CC BY
43
TESTING THE EFFECTIVENESS OF COMPLEX METHOD OF TREATMENT OF DOGS AT ACUTE AND CHRONIC PHASE OF BABESIOSIS
Temichev K.V., Lutsuk S.N., Dyachenko Y.V.
Summary
The study was undertaken to establish the efficacy of drug Babezan in combination with 10% alcoholic extract of the drone's pupaes and beetroot's extract at acute and chronic phase of dog's babesiosis. It was determined, that Babezan, injected subcutaneously, at a dose of 0.1 ml / kg of body weight, twice, at intervals of 24 hours, in combination with 10% alcoholic extract of the drone's pupaes and beetroot's extract (orally for 10 days), is effective for the treatment of dogs at acute and chronic phase of babesiosis.
УДК 619:616 - 002.5
ФАГОЦИТОЗ IN VITRO С ВИРУЛЕНТНЫМИ И АТИПИЧНЫМИ МИКОБАКТЕРИЯМИ ТУБЕРКУЛЕЗА
Трубкин А.И. - к.в.н., ст. преподаватель; Харитонов М.В. - д.в.н., профессор ФГБОУ ВПО КГАВМ, тел.: (843) 2382579
Ключевые слова: микобактерия, штамм, фагоцитоз.
Key words: mycobacterium, strain, phagocytosis.
В системе противоэпизоотических мероприятий при туберкулезе животных основным методом прижизненной диагностики является аллергическая проба, позволяющая выявлять инфицированных животных в 80% и более случаев. Однако оценивая высокую специфичность туберкулина при проведении диагностических плановых исследований животных в отдельных хозяйствах РТ, ветспециалисты сталкиваются с фактами, что из биоматериала животных, реагировавших на туберкулин, после проведенного контрольно-диагностического убоя, не всегда удается выделить истинного возбудителя туберкулеза. В отдельных случаях удается выделить пигментированные атипичные микобактерии.
В связи с этим вопрос о судьбе вирулентных, атипичных микобактерий, проникающих в организм животных, имеет практическое значение.
Цель исследования - провести серию опытов по фагоцитозу in vitro с вирулентными культурами M. bovis штамма 14 и атипичными микобактериями из штамма 55/96.
Материалы и методы. Использовали лейкоциты периферической крови здоровых животных: крупного рогатого скота, лошади, овцы, козы, собаки, кролика, морской свинки, белой крысы.
Чтобы кровь не свернулась, ее гепаринизировали из расчета 4 ед. инъекционного гепарина на 1 мл крови. После предварительного перемешивания пробирки с кровью в течение 1 часа оставляли под углом 100 при комнатной температуре. Затем пробирки ставили под углом 450 в течение 15-20 мин. при этом необходимое количество лейкоцитов для постановки опытов накапливается между эритроцитами и плазмой крови в виде тумана. Накопившиеся лейкоциты отсасывали и вносили во флаконы с содержанием по 5 мл среды 199. После легкого перемешивания полученной смеси во флаконы вносили М. Ьоу1б штамма N14 культуры микобактерий по стандартной мутности 1 мг в 1мл физиологического раствора.
Флаконы закрывали резиновой пробкой и после легкого перемешивания в вертикальном положении помещали в термостат при температуре 370С.
Вначале через каждые 15 мин. (15,30,45,60,75,90,105,120 мин), а затем через3,4,5,6,24,48 и 72 ч. с момента инкубации делали мазки. Мазки фиксировали в насыщенном растворе двухлористой ртути 2-3 мин. и окрашивали карболовым фуксином Циля, обесцвечивали 2,5% - ным раствором серной кислоты. Для растворения эритроцитов дополнительно обрабатывали раствором уксусной кислоты и дополнительной окраске 0,5% - ным раствором метиленовой синьки, смешанной с 0,5% - ным раствором соды.
Подсчитывали 100 полиморфно ядерных лейкоцитов, по 50 единиц с каждого края мазка и выводили фагоцитарную активность лейкоцитов в процентах.
