CC BY
135
Медицинская Иммунология 2005, Т. 7, Ms 1, стр 49-56 © 2005, СПб РО РААКИ
Оригинальные статьи
ФЕНОТИПИЧЕСКАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МОНОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЛЕГКИХ
Сахно Л.В., Тихонова М.А., Кожевников В.С., Сенюков В.В., Пронкина Н.В., Никонов С.Д., Жданов О.А., Останин А.А., Черных Е.Р.
НИИ клинической иммунологии СО РАМН,
* Городская клиническая специализированная туберкулезная больница №1, Новосибирск, Россия
Резюме. В работе исследовано состояние моноцитарного звена у больных туберкулезом легких. Установлено, что в периферической крови больных выявляется 2-кратное увеличение относительного содержания CD14+CD16+ моноцитов. Повышенное количество CD14+CD16+ клеток сопряжено со снижением доли моноцитов с внутриклеточной экспрессией TNFa/p. Причем между количеством CD14+CD16+ и TNF+ моноцитов обнаружена обратная корреляция. Напротив, увеличение субпопуляции CD14+CD16+ клеток у больных ТБ было ассоциировано с повышенным содержанием IL-10-позитивных моноцитов. Показано, что моноциты с внутриклеточной экспрессией IL-10 сосредоточены преимущественно в популяции CD16+ моноцитов, что свидетельствует о возможной супрессорной активности CD14+CD16+ клеток. Действительно, среднее количество CD14+CD16+ клеток и частота встречаемости больных с повышенным их содержанием (>17%) достоверно выше у больных с нарушенным антигенспецифическим ответом. Увеличение CD14+CD16+ моноцитов не связано с сопутствующей вирусной или неспецифической бактериальной инфекцией и выявляется у больных с активной формой туберкулеза независимо от формы и распространенности туберкулезного процесса.
Ключевые слова: CD14+CDIô+моноциты, внутриклеточные цитокины, PPD-анергия, туберкулез легких.
Sakhno L.V., Tihonova M.A., Kozhevnikov V.S., Senjukov V.V., Pronkina N.V., Nikonov S.D.,
Zhdanov O.A., Ostanin A.A., Chernykh E.R.
THE PHENOTYPE AND FUNCTION OF MONOCYTES IN PATIENTS
WITH PULMONARY TUBERCULOSIS
Abstract. Peripheral blood monocytes were investigated in the patients with pulmonary tuberculosis. It was established that population of CD14+16+ monocytes was twofold increased in the patients with tuberculosis. The higher level of CD14+CD16+ monocytes was associated with decreasing number of monocytes with intracellular TNF-a, and negative correlation between these parameters was revealed. On the contrary, the higher level of CD14+CD16+ monocytes was connected with increased number of IL-10 producing monocytes. IL-10-producing cells were established mainly in the population of CD16+ monocytes and so population of CD14+CD16+ monocytes may represent the cells with suppressive activity. Really, the CD14+CD16+ monocytes were increased in patients with defective antigen specific response. Enhancement of CD14+CD16+ monocytes was observed in patients with active tuberculosis independently of form and dissemination of disease and did not connected with concomitant viral or bacterial infection. (Med. Immunol., 2005, vol.7, № 1, pp 49-56)
Адрес для переписки:
Черных Е.Р., 630099, Новосибирск, ул. Ядринцевская, д.14,
ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН. Тел.: 3832-28-21-01, факс 3832-22-70-28. E-mail: ct lab @ mail.ru
Введение
Моноциты, являясь составной частью системы мононуклеарных фагоцитов, играют важную роль в иммунной регуляции и защите от патогенной флоры. В периферической крови моноциты представлены гетерогенной популяцией и различаются по
морфологии, экспрессии мембранных антигенов и функциональным свойствам [21]. Большинство циркулирующих моноцитов несут на своей поверхности высокий уровень CD14 (рецептор к липопо-лисахариду) и не экспрессируют CD16 ^су рецептор III типа) [8]. В то же время существует минорная субпопуляция моноцитов, которые одновременно с CD14 ко-экспрессирует CD16 антигены [23]. В периферической крови здоровых доноров доля таких клеток составляет около 10% от всех циркулирующих моноцитов [24].
