CC BY
18
Раздел 2 Педиатрия
диагностики аномалий хромосом и генома. Исследование осуществлено при финансовой поддержке Российского научного фонда (грант №14-35-00060).
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ И БИОХИМИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА СИНДРОМА СМИТА-ЛЕМЛИ-ОПИТЦА У РОССИЙСКИХ ПАЦИЕНТОВ
Куркина М.В.1, Байдакова Г.В.1, Михайлова С.В.2, Захарова ЕЮ.1, Шехтер О.В. 'ФГБНУ «Медико-генетический Научный Центр», г. Москва
2ФГБУ Российская детская клиническая больница, г. Москва
Введение. Синдром Смита-Лемли-Опитца (ССЛО) (OMIM #270400) — редкое заболевание с аутосомно-ре-цессивным типом наследования, связанное с нарушением метаболизма холестерина. Частота заболевания 1 на 20000-40000 новорожденных. Данное заболевание характеризуется множественными врожденными аномалиями и умственной отсталостью. В настоящее время идентифицирован ген DHCR7, ответственный за развитие данного синдрома. Этот ген кодирует 7-стеролредук-тазу, необходимую для биосинтеза холестерина. Мутации в данном гене приводят к недостаточной активности микросомального фермента 7-дегидрохолестерол редук-тазы. Вследствие чего происходит накопление 7-деги-дрохолестерина в плазме и клетках пациентов с ССЛО, вызывая нарушение их функции. DHCR7локализован на хромосоме 11q13. В настоящее время известно более 165 мутаций, и с каждым годом молекулярно-генетиче-ский анализ подтверждает новые. Выявлена строгая зависимость между характером мутации и тяжестью клинических проявлений.
Цель исследования. Молекулярно-генетическая и биохимическая диагностика синдрома ССЛО. Материалы и методы. Биохимическая диагностика ССЛО основана на определении концентрации в биологическом материале (плазме крови) трех диагностически значимых параметров: повышение концентрации 7-де-гидрохолестерина, 8-дегидрохолестерина и понижение концентрации холестерина. Комбинация концентраций этих трех веществ является наиболее достоверным маркером данного заболевания. Нами было обследовано 107 детей (возраст от 0 до 6 лет).
Результаты. Диагноз ССЛО был верифицирован биохимическими (методом газовой хромато-масс-спектрометрии) и/или молекулярно-генетически-ми методами у 7 детей: концентрация 7-дегидрохо-лестерина составила от 55 до 563 мкМ\л (норма: 5 - 10 мкМ\л), 8-дегидрохолестерина — от 38 до 502 мкМ\л (норма: 5 — 10 мкМ\л), холестерина — от 148 до 1750 мкМ\л (норма: 2140,00 — 8226,00 мкМ\л). ДНК-диагностика была проведена 3 пациентам. Выявлены две ранее описанные мутации: p.Leu157Pro, p.Thr93Met. В одном случае была обнаружена только одна мутация, в другом — мутаций обнаружено не было, что может быть обусловлено присутствием крупных делеций в гене.
Заключение. Разработан комплексный подход к диагностике ССЛО с применением современных биохимического и молекулярно-генетического методов.
