CC BY
34
Н.С. Линькова, Т.Е. Ничик, Р.И. Халимов, А.В. Дудков, А.В. Костылев, Г.А. Рыжак
ФАКТОР РОСТА ФИБРОБЛАСТОВ FGF КАК ПОТЕНЦИАЛЬНАЯ МИШЕНЬ ДЛЯ ТЕРАПИИ ХРОНИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПОЧЕК1
Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии,
Санкт-Петербург, Россия
Фактор роста фибробластов FGF регулирует пролиферацию, миграцию и дифференцировку клеток, оказывая воздействие ауто- и паракринным путем. В почках FGF экспрессируется в мезангиальных, эндотелиальных и эпителиальных клетках клубочков. Способствуя пролиферации фибробластов и эпителиально-мезенхимальной трансформации канальцевых клеток, FGF играет важную роль в развитии тубулоинтерстициального фиброза. При хронических заболеваниях почек наблюдается прямая взаимосвязь между экспрессией FGF и выраженностью фиброза интерстиция.
Целью работы явилось сравнительное изучение влияния пептидных биорегуляторов на экспрессию фактора роста фибробластов в культуре клеток почек.
Материалы и методы исследования. Опыты проводили на культурах клеток почек молодых (3 мес.) крыс линии Wistar. Клетки выращивали в культуральной среде, содержащей DMEM, 15% фетальной сыворотки, 1,5% HEPES-буфера, антибиотики: 50 000 ЕД/фл пенициллина G и 50 мг/фл стрептомицина и L-глутамин. Культивирование клеток проводили до 3 («молодые культуры»), 7 («зрелые культуры») и 14 пассажа («старые культуры»). Культуры разделили на 4 группы: в 1 группу (контрольную) добавляли физиологический раствор, во 2 группу добавляли пептид AED, в 3 группу - пептид EDL и в 4 группу - поли-пептидный комплекс почек [3]. Пептиды AED и EDL добавляли в культуральную среду в концентрации 20 нг/мл, а полипептидный комплекс почек - в концентрации 100 нг/мл. Для иммуноцитохимического окрашивания культур кле-
1Linkova N.S., Nichik T.E., Khalimov R.I., Dudkov A.V., Kostylev A.V.Fibroblasts growth factor as potential target for chronic kidney diseaces therapy.
ток почек использовали первичные моноклональные антитела к FGF [1, 2].
Для оценки результатов реакции проводили морфометрическое исследование с помощью системы компьютерного анализа микроскопических изображений, состоящей из микроскопа NikonEclipse E400, цифровой камеры Nikon DXM1200 и программного обеспечения «Vidеotest Morphology 5,2». Относительную площадь экспрессии рассчитывали, как отношение площади, занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади клеток в поле зрения, и выражали в процентах.
Результаты исследования. В контрольной группе площадь экспрессии FGFrn 3, 7 и 14 пассажах составила соответственно 0,78±0,05%, 1,12±0,16% и 1,13±0,05% соответственно. В культурах клеток с добавлением пептида AED площадь экспрессии снизилась соответственно до 0,58±0,05%, 0,82±0,10% и 0,78±0,11% (р<0,05), а с добавлением пептидного комплекса почек - до
0.42±0,12, 0,68±0,09 и 0,75±0,08 (р<0,05). При добавлении в среду пептида EDL площадь экспрессии FGF не изменялась.
Таким образом, полипептидный комплекс почек и трипептилДНР способствуют снижению экспрессии фактора роста фибробластов FGF, увеличение синтеза которого наблюдается при развитии тубулоинтерстициального фиброза почек.
Литература:
1) Хавинсон В.Х., Малинин В.В., Рыжак Г.А. / Средство, нормализующее функции почек, и способ его получения. / 2007 Пат. 2302868 Российская Федерация. МПК А61К 35/23. А61Р 13/12.
2) Strutz F. The role of FGF-2 in renal fibrogenesis // Front. Biosci. 2009. V. 1, N
1. P. 125-131.
3) Vasko R., Koziolek M., Ikehata M. et al. Role of basic fibroblast growth factor (FGF-2) in diabetic nephropathy and mechanisms of its induction by hyperglycemia in human renal fibroblasts // Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 2009. V. 296, N6. P. 1452-1463.
Ключевые слова: пептиды, почечная патология, фактор роста фибробластов, старение.
Key word: peptides, renal pathology, fibroblasts growth factor, senescence.
