CC BY
36
Содержание малонового диальдегида в опухолевых клетках по отношению к здоровой ткани яичников возрастает на 41% (р=0,047), что говорит о деструктивных воздействиях опухоли на липидный компонент мембран. Рост уровня свободных сульф-гидрильных групп на 55% (р=0,071) подтверждает усиление процесса окисления мембранных белков (рис.1.) [10].
У
}
МДА
(□крысы с ОЯ Пинтактные крысы I
Рис.1. Содержание МДА и активность ГР в опухолевых клетках
Глутатион восстановленный, участвуя в обезвреживании перекисей и гидроксильных радикалов, тем самым защищая тиоловые группы белков, является одним из важнейших компонентов системы антиоксидантной защиты клетки [7]. Поскольку 08И также участвует в синтезе белка, регуляции и экспрессии генов клеточного цикла, то прирост его содержания в опухолевых клетках становится нужен для существования опухоли [4]. Активность глутатионредуктазы - НАДФ+-зависимого фермента, катализирующего превращение окисленного глутатиона в восстановленный, также нарастает (р=0,024). Сохранение глутатио-на в восстановленном состоянии необходимо для предохранения ряда ферментов, содержащих 8Н-группы, от инактивации, ограждение мембраны клетки от действия перекисей. Активация глутатионредуктазы (на 25% по сравнению с контрольной группой) и увеличение 08И (на 20%) поддерживают высокий антипе-рекисный защитный барьер вокруг неопластических клеток. Эту же функцию удаления перекиси водорода выполняет и каталаза, уровень которой в опухолевой ткани на 14% выше, чем в здоровой ткани яичников интактных крыс (р=0,038) (рис.2.).
Рис.2. Содержание глутатиона восстановленного, сульфгидрильных групп и активность каталазы в опухолевых клетках
При развитии асцитной опухоли яичников (ОЯ) в брюшной полости растет уровень активности антиоксидантного звена, ответственного за утилизацию пероксидов. Однако степень выраженности повреждающего действия радикалов на компоненты мембран клеток говорит о недостаточном уровне антипере-кисной защиты. С помощью НСТ-теста получены данные о доле активных Нф (ДАН), способных генерировать АФК. ДАН в асцитической жидкости ниже, чем в периферической крови крыс-опухоленосителей (41,4±3,9 против 56,3±4,8; р=0,0352), а ДАН периферической крови интактных животных значительно ниже, чем в крови крыс с ОЯ (2,88±0,6 против 56,3±4,8; р=0,0002). МПО - фермент, локализующийся преимущественно в специфической зернистости цитоплазмы Нф. МПО разрушает перекись водорода, образующуюся внутриклеточно в процессе жизнедеятельности клеток. Киллерный эффект Нф обусловлен секрецией МПО, которая с Н2О2 в сочетании с галогенидами образует прооксиданты, повреждающие клетки-мишени. Установлено, что активность МПО в Нф асцитической жидкости крыс выше, чем в Нф периферической крови крыс с асцитной ОЯ (1,81±0,15 против
1,35±0,09; р=0,0281), а уровень МПО в крови крыс с опухолью ниже такового в крови интактных животных (1,35±0,09 против 2,24±0,1; р=0,0006) (рис.3.).
60 50 40
30 =
20 §
10 0
асцитическаякровь крыс с кровь жидкость опухолью интактных крыс
Рис.3. Уровень миелопероксидазы и доля активных нейтрофилов в асцитической жидкости, периферической крови
Фагоцитарная активность Нф периферической крови крыс с опухолью значительно снижена по сравнению с Нф крови здоровых крыс, а фагоцитарная активность Нф асцитической жидкости ниже, чем Нф периферической крови.
