CC BY
40
сы с большим количеством секреторных гранул в апикальных и субъядерных отделах цитоплазмы. На 21 сутки наблюдения на фоне курсового введения исследуемого средства площади некроза уменьшались на 30 %, площади воспалительной инфильтрации — в 1,7 раза и зоны кровоизлияния — в 2,2 раза по сравнению с таковыми у животных контрольной группы.
Таким образом, комплексное растительное средство «Панкреофит» обладает выраженным панкреопротекторным действием, снижая активность панкреотических ферментов, огрничивая площади некроза ацинарной ткани, интенсивность воспалительной реакции и уменьшая зоны
кровоизлияний на фоне острого хлорэтилового панкреатита. Данный фармакотерапевтический эффект «Панкреофита» обусловлен представленным в нем комплексом биологически активных веществ: флавоноидов, полисахаридов, эфирных масел, витаминов, органических кислот и других соединений. В целом «Панкреофит» не уступает, а по отдельным показателям превосходит (менее выраженные гиперамилаземия, гиперлипаземия, лейкоцитоз и нейтрофилез, восстановление численности лимфоцитов) сбору № 120. На основании полученных данных можно рекомендовать применение «Панкреофита» в комплексном лечении и профилактике острых панкреатитов.
PHARMACOTERAPEUTIC EFFICIENCY OF COMPLEX PHYTOREMEDY «PANCREOPHYT» IN ACUTE CHLORAETHYLINDUCED PANCREATITIS IN WITE RATS
A.M. Dorgiev, Ya.G. Razuvaeva, S.M. Nicolaev, I.G. Nicolaeva, L.B. Buraeva, M.M. Hrenova (Institute of the General and Experimental Biology SD RAS, Buryat State University, Ulan-Ude)
It is established, that complex phytoremedy «Pancreophyt» expresses pancreoprotective activity, reduces activity of pancreatitic enzymes, limits necrosis of acinaric tissue, intensity of inflammative reaction and reduces hemorrhage zones in acute chloraethyl-induced pancreatitis.
ЛИТЕРАТУРА
1. Аберясев Н.В. Экспериментально-клиническое обоснование энтеропротекторной терапии при различных формах острого панкреатита. Автореф.дис... канд.мед.наук. — М., 2007. — 20 с.
2. Губергриц Н.Б., Христич Т.Н. Клиническая пан-креатология. — Донецк, 2000. — 416 с.
3. Маев И.В. Наследственный панкреатит // Росс. журн.гастроэнтерол., гепатол.,колопроктол. — 2004. — № 1. — С. 20-25.
4. Маев И.В., Кучерявый Ю.А. Острый и хронический панкреатит, рак поджелудочной железы — цепь последовательных событий или самостоятельное заболевание? // Клиническая медицина. — 2005. — № 2. — С. 12-16.
5. Микроскопическая техника: Руководство/ Под ред. Д.С. Саркисова и Ю.Л. Перова. — М.: Медицина, 1996. — 544 с.
6. Морозов С.В., Долгих В.Т., Полуэктов В.Л. Активация процессов липопероксидации — патогене-
тический фактор дисфункции при остром панкреатите //Бюллетень СО РАМН. — 2005. — № 4. — С. 32-35.
7. Соколов С.Я. Фитотерапия и фитофармакология: Руководство для врачей. — М., 2000. — 976 с.
8. Сергиенко В.И., Бондаренко И.Б., Гайдышев И.И. Математическая статистика в клинических исследованиях. — М., 2001. — 256 с.
9. Симаворян П.С., Тишенина Р.С. Показатели жироуглеводного обмена при экспериментальном панкреатите // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. — 1973 . — № 2. — С. 59 — 62.
10. Chari S.T., Mohan V., Pitchumoni C.S. et al. Risk of pancreatic carcinoma in tropical calcifying pancreatitis: an epidemiologic study// Pancreas. — 1994. — № 9. — P. 6266.
11. Layer P., Yamamoto H., Kalthoff L. et al. ^e different courses of early- and late- onset idiopathic and alcoholic chronic pancreatitis // Gastroenterology. — 1994. — № 107. — Р 1481-1487.
