Фармакологическое исследование мази с экстрактом сухим рододендрона золотистого Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

лекарственные растения

© ЦЫРЕНЖАПОВ A.B., МУРАШКИНА И.А., МИРОВИЧ В.М., ГОЛЬДБЕРГ O.A., ВАСИЛЬЕВ И.Б. - 2015 УДК 615.03; 615.1/.3

фармакологическое исследование мази с экстрактом сухим рододендрона золотистого

Арсэн Владимирович Цыренжапов1, Ирина Анатольевна Мурашкина2, Вера Михайловна Мирович2, Олег Аронович Гольдберг1, Игорь Борисович Васильев2 ('Иркутский научный центр хирургии и травматологии, директор - чл.-корр. РАН, д.м.н., проф. Е.Г. Григорьев, научно-лабораторный отдел, зав. - д.м.н., проф. М.Г. Шурыгин; 2Иркутский государственный медицинский университет, ректор - д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра фармакогнозии и ботаники, зав. - д.ф.н. В.М. Мирович)

Резюме. Проведено фармакологическое исследование дерматологической мази, содержащей 10% экстракта сухого, полученного из побегов рододендрона золотистого (Rhododendron aureum Georgi) экстракцией водой очищенной. Исследование проведено на модели инфицированной раны с использованием штамма Staphylococcus aureus на белых крысах обоего пола линии Wistar. Результаты свидетельствуют, что мазь с сухим экстрактом побегов рододендрона золотистого увеличивает прочность послеоперационного рубца на 14 сутки в 4,1 раза в сравнении с контрольной группой и на 12,9% при использовании мази «Календула». Установлено ранозаживляющее, антимикробное и репаративное действие исследуемой мази, не уступающее по активности мази «Календула».

Ключевые слова: рододендрон золотистый, мазь, сухой экстракт, ранозаживляющее действие.

pharmacological study of the ointment with the dry extract of rhododendron

A.V. Tsyrenzhapov1,1.A. Murashkina2, V.M. Mirovich2, O.A. Goldberg1,1.B. Vasilyev2 ('Irkutsk Scientific Center of Surgery and Traumatology; 2Irkutsk State Medical University, Russia)

Summary. Conducted pharmacological investigation of dermatological ointments containing 10% dry extract obtained from shoots of Rhododendron aureum extraction with purified water. The study was conducted on the model of infected wounds using Staphylococcus aureus on white rats of both sexes of Wistar. The results show that the ointment with a dry extract of the shoots of rhododendron 4,1 times increases the strength of postoperative scar on 14 day, compared with the control group and 12,9% when using the ointment «Calendula». It has been established the wound healing, antimicrobial and reparative action of investigated ointment, similar the activity of ointment «Calendula».

Key words: Rhododendron aureum, ointment, dry extract, wound healing effect.

Снижение эффективности антибиотикотерапии, интенсивный рост количества послеоперационных осложнений ран, развитие аллергических реакций на лекарственные препараты и продолжительное лечение обусловливают необходимость создания новых эффективных лекарственных средств для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний кожи и раневого процесса [1].

Ассортимент наружных лекарственных форм, ускоряющих заживление ран, представлен преимущественно монопрепаратами синтетического происхождения в форме мази или крема. По данным Государственного Реестра лекарственных средств ассортимент растительных средств данной группы ограничен. Отечественной промышленностью выпускается 10% мазь «Календула» (Россия), оказывающая местное противовоспалительное, антимикробное и репа-ративное действие [3]. Мазь гомеопатическая «Цикадерма» (Франция), содержит извлечения и свежий сок календулы лекарственной, зверобоя продырявленного, тысячелистника, багульника болотного, прострела и обладает противовоспалительным и регенерирующим ткани действием. Мазь «Турманидзе» (Грузия) обладает противовоспалительным, обезболивающим и антисептическим действием, способствует очищению ран от некротических масс, стимулирует процесс регенерации тканей. В состав мази входят компоненты растительного происхождения, названия которых производитель не раскрывает [3].

