CC BY
26
Вюник Дншропетровського унiверситету. Бюлопя, медицина Visnik Dnipropetrovs'kogo universitetu. Seria Biología, medicina Visnyk of Dnipropetrovsk University. Biology, medicine
Visn. Dnipropetr. Univ. Ser. Biol. Med. 2016. 7(2), 96-100.
doi:10.15421/021617
ISSN 2310-4155 print ISSN 2312-7295 online
www.medicine.dp.ua
УДК 595.143.6:612.112.31+599. 323.4
Фагоцитарна та метаболiчна актившсть нейтрофШв щурiв на раннiх етапах постембртнального розвитку за впливу бюлопчно активних речовин сольового екстракту Hirudo verbana
РФ. Амшов, ОК. Фролов
Запор1зький нацюнальний yuieepcumem, Запорiжжя, Украта
Тест i3 нпроситм тетразтем показуе ступшь активацп кисневозалежних MexaHi3MiB бактерицидносп фагоцитуючих клпин, тому тдвищення НСТ теспв та фагоцитарних пoказникiв свщчить про щдвищену активацто до баш^ального процесу та тдви-щений захист за допомогою поглинально! здатнoстi клпин в opганiзмi. Вивчали дозований вплив бioлoгiчнo активних речовин медично! п'явки (Hirudo verbana Carena, 1820) на клггинну ланку природженого iмунiтету самок нелшшних щуpiв пiсля вигодову-вання приплоду, яким за два тижш до i два тижш тсля парування уводили внутpiшньoчеpевнo антигени сольового екстракту медично! п'явки (4 ш'екцп) та сам приплод у динамщ на 1, 15, 30, 45, 60-ту добу. Фiксували тварин за допомогою фiксувальнoгo пристрою. Тварин розподшяли на три групи: перша експериментальна група тварин за впливу антигешв сольового екстракту ме-дично! п'явки у кiлькoстi 0,5 мл (is розрахунку 3 мкг/г маси тварини); друга iнгактна група тварин без втручань, третя контрольна група тварин, яким внутршньочеревно вводили фiзioлoгiчний розчин (0,5 мл). Усiх тварин декаттували пiд ефipним наркозом. Шсля чого брали кров, розводили кримапчним гепарином та дoслiджували лабopатopнi показники: загальну кiлькiсть лейкоципв i лейкоцитарну формулу. Показники неспецифiчнo! резистентносп органзму дoслiджували за допомогою тестiв, що характеризу-ють активнiсть нейтpoфiлiв (НСТ-тест, показники фагоцитозу). Виявлено позитивний вплив антигешв сольового екстракту медич-но! п'явки на поглинальну та метабoлiчну активнiсть нейтpoфiлiв у самок та И приплоду на всгх термшах дoслiдження, який про-являвся збшьшенням фагоцитарного iндексу та числа, збшьшенням спонтанного та стимульованого тестiв на вщновлення н!тросинього тетразолю пор!вняно з контролем, збшьшенням юлькосп лейкoцитiв за рахунок зм!ни процесу дифеpенцiацi! та де-понування кл!тин в iмунoгенних органах на пpoлiфеpалiю. Зм!ни !мунолопчних пoказникiв свiдчать про iмунoстимулювальний вплив антигенiв медично! п'явки на лейкопоез та функцioнальну активнiсть нейтpoфiлiв - першу лшга захисту в!д проникнення в органзм р!зних бактеpiй, гри6!в i найпросттших.
