CC BY
22
Тезисы докладов конференции «Аутоиммунные и иммунодефицитные заболевания»
Выводы
Наличие ПОС значимо ухудшает качество жизни больных СД1, хотя это не опосредуется ни худшей компенсацией углеводного обмена, ни более низкой комп-лаентностью к терапии. ПОС негативно влияет на большинство аспектов КЖ, охватывающих физическое, социальное и психологическое функционирование больного.
Авторы
Малышева И.Е., Топчиева Л.В., Барышева О.Ю., Волкова Т.О. Место работы ИБ КарНЦ РАН Тема
Экспрессия гена Dicer в крови больных ревматоидным артритом на фоне терапии метотрексатом Ключевые слова
Ревматоидный артрит, экспрессия генов, ген DICER,
метотрексат
Введение
В настоящее время большое внимание уделяется роли отдельных микроРНК в патогенезе ревматоидного артрита (РА). Тем не менее, сведения о роли ферментов, участвующих в их биогенезе, например, рибонуклеазе Dicer в развитии данной патологии очень малочисленны. Исследование уровня транскриптов генов представляется очень удобным инструментом для изучения механизмов участия некоторых белков в развитии заболеваний. Однако как изменяется транскрипционная активность гена DICER у больных РА и влияет ли на этот процесс препараты, часто применяемые для их лечения, до сих пор не известно. Цель
Изучение уровня экспрессии гена DICER в лейкоцитах периферической крови (ЛПК) больных ревматоидным артритом на фоне терапии метотрексатом. Материалы и методы
Методом ПЦР в режиме реального времени исследован уровень транскриптов гена DICER у больных РА в дебюте заболевания (n = 6, ср. возраст - 54,50+5,96), принимающих метотрексат в дозе 15-22,5 мг/нед.(п = 30, ср. возраст - 53,87 ±1,15), а также в контрольной группе (здоровые доноры): п = 33, ср. возраст - 49,93 ±1,87)). Для сравнения уровня транскриптов в исследованных группах использован критерий Вилкоксона-Манна—Уитни (пакет программ Statgraphics 2.1). Данные представлены в виде M±m. Результаты
Уровень экспрессии гена DICER в лейкоцитах крови больных РА в дебюте заболевания был достоверно снижен по сравнению с контролем: 0,074+0,015 и 0,139+0,014 (р<0,001). Количество транскриптов указанного гена у больных РА на фоне проводимой терапии метотрексатом не отличалось от этого показателя у больных в дебюте заболевания (р>0,05). Выводы
Уровень транскриптов гена DICER в ЛПК снижается при развитии РА. Метотрексат не оказывает влияние на содержание мРНК указанного гена в ЛПК.
Авторы
Мамедов А.Э., Белогуров А.А., Воробьева Н.Е., Фаворо-ва О.О., Кулакова О.Г., Пономаренко Н.А., Габибов А.Г. Место работы ИБХРАН
Тема
Молекулярные механизмы презентации аутоантиген-
ных пептидов на MHC класса II, катализируемой HLA-
DM.
Ключевые слова
Рассеянный склероз, Главный комплекс гистосовме-стимости II класса, HLA-DR1, HLA-DR15, HLA-DM, пептид гемагглютинина HA, основный белок миелина MBP Введение
Главный комплекс гистосовместимости II класса (MHC II) играет важную роль не только в адаптивном иммунном ответе на чужеродные патогены, но и в развитии ряда аутоимунных заболеваний. Комплексы MHC II, располагаясь на поверхности антиген-презентирующих клеток, презентируют пептиды Т-клеточным рецепторам на поверхности Т-клеток, образуя тримолекулярные комплексы, которые в свою очередь запускают каскад иммунного ответа. В процессе загрузки MHC II пептидом непосредственное участие принимает HLA-DM, неклассический вариант МНС, который ускоряет процесс обмена пептида на HLA-DR, предзагруженном пептидом инвариантной цепи CLIP. Аллель HLA-DR2b (HLA-DRA, HLA-DRB1 1501) является одной из основных молекул, участвующих в развитии рассеянного склероза — хронического нейродегенера-тивного аутоиммунного заболевания. HLA-DR2b презен-тирует иммуннодоминантный аутоантигенный пептид основного белка миелина (MBP) - MBP85-99. Цель
Поиск протективной аллели HLA-DR в случае рассеянного склероза и установление молекулярного механизма протективности данной аллели.
Материалы и методы
В нашей лаборатории для экспрессии в клетках насекомых ранее были получены генетические конструкции pMT-V5/His_Fos и pRmHa_Jun, кодирующие последовательности лейциновых мотивов фактора транскрипции fos в случае а-цепи и фактора jun в случае ß-цепи для повышения уровня экспрессии и стабильности результирующего DR комплекса. Вариабельные и константные домены обеих цепей HLA-DR были амплифицированы методом ПЦР с использованием геномной ДНК клеток человека линии HeLa в качестве матрицы. Полученные ПЦР-продукты были лигированы в генетические конструкции pMT-V5/His_Fos и pRmHa_Jun по сайтам рестрикции KpnI/AgeI и BamHI/SalI для а- и ß-цепей соответственно. Генетическая конструкция для экспрессии белков в суспензионных клеток человека HEK pFUSE_lhFc, кодирующие последовательность константного фрагмента тяжелой цепи иммуноглобулина человека (Fc) с удлиненным hinge, была ранее получена в нашей лаборатории. Вариабельные и константные домены а- и ß-цепей HLA-DM были амплифицирова-ны методом ПЦР с использованием геномной ДНК клеток человека линии HeLa в качестве матрицы. Полученные ПЦР-продукты были лигированы в генетическую конструкцию pFUSE_lhFc по сайтам рестрикции EcoRI и NcoI. На основе pFUSE_DMa_lhFc методом перекрывающейся ПЦР была получена генетическая конструкция с точечной заменой N165D для а-цепи, которая предположительно является потенциальным сайтом гликозилирования.
Плазмидами pMT-V5/His_DRa_Fos
и pRmHa_DRß_Jun и плазмидой, кодирующей ген устойчивости к антибиотику бластицидину, методом липофек-ции была трансфецирована клеточная линия S2
