, диагностика, лечение. // Иммунология. - 1999. - N1. - С. 14-17.

6. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология,М., 1995. - 219 с.

7. Ярилин А.А. Межклеточная кооперация при иммуннном ответе. Выбор клеточной формы ответа. // Иммунология. 1999. - N1. - С. 17-24.

8. Ярилин А. Апоптоз и его место в иммунных процессах. // Иммунология. - 1996.- № 6,- С.10-23.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

9. Bassi V, Vitale М, Feliciello A et al. Retinoic acid induces intercellular adhesion molecule-1 hyperexpression in human thyroid carcinoma cell lines. // J. Clin. Endocrinol.& Metabolism. - 1995,- Vol.80. - P. 1129-1135.

10. Candore G, Cigna D, Todaro M.et al. T cell activation in HLA-B8, DR3-positive individuals. Early antigen expression defect in vitro. //Hum.Immunol.- 1995.-Vol.42, N 4.-P.289-294.

11. Deuss U, Buscema M, Schumacher H, Winkelmann W. In vitro effects of TNF-alpha on human thyroid follicular cells. // Acta Endocrinol.Copenh. - 1992,- Vol. 127. - P. 220-225.

12. Heuer M, Aust G, Ode-Hakim S, Scherbaum W. Different cytokine mRNA profiles in Graves’ disease, Hashimoto’s thyroiditis, and nonautoimmune thyroid disorders determined by quantitative PCR. // Thyroid. -1996. Vol. 6. -P.97-106.

13. Hiromatsu Y., Bednarczuk Т., Soyejima E. et al. Increased serum soluble Fas in patients with Graves’ disease. // Thyroid.- 1999.-Vol.9.-P.341-349.

14. Lio D, D’Anna C, Gervasi F et al. In vitro impairment of interleukin-5 production in HLA-B8, DR3-positive individuals. /Hum.Immunol.- 1995.- Vol.44, N 3,- P.170-174.

15. Metcalfe R., Weetman A. Stimulation of extraocular muscle fibroblasts by cytokines and hypoxia: possible role in thyroid-associated ophthalmopathy. // Clin. Endocrinol. 1994.-Vol. 40.-P. 67-72.

16. Paschke R, Schuppert F, Taton M, Velu T. Intrathyroidal cytokine gene expression profiles in autoimmune thyroiditis.//J. Endocrinol.- 1994.-Vol. 141.

- P.309-315.

17. Resetkova E, Morita T, Akasu F. et al. In vitro effects of cytokines and human thyroglobulin on the induction of antibody-secreting cells in patients with autoimmune thyroid disease. // Clin. Invest. Med. - 1993. - Vol. 16. - P.256-264.

18. Rieux-Laucat F, Le Deist F, Hivros С et al. Mutations in Fas associated with human lymphoproliferative syndrome and autoimmunity. /Science.-1995.-Vol. 268.-P. 1347-1358.

19. Thorsby E. Invited anniversary review: HLA-associated diseases // Human Immunol.- 1997,- Vol.53.-P.l-l 1.

20. Tolosa E, Roura C, Marti M et al. Induction of ICAM-1 but not of LFA-3 in thyroid follicular cells. / / Journal of Autoimmunity. - 1992. - Vol.5. - P.119-135.

21. Volpe R. Autoimmunity causing thyroid dysfunction. // Endocrinol. Metab. Clin. North Am. - 1991. -Vol. 20. -P.565-587.

22. Unanue E. Beller P, Lu C, Allen P. Antigen presentation: comments on its regulation and mechanisms // J.Immunol.- 1984,- N132,- P.l-5.

23. Yanagawa T, Hidaka Y, Guimaraes V et al. CTLA-4 gene polymorphism associated with Graves’ disease in a Caucasian population. // J.Clin. Endocrinol.¿¿Metabolism.

- 1995.-Vol. 80.-P. 41-45.

поступила в редакцию 06.04.2000 отправлена на доработку 18.09.2000 принята к печати 30.09.2000

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.