CC BY
12
ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ПЕДИАТРИИ И ДЕТСКОЙ ХИРУРГИИ
3ГБОУ ВПО «Московский городской психолого-педагогический университет», г. Москва 4ГБОУ ДПО Российская медицинская академия последипломного образования Минздрава России, г. Москва
Среди обширного спектра различных генетических и хромосомных аномалий видное место занимает синдром Шерешевского-Тернера. У пациентов с этим синдромом кариотип обычно представлен как 45,Х (регулярная и мозаичная формы), встречаются также кариотипы 45,X/46,XY; 46,X,i(X) и др. Признаки синдрома включают в себя задержку развития, низкий рост, отёки кистей и стоп, гипотрофию новорождённых, аменорею. У 16% пациентов наблюдается умственная отсталость. Среди дополнительных признаков отмечают врождённый порок сердца, аномалии мочевой системы, крыловидную складку шеи, микрогнатию, снижение зрения и слуха, широкую грудную клетку, короткую шею, искривление голеней, гипоплазию или гипертрофию ногтей рук и ног. Частота синдрома составляет 1 : 2-5000. По данным литературы, более 90% эмбрионов с кариотипом 45,Х погибают внутриутробно. В клинику института поступила девочка 3 лет. Причиной обращения послужили эпилепсия (судороги с возраста 1 г 3 мес), задержка психоречевого и психомоторного развития, атаксия, микроцефалия. Также были отмечены оттопыренные ушные раковины, неправильный прикус, плосковальгусные стопы, гипертелоризм глазных щелей. На основании клинических признаков было принято решение о проведении цито-генетического исследования. Культура лимфоцитов периферической крови, приготовление препаратов, дифференциальное окрашивание хромосом по длине и анализ кариотипа проводились по стандартным методикам. Кариотип ребёнка после проведения ци-тогенетического исследования — 45,Х, что означает регулярную форму моносомии хромосомы Х. Высокая степень тяжести патологических проявлений заставляет предположить у данного пациента наличие субмикроскопических перестроек хромосом, не обнаруженных стандартными цитогенетическими методами, поэтому ребёнку было рекомендовано молекулярно-цитогенетическое исследование (молекулярное кариотипирование). Применение современных высокотехнологических молекулярно-цито-генетических методов позволяет обнаружить малые (субмикроскопические) перестройки генома, установить корреляции «генотип-фенотип» и выявить гены-кандидаты генетических и наследственных заболеваний.
СЛУЧАЙ СЛОЖНОЙ ПЕРЕСТРОЙКИ ХРОМОСОМЫ 7 У МАЛЬЧИКА С УМСТВЕННОЙ ОТСТАЛОСТЬЮ ЛЕГКОЙ СТЕПЕНИ И МИКРОАНОМАЛИЯМИ РАЗВИТИЯ
Куринная О.С.1,2,3, Ворсанова С.Г.12,3, Воинова В.Ю.12,3, Кравец В.С.1,2,3, Зеленова М.А.1,2,3, Булатникова М.А.4, Юров Ю.Б.12 3, Юров И.Ю.12 5
'Обособленное структурное подразделение ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова «Научно-исследовательский клинический институт педиатрии» Минздрава России, г. Москва 2ФГБНУ «Научный центр психического здоровья», г. Москва
3ГБОУ ВПО «Московский городской психолого-педагогический университет», г. Москва "Медицинский центр "Покровский" ООО "ПБСК", г. Санкт-Петербург
5ГБОУ ДПО Российская медицинская академия последипломного образования Минздрава России, г. Москва
