CC BY
38
УДК 615.32.-092:616.61
С.В. Лемза1, Т.А. Ажунова1, А.Г. Мондодоев1, С.М. Николаев1, Я.Г. Разуваева1, А.О. Занданов2
фармакотерапевтическая эффективность комплексного растительного средства «гепатон» при экспериментальном повреждении печени
1 Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН (Улан-Удэ) 2 Бурятский государственный университет (Улан-Удэ)
Установлено гепатозащитное действие растительного средства при экспериментальном гепатите. Показано, что растительное средство «гепатон» снижает, активность трансаминотраефераз, альдолазы, снижает, содержание билирубина в сыворотке крови. ключевые слова: «гепатон», экспериментальный гепатит, апоптоз
pHARMAcoTHERApEuTic EFFicAcY oF complex pLANT REMEDY «HEpATON» iN experimental liver injury
S.V. Lemza1, T.A. Azhunova1, A.G. Mondodoyev1, S.M. Nikolayev1, Ya.G. Razuvayeva1,
A.O. Zandanov2
11nstitute of general and experimental biology SB RAS, Ulan-Ude
2Buryat state university, Ulan-Ude
A hepatoprotective effect of the plant remedy has been established, in experimental hepatitis. It has been shown that «Hepaton» decreases transaminotransferase and aldolase activities, decreases the content of bilirubin in blood serum..
Key words: «Hepaton», experimental hepatitis, apoptosis
введение
В настоящее время в Российской Федерации болезни органов пищеварения занимают третье место по распространенности среди основных классов болезней сразу после болезней органов дыхания и системы кровообращения [2]. В связи с этим возрастает актуальность поиска новых лекарственных препаратов, обладающих гепато-защитными свойствами, в частности, фитопрепаратов, которые имеют широкий диапазон действия и обладают такими важными преимуществами, как малая токсичность, высокая эффективность, доступность, взаимозаменяемость и возможность длительного применения без побочных проявлений. При применении фитопрепаратов действует целый комплекс биологически активных веществ, которые, благодаря их оптимальному сочетанию, оказывают благотворное влияние на функциональное состояние всего организма в целом [1]. Преимущественная фармакотерапевтическая и профилактическая эффективность многокомпонентных средств обусловлена не только их воздействием на патологический процесс, но и их регулирующим влиянием на соответствующие функциональные системы, повышая устойчивость организма.
методика исследования
Исследовали фармакотерапевтическую эффективность комплексного гепатозащитного растительного средства при экспериментальном токсическом гепатите у белых крыс. В состав «гепа-тона» (условное название) входят сухие экстракты 7 видов растительного сырья: плодов шиповника
(Rosa L.) — 30 ч., листьев мяты перечной (Metha piperita L.) — 10 ч., цветков ромашки аптечной (Matricaria chamomilla L.) — 10 ч., плодов боярышника кроваво-красного (Crataegus sanguinea Pall.) — 20 ч., корней солодки голой (Glycyrrhisa glabra L.) — 10 ч., травы зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.) — 10 ч., корней и корневищ девясила высокого (Inula helenium L.) — 10 ч.
Исследования выполнены на 54 белых крысах линии Wistar обоего пола массой 160—170 г, которых содержали в условиях естественного светового режима и на стандартной диете при свободном доступе к воде и пище в соответствии с правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей.
Острое повреждение печени вызывали путем подкожного введения 50% масляного раствора тетрахлорметана 1 раз в сутки в течение 4 дней. «Гепатон» вводили крысам 1 раз в сутки внутри-желудочно в установленной экспериментальнотерапевтической дозе 50 мг/кг в форме водного раствора в объеме 10 мл/кг в течение всего эксперимента. Крысы контрольной группы по аналогичной схеме в соответствующем объеме получали дистиллированную воду. Исследования проводили через 7, 14 и 21 сутки от начала введения гепатотропного токсина (CCl4). На гистологических препаратах печени подсчитывали количество не-кротизированных гепатоцитов и определяли степень жировой дистрофии. Для оценки динамики изменения интенсивности перекисного окисления липидов (ПОЛ) в гомогенате печени определяли
ствии с задачами применяли методы, изложенные в руководстве [5].
Статистическую обработку данных проводили общепринятыми методами с использованием пакета программ «Биостат-6». Для оценки уровня значимости полученных результатов использовали и-критерий Манна-Уитни и ^критерий Стьюдента. Различия считались достоверными при Р < 0,05.