Проблема импортозамещения лекарственных средств на современном этапе является первоочередной задачей, и в том числе, разработка отечественных растительных средств наружного применения с противовоспалительным, антимикробным и репаративным действием [5].

Перспективна разработка наружных лекарственных средств на основе биологически активных веществ растения Восточной Сибири рододендрона золотистого (Rhododendron aureum Georgi). Надземные органы рододендрона золотистого содержат простые фенольные соединения - 5-метокси-1,3-дигидроксибензол, этил-0-р-Э-глюкопиранозид, родо-дендрин, рододендрол; флавоноиды - кверцетин, гиперозид;

дубильные вещества, тритерпеновые соединения - кампану-лин, тараксерон, тараксерол [4,7].

Предварительные фармакологические исследования показали противовоспалительное, антиоксидантное и антимикробное действие (в отношении золотистого стафилококка) водных и водно-спиртовых извлечений надземных органов рододендрона золотистого [2]. На кафедре технологии лекарственных форм ИГМУ получен экстракт сухой из побегов рододендрона золотистого и разработан состав мази на его основе [6].

Целью работы является исследование ранозаживляюще-го, репаративного и антимикробного действия мази с экстрактом сухим из побегов рододендрона золотистого.

Материалы и методы

Для исследования была приготовлена дерматологическая мазь следующего состава: экстракта сухого рододендрона золотистого (ЭСРЗ) - 10,0 г; воды очищенной 27,0 мл; вазелина 54,0 г; эмульгатора Т-2 - 9,0 г.

Ранозаживляющее действие изучали на модели инфицированной раны, вызванного введением лабораторного штамма Staphylococcus aureus. Опыты проведены на 30 белых крысах, массой 200-230 г, обоего пола линии Wistar. Животных содержали в стандартных условиях в соответствии с правилами, утверждёнными Приказом Минздрава СССР от 10.10.1983 г. №1179 и в соответствии с директивой Совета ЕС от 24.11.1986 г. по вопросам защиты животных, используемых для экспериментальных и других научных целей. Животные получали стандартный пищевой рацион (ПК-120-1).

Исследование ранозаживляющего действия мази с ЭСРЗ проводили в сравнении с 10% мазью «Календула» (регистрационный номер 79/301/5), которая применяется при лечении ожогов, незаживающих ран и свищей. Мазь «Календула» обладает противовоспалительным, противомикробным и репаративным действием [3].

После анестезии тиопенталом-натрия и подготовки кожи крысам на спине параллельно позвоночнику наносили ли-

нейную рану до мышечного слоя длиной 3 см. Затем в раны вносили по 0,2 мл взвеси, длительно пассировавшегося на питательных средах лабораторного штамма Staphylococcus aureus, содержащего в 1 мл 109 микробных тел (концентрация определялась по стандарту мутности). После этого раны ушивались адаптационными швами шелком № 2.

Животные были разделены на 3 группы по 10 крыс в каждой:

1 группа (контроль) - крысы с полнослойной кожной раной, инфицированной штаммами St. aureus, рана заживала естественным путем;

2 группа (сравнения) - крысы с полнослойной кожной раной, инфицированной штаммами St. aureus, получавшими лечение 10% мазью «Календула»;

3 группа (опытная) - крысы с полнослойной кожной раной, инфицированной штаммами St. aureus, получавшие лечение мазью с ЭСРЗ 10%.

Наличие местного гнойного процесса оценивали на 3, 7 и 14 сутки. Контрольные временные точки определялись тем, что рана приобретает признаки острого воспаления через 72 часа. Особое внимание уделялось признакам воспаления со стороны раны - гиперемия, пастозность краёв, состояние швов, отделяемое из раны (преимущественно гнойное).

Для ранотензиометрического и гистологического исследования в поперечном направлении из иссеченных ран забирали полоски ткани шириной 0,5 см. Исследование биомеханических свойств заживающей раны производили путем определения прочности сращения ее краев в граммах. С этой целью использовали универсальный прибор для механических и термомеханических испытаний полимерных волокон и пленок модели УМИВ-3 (Россия).