© АЖУНОВА Т.А., ГУЛЯЕВ С.М., ЧЕХИРОВА Г.В., ЛЕМЗА C.B., НИКОЛАЕВ С.М. — 2007
ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА «ГЕПАТОН»
ПРИ ПОВРЕЖДЕНИИ ПЕЧЕНИ АЛКОГОЛЕМ
Т.А. Ажунова, С.М. Гуляев, Г.В. Чехирова, С.В. Лемза, С.М. Николаев (Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ, директор —
д.м.н., проф. Л.Л. Убугунов)
Резюме. Установлено, что комплексное растительное средство «гепатон» обладает выраженным гепа-топротекторным действием при остром экспериментальном алкогольном гепатите.
Ключевые слова: растительное средство «гепатон», алкогольный гепатит, цитолитический и холеста-тический синдром, мезенхимально-воспалительная реакция.
Известно, что повреждающее действие этанола на печень реализуется на уровне мембранных структур гепатоцитов, а также ферментных систем клеток печени с последующим развитием синдрома цитолиза и явлений холестаза. Прооксидантное действие этанола в сочетании с его влиянием на метаболизм холестери-
на — фактора, стабилизирующего мембраны, изменениями в концентрации желчных кислот, являющихся одним из ведущих механизмов гомеостаза, позволяют отнести этанол к активным мембранотропным ядам.
Исследовали фармакотерапевтическую эффективность комплексного гепатозащитного растительного
средства при экспериментальном алкогольном повреждении печени белых крыс. В состав «гепатона» (условное название) входят сухие экстракты 7 видов растительного сырья: плодов шиповника (Rosa L.) — 30 ч; листьев мяты перечной (Metha piperita L.) — 10ч; цветков ромашки аптечной (Matricaria chamomilla L.) — 10 ч; плодов боярышника кроваво-красного (Crataegus sanguinea Pall.) — 20 ч; корней солодки голой (Glycyrrhisa glabra L.) — 10 ч; травы зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.) — 10 ч; корней и корневищ девясила высокого (Inula helen-ium L.) — 10 ч. Сухие экстракты из отдельных компонентов сбора были получены и стандартизованы в Отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН. Для получения отдельных экстрактов сухих (корни и корневища девясила, корни и корневища солодки, листья мяты, цветков ромашки, трава зверобоя) было использовано фармакопейное растительное сырье производства ОАО «Красногорсклексредство» (г. Новосибирск); плоды шиповника и плоды боярышника были собраны в Баргузинском районе республики Бурятия в 2004-2005 гг.
Материалы и методы
Исследования выполнены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 160-170 г, которых содержали в условиях естественного светового режима и на стандартной диете при свободном доступе к воде и пище в соответствии с правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей.
При изучении острой токсичности «гепатона» исследования проводились по методу Кербера в соответствии с требованиями, изложенными в «Руководстве» [5], в объеме необходимом для изучения новых композиций из фармокопейных видов растительного сырья. Испытуемое средство крысам вводили вну-трижелудочно в утренние часы за 1 час до кормления. Экспериментальные группы были сформированы из 12 животных: по 6 самок и 6 самцов. Наблюдение за общим состоянием животных и их поведением осуществляли в течение 14 дней. Регистрировали наблюдаемые признаки интоксикации: общее состояние животных, поведение, двигательную активность, характер дыхательных движений, состояние шерстного покрова, окраску слизистых оболочек, потребление корма и воды, количество и консистенцию фекальных масс, частоту мочеиспускания и окраску мочи. Также регистрировали сроки развития интоксикации и гибели животных.
При внутрижелудочном введении животным «ге-патона» в максимально возможных дозах (6300 мг/кг) DL50 установить не удалось: гибель животных, получавших фитоэкстракт, не регистрировалась в течение всего срока наблюдения, хотя в первые 1-2 суток отмечались признаки интоксикации: снижение аппетита и двигательной активности, изменение шерстного покрова. Полученные результаты по изучению острой токсичности «гепатона» позволяют отнести его к группе малотоксичных веществ по действующей классификации [7].