результаты
В таблице 1 приведены данные о влиянии «ге-патона» на биохимические показатели сыворотки крови и содержание гликогена в печени крыс при остром тетрахлорметановом гепатите. Как сле-
Таблица 1
Влияние «гепатона» на биохимические показатели сыворотки крови и содержание гликогена в печени крыс
при остром тетрахлорметановом гепатите
Показатели Группы животных
Интактная Контрольная (тетрахлорметан) Опытная (тетрахлорметан + «гепатон»)
7-е сутки
АлТ (мкм/мл/ч) 1,81 ± 0,18 3,91 ± 0,24 2,68 ± 0,18*
АсТ (мкм/мл/ч) 1,29 ± 0,03 1,74 ± 0,09 1,05 ± 0,06*
ЩФ (ед. Бод.) 13,5 ± 1,29 17,20 ± 0,15 13,70 ± 0,58*
Альдолаза (мкм/мл/ч) 0,24 ± 0,01 0,58 ± 0,05 0,37 ± 0,01*
Общий белок (г/л) 7,50 ± 0,24 6,42 ± 0,12 6,80 ± 0,25
Тимоловая проба (ед.) 0,60 ± 0,03 0,90 ± 0,07 0,59 ± 0,05*
р-липопротеиды (ед.) 3,12 ± 0,54 6,12 ± 0,50 5,44 ± 0,23
Билирубин общ. (мкм/л) 5,04 ± 0,45 9,51 ± 0,14 10,40 ± 0,11
Гликоген (мг%) 1858 ± 40 692 ± 20 940 ± 13*
14-е сутки
АлТ (мкм/мл/ч) 1,81 ± 0,18 3,23 ± 0,18 2,13 ± 0,20*
АсТ (мкм/мл/ч) 1,29 ± 0,03 1,45 ± 0,11 1,15 ± 0,09
ЩФ (ед. Бод.) 13,50 ± 1,29 27,33 ± 1,04 17,24 ± 1,17*
Альдолаза (мкм/мл/ч) 0,24 ± 0,01 0,41 ± 0,03 0,27 ± 0,01*
Общий белок (г/л) 7,50 ± 0,24 6,34 ± 0,08 6,81 ± 0,17
Тимоловая проба (ед.) 0,60 ± 0,03 0,80 ± 0,03 0,67 ± 0,01*
р-липопротеиды (ед.) 3,12 ± 0,54 6,20 ± 0,50 4,42 ± 0,23*
Билирубин общ. (мкм/л) 5,04 ± 0,45 4,91 ± 0,16 2,73 ± 0,10*
Гликоген (мг%) 1858 ± 40 969 ± 41 1780 ± 10*
21-е сутки
АлТ (мкм/мл/ч) 1,81 ± 0,18 2,53 ± 0,18 1,90 ± 0,18
АсТ (мкм/мл/ч) 1,29 ± 0,03 1,25 ± 0,14 1,18 ± 0,02
ЩФ (ед. Бод.) 13,50 ± 1,29 17,08 ± 1,20 13,22 ± 0,85
Альдолаза (мкм/мл/ч) 0,24 ± 0,01 0,35 ± 0,04 0,22 ± 0,02
Общий белок (г/л) 7,50 ± 0,24 7,52 ± 0,15 7,33 ± 0,30
Тимоловая проба (ед.) 0,60 ± 0,03 0,78 ± 0,08 0,54 ± 0,05*
р-липопротеиды (ед.) 3,12 ± 0,54 5,78 ± 0,14 3,60 ± 0,12*
Билирубин общ. (мкм/л) 5,04 ± 0,45 8,93 ± 0,09 6,00 ± 0,60*
Гликоген (мг%) 1858 ± 40 1729± 79 1911 ±123
Примечание: * - здесь и далее различия достоверны по сравнению с контролем при Р < 0,05.