ЭКЗОМНОЕ СЕКВЕНИРОВАНИЕ И ПОИСК ПРЕДИКТОРОВ ЭФФЕКТИВНОСТИ ТЕРАПИИ ЛЕЙКОЗОВ
Лавров А.В.1-2, Смирнихина С.А.1, Адильгереева Э.П.1, Челышева Е.Ю.3, Шухов О.А.3, Туркина А.Г.3, Куцев С.И.12
'ФГБНУ "Медико-генетический научный центр", Москва
2ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Минздрава России, Москва 3ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, г. Москва
Полноэкзомное секвенирование занимает важное место в поиске новых диагностических и прогностических факторов в онкологии. Хронический миело-идный лейкоз (ХМЛ) — одно из частых онкогема-тологических заболеваний. Характерная для ХМЛ транслокация t(9;22)(q34;qll.2) в стволовой кроветворной клетке приводит к образованию химерной ти-розинкиназы BCR-ABL. Ингибиторы тирозинкиназ (ИТК) позволяют с высокой эффективностью достигать и контролировать ремиссию. У части пациентов возможна отмена токсичной и дорогостоящей терапии с сохранением ремиссии. К сожалению, у 50% пациентов после отмены терапии не возникает ремиссия. В настоящее время не существует надежных прогностических факторов безопасности отмены терапии ИТК. Кроме того, от 10 до 25% пациентов изначально отвечают на стандартную терапию ИТК неудовлетворительно и для выделения этой группы пациентов также нет надежных прогностических маркеров. Цель нашей работы — выявить новые потенциальные молекулярные прогностические факторы при ХМЛ методом полноэкзомного анализа. Были отобраны 4 пациента с оптимальным ответом на терапию ИТК (экспрессия BCR-ABL <1% и цитогенетический ответ 0% метафаз, содержащих Ph-хромосому через 6 месяцев терапии) и 4 с неудачей терапии (BCR-ABL >1% и/или цитогенетический ответ >10%). А также 3 пациента с сохранением ремиссии и 3 пациента с рецидивом на фоне отмены терапии ИТК. Экзомное секвенирование провели с использованием набора для обогащения эк-зома и оборудования Ion PGM (LifeTechnologies). Во всех группах пациентов удалось выявить генетические варианты в генах, ассоциированных с опухолевыми процессами: в 11 генах (ANKRD35, FCRL3, ATP7B, IGHV4-31, ANPEP, DNAH9, CCDC165, LRP2, FANCD2, KLB, MAGEC1) у пациентов, достигших оптимального ответа, в 3 генах (MORN2, TMX4, PTCRA) у пациентов с неудачей терапии, в 3 генах (CYP1B1, ALPK2, IRF1) у пациентов с рецидивом и в 1 гене (PARP9) у пациентов со стойкой ремиссией при отмене терапии ИТК. Обнаруженные варианты могут являться новыми генети-
РОССИЙСКИЙ ВЕСТНИКПЕРИНАТОЛОГИИ И ПЕДИАТРИИ, 4, 2015
ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ПЕДИАТРИИ И ДЕТСКОЙ ХИРУРГИИ
ческими маркерами эффективности терапии ИТК и возможности без рецидивной отмены ИТК при ХМЛ.
ДИАГНОСТИКА МИТОХОНДРИАЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ УДЕТЕЙ
Николаева Е.А., Яблонская М.И., Харабадзе М.Н. Обособленное структурное подразделение ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова «Научно-исследовательский клинический институт педиатрии» Минздрава России, г. Москва
Цель: выделение критериев диагностики митохондри-альных заболеваний у детей.
Материалы и методы: комплекс методов клинического обследования, исследование биохимических маркеров митохондриальных заболеваний (КЩС, уровни лактата и коэнзима Q10 в крови, экскреция органических кислот), молекулярно-генетические методы. Результаты. В результате комплексного клинико-ла-бораторного обследования были выявлены 67 пациентов, страдающих митохондриальной патологией. У 2/3 из них (n=46) были выявлены заболевания, обусловленные дефектами митохондриальной ДНК (1-я группа), у 1/3 (n=21) — заболевания, вызванные мутациями ядерной ДНК (2-я группа). В 1-й группе у 1/2 пациентов был определен синдром Кернса-Сейра (полная и неполная формы), связанный с митохон-дриалной делецией. Более чем у 1/3 больных (n=16) выявлены синдромы MELAS и MERRF. Редко встречающиеся формы патологии (4 нозологические формы, в том числе синдром NARP) были установлены у отдельных пациентов (n=7). Во 2-й группе почти 1/2 больных (n=12) страдала подострой некротизирую-щей энцефаломиопатей Ли (Leigh); у 3 детей определен синдром LBSL, у 2 — синдром Барта. Более редко встречающиеся формы (4 формы, в том числе синдром Альперса) установлены у 4 пациентов. Ряд нозологических форм (синдромы Кернса-Сейра, MELAS, MERRF, NARP, Ли, LBSL, Барта, Альперса) имели достаточно четкие клинико-лабораторные кртерии диагностики — совокупность клинических признаков, данные МРТ, экскреции органических кислот. Эти больные обоснованно направлялись на молекуляр-но-генетическое исследование. Диагностика 5 форм патологии (энцефаломиопатия с кардиомиопатией, энцефаломиопатия с пирамидно-экстрапирамидным синдромом, офтальмоплегическая энцефаломиопа-тия, энцефаломиопатия с резкой задержкой физического развития, синдром деплеции митохондриальной ДНК 7) была связана с длительным дифференциально-диагностическим поиском, необходимостью моле-кулярно-генетического исследования и митохондри-альной и ядерной ДНК. Дополнительным критерием диагностики митохондриального заболевания служил низкий показатель коэнзима Q10 в крови. Выводы. Значимыми критериями диагностики ми-тохондриальных заболевний являются результаты клинического, нейрорадиологического и биохимического обследования, что во многих случаях позволяет
установить форму патологии и направить ребенка на определенное молекулярно-генетическое исследование.
