Фармакотерапевтическая эффективность комплексного растительного средства диабефит при экспериментальном хроническом панкреатите Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА И БИОЛОГИЯ

УДК: 615.322.245.03:616.37-002-085

© Я.Г. Разуваева, Т. А. Ажунова, С.М. Николаев, А. А. Маркарян, О.В. Юндунова, 2009

Я.Г. Разуваева1, Т.А. Ажунова1, С.М. Николаев1, А.А. Маркарян2, О.В. Юндунова3 ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОМПЛЕКСНОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА ДИАБЕФИТ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ХРОНИЧЕСКОМ ПАНКРЕАТИТЕ

1 Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН 2Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова, г. Москва 3Бурятский государственный университет, г. Улан-Удэ

Установлено, что комплексное растительное средство диабефит оказывает выраженное панкреатопротекторное влияние при экспериментальном хроническом панкреатите благодаря снижению активности панкреатических ферментов, ингибированию процессов ПОЛ, повышению активности эндогенной антиокислительной защиты и ограничению некроза панкреацитов и фиброза в паренхиме органа.

Ключевые слова: хронический панкреатит, комплексное растительное средство диабефит.

Ya.G. Razuvaeva, T.A. Azhunova, S.M. Nicolaev, A.A. Markaryan, O.V. Yundunova

PHARMACOTERAPEUTIC EFFECTIVENESS OF COMPLEX PHYTOREMEDY DIABEPHYT® ON EXPERIMENTAL CHRONIC PANCREATITIS

It is established, that complex phytoremedy diabephyt® renders expressed pancreoprotective influence at exterimental chronic pancreatitis, reducing activity of pancreatic enzymes, inhibits peroxidative oxidation of lipids, suscitate of endogenic antioxidant protection, prevent necrosis of pancreacytis and fibrogenesis on organ’s parenchyma.

Key words: chronic pancreatitis, complex phytoremedy diabephyt®

Хронический панкреатит (ХП) занимает ведущее место среди наиболее тяжелых патологий панкреатогастродуоденальной зоны. Повышение заболеваемости данной нозологической формой, отмечаемое в последние десятилетия, обусловлено прежде всего ростом алкоголизма, ожирения, увеличением частоты и тяжести патологий со стороны желудочно-кишечного тракта [1,4,5,10].

Актуальность применения фитотерапевтических средств при ХП обусловлена характером течения клинической картины заболевания - длительное, затяжное течение с периодами относительного затихания и повышения активности воспалительных реакций [1,5,10]. Так, лекарственные средства растительного происхождения, применяемые наряду с химиотерапевтическими препаратами в периоды обострений, в фазе ремиссии заболевания являются самостоятельным методом лечения [8]. Вместе с тем арсенал панкреато-протекторных фитопрепаратов на современном рынке лекарственных средств ограничен. В этой связи необходимыми представляются продолжение поиска, изучение и внедрение новых эффективных и безопасных препаратов на основе лекарственных растений.

В связи с вышеизложенным разработано новое многокомпонентное растительное средство, условно названное диабефит, на основе сухих экстрактов: Vaccinium myrtillus L., Polygonum aviculare L., Urtica dioica L., Inula helenium L., Salix caprea L.- в соотношениях 3 : 2 : 2 :2 : 1 [6].

Целью настоящего исследования явилось определение фармакотерапевтической эффективности многокомпонентного растительного средства диабефит при экспериментальном хроническом панкреатите.

Материал и методы

Исследования выполнены на 30 белых крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой тела 160-200 г. Экспериментальный хронический панкреатит (ЭХП) вызывали путем сочетанного повреждения поджелудочной железы (ПЖ) этанолом и аллоксаном. Этанол в виде 40 % раствора в объеме 7 мл/кг массы животного вводили внутрижелудочно и аллоксан в дозе 55 мг/кг внутрибрюшинно 1 раз в сутки в течение 90 дней. Выбор этанола для воспроизведения ХП был обоснован тем, что спирт этиловый является не только стимулятором панкреатической секреции, но приводит к дуодениту большого дуоденального сосочка и создает затруднения оттоку панкреа-