содержание ТБК-активных продуктов (ТБКАП) [6]. Активность каталазы в сыворотке крови крыс определяли по методу [3]. Определение уровня восстановленного глутатиона проводили по методу [4]. Активность каспазы-3, как показателя интенсивности апоптотического процесса, определяли согласно методическим рекомендациям Caspase-3 Assay Kit (Sigma). Биохимическое исследование биологических жидкостей организма лабораторных животных выполняли с помощью унифицированных методов с использованием диагностических наборов «Вектор-Бест» (Россия) и «Lachema» (Чехия). В отдельных случаях в соответ-
дует из таблицы, курсовое введение животным «гепатона» в дозе 50 мг/кг на фоне острого тетрах-лорметанового гепатита оказывало выраженное гепатопротекторное действие, уменьшая выраженность функциональной состоятельности печени животных. Например, на 7 сутки эксперимента у животных, получавших испытуемое средство, отмечалось достоверное снижение активности ами-нотрансфераз (АлТ, АсТ) и альдолазы, уменьшались показатели тимоловой пробы, а также отмечалось повышение содержания гликогена в печени на 35 % по сравнению с показателями у крыс контрольной группы.
Из таблицы 2 следует, что на фоне курсового введения испытуемого средства скорость элиминации бромсульфалеина (БСФ) с желчью и антипирина с кровью возрастала соответственно на 23 и 27 %, по сравнению с показателями у крыс контрольной группы, а также сокращалась продолжительность гексеналового сна, что может косвенно свидетельствовать о повышении активности ферментов монооксигеназной системы печени.
Как следует из таблицы 3, курсовое введение «гепатона» оказывало выраженное антиоксидант-ное действие, уменьшая интенсивность процессов
ПОЛ и повышая активность антиоксидантной системы организма.
При патоморфометрическом исследовании печени установлено, что у крыс опытной группы, получавших «гепатон», число гепатоцитов с признаками дистрофии и некроза было достоверно снижено по сравнению с контролем. При введении животным «гепатона» наблюдались менее выраженные структурные изменения, в частности, практически не обнаруживали нарушения микроциркуляции, а синусоиды представляются умеренно расширенными; только единичные гепатоциты были подвержены некротическим и некробиотическим процессам, которые локально располагались в паренхиме органа. В печени животных опытной группы практически отсутствуют дистрофические изменения, выявляется слабо выраженная клеточная инфильтрация в зоне портальных трактов; происходит увеличение количества двуядерных и гипертрофированных гепатоцитов, что свидетельствует о стимуляции репаративных процессов в печени животных, получавших исследуемое средство.
Активность каспазы-3 определяли колориметрическим методом согласно рекомендациям к
Таблица 2
Влияние «гепатона» на экскреторно-поглотительную и детоксицирующую функции печени крыс при остром
токсическом гепатите (СС14) (7-е сутки)
Группы животных Период полувыведения антипирина (%) Период полувыведения БСФ (%) Продолжительность гексеналового сна (мин)
Интактная 100 100 20,5 ± 2,60
Контрольная (С^4) 149 154 38,6 ± 3,09
Опытная (С^4 + «гепатон») 110 120 27,3 ± 1,76*
Таблица 3
Влияние «гепатона» на содержание продуктов перекисного окисления липидов и состояние эндогенной антиокислительной системы у крыс при остром тетрахлорметановом гепатите (7-е сутки)
Показатели Группы животных
Интактная Контрольная (тетрахлорметан) Опытная (тетрахлорметан + «гепатон»)
МДА в гомогенате печени (нмоль/г) 0,32 ± 0,02 0,76 ± 0,05 0,53 ± 0,04*
МДА в сыворотке крови (мкм/мл/мин) 2,11 ± 0,16 5,70 ± 0,36 3,05 ± 0,15*
МДА в желчи (ед. ОП) 1,08 ± 0,01 1,92 ± 0,19 1,25 ± 0,11*
СОД (мкм/л) 8,69 ± 0,58 5,12 ± 0,41 7,15 ± 0,33*
Каталаза (мкат/л) 1,40 ± 0,11 1,05 ± 0,25 1,93 ± 0,25*
ВГ (мм/л) 24,32 ± 2,40 15,55 ± 1,95 25,52 ± 2,40*
Таблица 4
Влияние «гепатона» на активность каспазы-3 в клетках печени крыс при тетрахлорметановом гепатите
Группы животных Активность каспазы-3, пмоль/мин/мг белка
1 час 4 часа 12 часов 24 часа
Интактная 16,68 ± 3,56
Контрольная (С^4) 15,23 ± 1,27 28,69 ± 4,15 38,42 ± 1,39 38,98 ± 3,03
Контрольная + ингибитор 8,94 ± 1,53* 22,19 ± 5,41 21,60 ± 3,91* 23,65 ± 1,46*
Опытная (С^4 + «Гепатон») 7,24 ± 1,59* 29,51 ± 3,76 39,87 ± 3,53 33,75 ± 2,40
набору реактивов Caspase-3 Assay Kit в гомогенате печени крыс через 1, 4, 12 и 24 часа после введения четыреххлористого углерода. Из таблицы следует, что через 1 час после введения тетрахлорметана активность фермента статистически не отличалась от данных у животных интактной группы (15,23 ± 1,27 и 16,68 ± 3,56 соответственно). Возможно, тетрах-лорметан еще не оказывал своего токсического действия на клетки печени. Через 4 часа активность каспазы-3 в клетках печени возрастала до 28,69 ± 4,15 ед. активности, и к 12 часу вышла на плато (38,42 ± 1,39), в 2,3 раза превышая активность фермента у интактных животных. Введение «гепа-тона» в экспериментально-терапевтической дозе 5O мг/кг не оказывало ингибирующего действия на активность каспазы-3. Возможно, это связано с тем, что тетрахлорметан главным образом вызывает ранний и выраженный некроз гепатоцитов и только отчасти их апоптоз, переходящий во вторичный некротический процесс [7].