Поскольку CD16 экспрессируется при культивировании моноцитов in vitro, ряд авторов полагает, что появление CD16 может отражать состояние активации моноцитов. Кроме того, более высокий уровень антигенов II класса главного комплекса гистосовместимости и низкий уровень CD11b, CD33 и CD64 позволяет рассматривать CD14+CD16+ клетки, как популяцию более зрелых моноцитов со свойствами тканевых макрофагов [23]. Еще одной особенностью CD14+CD16+ у здоровых доноров является более высокий уровень мРНК и продукции TNFa при стимуляции LPS по сравнению с популяцией CD14+CD16- моноцитов [4], вследствие чего CD14+CD16+ моноциты получили название «про-воспалительных» моноцитов [24]. Действительно, увеличение доли CD14+CD16+ моноцитов выявлено при многих инфекционных и воспалительных заболеваниях, включая ВИЧ-инфекцию, сепсис и системные воспалительные заболевания аутоиммунной природы [5, 7, 13, 22]. Причем проведение противовоспалительной терапии приводит к снижению количества этих клеток [5, 15, 22, 24].
При туберкулезной инфекции моноциты периферической крови с одной стороны характеризуются признаками активации, а с другой - выраженными нарушениями регуляторной активности, что рассматривается в качестве одной из причин дефекта антигенспецифического Т-клеточного ответа [19, 20]. В то же время сведения о количественном содержании и функциональной активности субпопуляции CD14+CD16+ моноцитов при данной патологии практически отсутствуют.
Исходя из этого, в настоящем исследовании мы попытались охарактеризовать фенотипические и функциональные свойства моноцитов периферической крови у больных туберкулезом легких (ТБ) и выяснить возможную роль CD14+CD16+ моноцитов в нарушении антигенспецифического ответа.
Материалы и методы
Иммунологические исследования были проведены в группе 68 больных туберкулезом легких: 47 (69%) мужчин и 21 (31%) женщина в возрасте от 19 до 64 лет. Обследованная группа включала 23 (33,8%) пациента с фиброзно-кавернозной, 36
(52,9%) пациентов с инфильтративной и 9 (13,2%) -с диссеминированной формами туберкулеза. Активное бацилловыделение было выявлено у 62 больных (БК+ в 91% случаев). Контрольную группу составили 30 здоровых доноров крови (с положительной кожной туберкулиновой пробой), однородных по полу и возрасту с больными туберкулезом легких исследуемой группы. Обследование всех пациентов проводилось при получении информированного согласия.
Мононуклеарные клетки (МНК) выделяли из ге-паринизированной венозной крови центрифугированием в градиенте плотности фиколла-верографина. МНК (0,1х106/лунку) культивировали в 96-луноч-ных планшетах для иммунологических исследований в среде RPMI-1640 («Sigma-Aldrich», США), дополненной 0,3 мг/мл L-глютамина, 5 мМ HEPES-буфера, 100 мкг/мл гентамицина и 10% инактивированной сывороткой доноров крови IV (АВ) группы при 37оС в СО -инкубаторе. Для стимуляции клеток использовали очищенный туберкулин (PPD) в концентрации 50 мкг/мл. Интенсивность пролиферации оценивали на 6 сутки по включению 3Н-тимидина, добавленного за 18 ч до окончания культивирования. Продукцию IFNy в 48-часовых супернатантах PPD-стимулированных МНК оценивали методом проточной флюориметрии на 2-х лучевом лазерном автоматизированном анализаторе (Bio-Plex Protein Assay System, Bio-Rad, США) с использованием коммерческой тест-системы в соответствии с инструкцией фирмы-производителя.
Процентное содержание моноцитов, экспрессирующих HLA-DR, CD86 молекулы и FasL определяли методом проточной цитофлуориметрии на лазерном клеточном сортере-анализаторе FACS Calibur («Becton Dickinson», США) с использованием соответствующих FITC-меченых моноклональных антител (Becton Dickinson). Для определения субпопуляции CD14+CD16+ моноцитов использовали FITC-меченные анти-CD^ антитела («Сорбент», Москва) и фикоэритрин ^Е^меченые анти-CD14 антитела (Phar-Mingen, San Diego, США).
Оценку внутриклеточной экспрессии IL-10 проводили методом проточной цитофлуориметрии. Клетки лейковзвеси обрабатывали FITC-мечеными анти-CD^ моноклональными антителами и фиксировали 1% раствором параформальдегида. Пермеа-билизацию клеток проводили с использованием
0,2% раствора Твин-20. Для выявления внутриклеточных детерминант IL-10 клетки обрабатывали PE-мечеными анти-^-10 моноклональными антителами (Becton Dickinson). Относительное количество CD16+IL10+ моноцитов оценивали методом двуцветной проточной цитометрии. Определение относительного количества моноцитов, продуцирующих TNF производили аналогично, оценивая количество в моноцитарном облаке клеток, содержащих внут-
риклеточные детерминанты TNF-a/ß, и используя для их выявления соответствующие FITC-меченые моноклональные антитела 4F2, любезно предоставленные к.м.н. С.В. Киселевым (США).