тического секрета и желчи. Кроме того, алкоголь оказывает как прямое цитотоксическое действие на экзокринную часть поджелудочной железы, так и опосредованное за счет стимуляции внешней секреции панкреацитов, изменяя, при этом качественный состав секрета, за счет чего развивается алкогольный панкреатит. Также, изменяя активность анти-окислительных ферментов, алкоголь инициирует образование свободных радикалов, которые вызывают некроз и воспаление ткани ПЖ. Все вышеперечисленные патогенетические механизмы приводят к замещению эк-зокринной части паренхимы ПЖ соединительной тканью, завершающейся фиброзом [5,

10]. Наряду с этим аллоксан, обладая тропно-стью к островковому аппарату ПЖ, вызывает образование свободных радикалов и перекисей. Таким образом, сочетанное повреждение поджелудочной железы этанолом и аллоксаном, на наш взгляд, позволит воспроизвести кананикулярно - гипертензионную модель хронического панкреатита.

Диабефит в дозе 300 мг/кг в форме водного раствора в объеме 10 мл/кг вводили животным опытной группы внутрижелудочно 1 раз в сутки в течение всего эксперимента. Животные контрольной группы получали воду очищенную в соответствующем объеме по аналогичной схеме. Определение фармакоте-рапевтической эффективности указанного средства при повреждении поджелудочной железы проводили через 90 суток.

Активность панкреатических ферментов а-амилазы и липазы в сыворотке крови животных определяли колориметрическим методом с помощью стандартных наборов реактивов Био-Ла-Тест «Лахема» (Чехия). Для патоморфологических исследований ПЖ крыс фиксировали в 10 % нейтральном формалине, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в целлоидин-парафин. Гистологические срезы ПЖ окрашивали гематоксилин-эозином, а также по Массону и ван Ги-зону. Морфометрические исследования ПЖ проводили с использованием компьютерной программы «Motic Image 2000». На микропрепаратах железы подсчитывали количество панкреацитов в ацинусе, определяли площади некротизированных участков и разрастания соединительной ткани.

Интенсивность перекисного окисления липидов (ПОЛ) определяли по содержанию малонового диальдегида (МДА) [2]. Состояние эндогенной антиоксидантной системы организма оценивали по активности каталазы в гомогенате ПЖ [3].

Значимость различий между указанными параметрами в опытной и контрольной группах оценивали с помощью непараметрического критерия Манна - Уитни. Различия считались существенными при Р < 0,05 [7].

Результаты и их обсуждение

Результаты исследований показали, что сочетанное введение животным этанола и аллоксана вызывает развитие ХП, о чем свидетельствовало повышение через 90 суток эксперимента активности а-амилазы и липазы в сыворотке крови у животных контрольной группы в 5,7 и 4,1 раза соответственно по сравнению с данными у животных интактной группы (табл. 1). Установлено, что течение ХП сопровождается индукцией ПОЛ и угнетением антиокислительной системы организма (табл. 1). Так, у животных контрольной группы концентрация МДА повышалась в 3,6 раза, активность каталазы снижалась в 1,6 раза в гомогенате ПЖ по сравнению с таковыми показателями у животных интактной группы. При патоморфологическом исследовании у животных контрольной группы в ПЖ наблюдали изменения разной степени: при легкой степени преобладали деструктивнонекротические процессы в панкреацитах, отмечались явления кариоцитолиза и кариоли-зиса, при этом сохранялась ацинарная структура органа, но отдельные ацинусы теряли характерную для них округлую форму. При умеренной степени повреждения ПЖ находили участки некрозов значительной ее части. В области расположения триад наблюдали разрастание соединительной ткани, которая, проникая вглубь органа, замещала некротизи-рованные ацинусы. При выраженных изменениях паренхимы данного органа обнаруживали некротизированные участки, занимающие большую часть долек. Основная часть пан-креацитов была полностью разрушенной и замещалась постнекротическим интралобу-лярным фиброзом. Более выраженное разрастание фиброзной ткани обнаруживали по ходу сосудов и выводных протоков. В паренхиме органа наблюдали разрастание жировой ткани.

Таблица 1.