Ключовi слова: фагоцитоз; бюлопчно активы речовини; п'явка; кров; лейкоцити; антигени
Phagocytic and metabolic activity of neutrophils of rats in the early stages of post-embryonic development under the influence of biologically active substances of the salt extract of Hirudo verbana
R.F. Aminov, A.K. Frolov
Zaporizhzhia National University, Zaporizhzhia, Ukraine
The nitroblue tetrazolium test reflects the degree of activation of oxygen-dependent mechanisms of bactericidal activity of phagocytotic cells, so the increase in nbt-test and phagocytic indices shows increased activation in the bacterial process and enhanced protection with the help of the absorption ability of the cells in the body. We examined females of nonlinear rats after feeding of their offspring, which 2 weeks before and 2 weeks after mating were injected intraperitoneally with antigens of saline extract of medical leeches (4 injections) and the offspring at days 1, 15, 30, 45, 60. The dosage of salt extract antigens was carried out by determining the protein concentrations using the Lowry protein assay. The animals were immobilized using an immobilizing device. The animals were distributed into three groups: the first research and experimental group of animals was subject to the influence of medical leech salt extract antigens to the amount of 0.5 ml (at the rate of 3 ^g/g of animal weight); the second group of intact animals was not subject to intervention, the third control group of animals was
30mopi3bKuu mijioHcmbuuu yuieepcumem, eyn. Mукоeсbкого, 66, 3anopi^^M, 69600, yxpaiua Zaporizhzhia National University, Zhukovsky Str., 66, Zaporizhzhia, 69600, Ukraine Tel.:+38-067-479-65-91. E-mail: 91_amin_91@mail.ru; a_frolov@ukr.net
administered intraperitoneally saline 0.5 ml of 9% saline solution. We studied females after feeding offspring and offspring at 1, 15, 30, 60 days. The animals were kept in vivarium conditions in individual cages on a standard diet. In the experiment we used 60 females of nonlinear rats and 300 of their offspring. All animals were decapitated under ether anesthesia. After that, we took blood, made a solution with crystal heparin and examined the laboratory parameters: total number of leukocytes and leukocyte formula. Evaluation of nonspecific resistance of the organism was investigated using tests which characterize the activity of neutrophils (nbt-test, phagocytosis indices). The results of our studies revealed a positive effect of antigens of saline extract of medical leeches on the absorptive and metabolic activity of neutro-phils in the females and their offspring in all study periods compared with the control, an increased number of leukocytes, due to the change of the process of differentiation and deposition of cells in immunogenic organs on proliferation. Changes in immunological parameters indicate the immunostimulatory effect of AG ML on leukopoiesis and on the functional activity of neutrophils - the first line of defense against entry into the body of a variety of bacteria, fungi and protozoa.
Keywords: phagocytosis; bioactive substances; medical leech; blood; leukocytes; antigens
Вступ
Використання медичних п'явок у йрудотерапп зумов-лене широким спектром ix терапевтично! да: регуляцш гемостазу та судинного тонусу, протизапальна, регене-рацтна, нейротропна, бактерюстатична, мунотерапев-тична та ш (Kamenev and Baranovski, 2006; Hildebrandt and Lemke, 2011). Зпдно з електрофоретичними даними, у слит медично! п'явки виявлено понад 100 бюлопчно активних речовин (БАР) (Zharov, 2003; Gerashhenko, 2007), яю е антигенами для людини. Тому БАР певним чином впливають на Омунну систему. Секрет слинних залоз медично! п'явки стимулюе фагоцитарну активтсть нейтрофшв (ФАН) та антикомплементарну активтсть секрету (Savinov, 2004).
Оригшальт дослвдження присвячеш вивченню впли-ву прудотерапи на функц1ональну активтсть макрофа-пв при захворюваннях, що супроводжуються вторинни-ми Омунодефщитними станами (наприклад синдром психоемоцшного вигорання), показали, що прудотера-п1я забезпечуе активащю попередньо знижених фагоци-тарних показнишв моноципв або макрофапв до нижньо! меж1 норми та щдвищення функционально! активносп системи фагоцитуючих макрофагов. Прудотерашя вщь грае важливу роль у лжувант остеоартриту та ревмато-!дного артриту (Abdullah еt al., 2012), ппертотчно! хво-роби (Isahanjan and Arutjunjan, 1991), цереброваскуляр-них захворювань (Pospelova and Barnaulov, 2010), псорь азу (Kumar, 2012) та багатьох шших. Медичних п'явок ви-користовують, головним чином, при трансплантащях 1з метою усунення венозного застою (конгестй) (Eldor еt al., 1996; Chepeha еt al., 2002; Frodel еt al., 2004; Mineo еt al., 2004; Hullett еt al., 2007; Bank еt al., 2008; Mumcuogu, 2014).