Математическую обработку полученных результатов проводили методами описательной, параметрической и непараметрической статистики на персональном компьютере с использованием программы «Statistica 5.0».
Результаты
Для оценки состояния моноцитарного звена были исследованы фенотипические маркеры, а также внутриклеточная продукция TNF и IL-10 моноцитами периферической крови больных ТБ и здоровых доноров. Результаты сравнительного иммунологического исследования приведены в табл. 1.
У здоровых доноров процентное содержание CD14+CD16+ моноцитов варьировало от 2 до 17,3%, составляя в среднем 8,9 ± 1,2%, что согласуется с данными литературы. У больных ТБ относительное количество CD14+CD16+ моноцитов в периферической крови было достоверно выше. Содержание этих клеток колебалось от 4 до 54% и в среднем более чем в 2 раза превышало нормативный уровень. Причем выраженное увеличение доли CD14+CD16+ моноцитов, при котором индивидуальные значения их количества выходили за верхнюю границу нормативного диапазона (>17%), было выявлено у 31 из 65 обследованных больных ТБ (в 47,7 % случаев).
Кроме того, анализ экспрессии FasL на моноцитах показал достоверное увеличение у больных ТБ процентного содержания FasL-позитивных клеток. Вместе с тем количество моноцитов, экспрессирующих HLA-DR и CD86 антигены, было достоверно снижено. Как известно CD16 и FasL относятся к разряду активационных маркеров. Поэтому увеличение в периферической крови моноцитов, экспрессирующих CD16 и FasL могло быть результатом активации моноцитов. При этом уменьшение у больных доли HLA-DR+ и CD86+ моноцитов свидетельствует о нарушении экспрессии ко-стимуляторных молекул и может быть причиной дефекта антиген-презентирующей функции моноцитов.
Исследование внутриклеточной продукции ци-токинов выявило значимое снижение у больных относительного количества моноцитов, продуцирующих TNF, а также существенное увеличение моноцитов с внутриклеточной экспрессией IL-10, что явно указывает на изменение регуляторной функции моноцитов. Причем, если в периферической крови здоровых доноров преобладают моноциты с внутриклеточным TNF, то у больных ТБ регистрируется сдвиг в сторону клеток, продуцирующих IL-10, т.е. обладающих иммуносупрессорной активностью.
Согласно данным Belge K.U. с соавторами, у здоровых доноров субпопуляция CD14+CD16+ моноцитов является мощным источником продукции TNFa [4]. Действительно, сравнительный анализ больных ТБ, различающихся по степени активности воспалительного процесса, показал, что несмотря на близкие средние значения CD14+CD16+ моноцитов (соответственно 24 ± 3, n=10 и 18 ± 1,5%, n=23) в подгруппе с более выраженным воспалительным ответом (лейкоцитоз >10 х 109/л и СОЭ>30 мм/ч) частота встречаемости пациентов с высоким (>17%) содержанием CD14+CD16+ моноцитов была достоверно выше, чем в оппозитной подгруппе (90 vs 35%; %2=0,0035). Однако по сравнению с донорами количество TNF-позитивных клеток в обеих подгруппах оставалось сниженным (соответственно 8,6 ± 3,5 и 3,7 ± 0,8 vs 14,7 ± 2,1% у доноров, p<0,05). Более того, между количеством CD14+CD16+ моноцитов и процентным содержанием TNF+моноцитов выявлялась достоверная обратная корреляционная зависимость (Рис.1). В то же время важно отметить, что больные ТБ характеризовались не только увеличением доли CD14+CD16+ клеток, но и повышенным содержанием IL-10-по-зитивных моноцитов (см. табл. 1).