Фагоцитарный показатель определили следующим образом, подсчитывали количество фагоцитированных туберкулезных палочек в 100 лейкоцитах и полученное число делили на количество просмотренных лейкоцитов.
При изучении фагоцитоза с атипичными микобактериями штамма 55/96 мы пользовались той же методикой, что и в опытах со штаммом N14 М. Ьоу1б.
Результаты исследований. Изучение фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови у разных видов животных по отношению к вирулентным культурам микобактерий туберкулеза бычьего вида показало, что в первые 15 мин. после контакта лейкоцитов происходит накопление микробных тел вокруг фагоцитируемых клеток крови (аттракция), но при этом еще не наблюдали поглощение микробных тел. Через 30 мин. после введения микобактерий обнаруживалось повышение фагоцитарной активности лейкоцитов по отношению к
микобактериям у всех видов животных. Как видно из таблицы 1, в первые 30 мин. значительную фагоцитарную активность проявляют лейкоциты белой крысы (9,2±2,03%; Р< 0,05), а в тоже время у морской свинки этот показатель не превышает 1,2±0,32%; (Р< 0,05).
У продуктивных животных высокая фагоцитарная активность лейкоцитов наблюдалась у козы 6,2±2,10% (Р< 0,05), а из домашних животных у собаки 7,8±2,03% (Р< 0,05). Регулярное, статистически достоверное увеличение фагоцитоза отмечали через каждые 15 мин. В последующие часы и ближайшие сутки фагоцитоз оставался высоким, у всех видов животных, за исключением морской свинки.
Одновременно с фагоцитарной активностью лейкоцитов был изучен фагоцитарный показатель, - количество фагоцированных микробов в 100 лейкоцитах. Данные, показывающие среднее число поглощенных микобактерий на один фагоцит, представлены в таблице 2. причем для учета интенсивности фагоцитоза все фагоцитировавшие лейкоциты разбивали на три группы: в первую входили клетки, содержащие от 1 до 10 микобактерий; в нашем случае такие клетки составляли 80%; во вторую -от10 до 20, такие клетки составляли 15%; в третью - свыше 20 микобактерий, такие клетки составляли 5% из всех подсчитанных клеток.
Как видно из таблицы, первоначальный фагоцитарный показатель в отношении вирулентной культуры микобактерий бычьего вида у всех животных был ниже единицы. По мерее срока культивирования клеток показатель фагоцитоза достоверно (Р<0,05) у всех животных увеличивался. Так, например, к 72 ч. у лошади этот показатель доходил до 8,2±1,70 единиц, у овец и коз соответственно 6,8±3,11 и 7,8±3,11. Промежуточное положение имел показатель у крупного рогатого скота - 5,6±2,17. У белой крысы и собаки лейкоциты обладали, по сравнению с другими видами животных, наиболее интенсивной способностью поглощать микобактерий. В основном у последних имело место поглощение более 20 микробных тел.
По нашим исследованиям самой низкой поглотительной способностью обладали лейкоциты морской свинки, в среднем 2,7±0,45 (Р<0,05) микробных тел на одну фагоцитировавшую клетку.
Резюмируя полученные результаты исследований, отмечаем, что фагоцитарная активность и индекс фагоцитоза лейкоцитов периферической крови в отношении вирулентных микобактерий в значительной степени зависят от интенсивности трансформации малых лимфоцитов в бластные и макрофоганальные клетки под воздействием самих микобактерий в первые трое суток культивирования их. В этот период в поле зрения микроскопа с увеличением количества бластных клеток уменьшается количество свободноживущих микобактерий.
