CC BY
76
ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ РАСЦЕНОК НА ВЕТЕРИНАРНЫЕ УСЛУГИ ПРИ ОБСЛУЖИВАНИИ МЕЛКИХ ДОМАШНИХ ЖИВОТНЫХ
Трофимова Е.Н.
Резюме
Учет особенностей формирования расценок на ветеринарные услуги при обслуживании мелких домашних животных обеспечивает установление научно - обоснованных расценок, которые используются в ветеринарной практике.
FEATURES OF FORMATION OF QUOTATIONS ON VETERINARY SERVICES AT
SERVICE OF SMALL PETS
Trofimova E.N.
Summary
The account of features of formation of quotations on veterinary services at service of small pets provides an establishment scientifically - well-founded quotations which are used in veterinary practice.
УДК 619:616 - 002.5
ФАГОЦИТАРНАЯ АКТИВНОСТЬ ЛЕЙКОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У РАЗНЫХ ВИДОВ ЖИВОТНЫХ
Трубкин А.И., Харитонов М.В.
ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»
Ключевые слова: микобактерия, штамм, фагоцитарная активность.
Key words: mycobacterium, strain, phagocytic activity.
Кровь является одним из наиболее тонких и чувствительных показателей, указывающих на функциональное состояние организма, отображающих картину борьбы его с внедрившимися микроорганизмами, гельминтами и его реактивную способность. Разработанная И.И. Мечниковым теория защитной роли фагоцитов в борьбе организма с внедрившемся в его ткани патогенными микробами явилась первым шагом к построению теории противоинфекционного иммунитета. По данным литературных источников, фагоцитоз при туберкулезной инфекции имеет неспецифический защитный характер. Однако имеется ряд наблюдений, которые свидетельствуют о том, что некоторая степень специфичности в фагоцитарных реакциях при туберкулезе все-таки имеется. Например,
А.Д. Тимофеевский, С.В. Белеволенская (1927), Г.Д. Белановский (1928) показали, что фагоцитирующие клетки перитониального экссудата, периферической крови, селезенки и легкого, иммунизированных и естественно резистентных животных не разрушаются в присутствии вирулентных микобактерий, а наоборот, подавляют их размножение.
Еще более сложным является вопрос о судьбе самих туберкулезных микобактерий, проникающих в организм, и той реакции, которую они вызывают в органах. По литературным источникам (А.С. Рабухин, 1941; Ю.А. Лебедева, С.М. Сажина, 1913 и др.) в присутствии вирулентной туберкулезной культуры сначала происходит нейтрофильный лейкоцитоз и фагоцитоз туберкулезных микобактерий нейтрофильными лейкоцитами, затем - некроз лейкоцитов, наполненных возбудителем. При этом лейкоциты от больных неспецифическими заболеваниями легких, с ограниченной формой туберкулеза, в случаях инфицирования малыми дозами туберкулезных палочек происходит усиленный переход их в лимфобласты. В то же время лейкоциты страдающих хроническими или острым течением туберкулеза подвергаются быстрому распаду.
В связи с этим, определенный интерес вызывало сравнительное изучение фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови у разных видов животных, в том числе у морских свинок и кроликов.
Материалы и методы. Использовали лейкоциты периферической крови здоровых животных: крупный рогаты скот, лошади, овцы, козы, собаки, кролика, морской свинки, белой крысы.
Чтобы кровь не свернулась ее гепаринизировали из расчета 4 ед. инъекционного гепарина на 1 мл крови. После предварительного перемешивания, пробирки с кровью в течение 1 часа оставляли под углом 100 при комнатной температуре. Затем пробирки ставили под углом 450 в течение 15-20 мин. при этом необходимое количество лейкоцитов для постановки опытов накапливается между эритроцитами и плазмой крови в виде тумана. Накопившиеся лейкоциты отсасывали и вносили во флаконы с содержанием по 5 мл среды 199. После легкого перемешивания полученной смеси, во флаконы вносили M. bovis штамма N14 культуры микобактерий по стандартной мутности 1 мг в 1 мл физиологического раствора.