В лабораторию молекулярной цитогенетки нервно-психических заболеваний для проведения исследования методом сравнительной геномной гибридизации на микрочипах (молекулярное карио-типирование или array CGH) с использованием SNP/ олигонуклеотидной матрицы Affimetrix Cytoscan HD был направлен мальчик 16-ти лет с легкой степенью умственной отсталости, аутистическими чертами и приступами агрессивного поведения, церебрасте-ническим синдромом, дисплазией соединительной ткани сердца, пролапсом митрального клапана, астеническим телосложением, кифосколиозом, деформацией грудной клетки, широкой сандалевидной щелью, «выбухающими» и мобильными суставами, длинными пальцами, повышенной растяжимостью кожи, удлиненным лицом, тяжелой нижней челюстью, астигматизмом, дальнозоркостью, косоглазием и птозом левого глаза. При проведении цитогенети-ческого обследования, являющегося первым этапом всех молекулярно-цитогенетических исследований, у ребенка был обнаружен дополнительный материал неизвестного происхождения на длинном плече хромосомы 7, а также был выявлен гетерохроматиновый вариант в виде инверсии гетерохроматинового блока хромосомы 9. Результат цитогенетическо-го исследования в соответствии с международной номенклатурой был записан следующим образом: 46,XY,der(7)add7(q36),9phqh. Родителям ребенка также были проведены цитогенетические исследования, у них были выявлены нормальные кариотипы (46,XX,9phqh,15pss у матери; 46,XY у отца). С помощью молекулярного кариотипирования у мальчика были выявлены две несбалансированные хромосомные перестройки размером более 1 млн пн. Обнаружены делеция короткого плеча хромосомы 7 в участке 7p22.3p22.1 размером более 4,5 млн пн, затронувшая 64 гена, 28 из которых индексированы в OMIM, и дупликация длинного плеча хромосомы 7 в участке 7q36.1q36.3 размером 7,43 млн пн, затронувшая 66 генов, 23 из которых индексированы в OMIM. По всей видимости, у ребенка имеется сложная ре-комбинантная перестройка. Представленный случай демонстрирует необходимость сочетания цитоге-нетических и молекулярных технологий (таких как молекулярное кариотипирование) для эффективной
РОССИЙСКИЙ ВЕСТНИКПЕРИНАТОЛОГИИ И ПЕДИАТРИИ, 4, 2015
Раздел 2 Педиатрия
диагностики аномалий хромосом и генома. Исследование осуществлено при финансовой поддержке Российского научного фонда (грант №14-35-00060).
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ И БИОХИМИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА СИНДРОМА СМИТА-ЛЕМЛИ-ОПИТЦА У РОССИЙСКИХ ПАЦИЕНТОВ
Куркина М.В.1, Байдакова Г.В.1, Михайлова С.В.2, Захарова ЕЮ.1, Шехтер О.В. 'ФГБНУ «Медико-генетический Научный Центр», г. Москва
2ФГБУ Российская детская клиническая больница, г. Москва
Введение. Синдром Смита-Лемли-Опитца (ССЛО) (OMIM #270400) — редкое заболевание с аутосомно-ре-цессивным типом наследования, связанное с нарушением метаболизма холестерина. Частота заболевания 1 на 20000-40000 новорожденных. Данное заболевание характеризуется множественными врожденными аномалиями и умственной отсталостью. В настоящее время идентифицирован ген DHCR7, ответственный за развитие данного синдрома. Этот ген кодирует 7-стеролредук-тазу, необходимую для биосинтеза холестерина. Мутации в данном гене приводят к недостаточной активности микросомального фермента 7-дегидрохолестерол редук-тазы. Вследствие чего происходит накопление 7-деги-дрохолестерина в плазме и клетках пациентов с ССЛО, вызывая нарушение их функции. DHCR7локализован на хромосоме 11q13. В настоящее время известно более 165 мутаций, и с каждым годом молекулярно-генетиче-ский анализ подтверждает новые. Выявлена строгая зависимость между характером мутации и тяжестью клинических проявлений.
Цель исследования. Молекулярно-генетическая и биохимическая диагностика синдрома ССЛО. Материалы и методы. Биохимическая диагностика ССЛО основана на определении концентрации в биологическом материале (плазме крови) трех диагностически значимых параметров: повышение концентрации 7-де-гидрохолестерина, 8-дегидрохолестерина и понижение концентрации холестерина. Комбинация концентраций этих трех веществ является наиболее достоверным маркером данного заболевания. Нами было обследовано 107 детей (возраст от 0 до 6 лет).