№ п/п Вид живот ных после контакта с возбудителем через:
15 мин. 30 мин. 45 мин. 60 мин. 75 мин. 90 мин. 105 мин. 120 мин. 3 ч. 4 ч. 5 ч. 6 ч. 24 ч. 48 ч. 72 ч.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
1. Лоша дь 3 6,8 ± 1,62 3,5 ± 0,95 4,3 ± 1,10 5,8 ± 1,31 6,4 ± 1,68 8,7 ± 1,62 10,0 ± 2,71 18,5 ± 4,00 25,0 ± 3,10 28,6 ± 3,80 30,0 ± 3,22 39,0 ± 3,50 43,9 ± 7,72 48,4 ± 6,20 48,7 ± 5,20
2. Кр. рог. скот 3 5,0 ± 1,03 3,4 ± 0,93 4,8 ± 1,19 5,8 ± 1,14 5,8 ± 1,39 7,4 ± 2,31 12,2 ± 2,96 19,0 ± 3,43 26,1 ± 3,31 27,6 ± 5,19 38,8 ± 6,05 40,0 ± 6,15 41,6 ± 8,07 43,0 ± 8,11 43,2 ± 5,08
3. Овца 3 5,6 ± 1,11 0,05 4,8 ± 1,05 0,05 6,2 ± 1,21 9,2 ± 2,05 12,4 ± 3,63 15,8 ± 2,33 19,8 ± 2,91 24,2 ± 3,81 30,0 ± 4,01 33,8 ± 4,17 38,8 ± 5,26 40,0 ± 4,15 44,8 ± 5,17 49,6 ± 5,09 51,8 ± 7,11
4. Коза 3 6,4 ± 2,09 6,2 ± 2,10 7,8 ± 2,20 9,2 ± 2,81 11,0 ± 2,33 19,4 ± 3,17 23,0 ± 3,19 25,4 ± 4,21 35,8 ± 6,15 37,0 ± 5,11 40,0 ± 5,08 44,4 ± 5,19 52,0 ± 7,01 55,6 ± 7,12 60,4 ± 7,07
5. Собак а 3 6,6 ± 1,15 7,8 ± 2,03 9,2 ± 2,97 12,0 ± 3,53 12,8 ± 3,31 19,8 ± 3,03 26,1 ± 3,95 31,0 ± 3,91 38,4 ± 5,05 38,2 ± 4,17 40,4 ± 6,09 43,2 ± 6,12 49.5 ± 7.05 55,8 ± 8,11 67,0 ± 8,19
6. Кроли к 3 4,3 ± 1,90 2,8 ± 0,9 3.1 ± 1.01 3,8 ± 1,56 3,9 ± 1,65 5,0 ± 1,68 5,4 ± 1,35 7,4 ± 2,06 7,8 ± 2,11 9,0 ± 2,19 12,6 ± 2,51 17,8 ± 3,19 0,05 24,4 ± 4,11 0,05 27,0 ± 4,92 31,0 ± 5,15 0,05
7. М. свинк а 3 2,6 ± 1,07 1,2 ± 0,32 1,5 ± 0,95 2,0 ± 1,04 2,2 ± 1,00 2,8 ± 1,04 3,4 ± 1,17 3,8 ± 1,23 4,1 ± 1,92 5.0 ± 2.00 5,6 ± 1,92 6.3 ± 2.03 11,8 ± 3,09 13,2 ± 3,19 17,2 ± 4,05
8. Белая крыса 3 8,1 ± 1,35 9.2 ± 2.03 13,0± 2,20 19,6 ± 3,35 27,6 ± 5,49 31,6 ± 5,82 37,4 ± 6,05 43,8 ± 6,11 56,6 ± 7,14 59,8 ± 8,07 65,0 ± 8,15 72.3 ± 8.03 84,4 ± 8,15 87,0 ± 9,07 87,6 ± 9,19
№ п/п Вид живот ных после контакта с возбудителем через:
15 мин. 30 мин. 45 мин. 60 мин. 75 мин. 90 мин. 105 мин. 120 мин. 3 ч. 4 ч.4 ч 5 ч. 6 ч. 24 ч. 48 ч. 72 ч.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