Флаконы закрывали резиновой пробкой и после легкого перемешивания в вертикальном положении поместили в термостат при температуре 370С.
Вначале через каждые 15 мин. (15,30,45,60,75,90,105,120мин), а затем через3,4,5,6,24,48 и 72 ч. с момента инкубации делали мазки при помощи специально изготовленного для этой цели стекла под углом 200. Мазки фиксировали в насыщенном растворе двухлористой ртути 2-3 мин. и окрашивали карболовым фуксином Циля, обесцвечивали 2,5% - ным раствором серной кислоты. Для растворения эритроцитов дополнительно
обрабатывали раствором уксусной кислоты и дополнительной окраске 0,5% - ным раствором метиленовой синьки, смешанной с 0,5% - ным раствором соды.
Подсчитывали 100 полиморфно ядерных лейкоцитов, по 50 единиц с каждого края мазка, и выводили фагоцитарную активность лейкоцитов в процентах.
Фагоцитарный показатель определили следующим образом, подсчитывали количество фагоцитированных туберкулезных палочек в 100 лейкоцитах и полученное число делили на количество просмотренных лейкоцитов.
Результаты исследований. Изучение фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови у разных видов животных по отношению к вирулентным культурам микобактерий туберкулеза бычьего вида показало, что в первые 15 мин. после контакта лейкоцитов происходит накопление микробных тел вокруг фагоцитируемых клеток крови (аттракция), но при этом еще не наблюдали поглощение микробных тел. Через 30 мин., после введения микобактерий обнаруживалось повышение фагоцитарной активности лейкоцитов по отношению к микобактериям у всех видов животных. Как видно из таблицы 1, в первые 30 мин. значительную фагоцитарную активность проявляют лейкоциты белой крысы (9,2±2,03%; Р< 0,05), а в тоже время у морской свинки этот показатель не превышает 1,2±0,32%; (Р< 0,05).
У продуктивных животных высокая фагоцитарная активность лейкоцитов наблюдалась у козы 6,2±2,10% (Р< 0,05), а из домашних животных у собаки 7,8±2,03% (Р< 0,05). Регулярное, статистически достоверное увеличение фагоцитоза отмечали через каждые 15 мин. В последующие часы и ближайшие сутки фагоцитоз оставался высоким, у всех видов животных, за исключением морской свинки.
Одновременно с фагоцитарной активностью лейкоцитов был изучен фагоцитарный показатель, - количество фагоцированных микробов в 100 лейкоцитах. Данные, показывающие среднее число поглощенных микобактерий на один фагоцит представлены в таблице 2. причем, для учета интенсивности фагоцитоза все фагоцитировавшие лейкоциты разбивали на три группы: в первую входили клетки, содержащие от 1 до 10 микобактерий; в нашем случае такие клетки составляли 80%; во вторую -от10 до 20, такие клетки, составляли 15%; в третью - свыше 20 микобактерий, такие клетки составляли 5%, из всех подсчитанных клеток.
Как видно из таблицы, первоначальный фагоцитарный показатель в отношении вирулентной культуры микобактерий бычьего вида у всех животных был ниже единицы.