Чтобы проанализировать, являются ли CD14+ CD16+ моноциты непосредственными продуцентами IL-10, далее была исследована внутриклеточная продукция IL-10 в субпопуляциях CD16+ и CD16-моноцитов у больных ТБ и здоровых доноров (Табл. 2). Как видно, у здоровых доноров IL-10-продуци-рующие клетки в популяции CD16- моноцитов практически не обнаруживались, а в популяции CD16+ моноцитов составляли в среднем 2%. У обследован-
Табл.1. МОНОРИТАРНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ В ГРУППАХ ЗДОРОВЫХ ДОНОРОВ И БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЛЕГКИХ
Количество моноцитов (%) Доноры Больные ТБ
CD14+CD16+ 8,9 ± 1,2 (15) 18,0 ± 1,2 (65) *
FasL+ 5,1 ± 1,0 (14) 24,5 ± 5,4 (16) *
HLA-DR+ 84,1 ± 1,5 (10) 71,4 ± 1,8 (68) *
CD86+ 66,1 ± 4,5 (9) 47,3 ± 5,6 (12) *
С внутриклеточной экспрессией TNF 14,7 ± 2,1 (8) 4,9 ± 1,1 (32) *
С внутриклеточной экспрессией IL-10 1,06 ± 0,34 (8) 6,6 ± 2,7 (6) *
Примечание: * ри<0,05 - достоверность различия показателей по сравнению с донорами. Здесь и далее в таблицах: и - непараметрический критерий Вилкоксона-Манна-Уитни; в скобках - количество наблюдений
Табл.2. ВНУТРИКЛЕТОЧНАЯ ЭКСПРЕССИЯ 1И0 В СУБПОПУЛЯЦИЯХ CD16+ И С016‘ МОНОЦИТОВ У ЗДОРОВЫХ ДОНОРОВ И БОЛЬНЫХТБ
Группы / №№ Субпопуляции моноцитов (%)
С014+С016+ 11_-10+С016+ 1Ы0+СР16'
Доноры
1 17 5,5 0,19
2 10 5,46 0,27
3 6 4,45 0,28
4 2,6 0 0,13
5 15 0 0
6 4 0,18 1,03
7 4 0,14 0,47
8 7 0,34 0
М ± Б.Е. 8,2 ± 1,9 2,0 ± 0,92 0,3 ± 0,12
Больные ТБ
1 16 12,6 1,14
2 33 8,8 0,11
3 15 13,9 2,5
4 54 3,1 0,15
5 31 22,2 0,42
М ± Б.Е. 29,8 ± 7 * 12,1 ± 3,1 * 0,86 ± 0,45
Примечание: *- ри<0,05, достоверность различия средних значений у больных ТБ по сравнению с донорами
ных больных ^-10-продуцирующие клетки также выявлялись преимущественно в популяции CD16+ моноцитов, однако их количество было значимо выше. Следовательно, можно полагать, что и у здоровых доноров и у больных ТБ ^-10 продуцирующие моноциты сосредоточены преимущественно в популяции CD16+ моноцитов. Это подтверждается данными корреляционного анализа в общей группе больных и доноров (п=13), который выявил прямую взаимосвязь между количеством CD14+CD16+ и ^-10+CD16+ моноцитов (г=0,63; р<0,05). Из полученных данных следует, что повышенное содержание моноцитов с внутриклеточной экспрессией ^-10 при туберкулезной инфекции является совокупным результатом как увеличения общего числа CD14+ CD16+ моноцитов, так и доли ^-10-позитивных клеток среди них. Таким образом, у больных ТБ CD14+CD16+ моноциты, по-видимому, не связаны с фракцией клеток, обладающих провоспалительной активностью, а, напротив, представляют субпопуля-
СР14+С016+ моноциты (%)
Рис. 1. Корреляционная взаимосвязь между количеством CD14+CD16+ моноцитов и процентным содержанием моноцитов с внутриклеточным у больных туберкулезом легких
цию клеток с противовоспалительной/иммуносуп-рессорной активностью.
Усиление супрессорной активности моноцитов при туберкулезной инфекции является известным фактом [6, 14, 20] и рассматривается в качестве одной из причин нарушения антигенспецифичес-кого ответа. Однако не ясно, характерна ли супрессорная активность для всей популяции моноцитов, или же опосредуется определенной ее субфракцией. Согласно полученным нами ранее данным выраженное угнетение пролиферативного ответа на PPD (PPD-анергия) регистрируется приблизительно у 40% больных ТБ [1-3]. Чтобы выяснить возможную взаимосвязь между дефектом Т-клеточного ответа и популяцией CD14+ CD16+ моноцитов, был проведен сравнительный анализ содержания CD14+ CD16+ клеток у пациентов с сохранным и сниженным (<12000 имп/ мин) PPD ответом. Как видно из данных таблицы 3, больные со сниженным пролиферативным ответом на PPD характеризовались также более низким уровнем PPD-стимулированной продукции №N7, что указывало на дефект ТЫ клеток. Относительное содержание CD14+CD16+ моноцитов в этой подгруппе было достоверно выше, чем у больных, отвечающих на PPD (21,4 ± 2,4 и 15,4 ± 1,0%, соответственно; р<0,05). При этом наиболее яркие различия выявлялись при частотном анализе. Так, частота больных с высоким уровнем CD14+ CD16+ моноцитов в подгруппе анергичных пациентов более чем в 2 раза превышала аналогичный показатель PPD-реактивных больных. Таким образом, увеличение относительного содержания CD14+ CD16+ моноцитов у больных ТБ ассоциировано с угнетением ТЫ антигенспецифи-ческого ответа.