Влияние диабефита на активность панкреатических ферментов, показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы организма у белых крыс при экспериментальном пан-

креатите

Показатели Группы животных (n = 10)

Интактная Контр-я Опытная

Амилаза, мг/с^л 11,87±1,79 67,40±5,38 38,19±3,51 *

Липаза, мг/с^л 15,27±1,27 62,78±4,57 33,64±2,75*

МДА, мкмоль/мл^мин 2,37±0,15 8,64±7,32 2,59±0,21*

Каталаза, мкат/ мл^мин 45,23±3,72 27,10±2,41 36,15±2,84*

* Здесь и далее разница достоверна по сравнению с контролем при Р<0,05.

Курсовое введение животным диабефи-та в экспериментально-терапевтической дозе сопровождалось выраженным панкреатопро-текторным влиянием, о чем свидетельствовали менее выраженные гиперамилаземия (на 43 %) и гиперлипаземия (на 46 %) по сравнению с данными у животных контрольной группы (табл. 1). На фоне введения крысам диабефита в указанной дозе концентрация МДА в гомогенате ПЖ снижалась на 70%, а активность каталазы повышалась на 25 % по сравнению с таковыми показателями у животных контрольной группы (р < 0,05). Патоморфологические исследования показали, что у животных опытной группы структурные изменения в ПЖ проявляются в легкой и умеренной степени. Так, в ткани ПЖ наблюдали небольшие очаговые некротические изменения ацинусов и незначительную вакуолизацию паренхимы, отек внутридолькового и междолькового ин-терстициев, умеренное разрастание соединительной ткани, которая располагалась по ходу сосудов и практически не проникала вглубь паренхимы.

Морфометрические исследования свидетельствовали (табл. 2), что на фоне введения крысам диабефита в ПЖ площадь некро-тизированной ткани была уменьшена на 40 %, а площадь разрастания соединительной ткани

- на 51 % по сравнению с данными у животных контрольной группы. При курсовом введении животным диабефита у большинства панкреацитов в ацинусах четко просматривалась апикальная зона, содержащая оксифиль-ную зернистость, и базальная, содержащая ядро. У животных опытной группы в ПЖ количество таких панкреацитов на 32%, чем та-

кового у животных контрольной группы (табл. 2).

Таблица 2.

Влияние диабефита на морфометрические показатели поджелудочной железы при экспериментальном панкреатите у белых ___________________________крыс___________________________

Показатели Группы животных (n=10)

Контрольная Опытная

Количество папкреаци-тов в ацинусе 4,74±0,363 7,67±0,610*

Площадь пекроза, мм2 0,1135±0,0124 0,0682±0,0081*

Площадь фиброза, мм2 0,1018±0,0135 0,0497±0,0071*

Таким образом, диабефит, проявляет выраженные панкреатозащитные свойства при экспериментальном панкреатите, ограничивая развитие некротических изменений в паренхиме органа и разрастание соединительной ткани. Основой в механизме фармакоте-рапевтического влияния диабефита является установленное его антирадикальное действие, в результате чего снижается проницаемость биологических мембран, восстанавливается их структурная и функциональная целостность, повышается активность эндогенной антиоксидантной защиты организма, нормализуется морфофункциональное состояние поджелудочной железы. По всей видимости, широта терапевтического действия и выраженная фармакотерапевтическая эффективность диабефита обусловлены спектром содержащихся в нем биологически активных веществ, прежде всего флавоноидов, органических кислот, полисахаридов, аминокислот, витаминов, макро- и микроэлементов и др. [7]. Полученные данные позволяют рекомендовать диабефит как эффективное растительное средство для комплексной терапии и профилактики воспалительных заболеваний поджелудочной железы.

Сведения об авторах статьи Ажунова Т.А. - д.б.н., в.п.с. ЛЭФ ИОЭБ СО РАН

Николаев С.М. - д.м.п., проф., зав. отделом биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии (ИЩЭБ) СО РАН, e-mail: ggnikl@mail.ru

Маркарян А.А. - д.фарм.н., профессор, зав.кафедрой фармации с курсом социальной фармации ФППО, ММА им.

И.М.Сеченова, г. Москва, е-mail: Markaryan@regmed.ru Разуваева Я.Г. - к.б.н., научный сотрудник ЛББАВ ИОЭБ СО РАН

ЛИТЕРАТУРА

1. Буклис Э.Р., Ивашкин В.Т. Хронический панкреатит: этиология, патофизиология и консервативная терапия // Российский журнал гастроэнтеролологии, гепатологии и колопроктологии.

- 2006. - Т. 16, № 6. - С. 79 - 86.