заключение
В результате проведенных экспериментов было установлено, что курсовое введение «ге-патона» приводило к нормализации структуры печени, снижению количества гепатоцитов, подверженных жировой и белковой дистрофии, повышению содержания гликогена в гепатоцитах. Отмечалось снижение интенсивности лимфоидно-гистиоцитарной реакции (единичные микроочажки инфильтратов), отсутствовали гепатоциты в состоянии некроза и некробиоза, увеличивалось количество гипертрофированных и двуядерных гепатоцитов, что указывает на активацию регенераторных процессов.
Учитывая, что гепатотоксичность тетрахлор-метана во многом обусловлена активацией процессов ПОЛ в мембранных структурах печени, можно утверждать, что основным механизмом действия «гепатона» является его антиоксидантная
Сведения об авторах
и мембраностабилизирующая активность, а также повышением под его влиянием активности эндогенной антиоксидантной системы. Особенностью фармакотерапевтической эффективности «гепатона» является предупреждение развития синдрома холестаза и жировой дистрофии органа, а также предохранение гепатоцитов от некроза и некробиоза. Наряду с этим, «гепатон» активно стимулирует регенераторные процессы в печени, что также обеспечивает указанному растительному средству высокий фармакотерапевтический эффект.
литература
1. Апросина З.Г. Хронические вирусные заболевания печени / З.Г. Апросина // Тер. архив. — 1995. - № 5. - С. 77-80.
2. Комбинированная терапия хронического вирусного гепатита В и ее влияние на качество жизни / Т.В. Сологуб [и др.] // Вестн. СПб. Гос. мед. академии. — 2006. — № 1. — С. 7-14.
3. Метод определения активности каталазы / М.А. Королюк [и др.] // Лаб. дело. - 1988. -№ 6. - С. 16-19.
4. Применение специфических ферментных биотест-систем in vitro для выявления целевой биологической активности фармакологически активных веществ / М.С. Бродова [и др.] // Биомед. технол. и радиоэлектр. - 2004. - № 1-2. - С. 24-30.
5. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2005. - 832 с.
6. Темирбулатов Р.А. Метод повышения интенсивности свободнорадикального окисления липидсодержащих компонентов крови и его диагностическое значение / Р.А. Темирбулатов, Е.И. Селезнев // Лаб. дело. - 1981. - № 4. - С. 209-211.
7. Evaluation of oxidative stress during apoptosis and necrosis caused by D-galactosamine in rat liver / F. Sun [et al.] // Biochemical Pharmacology. -2003. - Vol. 65. - P. 101-107.
Лемза Сергей Васильевич - к.б.н., с.н.с. лаборатории экспериментальной фармакологии (ЛЭФ) Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (670047, г Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6)
Ажунова Татьяна Александровна - д.б.н., в.н.с. ЛЭФ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН Мондодоев Александр Гаврилович - к.м.н., с.н.с. лаборатории экспериментальной фармакологии (ЛЭФ) Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (670047 Улан-Удэ, ул. Столбовая 60, кв. 113)
Николаев Сергей Матвеевич - д.м.н., профессор, руководитель ЛЭФ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН
РазуваеваЯнина Геннадьевна - Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН (670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, д. 6. Тел.: (3012)434225. E-mail: [email protected])
Занданов Александр Октябрьевич - декан медицинского факультета БГУ, к.м.н., доцент, заслуженный врач РФ и РБ, зам. министра здравоохранения РБ