1. Лоша дь 3 - 0,9 ± 0,03 1,78 ± 0,86 2,82 ± 1,25 3,13 ± 1,08 3,3 ± 1,01 3.9 ± 1.10 4,07 ± 1,51 5,32 ± 1,58 5,4 ± 1,96 5,95 ± 1,05 5,96 ± 1,14 6,8 ± 1,6 8,1 ± 2,90 8,2 ± 1,70
2. Кр. рог. скот 3 0,9 ± 0,02 1,5 ± 0,51 2,0 ± 0,52 2,2 ± 0,91 2,8 ± 0,85 3,1 ± 1,05 3,6 ± 1,21 4,0 ± 1,65 4,8 ± 1,12 5,2 ± 2,01 5,6 ± 2,12 5,4 ± 1,36 5,6 ± 2,05 5,6 ± 2,17
3. Овца 3 - 0,8 ± 0,02 1,8 ± 0,30 2,3 ± 0,15 2,8 ± 0,65 3,3 ± 1,02 4,4 ± 1,65 5,8 ± 2,01 5,8 ± 2,11 6,4 ± 3,03 6,0 ± 3,05 6,2 ± 3,18 6,0 ± 2,31 6,8 ± 2,15 6,8 ± 3,11
4. Коза 3 - 0,8 ± 0,11 1,7 ± 0,20 2,1 ± 0,80 2,3 ± 0,7 3,8 ± 1,05 4,0 ± 2,11 4,4 ± 2,01 5,1 ± 2,03 6,4 ± 2,11 6,8 ± 2,19 6,8 ± 2,35 7,6 ± 3,05 7,8 ± 3,12 7,8 ± 3,11
5. Собак а 3 0,2 ± 0,01 0,8 ± 0,05 1,7 ± 0,15 2,3 ± 0,17 3.01 ± 1.01 4,5 ± 1,17 5,9 ± 1,19 6.5 ± 2.05 7,2 ± 2,01 7,5 ± 2,10 7,8 ± 2,05 8,7 ± 3,15 9.5 ± 3.05 9,9 ± 3,41 10,1± 3,11
6. Кроли к 3 0,3 ± 0,02 1,9 ± 0,3 1,9 ± 0,61 1,3 ± 0,85 2,0 ± 0,90 2,1 ± 0,80 2,6 ± 0,31 2,9 ± 0,68 2,9 ± 0,35 3,0 ± 1,05 3.0 ± 1.01 3,8 ± 1,15 3,9 ± 1,12 3,9 ± 1,05
7. М. свинк а 3 0,1 ± 0,01 1,2 ± 0,3 1,6 ± 0,03 1,9 ± 0,2 1,1 ± 0,30 1,3 ± 0,9 1,3 ± 0,12 1,8 ± 0,75 1,9 ± 0,90 1,9 ± 0,85 2,0 ± 0,64 2,6 ± 1,01 2,6 ± 1,00 2,7 ± 0,45
8. Белая крыса 3 0,3 ± 0,1 0,9 ± 0,05 1,0 ± 0,04 2,8 ± 0,31 3,6 ± 1,15 5,3 ± 1,36 6,8 ± 2,02 7,5 ± 2,33 8,8 ± 2,14 9.0 ± 3.00 9,2 ± 3,06 9,1 ± 2,95 9,9 ± 2,12 10,0 ± 3,01 10,3 ± 3,05
№ п/п Вид живот ных после контакта с возбудителем через:
15 мин. 30 мин. 45 мин. 60 мин. 75 мин. 90 мин. 105 мин. 120 мин. 3 ч. 4 ч.4 ч. 5 ч. 6 ч. 24 ч. 48 ч. 72 ч.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
1. Лоша дь 3 9,3 ± 3,51 1,9 ± 0,66 3,9 ± 1,22 4,6 ± 1,19 5,81 ± 1,57 6,4 ± 2,12 7,7 ± 2,17 8,0 ± 2,11 12,6 ± 3,75 28,2 ± 5,42 34,3 ± 5,22 47,8 ± 8,32 50,7 ± 7,04 51,2 ± 8,65 52,0 ± 8,25
2. Кр. рог. скот 3 7,5 ± 2,15 1,7 ± 0,55 3,3 ± 1,05 4,1 ± 1,85 4,3 ± 1,63 5,9 ± 1,75 6,6 ± 2,03 12,1 ± 3,06 19,5 ± 3,15 28,3 ± 3,64 39,1 ± 5,12 45,7 ± 6,02 49,3 ± 7,16 50,8 ± 8,02 51.7 ± 8.07