Поскольку прирост CD14+CD16+ моноцитов может наблюдаться при вирусной и неспецифической бактериальной инфекции [7, 13], которые часто осложняют течение туберкулеза легких, представлялось важным выяснить, с чем связано увеличение CD14+CD16+ моноцитов у обследованных нами больных - непосредственно с туберкулезным процессом или с какой-либо сопутствующей инфекцией. При сравнении больных ТБ без сопутствующей инфекции (п=45), а также пациентов ТБ с хроническим вирусным гепатитом В и/или С (п=16), либо гнойно-септическими осложнениями (п=4) относительное содержание CD14+CD16+ моноцитов составило соответственно 19,0 ± 1,3; 14,3 ± 1,6 и 15,0 ± 1,5% и значимо не различалось. Следовательно, увеличение относительного количества CD14+CD16+ моноцитов связано, по-видимому, непосредственно с развитием туберкулезного процесса.
Как было отмечено выше, высокий уровень CD14+CD16+ моноцитов выявляется у значительной части, но не у всех больных ТБ. Чтобы выяснить, имеется ли взаимосвязь между относительным содержанием CD14+CD16+ моноцитов и клиническими особенностями заболевания, был проведен анализ больных с различными формами и вариантами течения ТБ. Сравнение больных с фиброзно-кавернозной, инфильтративной и диссеминированной формами ТБ не выявило существенных различий в содержании CD14+CD16+ моноцитов в этих подгруппах (17,0 ± 2,1; 20,1 ± 2,4 и 17,6 ± 1,3%, соответственно). Не регистрировалось также достоверных различий в количестве CD14+ CD16+ моноцитов у больных ТБ в зависимости от распространенности процесса, локализованного в легких на одной или на обеих сторонах. Содержание СD14+СD16+ моноцитов у больных с резистентностью к туберкулостатической терапии (п=18) было несколько выше, чем в оппозитной подгруппе (20,7 ± 2,6 vs 16,8 ± 1,7%), однако также значимо не различалось. По-видимому, увеличение субпопуляции CD14+CD16+ моноцитов характерно для большинства больных с активной формой туберкулеза легких независимо от клинического варианта течения заболевания.
Обсуждение
Идентификация новой минорной субпопуляции СD14+СD16+ моноцитов, отличающихся фенотипически и функционально от преобладающей фракции СD14+СD16- моноцитов периферической крови вызвала большой интерес к исследованию этих клеток при различных патологиях. В результате было показано, что многие воспалительные заболевания аутоиммунного и инфекционного генеза сопровождаются значительным увеличением СD14+СD16+ моноцитов [13, 22, 24]. Изменение фенотипических и функциональных свойств моноцитов является характерным признаком и для туберкулезной инфекции. Так, полученные нами данные о снижении относительного количества HLA-DR и CD86-пози-тивных моноцитов согласуются с данными других исследователей о нарушении экспрессии ко-стиму-ляторных молекул на моноцитах периферической крови больных ТБ [12, 20]. Вместе с тем нами обнаружено увеличение числа моноцитов, экспрессирующих FasL, что явно указывает на состояние активации моноцитов. Причем это факт позволяет с новых позиций рассмотреть механизм ингибирующего действия моноцитов на Т-клетки через Fas/FasL индуцированный апоптоз. Действительно, ранее нами было показано, что угнетение пролиферации Т-клеток при стимуляции PPD ассоциировано с их повышенным апоптозом [2, 3].