Для гистологического исследования ткани из ран срезы препаратов, фиксированных в формалине, окрашивали гематоксилином и пикрофуксином.

Обработку экспериментальных данных проводили при помощи статистических программ Statistica 7,0. Проверка статистической гипотезы о нормальности распределения осуществлялась с использованием критерия Колмогорова-Смирнова. Применялись стандартные параметры описательной статистики при распределении, отличном от нормального. Данные представлены в виде медианы, верхней и нижней квартилей - Me [LQ25; HQ75]. Статистические различия в группах определялись дисперсионным анализом, критерием Манна-Уитни. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез принимался равным 0,05.

Результаты и обсуждение

Результаты исследований свидетельствуют, что на 3-и сутки эксперимента, у крыс контрольной группы отмечались гиперемия и пастозность краёв раны, обильное гнойное отделяемое с неприятным запахом (около 3 мл), признаки интоксикации (адинамия, жажда, плохой аппетит). Дно раны влажное, гиперемированное, с наложениями фибрина. У крыс опытной группы (60% животных) и группы сравнения (80% животных) отмечались - слабая гиперемия и отёчность краёв раны, небольшое количество гнойного отделяемого без характерного запаха, слабые признаки интоксикации. При этом размер ран у крыс контрольной, сравнения и опытной групп уменьшились до размера 2,5 см.

На 7 сутки эксперимента у животных контрольной группы и группы сравнения сохранялись клинические признаки гнойного воспаления, однако отёк и количество гнойного отделяемого из-под сформировавшегося струпа уменьшились. У крыс опытной группы отмечалось незначительное мокну-тие ран без запаха. Микробиологические исследования показали отсутствие золотистого стафилококка в отделяемом из раны. Размер ран у крыс 1-й группы длиной 2,5 см, шириной 0,4 см (диастаз краёв раны), у крыс 2-й и 3-й групп - 2,5 см,

шириной 0,1 см (диастаза краёв нет). При этом у всех групп дно раны очищено и представлено грануляционной тканью.

На 14 сутки эксперимента у крыс 2-й и 3-й групп раны полностью эпителизировались, в то время как в 1-й группе оставались 10% животных с менее выраженной эпитализа-цией и частичным сохранением струпа. В целом заживление раневого дефекта у всех групп животных в виде рубца.

Ранотензиометрия позволяет получать количественную оценку деформационно-прочностных свойств рубца на разрыв. Абсолютные данные были получены в «грамм-сила» (дольная единица силы в системе единиц МКГСС). Полученные данные приведены в таблице 1.

Таблица 1

Влияние мази, содержащей ЭСРЗ на прочность экспериментальной раны у крыс

№ п/п Экспериментальные группы Прочность раны на разрыв

1 Контроль 91,6 (85,2; 98)

2 Группа сравнения 330,0* (320,0; 340,0)

3 Опытная группа 372,5* (334,0; 411,0)

Примечание: * - значимые различия по сравнению с группой контроля (р < 0,05).

Результаты ранотензиометрического исследования свидетельствуют, что мазь с ЭСРЗ увеличивает прочность послеоперационного рубца на 14 сутки в 4,1 раза в сравнении с контрольной группой. При этом препарат сравнения мазь «Календула» увеличивал прочность послеоперационного рубца на 14 сутки в 3,6 раза в сравнении с контрольной группой (табл. 1). Мазь с ЭСРЗ превосходит мазь «Календула» на 12,9% по прочности образующегося послеоперационного рубца.

При гистологическом исследовании препаратов кожной раны инфицированной St. aureus в контроле выявлено наличие раневого дефекта с обильным количеством фибрина, колоний микробных клеток, так же наблюдается диффузная инфильтрация сегментоядерными лейкоцитами дермы, подкожно-жировой клетчатки и мышечной ткани [1]. При этом на срезах групп сравнения и опыта отмечается крупнозернистый клеточный состав инфильтрата [2,3]. Под микроскопом в контроле (рис. 1) наблюдается толстый соединительнотканный рубец, а в группе сравнения и опытной на месте раны определяется тонкий рубец.