Установлено оптимальн та цитотоксичт концен-траци антигешв сольового екстракту медично! п'явки для фагоцитарно! реакци нейгрофiлiв i реактивносп л1мфоципв у людини (Aminov, 2015). Зараз прудотера-тя широко застосовуеться у ветеринари для лжування захворювань собак, котв, коней (Sobczak and Kantyka, 2014). Прудотерашя к1з супроводжуеться мцрацшним перерозподшом л1мфоципв кров1 з тимчасовим !х депо-нуванням у мюцях приставлення медично! п'явки, щдвищенням ФАН (Frolov еt al., 2010). Дослвдження впливу прудотерапи на оргашзм кор1в вказують на ефективтсть БАР медично! п'явки, приставлених на бюлопчно активн проекцц, в кров1 спостер1гаеться збшь-шення кшькосп еритроципв та гемоглобшу, базофшв, еозинофшв, альбумЫв, тдвишуеться фагоцитарна активнить лейкоципв, бактерицидна та л1зоцимна активность; дещо зменшуеться фагоцитарний шдекс, вмкт
лейкоцитв, сегментоядерних нейтрофшв, тромбоцитв; уповшьнюеться швидк1сть згортання кров1 (Popova, 2003).
Мета наших дослвджень - ощнити стан фагоцитарно! та метабоЛчно! активносп нейтроф1льних гранулоципв кров1 нелшшних самок шур1в, !х приплоду в динамщ за впливу бюлопчно активних речовин медично! п'явки. Вперше дослвджусться дозований вплив антигенв сольового екстракту на 1мунолопчт процеси шура, народженого в1д самки, яка зазнала впливу антигетв медично! п'явки.
MaTepia™ i методи дослiджень
Дослвдження проводили у навчально-науково-до-слОднш лабораторй' клгтинно! та оргатзмено! бютехно-логй' Запор1зького нац1онального ушверситету. Самкам нелшшних шур1в 2 тижн до i 2 тижш шсля парування вводили внутршньочеревно антигени сольового екстракту медично! п'явки Hirudo verbana Carena, 1820 (4 ш'екцп), отримат методом, запропонованим Frolov (2013). Дозування антигешв сольового екстракту здш-снювали за вмктом б1лка (визначали за ЛоурГ). Ф1ксу-вали тварин за допомогою фксувального пристрою (Aminov, 2015). Тварин розподшяли на три групи: перша експериментальна група тварин перебувала щд впливом антигешв сольового екстракту медично! п'явки у кшькосп 0,5 мл (1з розрахунку 3 мкг/г маси тша твари-ни); друга штактна група тварин на зазнавала втручань, трети, контрольн1й груш тварин внутршньочеревно вводили ф1зюлопчний розчин (0,5 мл). Дослвджували самок п1сля вигодовування приплоду, а також приплОд у динамщ на 1, 15, 30, 45, 60-ту добу.
Експериментальш дослвдження виконаш з дотри-манням м1жнародних принцишв Свропейсько! конвенцй' про захист хребетних тварин, шо використовуються для дослвдних та шших наукових ц1лей, зпдно 1з Законом Укра!ни в!д 21.02.2006 р. № 3447-IV «Про захист тварин в!д жорстокого поводження» та зпдно з етичними нормами та правилами роботи з лабораторними тваринами.