№ п/п Вид животных после контакта с возбудителем через:
* 15 30 45 60 75 90 105 120 3 ч. 4 ч. 5 ч. 6 ч. 24 ч. 48 ч. 72 ч.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
1. Лошадь 3 6,8 ± 1,62 3,5 ± 0,95 4,3 ± 1,10 5,8 ± 1,31 6,4 ± 1,68 8,7 ± 1,62 10,0 ± 2,71 18,5 ± 4,00 25,0 ± 3,10 28,6 ± 3,80 30,0 ± 3,22 39,0 ± 3,50 43,9 ± 7,72 48,4 ± 6,20 48,7 ± 5,20
2. Кр. рог. скот 3 5,0 ± 1,03 3,4 ± 0,93 4,8 ± 1,19 5,8 ± 1,14 5,8 ± 1,39 7,4 ± 2,31 12,2 ± 2,96 19,0 ± 3,43 26,1 ± 3,31 27,6 ± 5,19 38,8 ± 6,05 40,0 ± 6,15 41,6 ± 8,07 43,0 ± 8,11 43,2 ± 5,08
3. Овца 3 5,6 ± 1,11 0,05 4,8 ± 1,05 0,05 6,2 ± 1,21 9,2 ± 2,05 12,4 ± 3,63 15,8 ± 2,33 19,8 ± 2,91 24,2 ± 3,81 30,0 ± 4,01 33,8 ± 4,17 38,8 ± 5,26 40,0 ± 4,15 44,8 ± 5,17 49,6 ± 5,09 51,8 ± 7,11
4. Коза 3 6,4 ± 2,09 6,2 ± 2,10 7,8 ± 2,20 9,2 ± 2,81 11,0 ± 2,33 19,4 ± 3,17 23,0 ± 3,19 25,4 ± 4,21 35,8 ± 6,15 37,0 ± 5,11 40,0 ± 5,08 44,4 ± 5,19 52,0 ± 7,01 55,6 ± 7,12 60,4 ± 7,07
5. Собака 3 6,6 ± 1,15 7,8 ± 2,03 9,2 ± 2,97 12,0 ± 3,53 12,8 ± 3,31 19,8 ± 3,03 26,1 ± 3,95 31,0 ± 3,91 38,4 ± 5,05 38,2 ± 4,17 40,4 ± 6,09 43,2 ± 6,12 49,5 ± 7,05 55,8 ± 8,11 67,0 ± 8,19
6. Кролик 3 4,3 ± 1,90 2,8 ± 0,9 3.1 ± 1.01 3,8 ± 1,56 3,9 ± 1,65 5,0 ± 1,68 5,4 ± 1,35 7,4 ± 2,06 7,8 ± 2,11 9,0 ± 2,19 12,6 ± 2,51 17,8 ± 3,19 0,05 24,4 ± 4,11 0,05 27,0 ± 4,92 31,0 ± 5,15 0,05
7. М. свинка 3 2,6 ± 1,07 1,2 ± 0,32 1,5 ± 0,95 2,0 ± 1,04 2,2 ± 1,00 2,8 ± 1,04 3,4 ± 1,17 3,8 ± 1,23 4,1 ± 1,92 5.0 ± 2.00 5,6 ± 1,92 6.3 ± 2.03 11,8 ± 3,09 13,2 ± 3,19 17,2 ± 4,05
8. Белая крыса 3 8,1 ± 1,35 9.2 ± 2.03 13,0± 2,20 19,6 ± 3,35 27,6 ± 5,49 31,6 ± 5,82 37,4 ± 6,05 43,8 ± 6,11 56,6 ± 7,14 59,8 ± 8,07 65,0 ± 8,15 72,3 ± 8,03 84,4 ± 8,15 87,0 ± 9,07 87,6 ± 9,19
* - аттракция микобактерий на поверхности лейкоцитов
№ п/п Вид животных после контакта с возбудителем через:
15 30 45 60 75 90 105 120 3 ч. 4 ч. 4 ч 5 ч. 6 ч. 24 ч. 48 ч. 72 ч.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