Таким образом, мазь с экстрактом сухим рододендрона золотистого обладает выраженным антимикробным, рано-заживляющим и репаративным действием, превосходящим препарат сравнения мазь «Календула». Мазь с сухим экстрактом рододендрона золотистого может быть в дальнейшем рекомендована для клинических испытаний по лечению ран на третьей фазе раневого процесса.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Прозрачность исследования. Исследование не имело спонсорской поддержки. Исследователи несут полную ответственность за предоставление окончательной версии

А Б В

Обозначения: А - контроль, Б - мазь «Календула», В - мазь с ЭСРЗ: а - многослойный эпителий, б - эластичные волокна дермы, в - новообразованная соединительная ткань.

Рис. 1. Заживление кожной раны у крыс на 14 сутки. Окраска гематоксилином -пикрофуксином. 0к.10х. 0б.10х.

рукописи в печать.

Декларация о финансовых и иных взаимодействиях. Все

авторы принимали участие в разработке концепции и ди-

зайна исследования и в написании рукописи. Окончательная версия рукописи была одобрена всеми авторами. Авторы не получали гонорар за исследование.

Работа поступила в редакцию: 28.02.2015 г.

ЛИТЕРАТУРА

1. Абаев Ю.К. Справочник хирурга. Раны и раневая инфекция. - Ростов-на-Дону: Феникс, 2006. - 427 с.

2. Мирович В.М., Федосеев А.П., Федосеева Г.М. и др. Биолого-фармакологическое действие настоек из растений представителей рода Rhododendron L. // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2003. - Т. 27. №5. - С.70-75.

3. Государственный реестр лекарственных средств 2014 г. / http://grls.rosminzdrav.ru/grls.aspx.

4. Горшков А.Г., Мурашкина И.А., Верещагин А.Л. и др. Количественное определение биологически активных компонентов растения Rhododendron aureum Georgi методом ВЭЖХ // Химико-фармацевтический журнал. - 2000. - Т. 34. №12. - С.30-32.

5. Леонидов Н.Б., Воронина Т.А., Скачилова С.Я. и др. Развитие фармацевтической промышленности и национальная безопасность России // Производство лекарственных средств. - 2014. - №2(3). - С.50-56.

6. Мурашкина И.А., Гордеева В.В., Горячкина Е.Г. Оптимизация технологии сухого экстракта побегов рододендрона золотистого // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2013. - №3.- С.100-102.

7. Сырчина А.И., Мурашкина И.А., Ушаков И.А. и др. Компонентный состав фенольных соединений Rhododendron aureum G. // Растительные ресурсы. - 2000. - Т. 36. Вып. 3. -С.52-55.

REFERENCES

1. Abaev Y.K. Handbook of the surgeon. Wounds and wound infection. - Rostov-on-Don: Fenix, 2006. - 427 p. (in Russian)

2. Mirovich V.M., Fedoseev A.P., Fedoseeva G.M., et al. Biological and pharmacological effects of infusions of the plants, representatives of Rhododendrons L. genus // Sibirskij medicinskij zurnal (Irkutsk). - 2003. - Vol. 40. №5. - P.69-71. (in Russian)

3. Gosudarstvennyj reestr lekarstvennyh sredstv 2014 / http:// grls.rosminzdrav.ru/grls.aspx. (in Russian)

4. Gorshkov A.G., Murashkina I.A., Vereshhagin A.L., et al. The quantitative determination of biologically active components of plants Rhododendron aureum Georgi by HPLC // Pharmaceutical Chemistry Journal. - 2000. - Vol. 34. №12. - P.30-32. (in Russian)

5. Leonidov N.B., Voronina T.A., Skachilova S. Ya., et al. Pharmaceutical industry development and national security of Russia // Drug Development and Registration. - 2014. - №2 (3). -P.50-56. (in Russian)