2. Владимиров Ю.В., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. - М., 1972. - 252 с.

3. Королюк М.А. Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.Е. Метод определения активности каталазы // Лабораторное дело. - 1988. - №1. - С.16-19.

4. Минушкин О.Н. Хронический панкреатит: эпидемиология, этиология, классификация // Фарматека. - 2007. - № 2. - С.53-57.

5. Нестеренко Ю.А., Глабай В.П., Шаповальянц С.Г. Хронический панкреатит. - М.: Медицина, 2000. - 346с.

6. Петров Е.В., Занабадарова З.М., Арьяева М.М., Асеева Т.А. Способ получения средства, обладающего гипоклигемической активностью: Патент РФ № 2141841. - 1999.

7. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. -М., 2001. - 256с.

8. Соколов С.Я. Фитотерапия и фитофармакология. - М., 2000.- 976 с.

9. Хазанов А.И. Современные проблемы острого и хронического панкреатита // Российские медицинские вести. - 2000. - Т.6, №2. - С.58-63.

10.Natalia J., Herbert A., Bar-Sagi D. СИгошс pancreatitis, pancreatic adenocarcinoma and the black box inbetween // Cell Res. - 2005. - Vol.15. - № 1. - С. 72 - 77.

УДК: 615.322.252.349.03:616.379-008.64-085 © Т.А. Ажунова, С.М. Николаев, А.А. Маркарян, С.В. Лемза, 2009

Т.А. Ажунова1, С.М. Николаев1, А.А. Маркарян2, С.В. Лемза3 ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОМПЛЕКСНОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ДИАБЕТЕ

1 Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН,

Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова, г. Москва,

3Бурятский государственный институт, г. Улан-Удэ;

Установлено выраженное гипогликемическое, антиоксидантное, панкреозащитное действие комплексного растительного средства при экспериментальном аллоксановом диабете. Разработанное растительное средство «диабефит» может быть использовано в комплексной терапии сахарного диабета 2 типа.

Ключевые слова: сахарный диабет, «диабефит», аллоксан, иммунореактивный инсулин, С-пептид, гипогликемическое действие.

T.A.Azhunova, S.M.Nikolaev, A.A.Markaryan, S.V.Lemza PHARMACOTHERAPEUTIC EFFICACY OF MULTICOMPONENT PLANT MEDICINE IN EXPERIMENTAL DIABETES MELLITUS

Pronounced hypoglycemic, antioxidant and pancreaprotective effect of multicomponent plant medicine in experimental alloxan diabetes has been established. It can be used in complex therapy of diabetes mellitus type II.

Key words: diabetes mellitus, “diabephyte”, alloxan, immunoreactive insulin, C-peptide, hypoglycemic effect.

Заболевание сахарным диабетом является одним из наиболее серьезных в современной эндокринологии. Распространенность заболевания среди населения различных стран и этнических групп составляет 2-3 %; у детей и подростков колеблется от 0,1 до 0,3 %. С учетом недиагностированных форм распространенность его в отдельных странах достигает 6 %. К настоящему времени на земном шаре сахарным диабетом страдает более 60 млн. человек [5; 7; 9].Ежегодно количество вновь диагностированных случаев составляет 6-10 % по отношению к общему числу больных, что предполагает удвоение популяции больных сахарным диабетом каждые 10-15 лет [6]. В экономически развитых странах сахарный диабет стал не только медицинской, но и социальной проблемой.

Рост заболеваемости сахарным диабетом, ранняя инвалидизация больных, высокая летальность при этой патологии требуют эф-

фективной организации лечебного процесса и профилактики заболевания.

В последние десятилетия возрос интерес диабетологов всего мира к изучению фармакологических свойств лекарственных растений. Накопился обширный фактический материал о благоприятном влиянии различных лекарственных растений и сборов в лечении и профилактике сахарного диабета [1;

11]. Растительные лекарственные средства, благодаря широкому набору биологически активных веществ, оказывают благоприятное влияние не только на углеводный обмен, но и на липидный обмен, регулируют водный баланс, нормализуют функциональную деятельность почек и печени, повышают адаптивные возможности организма в условиях экологического стресса. Возможность поддерживать состояние длительной компенсации при использовании лекарственных средств растительного происхождения позволяет больным избегать частого и длительного стационарно-