CC BY
89
ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ НА ПЛЕНКАХ ИЗ АЦЕТИЛЦЕЛЛЮЛОЗЫ © А.И. Панасснко, О.В. Рагулина
Из всех органических веществ, входящих в состав живых организмов, наиболее важными в биологическом отношении и наиболее сложными по структуре являются белки. Исследование структуры природных белков и их фракционного состава привлекали ученых еще более ста лет назад. Знание нормальных величин и патологического изменения фракционного состава белков некоторых биологических жидкостей человека (сыворотки крови, спинномозговой жидкости, слезной жидкости и др.) имеет большое значение в клинической медицине для диагностики и лечения многих заболеваний. В настоящее время в клинико-лечебной диагностике для фракционирования белков используются два основных метода: электрофоретическое разделение на бумажных носителях и электрофоретическое разделение в агаровом геле. Предлагается также и метод электрофоретического разделения белков на пленках из ацетата целлюлозы.
В настоящей работе проведена проверка и апробирование этого метода с целью рекомендации его использования в клинической практике. Использовались унифицированные стандартные методики анализа сыворотки крови, рекомендованные для клинических лабораторий. В результате проведенных исследований был выявлен ряд преимуществ методики с использованием ацетилцеллюлозы. Время, необходимое для разделения на пленке из ацетилцеллюлозы, значительно меньше, чем при электрофорезе в геле и на бумаге. Для получения четкой электрофореграммы достаточно
0,1-0,3 мкл образца. Фон, получаемый при окрашивании, легко отмывается, что увеличивает чувствительность обнаружения. Прозрачность ацетилцеллюлозы дает возможность осуществлять прямую фотометрию, а хорошая растворимость в различных растворителях позволяет легко элюировать разделенные компоненты. Электрофореграммы на ацетилцеллюлозе имеют четкие границы, нет размытости (как на бумаге) и нет сливающегося общего фона (как на агаре).
Чтобы показать эффективность метода электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы, была проведена серия исследований фракционного состава белков сыворотки крови практически здоровых людей. Опыты показали, что электрофорез на ацетилцеллюлозе дает значения, наиболее близкие к стандарту. Два других метода (электрофорез на бумаге и в агаровом геле) дают результаты, отличающиеся от стандартных. Электрофорез на бумаге занижает содержание глобулинов на 5-15 % относительно нормы, электрофорез на агаре дает завышение результатов глобулиновых фракций от 5 до 15 %. Методом электрофореза на пленках из ацетилцеллюлозы была проанализирована сыворотка крови 20 больных пациентов ТМО № 2 г. Тамбова. Параллельно проводился анализ другими методами. Результаты оказались аналогичны результатам, полученным при анализе сыворотки практически здоровых людей. Таким образом, метод анализа с использованием ацетилцеллюлозы может быть рекомендован для широкого использования в клинических лабораториях.
ХАРАКТЕРИСТИКИ УФ-СПЕКТРОВ НЕКОТОРЫХ ФЛАВАНОИДОВ © А.И. Панасснко
Получены и проанализированы УФ-спектры 13 флаваноидных соединений, обсуждено отнесение ха-рактеристических полос поглощения к фрагментам строения их молекул. Показано, что с помощью УФ-спектров можно успешно идентифицировать халконы, эпоксихалконы, флаваноны и флавонолы.
УФ-спектры снимали по стандартной методике на регистрирующем спектрофотометре ЯРЕСОГШ ЦУ-ХЛБ, используя монохроматор с призмой из синтетического кварца и приемное устройство с фотоумножителем М 12 17С?С 52 А. В качестве растворителя применяли ацетонитрил.
В соответствии с особенностями УФ-спектров исследуемые соединения можно разделить на несколько групп.
УФ-еиектр 2',4'-дигидроксихалкона имеет три максимума поглощения в области: 271-274, 313-317, 354-368 нм. УФ-спектр 2'-гидрокси-4'-метоксихалкона также имеет три максимума (264-268, 315-316, 360-364 нм). Полосы поглощения в области 313-317 нм проявляются у всех халконов, за исключением их ами-но- и нитропроизводных, и обусловлены я-я* электронным переходом в циннамоилыюй части молекулы. Полосы с максимумом при 264-268, 271-274 нм и 354-
368 нм также можно отнести к полосам л-л* электронных переходов, но уже в бензоильной части молекул халконов.