Тварин утримували в умовах в1варш на стандартному рацют в шдивщуальних кликах. Усього в експе-рименп задгяно 60 самок нелшшних шур1в та 300 ек-земпляр1в приплоду. Вс1х тварин декаптували щд еф1р-ним наркозом, дослвджували 1мунолопчн1 показники (к1льк1сть лейкоципв, лейкоцитарну формулу кров1, фагоцитарну активтсть нейтрофшв: фагоцитарний шдекс (Ф1), фагоцитарне число (ФЧ), спонтанний та стимульо-ваний тест на вщновлення нпросинього тетразолю (НСТ-тест)) на 1, 15, 30, 45, 60-ту добу експерименту (Berkalo еt al., 2003). Стимулювали за допомогою 1% суспензй' дргждж1в.
Термши проведения експерименту обрат з урахуван-ням загальновизнаного под1лу в1кових перюдав у шур1в. З 1-1 по 5-ту добу життя тривае перюд новонародженосп, з 6-1 по 21-шу добу - пдсосний перюд, з 22-1 по 50-ту добу -перюд становлення статево! зршосп, з 60-1 доби - перюд статево! зршосп (Zapadnjuk еt al., 1983). Контрольну гру-пу тварин об'еднали з штактною, оск1льки тсля дослвд-ження цих груп тварин отримано дат, як1 статистично значимо не вщр1знялися м1ж собою. У подальших дослвд-женнях для пор1вняння з експериментальною групою використовували контрольну групу.
Статистичну обробку результапв проводили методом обчислення середньо! арифметично!, помилки середньо! арифметично!, середнього квадратичного вщхи-лення за допомогою комп'ютерно! програми SPSS v.21,0. Достов1ршсть р1знищ м1ж показниками визнача-ли за ^критер1ем Стьюдента, попередньо перев1ривши виб1рки на нормальтсть розподшу.
Результата та ix обговорення
У самок, яким уводили внутршньочеревно антигени сольового екстракту медично! п'явки у преембрю-нальний та ембрюнальний перюди розвитку, та у !х приплоду на вах етапах раннього онтогенезу ввдзначали односпрямоваш змши до !х збшьшення пор1вняно з контролем (табл. 1). Самок виводили з експерименту на 60-ту добу. У них проявлялась значна тенденщя до збшьшення кшькосп лейкоципв у перифершнш кров1 у дослщних шур1в до 11,7 ± 0,5 при 6,9 ± 0,2 в контрольнш
rpyni тварин Р < 0,05 (табл. 2). Порiвняльний аналiз лейкоцитарно! формули KpoBi в дослщних групах самок шурДв не виявив системних вiдмiнностей (табл. 1).
Цд даш свДдчать про гомеостатичний розвиток вро-джених i адаптивних ланок Дмунно! системи дослДдже-них шуpiв за впливу БАР медично! п'явки. Як i у дослДдних самок шуpiв, у 1х приплоду також спосте-piгали збiльшення показник1в лейкоципв. Поглинальна активнiсть нейтpофiлiв тварин (рис. 1) за впливу анти-генiв медично! п'явки проявлялась збшьшенням Ф1 в усДх теpмiнах дослДдження, статистично значима на першу добу та у самок (табл. 2).
ФЧ збшьшусться з 15-! доби, статистично значиме збiльшення на 15, 30 та 45-ту добу, статистично значиме зниження на першу добу та у самок. Цд даш збпаються з лiтеpатуpними даними про збшьшення фагоцитарно! активностi нейтрофшв за впливу БАР медично! п'явки. Нейтрофши - перша лшя захисту вДд проникнення в оpганiзм piзноманiтних бакгеpiй, грибДв i найпроспших. Тому збшьшення поглинально! активностi може свДд-чити про шдвищення функц1онально-захисно! здатносп клДтин до фагоцитозу (поглинання, руйнування та виве-дення з оргатзму чужор1дного матеpiалу).
Цд данi тдтверджуються пДд час дослддження окис-но-вщновно! активностД нейтрофДлДв у самок шурДв та !х приплоду (рис. 2). За впливу антигешв медично! п'явки НСТ спонтанний та НСТ стимульований тести статистично значимо збшьшувалися у самок та !х приплоду на всДх термДнах дослДдження порДвняно з контролем (табл. 2).