3. Овца 3 9,6 ± 2,01 3,1 ± 1,06 4,0 ± 1,95 5,6 ± 2,03 6,8 ± 2,13 8,3 ± 3,02 12,8 ± 2,91 15,6 ± 3,25 21,6 ± 4,06 26,1 ± 4,15 33,5 ± 6,18 38,4 ± 9,11 43,7 ± 8,19 48,4 ± 8,36 53,9 ± 8,92
4. Коза 3 10,2 ± 3,15 3,9 ± 1,95 6,86 ± 2,12 7,7 ± 2,61 9.4 ± 3.05 12,4 ± 2,08 15,9 ± 2,95 17,8 ± 3,65 23,1 ± 4,12 27,3 ± 5,17 36,6 ± 8,19 43,5 ± 8,08 45,5 ± 8,63 48,7 ± 9,15 55,1 ± 8,82
5. Собак а 3 13,3 ± 3,63 4,1 ± 1,63 11,7 ± 2,08 12,5 ± 2,96 16,8 ± 3,38 20,3 ± 3,86 27,8 ± 4,09 29,5 ± 4,16 35,7 ± 5,68 40,8 ± 6,12 44,7 ± 7,08 47,5 ± 7,15 55,7 ± 8,18 60,7 ± 9,85 68,3 ± 8,91
6. Кроли к 3 4,2 ± 1,22 1,2 ± 0,35 4,3 ± 1,96 5,6 ± 2,08 6,3 ± 2,65 7,3 ± 2,07 9,3 ± 2,36 11,8 ± 3,02 12,8 ± 2,11 14,8 ± 3,02 15,4 ± 2,31 21,8 ± 2,65 25,6 ± 3,38 30,5 ± 4,85 33,7 ± 6,17
7. М. свинк а 3 2,2 ± 0,35 1,2 ± 0,15 4,07 ± 1,05 5,5 ± 1,95 6,0 ± 1,15 6,5 ± 1,65 8,3 ± 2,62 10,1 ± 2,15 12,5 ± 2,72 14,3 ± 3,21 15,8 ± 3,62 17,6 ± 3,92 18,8 ± 4,05 19,8 ± 4,21 21,1 ± 5,07
8. Белая крыса 3 19,1 ± 4,8 9.4 ± 3.05 13,2 ± 3,72 17,3 ± 4,01 28,5 ± 7,06 31,3 ± 7,22 37,4 ± 8,15 43,5 ± 8,72 51,3 ± 9,08 55.4 ± 10.5 60,3 ± 11,02 63,2 ± 11,05 75,1 ± 11,68 79,8 ± 11,05 81,9 ± 12,7
Однако при удлинении срока культивирования до 5 суток и более количество бластных клеток уменьшалось вследствие их усиленного разрушения. В этой стадии фагоцитоз фактически не проявляется, количество свободноживущих микобактерий увеличивалось, в том числе и видоизмененных. Последние представлялись в виде удлиненных форм с включением зерен; наряду с кислотоустойчивыми палочками, обнаруживали и кислотоподатливые формы в виде длинных синих палочек с темно-синими зернами на концах.
Как видно из таблицы 3, процесс аттракции атипичных микобактерий на поверхности лейкоцитов выше, чем у вирулентных микобактерий, особенно у тех видов животных, у которых естественная устойчивость выше к туберкулезу. Если лейкоциты крупного рогатого скота с вирулентными туберкулезными микобактериями вошли в контакт в среднем в 5,0 ± 1,03 % случаев, то с атипичными микобактериями этот показатель составил 7,5 ± 2,15 % при достоверности показателей (Р<0,05).
