CC BY
42
ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ НА ПЛЕНКАХ ИЗ АЦЕТИЛЦЕЛЛЮЛОЗЫ © А.И. Панасенко, О.В. Рагулина
Из всех органических веществ, входящих в состав живых организмов, наиболее важными в биологическом отношении и наиболее сложными по структуре являются белки. Исследование структуры природных белков и их фракционного состава привлекали ученых еще более ста лет назад. Знание нормальных величин и патологического изменения фракционного состава белков некоторых биологических жидкостей человека (сыворотки крови, спинномозговой жидкости, слезной жидкости и др.) имеет большое значение в клинической медицине для диагностики и лечения многих заболеваний. В настоящее время в клинико-лечебной диагностике для фракционирования белков используются два основных метода: электрофоретическое разделение на бумажных носителях и электрофоретическое разделение в агаровом геле. Предлагается также и метод электрофоретического разделения белков на пленках из ацетата целлюлозы.
В настоящей работе проведена проверка и апробирование этого метода с целью рекомендации его использования в клинической практике. Использовались унифицированные стандартные методики анализа сыворотки крови, рекомендованные для клинических лабораторий. В результате проведенных исследований был выявлен ряд преимуществ методики с использованием ацетилцеллюлозы. Время, необходимое для разделения на пленке из ацетилцеллюлозы, значительно меньше, чем при электрофорезе в геле и на бумаге. Для получения четкой электрофореграммы достаточно
0,1-0,3 мкл образца. Фон, получаемый при окрашивании, легко отмывается, что увеличивает чувствительность обнаружения. Прозрачность ацетилцеллюлозы дает возможность осуществлять прямую фотометрию, а хорошая растворимость в различных растворителях позволяет легко элюировать разделенные компоненты. Электрофореграммы на ацетилцеллюлозе имеют четкие границы, нет размытости (как на бумаге) и нет сливающегося общего фона (как на агаре).
Чтобы показать эффективность метода электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы, была проведена серия исследований фракционного состава белков сыворотки крови практически здоровых людей. Опыты показали, что электрофорез на ацетилцеллюлозе дает значения, наиболее близкие к стандарту. Два других метода (электрофорез на бумаге и в агаровом геле) дают результаты, отличающиеся от стандартных. Электрофорез на бумаге занижает содержание глобулинов на 5-15 % относительно нормы, электрофорез на агаре дает завышение результатов глобулиновых фракций от 5 до 15 %. Методом электрофореза на пленках из ацетилцеллюлозы была проанализирована сыворотка крови 20 больных пациентов ТМО № 2 г. Тамбова. Параллельно проводился анализ другими методами. Результаты оказались аналогичны результатам, полученным при анализе сыворотки практически здоровых людей. Таким образом, метод анализа с использованием ацетилцеллюлозы может быть рекомендован для широкого использования в клинических лабораториях.
ХАРАКТЕРИСТИКИ УФ-СПЕКТРОВ НЕКОТОРЫХ ФЛАВАНОИДОВ © А.И. Панасенко
Получены и проанализированы УФ-спектры 13 флаваноидных соединений, обсуждено отнесение характеристических полос поглощения к фрагментам строения их молекул. Показано, что с помощью УФ-спектров можно успешно идентифицирован, халконы, эпоксихалконы, флаваноны и флавонолы.
УФ-спектры снимали по стандартной методике на регистрирующем спектрофотометре 8РЕСОШЗ ЦУ-УІБ, используя монохроматор с призмой из синтетического кварца и приемное устройство с фотоумножителем М 12 РС?С 52 А. В качестве растворителя применяли ацетонитрил.
В соответствии с особенностями УФ-спектров исследуемые соединения можно разделить на несколько групп.
УФ-спектр 2',4'-дигидроксихалкона имеет три максимума поглощения в области: 271-274, 313-317, 354-368 нм. УФ-спектр 2'-гидрокси-4'-метоксихалкона также имеет три максимума (264-268, 315-316, 360-364 нм). Полосы поглощения в области 313-317 нм проявляются у всех халконов, за исключением их ами-но- и нитропроизводных, и обусловлены 71-л* электронным переходом в циннамоильной части молекулы. Полосы с максимумом при 264-268, 271-274 нм и 354-