Таблиця 1
Загальна кшькють лейкоцит1в i лейкоцитарна формула кров1 самок щур1в та ïx приплоду (М ± m, n = 360)
Доба Групи тварин Лейкоцити, 109 кл./л Лейкоцитарна формула кров1, %
нейтрофши л1мфоцити моноцити еозиноф1ли
паличкоядерт сегментоядерн1 загальний в1дсоток
1-ша контроль 8,0 ± 1,1 37,2 ± 4,8 17,0 ± 3,8 54,2 ± 5,0 39,9 ± 4,9 5,9 ± 2,4 0
досл1д 8,9 ± 0,9 28,5 ± 4,5 18,4 ± 3,9 46,9 ± 5,0 50,2 ± 5,0* 2,3 ± 1,5 0,64 ± 0,08*
15-та контроль 4,4 ± 0,3 3,8 ± 1,9 9,4 ± 2,9 13,2 ± 3,4 83,2 ± 3,8 3,4 ± 1,8 0,20 ± 0,04*
дослщ 6,0 ± 0,8* 6,7 ± 2,5 14,6 ± 3,5 21,3 ± 4,1* 75,7 ± 4,3 2,7 ± 1,6 0
30-та контроль 5,3 ± 0,7 3,6 ± 1,9 2,7 ± 1,6 6,4 ± 2,4 89,0 ± 3,1* 4,7 ± 2,1 0
досл1д 4,6 ± 0,3 8,2 ± 2,7* 6,7 ± 2,5 15,0 ± 3,6* 79,7 ± 4,0 5,2 ± 2,2 0,50 ± 0,07*
45-та контроль 6,3 ±1,3 2,3 ± 1,5 6,0 ± 2,4 8,3 ± 2,8 89,5 ± 3,1 2,0 ± 1,4 0,17 ± 0,04
досл1д 6,5 ± 1,0 3,3 ±1,9 7,4 ± 2,6 10,7 ± 3,1 85,2 ± 3,5 3,8 ± 1,9 0,28 ± 0,05*
60-та контроль 4,5 ± 0,3 4,7 ± 2,1 5,7 ± 2,3 10,3 ± 3,0 87,0 ± 3,4* 2,7 ± 1,6 0
дослщ 7,2 ± 0,7* 13,5 ± 3,4* 7,8 ± 2,7 21,3 ± 4,1* 74,0 ± 4,4 3,8 ± 1,9 0,84 ± 0,09*
Самки контроль 6,9 ± 0,2 7,7 ± 2,7 18,7 ± 3,9 26,4 ± 4,4 71,8 ± 4,5 1,3 ± 1,1 0,45 ± 0,07
досл1д 11,7 ± 0,5* 6,0 ± 2,4 17,7 ± 3,8 23,7 ± 4,2 72,1 ± 4,5 3,8 ± 1,9 0,40 ± 0,06
Примтка: * - показники, що достовiрно вiдрiзняються вiд контролю за Р < 0,05.
Таблиця 2
1мунолопчш показники кров1 самок щур1в та ix приплоду (М ± m, n = 360)
Показники Групи тварин Доба Самки
1-ша 15-та 30-та 45-та 60-та
Фагоцитарний гндекс, % контроль 32,0 ± 4,8 64,0 ± 4,8 39,0 ± 4,9 41,0 ± 4,9 60,8 ± 4,9 37,5 ± 4,8
дослщ 45,0 ± 4,9* 66,0 ± 4,7 39,4 ± 4,9 44,4 ± 5,0 65,8 ± 4,7 46,5 ± 5,0
Фагоцитарне число контроль 2,60 ± 0,10* 3,35 ± 0,17 1,98 ± 0,10 2,88 ± 0,14 3,02 ± 0,15 3,01 ± 0,15*
дослщ 1,84 ± 0,10 5,39 ± 0,27* 2,84 ± 0,14* 3,57 ± 0,18* 3,21 ± 0,16 2,26 ± 0,11
НСТ спонтанний, % контроль 71,7 ± 4,5 72,2 ± 4,5 63,7 ± 4,8 54,9 ± 5,0 51,2 ± 5,0
дослщ 93,3 ± 2,5* 91,8 ± 2,7* 92,1 ± 2,7* 85,4 ± 3,5* 86,8 ± 3,4*
НСТ стимульований, % контроль 68,4 ± 4,6 70,0 ± 4,6 74,0 ± 4,4 72,0 ± 4,5 51,2 ± 5,0
досл1д 87,5 ± 3,3* 87,8 ± 3,3* 92,5 ± 2,6* 91,8 ± 2,7* 89,8 ± 3,0*
Примтка: * - показники, що достов1рно в1др1зняються в1д контролю за Р < 0,05.