Острое повреждение печени вызывали путем внутрижелудочного введения 40 % водного раствора этилового спирта в объеме 7 мл/кг массы крыс 1 раз в сутки в течение 21 дня. «Гепатон» вводили крысам 1 раз в сутки внутрижелудочно в установленной экспериментально-терапевтической дозе 50 мг/кг в форме водного раствора в объеме 10 мл/кг в течение всего эксперимента (21 день). Крысам контрольной группы по аналогичной схеме в соответствующем объеме вво-
дили воду очищенную. Исследования проводили через 21 сутки от начала введения гепатотропного токсина. На гистологических препаратах печени подсчитывали количество некротизированных гепатоцитов и определяли степень жировой дистрофии [1]. Для оценки динамики изменения интенсивности перекисного окисления липидов (ПОЛ) в гомогенате печени определяли содержание ТБК-активных продуктов (ТБКАП) [2]. Активность каталазы в сыворотке крови крыс определяли по методу [3]; исследование уровня восстановленного глутатиона проводили по методу [8]; содержание белка в гомогенатах печени определяли по методу [9]. Биохимическое исследование биологических жидкостей организма лабораторных животных проводили с помощью унифицированных методов с использованием диагностических наборов: «Вектор-Бест» (Россия) и «ЬасЬета» (Чехия). В отдельных случаях в соответствии с задачами применяли методы, изложенные в руководстве [4], а также использовали универсальные биохимические анализаторы.
Статистическую обработку данных проводили с использованием общепринятых методов. Для оценки степени достоверности полученных результатов использовали Ц-критерий Манна-Уитни [6]. Критический уровень значимости при проверке гипотез р = 0,05.
Результаты и обсуждение
В результате проведенных исследований установлено, что введение этанола белым крысам сопровождается накоплением в печени продуктов пероксида-ции липидов, повышением активности мембраносвязанных ферментов — аланинаминотрансферазы (АлТ) и аспартатаминотрасферазы (АсТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), содержания б-липопротеидов, общего билирубина и показателей тимоловой пробы, свидетельствующих о развитии цитолитического и холестатического синдромов и выраженности мезенхимально-воспалительной реакции в печени, что согласуется с данными.
На фоне курсового введения испытуемого средства животным наблюдалось снижение активности процесса ПОЛ: содержание ТБК-активных продуктов в гомогенате печени животных, получавших «гепатон», снижалось на 34 % по сравнению с данными у крыс контрольной группы, активность каталазы повышалась на 32 %, содержание восстановленного глутатиона в сыворотке крови повышалось на 50 % по сравнению с контролем (табл. 1). Под влиянием указанного фитосредства уменьшалась проницаемость клеточных мембран гепатоцитов, на что указывало снижение активности в сыворотке крови АлТ на 53 % и АсТ на 46 % по сравнению с контролем. Позитивное влияние «гепатон» оказывал на проявления холестатического синдрома и диспротеинемии. Так, у крыс, получавших данное средство, наблюдалось снижение активности ЩФ на 25 %, содержания (3-липопротеидов — на 31 %, концентрации билирубина — на 38 %, показателей тимоловой пробы — на 26 % по сравнению с соответствующими показателями у крыс контрольной группы (табл. 1).
Морфологическое исследование печени крыс контрольной группы, получавшей только 40 % этиловый спирт, показало, что повреждение печени сопровождается расширением синусных капилляров, изменением формы и сжатием печеночных балок. Междольковые сосуды, расположенные в портальных трактах, представлялись полнокровными, развивался «сладж-феномен» (слипание эритроцитов): при сниженной перфузии крови через сосуды микроциркуляторного русла происходило накопление гранул гемосидерина (местный гемосидероз при внесосудистом гемолизе в очагах диапедезных кровоизлияний). В ряде случаев отмечалась очаговая диском-
Таблица 1
Влияние гепатона на функциональное состояние печени крыс при остром этаноловом гепатите
Показатели Интактные животные Контрольная группа (этанол) Опытная группа (этанол+гепатон)
МДА, нмоль/г ткани 2,33±0,11 4,20±0,12 2,80±0,12*
АлТ, мкМ/мл-час 2,60±0,12 4,19±0,13 1,99±0,11"
АсТ, мкМ/мл-час 1,42±0,11 3,28±0,07 1,78±0,08*
Щелочная фосфатаза, мкмоль/л. ч 7,44±0,68 11,66±0,31 8,80±0,60*
Р-липопротеиды, ед 3,10±0,01 4,77±0,10 3,32±0,10*
Общий билирубин, мкМ/л 5,82±0,51 16,55±1,07 10,41±0,70*
Тимоловая проба, ед.помутн. 0,51±0,03 0,70±0,01 0,52±0,03*
Восстановленный глутатион, нмоль/мг белка 6,13± 0,22 3,54± 0,15 5,34± 0,11*
Каталаза, мкат/л 65,71± 4,23 48,45± 3,22 64,11± 5,12*
Примечание: " — разница достоверна по сравнению с контролем при р < 0,05
плексация балочного расположения гепатоцитов в дольке. Наряду с этим, регистрировалось развитие признаков белковой дистрофии гепатоцитов и накопление по всей площади печеночной дольки нейтральных липидов в виде крупных, средних и мелких капель. Отмечалось нарушение синтеза гликогена особенно в центре печеночных долек, незначительное содержание гликогена обнаруживалось только в клетках, расположенных по периферии долек печени. Также у крыс контрольной группы патоморфологические изменения характеризовались наличием в паренхиме органа многочисленных очагов лимфоидно-гистиоцитарных инфильтратов.