В спектре 4-нитрохалконов проявляется лишь одна полоса в области 318 нм, которая претерпевает бато-хромное смещение до 368 нм в спектре 2'-гидрокси-4-нитрохалкона. Вследствие сильного электронодонор-ного эффекта диметил аминогруппы полосы поглощения диметиламинохалконов проявляются в области 410 и 438 нм, что согласуется с их ярко-оранжевой окраской.
УФ-спектры 7-гидрокси- и б-трет.бутил-7-гидро-ксихалконов имеют характеристические полосы в об-
ласти 225-235 и 271-274 нм, что соответствует литературным данным для флаванонов. В отличие от флава-нонов и халконов, 7-метоксифлавонол имеет характеристические полосы поглощения в области 231-237, 253-272 и 322-328 нм.
УФ-спектр эпоксихалкона не содержит полос поглощения в длинноволновой части спектра, обусловленных л-л* переходом, что указывает на отсутствие в его молекуле двойной связи. Полоса поглощения в области 248 нм обусловлена возбуждением электронов в карбонильной группе.
СИНТЕЗ И ЦИКЛИЗАЦИЯ ГИДРОКСИХАЛКОНОВ © А.И. Панасенко, Г.А Гончаренко, М.Ю. Самойлова
В продолжение исследований биологически активных веществ флаваноидного ряда проведено изучение реакции каталитической циклизации некоторых гидро-ксихалконов в соответствующие флаваноны.
Циклизацию 2'-гидрокси-, 2'-гидрокси-5'-метил-, 2',4'-дигидрокси- и 2',4'-дигидрокси-6'-метилхалконов во флаваноны проводили в водно-спиртовых растворах гидроксида натрия различной концентрации (0,170; 0,345; 0,703 и 1,41 моль/л) при температурах: 20, 30,40 и 50 °С. Содержание халконов и флаванонов в продуктах реакции определяли спектрофотометрически по оптической плотности анализируемого раствора и равномолярных растворов изомерных халконов и флаванонов при длинах волн, соответствующих максимумам поглощения на спектральных кривых.
Наибольшая степень превращения всех исследованных гидроксихалконов наблюдалась при концен-трации щелочи, равной 0,170 моль/л. С наибольшей скоростью циклизуются 2',4'-дигидрокси- и 2’,4'-дигидрокси-б'-метоксихалкон (реакция практически заканчивается в течение 1 часа). 2'-Гидроксихалкон и его метилзамещенное производное реагируют в два
раза медленнее. Повышение температуры ускоряет процесс циклизации, но мало влияет на равновесное содержание халкона и соответствующего флаванона.
Полученные результаты показывают, что реакция циклизации исследованных халконов в описанных условиях представляет собой обратимый мономолеку-лярный процесс, протекающий с участием молекул растворителя (воды) и характеризующийся низким значением энергии активации, что характерно для изомерных превращений, протекающих через стадию образования циклического переходного состояния. Щелочь выполняет двоякую роль: переводит молекулы гидроксихалкона в состояние активных фенолятных ионов и участвует в обратимой реакции изомерного превращения. Эти выводы согласуются с результатами аналогичных исследований, проведенных авторами ранее. Используемые в работе гидроксихалконы синтезированы реакцией Клайзена - Шмидта и конденсацией коричной кислоты с фенолами в присутствии трехфтористого бора как катализатора. Они охарактеризованы температурами плавления, данными элементного анализа, УФ- и ИК-спектрами.
СИНТЕЗ ПРОИЗВОДНЫХ ХИНОЛИНА ЦИКЛИЗАЦИЕЙ АРИЛИДОВ АЦЕТОУКСУСНОЙ КИСЛОТЫ © С.Е. Сишотнна, И.В. Казанцева
Хинолин и его производные находят широкое применение в медицине и фармокологии как антибиотики, анальгетические и гипотензивные препараты, в качестве пестицидов в сельском хозяйстве, в аналитической химии. Большой практический интерес представляет использование производных хинолина для производства красителей и полупродуктов для их синтеза. Хинолиновая структура лежит в основе цианиновых краси-
телей, применяемых в цветной фотографии, полиграфии. На основе хинальдина получают красители хинолиновый желтый, дисперсный жел тый Ж4”3" и другие. Для синтеза хинолина и его производных используются разнообразные реакции конденсации анилина с карбонильными соединениями.
Целью нашей работы явилась разработка синтеза производных хинолина из арилидов ацетоуксусной