Субпопуляция СD14+СD16+ моноцитов и их свойства у больных ТБ практически не исследованы. Единственным сообщением является работа Vanham G. с соавторами, которые выявили при туберкулезной инфекции повышенную экспрессию на моноцитах FcyR I и Ш типа [19]. Поэтому в настоящем исследовании, по сути, впервые продемонстрировано увеличение относительного содержания СD14+СD16+ моноцитов в периферической крови больных ТБ легких. Важно отметить, что у здоровых доноров CD14+CD16+ моноциты экспрессируют мРНК ЮТа, ^-1 и ^-6, но не ^-10 [4, 24]. Кроме того, содержание СD14+СD16+ моноцитов при многих заболеваниях ассоциировано с активностью воспалительного процесса [16]. Поэтому общепринятым стало мнение, что данная субпопуляция пред-
Табл.3. CD14+CD16+ МОНОЦИТЫ В ПОДГРУППАХ БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗМ ЛЕГКИХ С СОХРАННЫМ И СНИЖЕННЫМ РР^ОТВЕТОМ
Показатель Больные с сохранным РРй-ответом Больные с РРй-анергией
Пролиферация (имп/мин): Спонтанная 1672 ± 98 (39) 1387 ± 72 (26)
РРй-стимулированная 31973 ± 1775 (39) 4817 ± 421 (26) *
Продукция !РЫу (пкг/мл) 9183 ± 4263 (7) 2787 ± 1592 (5) *
Сй14+Сй16+ моноциты (%) 15,4 ± 1,0 (39) 21,4 ± 2,4 (26) *
Частота больных с высоким (>17%) содержанием СР14+СР16+ моноцитов 25,6% (10/39) 61,5% (16/26) ##
Примечание: * ри<0,05 - достоверность различия средних значений и ## рТМФ=0,004 - достоверность различия частот в подгруппах больных ТБ (ри - непараметрический критерий Вилкоксона-Манна-Уитни, рТМФ - точный метод Фишера)
ставлена клетками с выраженной провоспалитель-ной активностью. Полученные нами результаты противоречат такому представлению. Так, нами показано, что моноциты, продуцирующие ^-10, сосредоточены преимущественно во фракции CD16+ моноцитов, а количество CD16+ моноцитов с внутриклеточной экспрессией ^-10 у больных ТБ повышено в 6 раз. Таким образом, вторым важным заключением, которое следует из полученных данных, является тот факт, что CD14+CD16+ моноциты у больных ТБ обладают не провоспалительной, а им-муносупрессорной активностью. Супрессорная активность CD14+CD16+ моноцитов обсуждается и рядом других авторов. Например, у пациентов с болезнью Кавасаки увеличение числа CD14+CD16+ моноцитов сопряжено с повышенной концентрацией ^-10 в сыворотке [6]. Снижение продукции ^-1 и увеличение продукции ^-10 на фоне увеличение популяции CD14+CD16+ моноцитов описано у новорожденных и детей младшего возраста с сепсисом. Причем, аналогично полученным нами данным, моноциты периферической крови в этом случае характеризуются снижением экспрессии HLA-DR и CD86 молекул [17]. Субпопуляция моноцитов с супрессорными свойствами выявлена в перитонеальном экссудате больных раком яичника с канцероматоз-ным асцитом. Моноцитарные клетки этих больных продуцируют ^-10 и TGFp, но не ^-12, ^-1 и ТОТа и экспрессируют CD14, CD16 и CD54, но не HLA-DR, CD80, CD86, CD11a, CD11b или СD25 поверхностные антигены [11]. Следовательно, можно полагать, что при разных патологиях CD14+CD16+ моноциты могут проявлять различные функциональные свойства.
Супрессорная перестройка моноцитов при ТБ активно обсуждается в контексте угнетения ТЫ клеток, контролирующих иммунный ответ на антигены M.tuberculosis [6, 14, 20]. Согласно данным литературы ^-10 обладает широким спектром иммуносупрес-сорной активности, в частности, может оказывать прямой ингибирующий эффект на пролиферацию Т-клеток и продукцию ТЫ цитокинов, а также экспрессию ко-стимуляторных молекул на антиген-пре-зентирующих клетках и тем самым подавлять иммунный ответ [15]. Анализ пролиферативного ответа на PPD у обследованных нами пациентов позволил разделить их на 2 подгруппы: с сохранной PPD-реактивностью и PPD-анергией. Сравнительный их анализ показал, что пациенты со сниженным PPD-ответом характеризуются угнетением продукции №N7 и более высоким содержанием CD14+CD16+ моноцитов. Эти данные указывают на то, что важную роль в угнетении ТЫ антигенспецифического ответа при ТБ может играть субпопуляция моноцитов, представленная CD14+CD16+ клетками.
Одним из открытых остается вопрос, с чем связано увеличение числа CD14+CD16+ моноцитов у
больных ТБ. В литературе имеются данные, что индукция CD16 антигена на моноцитах периферической крови происходит под действием ряда цитокинов - трансформирующего рост фактора-p (TGFP) и IL-10 [10, 22, 24]. Эти же цитокины предопределяют альтернативный путь активации моноцитов/ макрофагов, при котором клетки начинают продуцировать преимущественно цитокины с противовос-палительной/иммуносупрессорной активностью [18]. Поскольку инфицирование моноцитов/макрофагов M. tuberculosis сопровождается запуском продукции TGFP и IL-10 [7, 15], а развитие туберкулезной инфекции сопряжено с Th1^Th2 переключением [15,20], то увеличение популяции CD14+ CD16+ моноцитов у больных ТБ, возможно, является результатом активации моноцитов в условиях смещения цитокинового баланса в сторону противовоспалительных/ иммуносупрессорных медиаторов.