1. Лошадь 3 - 0,9 ± 0,03 1,78 ± 0,86 2,82 ± 1,25 3,13 ± 1,08 3,3 ± 1,01 3.9 ± 1.10 4,07 ± 1,51 5,32 ± 1,58 5,4 ± 1,96 5,95 ± 1,05 5,96 ± 1,14 6,8 ± 1,6 8,1 ± 2,90 8,2 ± 1,70
2. Кр. рог. скот 3 - 0,9 ± 0,02 1,5 ± 0,51 2,0 ± 0,52 2,2 ± 0,91 2,8 ± 0,85 3,1 ± 1,05 3,6 ± 1,21 4,0 ± 1,65 4,8 ± 1,12 5,2 ± 2,01 5,6 ± 2,12 5,4 ± 1,36 5,6 ± 2,05 5,6 ± 2,17
3. Овца 3 - 0,8 ± 0,02 1,8 ± 0,30 2,3 ± 0,15 2,8 ± 0,65 3,3 ± 1,02 4,4 ± 1,65 5,8 ± 2,01 5,8 ± 2,11 6,4 ± 3,03 6,0 ± 3,05 6,2 ± 3,18 6,0 ± 2,31 6,8 ± 2,15 6,8 ± 3,11
4. Коза 3 - 0,8 ± 0,11 1,7 ± 0,20 2,1 ± 0,80 2,3 ± 0,7 3,8 ± 1,05 4,0 ± 2,11 4,4 ± 2,01 5,1 ± 2,03 6,4 ± 2,11 6,8 ± 2,19 6,8 ± 2,35 7,6 ± 3,05 7,8 ± 3,12 7,8 ± 3,11
5. Собака 3 0,2 ± 0,01 0,8 ± 0,05 1,7 ± 0,15 2,3 ± 0,17 3,01 ± 1,01 4,5 ± 1,17 5,9 ± 1,19 6.5 ± 2.05 7,2 ± 2,01 7,5 ± 2,10 7,8 ± 2,05 8,7 ± 3,15 9.5 ± 3.05 9,9 ± 3,41 10,1± 3,11
6. Кролик 3 0,3 ± 0,02 1,9 ± 0,3 1,9 ± 0,61 1,3 ± 0,85 2,0 ± 0,90 2,1 ± 0,80 2,6 ± 0,31 2,9 ± 0,68 2,9 ± 0,35 3,0 ± 1,05 3.0 ± 1.01 3,8 ± 1,15 3,9 ± 1,12 3,9 ± 1,05
7. М. свинка 3 - 0,1 ± 0,01 1,2 ± 0,3 1,6 ± 0,03 1,9 ± 0,2 1,1 ± 0,30 1,3 ± 0,9 1,3 ± 0,12 1,8 ± 0,75 1,9 ± 0,90 1,9 ± 0,85 2,0 ± 0,64 2,6 ± 1,01 2,6 ± 1,00 2,7 ± 0,45
8. Белая крыса 3 0,3 ± 0,1 0,9 ± 0,05 1,0 ± 0,04 2,8 ± 0,31 3,6 ± 1,15 5,3 ± 1,36 6,8 ± 2,02 7,5 ± 2,33 8,8 ± 2,14 9.0 ± 3.00 9,2 ± 3,06 9,1 ± 2,95 9,9 ± 2,12 10,0 ± 3,01 10,3 ± 3,05
По мерее срока культивирования клеток показатель фагоцитоза достоверно (Р<0,05) у всех животных увеличивался. Так, например, к 72 ч. у лошади этот показатель доходил до 8,2±1,70 единиц, у овец и коз соответственно 6,8±3,11 и 7,8±3,11. Промежуточное положение имел показатель у крупного рогатого скота - 5,6±2,17. У белой крысы и собаки лейкоциты обладали, по сравнению с другими видами животных, наиболее интенсивной способностью поглощать микобактерий. В основном у последних имело место поглощение более 20 микробных тел.
По нашим исследованиям, самой низкой поглотительной способностью обладали лейкоциты морской свинки, в среднем 2,7±0,45 (Р<0,05) микробных тел на одну фагоцитировавшую клетку.