6. Murashkina, I.A., Gordeeva V.V., Goryachkina E.G. Technology optimization of dry extract shoots of Rhododendron aureum G // Sibirskij medicinskij zurnal (Irkutsk). - 2013. - №3.-P. 100-102. (in Russian)

7. Syrchyina A.I., Murashkina I.A., Ushakov I.A., et al. Component composition of phenol compounds of Rhododendron aureum Georgi // Rastitel'nye resursy. - 2000. - Vol. 36. I.3. - P.52-55. (in Russian)

Информация об авторах:

Цыренжапов Арсен Владимирович - к.м.н., младший научный сотрудник, 664003, г. Иркутск, ул. Борцов Революции, д.1, тел. 8 (3952) 290354, e-mail: [email protected]; Мурашкина Ирина Анатольевна - к.ф.н., доцент кафедры технологии лекарственных форм, 664003, г. Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, тел. 8 (3952) 243447; Мирович Вера Михайловна -д.ф.н., заведующая кафедрой фармакогнозии и ботаники, 664003, Иркутск, ул. Карла Маркса, 10, тел. 8 (3952) 24-34-47, e-mail: [email protected]; Гольдберг Олег Аронович - к.м.н., ведущий научный сотрудник, 664003, г. Иркутск, ул. Борцов Революции, д.1, тел. 8 (3952) 290354; Васильев Игорь Борисович - к.ф.н., ассистент кафедры. 664003, г. Иркутск,

ул. Красного Восстания, 1, тел. 8 (3952) 24-34-47.

Information About the Authors:

Tsyrenzhapov Arsen V. - Ph.D., Researcher, 1, B. Revolutsii, Irkutsk< Russia, tel. 8 (3952) 290354, e-mail: [email protected]; Murashkina Irina A. - PhD Pharmacy, Associate Professor of department Technology of drugs. 664003, 10, K. Marks str., Irkutsk, Russia, tel. 8 (3952) 243447; Mirovich Vera M. - Ph.D., Head of the Department of Pharmacognosy. 10, K. Marks str., Irkutsk, Russia, tel. 8 (3952) 24-34-47, e-mail: [email protected]; Goldberg Oleg A. - Ph.D., Researcher. 1, B. Revolutsii, Irkutsk< Russia, tel. 8 (3952) 290354; Vasilyev Igor B. - PhD Pharmacy, assistant professor of department Technology of drugs. 664003, 10, K. Marks str.,

Irkutsk, Russia, tel. 8 (3952) 243447.

© АЖУНОВА Т.А., ЛУБСАНДОРЖИЕВА П.-Н.Б. - 2015 УДК: 615.322

фармакотерапевтическая эффективность растительного средства при нарушениях гемостаза, вызванных циклофосфамидом

Татьяна Александровна Ажунова, Пунцык-Нима Базыровна Лубсандоржиева (Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, Улан-Удэ, директор - д.б.н., проф. Л.Л. Убугунов)

Резюме. 5-компонентное растительное средство, в состав которого входят экстракты сухие из листьев Urtica dioica L., травы Polygonum aviculare L., Achillea millefolium L., мелкоизмельченные порошки корневищ Zingiber officinale Roscoe и коры Cinnamomum cassia L. оказывает регулирующее влияние на основные звенья системы гемостаза: тромбоцитарное, коагуляционное и фибринолитическое при циклофосфановой интоксикации лабораторных животных; оказывает положительное влияние на клеточный гомеостаз периферической крови при повреждающем действии циклофосфана.

Ключевые слова: растительное средство, Urtica dioica, Polygonum aviculare, Achillea millefolium, Zingiber officinale, Cinnamomum cassia, циклофосфамид, гемостаз.

pharmacotherapeutic efficiency of herbal remedy in cyclophospha

MIDE INDUCED HEMOSTASIS DAMAGE

T.A. Azhunova, P.B. Lubsandorzhieva (Institute of General and Experimental Biology SB RAS, Ulan-Ude, Russia)