Выводы
1. Больные ТБ характеризуются повышенным содержанием циркулирующих CD14+CD16+ моноцитов. Увеличение данной субпопуляции моноцитов не связано с сопутствующей вирусной или неспецифической бактериальной инфекцией и выявляется у больных с активной формой туберкулеза независимо от формы и распространенности туберкулезного процесса.
2. Увеличение CD14+CD16+ моноцитов у больных ТБ сопряжено со снижением количества моноцитов, продуцирующих TNFa, и увеличением количества IL-10 продуцирующих клеток. При этом моноциты с внутриклеточной экспрессией IL-10 сосредоточены исключительно среди CD16+ моноцитов, что свидетельствует о супрессорной активности CD14+CD16+ клеток.
3. Частота встречаемости пациентов с повышенным содержанием CD14+CD16+ моноцитов и средний уровень этих клеток выше у больных с угнетением PPD-стимулированной пролиферации и продукции INFy, что указывают на возможную роль CD14+CD16+ клеток в нарушении Th1 антигенспе-цифического ответа при туберкулезе легких.
Авторы выражают признательность Региональному общественному фонду содействия отечественной медицине за поддержку в проведении исследований.
Список литературы
1. Сахно Л.В., Хонина Н.А., Норкина О.В., Мостовая Г.В., Никонов С.Д., Огиренко А.П., Черных Е.Р., Останин А.А. Участие оксида азота в развитии туберкулиновой анергии у больных туберкулезом легких // Проблемы туберкулеза. - 2001. - № 8. -С.42-46.
2. Хонина Н.А., Сахно Л.В., Норкин М.Н., Нор-кина О.В., Мостовая Г.В., Никонов С.Д., Огиренко А.П., Останин А.А., Черных Е.Р. Апоптоз лимфоцитов как возможный механизм нарушений антигенс-пецифического ответа при туберкулезе легких // Мед. Иммунология. - 2001. -Т. 3, № 1. - С.51-59.
3. Черных Е.Р., Сахно Л.В., Хонина Н.А., Тихонова М.А., Кожевников В.С., Никонов С.Д., Жданов О.А., Останин А.А. Субпопуляционная принадлежность Т-клеток, подверженных анергии и апоптозу у больных туберкулезом легких // Проблемы туберкулеза. - 2002. - №7. -С. 43-48.
4. Belge K.U., Dayyani F., Horelz A., Siedlar M., Frankenberger M., Frankenberger B., Espevik T., Zie-gler-Heitbrock L. The proinflammatory CD14+CD16+ DR++ monocytes are a major source of TNF // J. Immunol. - 2002. - Vol.168. - P. 3536-3542.
5. Dayyani F., Belge K.U., Frankenberger M., Mack M., Berki T., Ziegler-Heitbrock L. Mechanism of glucocorticoid-induced depletion of human CD14+CD16+ monocytes // J. Leukoc. Biol. - 2003. - Vol. 74. - P. 33-39.
6. Fietta A., Meloni F., Francioli C., Morosini M., Bulgheroni A., Casali L., Gialdroni G.G. Virulence of Mycobacterium tuberculosis affects interleukin-mono-cyte chemoattractant protein-1 and interleukin-10 production by human mononuclear phagocytes // Int. J. Tissue React. -2001. - Vol.23. - P.113-125.
7. Fingerle G., Pforte A., Passlick B., Blumenstein M., Strobel M., Ziegler-Heitbrock H.W. The novel subset of CD14+/CD16+ blood monocytes is expanded in sepsis patients // Blood. - 1993. - Vol. 82. - P. 31703176.
8. Grage-Griebenow E., Lorenzen D., Fetting R., Flad H.D., Ernst M. Phenotypical and functional characterization of F у receptor I (CD64)-negative monocytes, a minor human monocyte subpopulation with high accessory and antiviral activity // Eur. J. Immunol. - 1993. -Vol. 23. - P. 3126-3135.
9. Katayama K., Matsubara T., Fujiwara M., Koga M., Furukawa S. CD14+CD16+ monocytes subpopulation in Kawasaki disease // Clin. Exp. Immunol. - 2000.
- Vol. 121. - P. 566-570.