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ГЕНОМНАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ У БОЛЬНЫХ С СОЧЕТАННЫМИ ВРОЖДЕННЫМИ ПОРОКАМИ СЕРДЦА И ПОЧЕК
Первунина Т.М.1-2, Костарева А.А.1, Злотина А.А.1, Моисеева О.М.1, Грехов Е.В.1, Морозов К.А.1, Вершинина Т.Л.1, Эрман М.В.2
'ФГБУ «Северо-Западный федеральный медицинский исследовательский центр» МЗ РФ, г. Санкт-Петербург, Россия 2ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный университет», г. Санкт-Петербург, Россия
Введение. Врожденные пороки сердца и почек имеют высокую распространенность у детей и оказывают серьезное негативное влияние на здоровье, развитие и функциональные способности. Возрастает значение генетических факторов, в частности, генетических мутаций, лидирующих в факторах риска аномалий развития.
Цель исследования. Изучение вклада генетических факторов в формирование сочетанных пороков сердца и почек у детей.
Материалы и методы. В исследование включено 25 детей с сочетанными врожденными пороками сердечно—сосудистой и мочевой систем в возрасте от 1 месяца до 18 лет (средний возраст 5,8 лет); мальчиков — 16, девочек — 9. Полногеномный высокоразрешающий цитогенетический анализ проведен на секвенаторе нового поколения. Сравнительная геномная гибридизация проводилась на сканере Agilent Tecknology. Результаты: У 3 из 25 детей выявлены известные хромосомные аномалии (1 — трисомия 21, 2 — делеция DiGeorge chromosome region). При этом необходимо отметить отсутствие у этих пациентов характерных для данных синдромом фенотипов. Еще у 5 из 25 больных выявлены микроструктурные аномалии хромосом, приводящие к изменениям в следующих генах:
1 — дупликация в гене DHFR (дигидрофолат—ре-дуктаза), являющемся ключевым ферментом во внутриклеточном метаболизме фолатов, участвующий в регуляции экспрессии некоторых транскипционных факторов (NKX2.5, TBX1, TBX20), необходимых для формирования сердца в эмбриогенезе.
2 — дупликация гена ZNF649 — транскрипционный фактор — с доменом типа «Цинковые пальцы», участвующий в кардиогенезе и нефрогенезе.
3 — дупликация гена NPHP1 Nephrocystin 1, ассоциированного с различными вариантами цилиопатий.
4 — дупликация гена NNT (nicotinamide nucleotide transhydrogenase), который является белком внутренней мембраны митохондрий и компонентом электрон—транспортной дыхательной цепи.
5 — делеция LCLAT1 (lysocardiolipin acyltransferase 1). Продукт экспрессии данного гена катализирует аци-
РОССИЙСКИЙ ВЕСТНИКПЕРИНАТОЛОГИИ И ПЕДИАТРИИ, 4, 2015