При курсовом назначении крысам «гепатона» в указанной дозе наблюдали снижение интенсивности лимфоидно-гистиоцитарной реакции, которая характеризовалась наличием единичных микроочаговых инфильтратов, практически не обнаруживались гепа-тоциты в состоянии некроза и некробиоза, выявля-
лись гипертрофированные и двуядерные гепатоциты, являющиеся показателями развития регенераторных процессов в печени.
Таким образом, при повреждении печени лабораторных животных 40 % этиловым спиртом установлено, что при курсовом назначении «гепатона» не возникают типичные для острого алкогольного гепатита патологические изменения — дископлекса-ция печеночных пластинок, полнокровие вокруг синусоидальных пространств, выраженная воспалительная инфильтрация. Значительно слабее выражены белковая и жировая дистрофия паренхимы, уменьшено количество гепатоцитов, находящихся в состоянии колликвационного некроза. Под влиянием терапии «гепатоном» нормализуются ультраструктура гепатоцитов и активность органеллоспецифических ферментов. Данное средство улучшает барьерную функцию мембран, препятствует развитию цитолиза гепатоцитов. По всей видимости гепатон потенцирует защитное действие эндогенных антиоксидантных систем, включается в реакции ПОЛ как прямой ингибитор свободных радикалов, а также поставляет антиоксиданты в поврежденные мембраны паренхимы печени. «Гепатон» препятствует истощению функции антиоксидантной системы печени, восстанавливает функциональную активность водорастворимой глутатионзависимой системы, активизирует конъюгацию свободнорадикальных веществ с восстановленным глутатионом. Также «гепатон» препятствует развитию синдрома холестаза при повреждении печени гепатотропным ядом.
Таким образом, «гепатон» при остром гепатите у крыс, вызванном введением 40 % этанола, оказывает гепатопротекторное действие. В основе фармако-терапевтической эффективности «гепатона» лежит его способность снижать содержание ТБК-активных продуктов в печени, стабилизировать фосфолипиды биологических мембран гепатоцитов, снижать выраженность мезенхимально-воспалительных реакций и предупреждать развитие признаков холестаза.
PHARMACOTERAPEUTIC EFFICIECY OF PLANT REMEDY «GEPATON» IN ALCOHOLIC DAMAGE OF LIVER
T.A. Azhunova, S.M. Gulyaev, G. V Chekhirova, S. V Lemza, S.M. Nikolaev (Institute of General and Experimental Biology SD RAS, Ulan-Ude)
It is established, that the complex plant remedy «Hepaton» has expressed hepatoprotective action in acute experimental alcoholic hepatitis. Remedy strengthens the protective action of endogenic antioxidative systems, interferes to development of cytolysis and cholestasis syndromes and reduces forces of mezenhymal-inflamative reactions in hepatocites.
ЛИТЕРАТУРА
1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. — М., 1990.
2. Колесова O.E., Маркин А.А., Федорова Т.Н. Перекисное окисление липидов и методы определения продуктов липоперокисдации в биологических средах // Лаб. дело. — 1984. — № 9. — С. 16-19.
3. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г. и др. Метод определения каталазы // Лаб. дело. — 1988. — № 1. — С. 16-19.
4. Меньшиков В.В., Делекторская Л.Н., Золотницкая Р.П. и др. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник /Под ред. В.В. Меньшикова. — М., 1987. — 368 с.
5. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. — М., 2000.
6. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. — М., 2001.
7. Сидоров К.К. Требования по доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических веществ. — М., 1973.
8. Beutler Е., Duron О., Kelly B.U. Improved method for the glutathione determination // J. Lab. Clin. Med. — 1963. — Vol. 61. — P. 882-890.
9. Lowry O.N., Roserbrougt N.J., Farr A.L., et al. Protein measurements with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. — 1951. — Vol. 193. — № 2. — P. 265-275.