10. Li G., Kim Y.J., Mantel C., Broxmeyer H.E. P-selectin enhances generation of CD14+CD16+ dendritic-like cells and inhibits macrophage maturation from human peripheral blood monocytes // J. Immunol. -2003. - Vol. 171. - P. 669-677.
11. Loercher A.E., Nash M.A., Kavanagh J.J., Plat-soucas C.D., Freedman R.S. Identification of an IL-10-producing HLA-DR-negative monocyte subset in the malignant ascites of patients with ovarian carcinoma that inhibits cytokine protein expression and proliferation of autologous T cells // J. Immunol. - 1999. -Vol.163. - P.62-71.
12. Mariotti S., Teloni R., Iona E., Fattorini L., Gi-annoni F., Romagnoli G., Orefici G., Nisini R. Myco-
bacterium tuberculosis subverts the differentiation of human monocytes into dendritic cells // Eur. J. Immunol. - 2002. - Vol. 32. - P. 3050-3058.
13. Nockher W.A., Scherberich J.E. Expanded CD14+CD16+ monocyte subpopulation in patients with acute and chronic infections undergoing hemodialysis // Infect. Immun. - 1998. - Vol. 66. - P. 2782-2790.
14. Pereira C.B., Palaci M., Leite O.H., Duarte A.J., Benard G. Monocyte cytokine secretion in patients with pulmonary tuberculosis differs from that of healthy infected subjects and correlates with clinical manifestations // Microbes. Infect. - 2004. - Vol. 6.
- P. 25-33.
15. Rojas R.E., Balaji K.N., Subramanian A., Boom W.H. Regulation of human CD4(+) alphabeta T-cell-receptor-positive (TCR(+)) and gammadelta TCR(+) T-cell responses to Mycobacterium tuberculosis by interleukin-10 and transforming growth factor beta // Infect. Immun. - 1999. - Vol. 67. - P. 6461-6472.
16. Scherberich J.E., Nockher W.A. CD14++ monocytes, CD14+/CD16+ subset and soluble CD14 as biological markers of inflammatory system diseases and monitoring immunosuppressive therapy // Scand. J. Immunol. - 2002. - Vol. 55. - P. 629-638.
17. Skrzeczynska J., Kobylarz K., Hartwich Z., Zem-bala M., Pryjma J. CD14+16+ monocytes in the course of sepsis in neonates and small children: monitoring and functional studies // Scand. J. Immunol. - 2002. -Vol. 55. - P. 629-638.
18. Tzachanis D., Berezovskaya A., Nadler L.M., Boussiotis V.A. Blockade of B7/CD28 in mixed lymphocyte reaction cultures results in the generation of alternatively activated macrophages, which suppress T-cell responses // Blood. - 2002. - Vol. 99. - P.1465-1473.
19. Vanham G., Edmonds K., Qing L., Hom D., Toossi Z., Jons B., Daley C.L., Huebler B., Kestens L., Gigase P., Ellner J.J. Generalized immune activation in pulmonary tuberculosis: co-activation with HIV infection // Clin. Exp. Immunol. - 1996. - Vol.103. -P.30-34.
20. Vanham G., Toossi Z., Hirsch C.S., Wallis R.S., Schwander S.K., Rich E.A., Ellner J.J. Examining a paradox in the pathogenesis of human pulmonary tuberculosis: immune activation and suppression/anergy // Tubercle and Lung Disease. - 1997. - Vol. 78. - P.145-158.
21. Wang S.Y., Mak K.L., Chen L.Y., Chou M.P., Ho C.K. Heterogeneity of human blood monocytes: two subpopulations with different sizes, phenotypes and function // Immunol. - 1992. - Vol. 77. - P. 298303.
22. Wijngaarden S., van Roon J.A.G., BijlsmaJ.WJ., van de Winkel J.G.J., Lafeber F.P.J. Fcy receptor expression levels on monocytes are elevated in rheumatoid arthritis patient with high erythrocyte sedimen-
tation rate who do not use anti-rheumatic drugs // Rheumatol. - 2003. - Vol. 42. - P. 681-688.
23. Ziegler-Heitbrock H.W., Fingerle G., Strobel M., Schraut W., Stelter F., Schutt C., Passlick B., Pforte A. The novel subset of CD14+/CD16+ blood monocytes
exhibits features of tissue macrophages // Eur. J. Immunol. - 1993. - Vol. 23. - P.2053-2058.
24. Ziegler-Heitbrock H.W.L. Heterogeneity of human blood monocytes: CD14+CD16+ subpopulation / / Immunol. Today. - 1996. - Vol. 17. - P. 424-428.
поступила в редакцию 14.10.2004 принята к печати 21.12.2004