Результаты. Диагноз ССЛО был верифицирован биохимическими (методом газовой хромато-масс-спектрометрии) и/или молекулярно-генетически-ми методами у 7 детей: концентрация 7-дегидрохо-лестерина составила от 55 до 563 мкМ\л (норма: 5 - 10 мкМ\л), 8-дегидрохолестерина — от 38 до 502 мкМ\л (норма: 5 — 10 мкМ\л), холестерина — от 148 до 1750 мкМ\л (норма: 2140,00 — 8226,00 мкМ\л). ДНК-диагностика была проведена 3 пациентам. Выявлены две ранее описанные мутации: p.Leu157Pro, p.Thr93Met. В одном случае была обнаружена только одна мутация, в другом — мутаций обнаружено не было, что может быть обусловлено присутствием крупных делеций в гене.
Заключение. Разработан комплексный подход к диагностике ССЛО с применением современных биохимического и молекулярно-генетического методов.
ЭКЗОМНОЕ СЕКВЕНИРОВАНИЕ И ПОИСК ПРЕДИКТОРОВ ЭФФЕКТИВНОСТИ ТЕРАПИИ ЛЕЙКОЗОВ
Лавров А.В.1-2, Смирнихина С.А.1, Адильгереева Э.П.1, Челышева Е.Ю.3, Шухов О.А.3, Туркина А.Г.3, Куцев С.И.12
'ФГБНУ "Медико-генетический научный центр", Москва
2ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Минздрава России, Москва 3ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, г. Москва
Полноэкзомное секвенирование занимает важное место в поиске новых диагностических и прогностических факторов в онкологии. Хронический миело-идный лейкоз (ХМЛ) — одно из частых онкогема-тологических заболеваний. Характерная для ХМЛ транслокация t(9;22)(q34;qll.2) в стволовой кроветворной клетке приводит к образованию химерной ти-розинкиназы BCR-ABL. Ингибиторы тирозинкиназ (ИТК) позволяют с высокой эффективностью достигать и контролировать ремиссию. У части пациентов возможна отмена токсичной и дорогостоящей терапии с сохранением ремиссии. К сожалению, у 50% пациентов после отмены терапии не возникает ремиссия. В настоящее время не существует надежных прогностических факторов безопасности отмены терапии ИТК. Кроме того, от 10 до 25% пациентов изначально отвечают на стандартную терапию ИТК неудовлетворительно и для выделения этой группы пациентов также нет надежных прогностических маркеров. Цель нашей работы — выявить новые потенциальные молекулярные прогностические факторы при ХМЛ методом полноэкзомного анализа. Были отобраны 4 пациента с оптимальным ответом на терапию ИТК (экспрессия BCR-ABL <1% и цитогенетический ответ 0% метафаз, содержащих Ph-хромосому через 6 месяцев терапии) и 4 с неудачей терапии (BCR-ABL >1% и/или цитогенетический ответ >10%). А также 3 пациента с сохранением ремиссии и 3 пациента с рецидивом на фоне отмены терапии ИТК. Экзомное секвенирование провели с использованием набора для обогащения эк-зома и оборудования Ion PGM (LifeTechnologies). Во всех группах пациентов удалось выявить генетические варианты в генах, ассоциированных с опухолевыми процессами: в 11 генах (ANKRD35, FCRL3, ATP7B, IGHV4-31, ANPEP, DNAH9, CCDC165, LRP2, FANCD2, KLB, MAGEC1) у пациентов, достигших оптимального ответа, в 3 генах (MORN2, TMX4, PTCRA) у пациентов с неудачей терапии, в 3 генах (CYP1B1, ALPK2, IRF1) у пациентов с рецидивом и в 1 гене (PARP9) у пациентов со стойкой ремиссией при отмене терапии ИТК. Обнаруженные варианты могут являться новыми генети-
РОССИЙСКИЙ ВЕСТНИКПЕРИНАТОЛОГИИ И ПЕДИАТРИИ, 4, 2015