По данным таблицы 3 высокая активность лейкоцитов отмечается у белых крыс и собак.
Следует отметить, что первые 30 мин. у продуктивных животных фагоцитарная активность лейкоцитов по отношению к атипичным микобактериям несколько ниже, чем к вирулентным микобактериям, но в процессе дальнейшего взаимодействия возбудителя с лейкоцитами этот показатель значительно увеличивается.
ЛИТЕРАТУРА: 1. Адо А. Д. Патофизиология фагоцитов /А. Д. Адо // М., 1961. С.120. 2. Белановский Г. Д. Влияние бацилл ВСЖ на культуры тканей лейкоцитов /Г.Д. Белановский// Микробл. Журн. №1, 23. - 1928. 3. Кетлинская С.А. Цитокины мононкулеарных фагоцитов в регуляции воспаления и иммунитета /С. А. Кетлинская, Н.М. Калинина// Иммунология. - 1995. №3 - С.30-44. 4. Чернушенко Е.Ф. Функциональное состояние фогоцитирующих клеток у больных туберкулезом легких /Е.Ф. Чернушенко, В.А. Шатров, Т.И. Беляновская//Проблемы туберкулеза. -1986. №1. - С. 59-63.
ФАГОЦИТОЗ ИН ВИТРО С ВИРУЛЕНТНЫМИ И АТИПИЧНЫМИ МИКОБАКТЕРИЯМИ ТУБЕРКУЛЕЗА
Трубкин А.И., Харитонов М.В.
Резюме
В системе противоэпизоотических мероприятий при туберкулезе животных основным методом прижизненной диагностики является аллергическая проба, позволяющая выявлять инфицированных животных в 80% и более случаев.
PHAGOCYTOSIS IN VITRO WITH VIRULENT MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS AND ATYPICAL
Trubkin A.I., Haritonov M.V.
Summary
In the system of anti-episootic measures in the main method of animal tuberculosis in vivo diagnosis is allergy test, which allows to detect infected animals at 80% or more of cases.
УДК 619:616.07+616.5-002.9:636 ДИАГНОСТИКА САРКОПТОИДОЗОВ ЖИВОТНЫХ
Фазулзянова А.М. - аспирант; Хамзина Е.В. - к.б.н., ассистент; Лутфуллина Н.А. -
к.в.н., ассистент; Лутфуллин М.Х. - д.в.н., профессор, зав. кафедрой ФГБОУ ВПО КГАВМ, тел. (843) 238-2569
Ключевые слова: саркоптоидозы, клещи, соскоб, генцианвиолет, диметилсульфоксид.
Key words: sarcoptoidоsis, mites, scraping, gentian violet,
dimethylsulfoxide.
Введение. Под названием «чесоточные клещи» обычно объединяются клещи - паразиты человека, домашних и диких животных, паразитирующие внутри или на коже их и вызывающие длительное заболевание - чесотку. Чесоточные клещи относятся к типу членистоногих, к классу паукообразных и к отряду клещей.
Саркоптоидозы в большинстве случаев протекают в хронической форме, что является причиной отсутствия лечения и профилактических мероприятий. Однако данные инвазии наносят значительный экономический ущерб, который складывается из снижения продуктивности животных, ухудшения качества шкуры, затрат на проведение лечебно-профилактических мероприятий (Токарев А.Н., 2008).
Спектр клинических признаков при болезнях, вызываемых паразитическими клещами широк: от зуда и локальных поражений кожи до интоксикации и угнетения центральной нервной системы.
Интенсивное развитие животноводческих хозяйств и создание крупных комплексов со всей необходимостью ставят вопрос о разработке методов ранней диагностики саркоптоидозов. Это сделает возможным своевременное выявление и изолирование больных животных, что предотвратит широкое распространение больных животных и позволит точно установить диагноз.