Phc. 2. HCT-TecT 3a BM.HBy co.boBoro eKCTpaKTy aHTHreHÏB MegHHHoY m'abkh:
a - HeaKTHBoBaHHH Hempo^iin, 6 Ta b - HCT cnoHTaHHHH TecT (cTpinKaMH noMinem rpaHynu HiTpocHHboro TeTpa3onro), s Ta d - HCT cTHMyntoBaHHn TecT (nopHHMH CTpinKaMH noMinem rpaHynu HirpocHHtoro TeTpa3onro, a nepBoHHMH - rpaHynu gpixgxiB); goB^HHa 6apa - 10 mkm; 3a6apmeHHa 1% ca^pamHoM
9 _ a W _ 6 _ e __ \ _ s _ d
Phc. 1. ®aгoцнтaрнa aKTHBHicTb iiciÎTpo(|>i. liB 3a BM.HBy coabOBoro eKCTpaKTy aHTHreHiB MegiHHoY m'abkh: a - HeaKTHBoBaHHH HeËTpo^in; 6-d - aKTHBoBaHi HenTpo^inu; CTpinKaMH noMineHi gpixgxi, 3axonneHi Hempo^iinoM; goB^HHa 6apa - 10 mkm; 3a6apBneHHa 3a PoMaHoBCbKHM - TiM3a
— a % \ — 6 / \ — e * ■I ' \ — s / - d
Tecr i3 HÎTpocHHÎM Terpa3onieM Bigo6pa^ae cryniHb aктнвaцiï KHCHeBo3ane®HHx Mexam3MiB 6aKTepHHHgHocri ^arouHrapHHx ktîthh, ToMy nigBH^eHHa HCT TecriB i rouHTapHHx noKa3HHKÎB CBignaTb npo nigBH^eHy aKTHBauiro go 6aKTepianbHoro npoцecy Ta nigBH^eHHH 3axucT 3a gono-Mororo $arouHTo3y My^opigHoro Marepiany KriraHaMH b opraH3Mi. no3HTHBHi 3mîhh iMyHonoriHHHx noKa3HHKiB CBig-naTb npo iMyHocTHMynroBa^bHHH bkthb aHraremB MegHMHoï n'aBKH Ha neHKonoe3 i noniHyKjieapm Hempo^inH - nepmy mfflk) 3axHCTy Big npoHHKHeHHa b opram3M pi3HHx 6aKTepiH, rpu6iB i HaHnpocrimHx. Цi gaHi 36iraK>Tbca 3 gaHHMH mreparypH (Zharov, 2003; Savinov, 2004; Kamenev and Ba-ranovski, 2006; Gerashhenko, 2007) npo BrniHB MegHMHoï
n'aBKH Ha ®AH Ta œHKouHTH nepu^epHMHoï KpoBi, ocKinb-kh B^e BCTaHoB^eHo, ^o ceKpeT CTHHHHX 3aro3 MegHMHoï n'aBKH CTHMynroe ®AH. OpHriHam>m gocnig^eHHa (Frolov et al., 2008) npHCBanem BHBMeHHro BnruBy ripygoTepaniï Ha ^yHKqioHa^bHy aKTHBHicTb MaKpo^ariB npu 3axBopK>BaHHax, ^o cynpoBog^yroTbca btophhhhmh iMyHoge^iuHTHHMH craHaMH (HanpHKnag CHHgpoMy ncuxoeMouiHHoro BuropaHHa), noKa3anH: ripygoTepania 3a6e3nenye aKTHBaqiro nonepegHbo 3hh®shhx ^arouHTap-hhx noKa3HHKÎB mohohhtb a6o MaKpo^ariB go HH^Hboï Me^i HopMH Ta nigBH^eHHa ^yHKuioHarbHoï aKTHBHocri CHCTeMH ^arouHryroMHx MaKpo^ariB. Ane, nopiBHaHo 3 gocnig^eHHHMH rnmux aBTopiB, Bnepme gocnig^eHo go3o-BaHHH bkthb aHTHreHiB com>oBoro eKCTpaKTy Ha iMyHo^oriMHi npouecH rnypiB, Hapog^eHHx Big caMKH, aKa 3a3Hana BrniHBy aHTHreHiB MegHMHoï n'aBKH.