Резюмируя полученные результаты исследований, отмечаем, что фагоцитарная активность и индекс фагоцитоза лейкоцитов периферической крови в отношении вирулентных микобактерий в значительной степени зависят от интенсивности трансформации малых лимфоцитов в бластные и макрофоганальные клетки, под воздействием самих микобактерий, в первые трое суток культивирования их. В этот период в поле зрения микроскопа с увеличением количества бластных клеток уменьшается количество свободноживущих микобактерий.
Однако при удлинении срока культивирования до 5 суток и более количество бластных клеток уменьшалось вследствие их усиленного разрушения. В этой стадии фагоцитоз фактически не проявляется, количество свободноживущих микобактерий увеличивалось, в том числе и видоизмененных. Последние представлялись в виде удлиненных форм с включением зерен; наряду с кислотоустойчивыми палочками, обнаруживали и кислотоподатливые формы в виде длинных синих палочек с темно-синими зернами на концах.
Заключение. Как показали исследования кроме белых крыс (87,6±9,19%) высокая фагоцитарная активность лейкоцитов, по отношению к микобактериям туберкулеза, было отмечено у собак (67,0±8,19%) и лошади (48,7±5,20%). Нужно полагать, что относительная естественная резистентность указанных видов животных к туберкулезу достигается в результате усиленной борьбы тканей организма, в том числе и лейкоцитов, с внедрившимися в макроорганизм возбудителем туберкулеза. При этом часть из них подвергаются усиленному фагоцитозу и лизису, а часть элиминируется из организма через различные системы выделения.
Вероятно, с этим и можно объяснить незаболеваемость лошадей, используемых животноводстве в качестве гужевого транспорта, не только в свежих туберкулезных очагах, но и в стационарно длительно неблагополучных хозяйствах.
ЛИТЕРАТУРА: 1. Адо А. Д. Патофизиология фагоцитов /А. Д. Адо // М., 1961. С.120. 2. Белановский Г.Д. Влияние бацилл ВСЖ на культуры
тканей лейкоцитов /Г.Д. Белановский// Микробл. Журн. №1, 23. - 1928. 3. Кетлинская С.А. Цитокины мононкулеарных фагоцитов в регуляции воспаления и иммунитета /С. А. Кетлинская, Н.М. Калинина// Иммунология. - 1995. №3 - С.30-44. 4. Чернушенко Е.Ф. Функциональное состояние фогоцитирующих клеток у больных туберкулезом легких /Е.Ф. Чернушенко, В.А. Шатров, Т.И. Беляновская//Проблемы туберкулеза. -1986. №1. - С. 59-63.
ФАГОЦИТАРНАЯ АКТИВНОСТЬ ЛЕЙКОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У
РАЗНЫХ ВИДОВ ЖИВОТНЫХ
Трубкин А.И., Харитонов М.В.
Резюме
Кровь является одним из наиболее тонких и чувствительных показателей, указывающих на функциональное состояние организма, отображающих картину борьбы его с внедрившимися микроорганизмами, гельминтами и его реактивную способность.
PHAGOCYTIC ACTIVITY OF PERIPHERAL BLOOD LEUKOCYTES OF DIFFERENT
SPECIES ZHIVOTHNYH
Trubkin A.I., Haritonov M.V.
Summary
Blood is one of the most subtle and chuvsitvitlnyh indicators pointimg to a picture control with imbedded microorganisms, worms and reativnuyu activity.
УДК 636:619:616-08-031.81-84-035-084
ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ДИАГНОСТИКЕ ГНОЙНОНЕКРОТИЧЕСКИХ БОЛЕЗНЕЙ КОНЕЧНОСТЕЙ У КОРОВ
Улько Л.Г., Фотина Т.И., Березовский А.Б.
Сумский национальный аграрный университет, г. Сумы, Украина
Ключевые слова: болезни конечностей, электронная микроскопия, минеральный состав, структура, копытный рог, микрофлора.
Key words: limb disease, electron microscopy, mineral composition, structure, ungulate horn microflora.