Biiciumk'ii
BHaBneHO no3HTHBHHH BnnHB aHTHreHiB conbOBoro eK-crpaKiy Megu^HOi n'aBKH Ha nornHHanbHy Ta MeTa6oniHHy aKTHBHicTb HeHipo^iniB y caMOK Ta ix npunnogy Ha pi3Hux TepMiHax gocnig^eHHa nopiBHaHo 3 KomponeM, 36inbmeHHa KinbKOcri neHKOHHTiB 3a paxyHOK 3MiHH nponi^epaHii Ha gH$epeHnjauiK> Ta genoHyBaHHa KniTHH b iMyHoreHHHx op-raHax. 3MiHH iMyHonorwHHx noKa3HHKiB CBignaTb npo iMyHOCTHMynKBanbHHH BnnHB aHTHreHiB MegrnHOi n'aBKH Ha neHKonoe3 Ta ^yHKHioHanbHy aKTHBHicTb Hempo^iniB -nepmy niHiK 3axHCTy Big npoHHKHeHHa b opram3M pi3HO-MaHiTHHx 6aKTepiH, rpH6iB i HaHnpocTimHx.
EiSniorpa^inm iiocii. miiim
Abdullah, S. (ed.), 2012. Hirudo therapy. Leech therapy: Applications and indications in surgery. Arch. Clin. Exp. Surg. 1(3), 172-180.
Aminov, R.F., Frolov, O.K., 2015. Vplyv biologichno aktyvnyh rechovyn sol'ovogo ekstraktu medychnoi' p'javky na fago-cytarnu aktyvnist' nejtrofiliv i cytomorfometrychni zminy limfocytiv krovi ljudyny u kul'turi [Influence of biologically active substances in the salt extract of the medicinal leech on phagocytic activity of neutrophils and cytomorphometric changes of blood lymphocytes in culture]. Naukovyj Visnyk Chernivec'kogo Universytetu Biologija 7(1), 108-112 (in Ukrainian).
Aminov, R.F., Frolov, O.K., Fedotov, J.R., 2016. Prystrij dlja fiksacii' dribnyh laboratornyh tvaryn Ukrai'ny [Device for fixation of small animals laboratory]. Pat. 107289 (in Ukrainian).
Bank, J. (ed), 2008. Medicinal leech fixation in precarious locations. J. Reconstr. Microsurg. 24, 67-68.
Berkalo, L.V. (ed), 2003. Metody klinichnyh ta eksperymen-tal'nyh doslidzhen' v medycyni [Methods of clinic eksperi-mentalnih dozen in charity fund medical]. Polimet, Poltava (in Ukrainian).
Chepeha, D.B. (ed.), 2002. Leech therapy for patients with surgically unsalvageable venous obstruction after revascula-rized free tissue transfer. Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg. 128, 960-965.
Eldor, A., Orevi, M., Rigbi, M., 1996. The role of the leech in medical therapeutics. Blood Rev. 10, 201-209.
Frodel, J., Barth, P., Wagner, J., 2004. Salvage of partial facial soft tissue avulsions with medicinal leeches. Otolaryngol. Head Neck Surg. 131, 934-939.
Frolov, A.K., Kopejka, V.V., Fedotov, E.R., 2010. Vlijanie gi-rudoterapii na fiziologicheskie pokazateli u koz [The impact of treatment on physiological parameters in goats]. Tvaryn-nyctvo Ukrai'ny 7, 7-10 (in Ukrainian).
Frolov, V.M. (ed.), 2008. Dinamika pokazatelej fagocitarnoj aktivnosti monocitov perifericheskoj krovi u bol'nyh s sin-dromom psihojemocional'nogo vygoranija pri girudoterapii [Dynamics of phagocytic activity of monocytes of peripheral blood in patients with burnout syndrome in hirudothera-py]. Ukrams'kij Medichnij Al'manah 11(4), 175-178.
Gerashhenko, L., 2007. Vsjo o pijavke. Girudoterapija dlja raz-nyh tipov ljudej [All about leech. Leech therapy for different types of people]. Piter, Saint Petersburg (in Russian).
Hildebrandt, J.P., Lemke, S., 2011. Small bite, large impact-saliva and salivary molecules in the medicinal leech, Hirudo medicinalis. Naturwissenschaften 98(12), 995-1008.
Hullett, J.S., Spinnato, G.G., Zi, V., 2007. Treatment of an ear laceration with adjunctive leech therapy: A case report. J. Oral. Maxillofac. Surg. 65, 2112-2114.
Isahanjan, G.S., Arutjunjan, V.M., 1991. Medicinskie pijavki ih lechebnoe primenenie v terapevticheskoj klinike. Terapevti-cheskij Arhiv 63(8), 110-112.
Kamenev, O.J., Baranovskij, A.J., 2010. Lechenie pijavkami -teorija i praktika girudoterapii [Treatment by leeches: Theory and practice hirudotherapy]. Ves', Saint Petersburg (in Russian).
Kumar, S.A., 2012. Antiinflammatory effect of leech therapy in the patients of psoriasis. Journal of Pharmaceutical and Scientific Innovation 1(1), 71-74.
Mineo, M., Jolley, T., Rodriguez, G., 2004. Leech therapy in penile replantation: A case of recurrent penile self-amputation. Urology 63, 981-983.
Mumcuoglu, K.Y., 2014. Recommendations for the use of leeches in reconstructive plastic surgery. Evid. Based. Complement. Alternat. Med.
Popova, I.S., 2003. Vosproizvoditel'naja sposobnost' moloch-nyh korov raznyh genotipov i ispol'zovanie girudopunktury dlja ee korrekcii [Reproductive ability of dairy cows of different genotypes and the use of gyrodometry its correction]. Voronezh, P. 1-21 (in Russian).
Pospelova, M.L., Barnaulov, O.D., 2010. Effects of hirudothe-rapy on intravascular thrombosis activation in different groups of patients with cerebrovascular pathologies. Aktuel-nosti Neurol, Psihijatrije Granicnih Podrucja 18(3), 27-32.
Savinov, V.A., 2004. Girudoterapija [Hirudotherapy]. Medicina, Moscow (in Russian).
Sobczak, N., Kantyka, M., 2014. Hirudotherapy in veterinary medicine. Annals of Parasitology 60(2), 89-92.
Zapadnjuk, I.P., Zapadnjuk, V.I., Zaharija, E.A., 1983. Labora-tornye zhivotnye. Razvedenie, soderzhanie, ispol'zovanie v jeksperimente [Laboratory animals. Breeding, keeping, use in the experiment]. Vishha Shkola, Kiev (in Ukrainian).
Zharov, D.G., 2003. Sekrety girudoterapii ili kak lechit'sja pijavkami [Secrets of treatment or how to treat leeches]. Fe-niks, Rostov (in Russian).
Hadiumna do редкonегiï 12.09.2016