Таблица 1
Фагоцитарная активность нейтрофилов
группа ФИ,% ФЧ
Нф асц.жидкости крыс с опухолью (п=19) 19,8±4,0 1,35±0,1
Нф крови крыс с опухолью (п=19) 49,2±7,1* 1,4±0,07*
Нф крови здоровых крыс (п=9) 81,3±2,85* 1,75±0,1*
Примечание: * - различия статистически значимы (р<0,01)
Полученные данные свидетельствуют о снижении киллер-ного эффекта Нф на клетки асцитной опухоли наряду с увеличением активности МПО, что не позволяет в достаточной мере реализовать фагоцитарный потенциал. Наряду с ростом продукции прооксидантов при «респираторном взрыве» в организме животных-опухоленоситей идет усиление активности антипере-кисного звена антиоксидантной системы. Изменения в системе ПОЛ-АО и активности Нф можно рассматривать как адаптационные на начальных стадиях развития асцитной ОЯ. Но включение естественных защитных механизмов не является достаточным для уменьшения повреждающего действия опухоли.
Литература
1. Андреева Л.И. и др. // Лаб.дело.- 1988.- .№11.- С. 41.
2. Асатиани В.С. Ферментные методы анализа.- М.: Медицина, 1969.
3. Васильева Г.С. Биология трансплантируемых опухолей.- Алма-Ата,1982.
4. Горожанская Э.Г. и др.// Биохим.- 2001.- №2.- С. 273.
5. Долгушин ИИ., Бухарин О.В. Нейтрофилы и гомеостаз.- Екатеринбург.- 2001.
6. Карпищенко А.И. Современные медицинские технологии.- СПб, 1999.
7. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. // Успехи совр. биологии.- 1990.- Т.110, вып.1(4).- С. 20-33.
8. Меньщикова Е.Б., Зенков Н.К. // Успехи совр. биологии.- 1993.- Т.113, вып.4.- С. 442-455
9. Лаврова В.С.и др. Нейтрофилы и злокачественный рост.- Томск: Изд-во Томского университета.- 1992.
10. Лю М. Б. и др. // Современные аспекты онкологии и радиологии. Сб. научных. трудов, посвященных 80-летию академика Балмуханова С. Б.- Алматы, 2002.- С. 39-42.
11. Bradford MM. // Anal. Biochem., 1976.- №72.- Р. 248.
УДК 616.381-002:615.31
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ ФОРМ ГИПОХЛОРИТА НАТРИЯ В ЛЕЧЕНИИ РАСПРОСТРАНЕННОГО ПЕРИТОНИТА
Ю.Ю. БЛИНКОВ, С.А. ЕШТОКИН, В.А. ЛИПАТОВ, Б.С. СУКОВАТЫХ*
Проблема перитонита не теряет своей актуальности в связи с сохраняющейся высокой летальностью и большим числом послеоперационных осложнений [3]. Современные методы лечения перитонита зачастую не приносят желаемого результата. Не всегда удается купировать воспалительный процесс, само по себе
305041, г. Курск, ул. К.Маркса 3. Курский ГМУ
развитие перитонита нередко дает новые осложнения. Одним из основных компонентов оперативного вмешательства при распространенном перитоните, влияющим на конечный результат лечения, является санация брюшной полости. Применение антисептиков не всегда ведет к удовлетворительным результатам. Среди штаммов микроорганизмов возбудителей перитонита отмечается резистентность к антибактериальным средствам, которые сами могут быть причиной осложнений (спаечная болезнь) [1,2].
Для санации брюшной полости применяется гипохлорит натрия (ЫаСЮ), который можно отнести к числу универсальных антибактериальных средств ввиду его активности в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов и анаэробов. Вместе с тем эффективность ЫаСЮ при лечении перитонита снижается из-за быстрого вымывания его из брюшной полости, растворения и инактивации перитонеальным экссудатом. Повреждающее действие ЫаСЮ на мезотелий брюшины способствует возникновению спаек, что потом может привести к развитию спаечной болезни и кишечной непроходимости [4].
Цель - анализ влияния иммобилизированных форм ЫаСЮ на течение воспалительного процесса и послеоперационное спайкообразование при распространенном перитоните.
Материалы и методы. Раствор ЫаСЮ в геле метилцеллю-лозы готовился так: 8 мг порошка метилцеллюлозы заливали 100 мл воды очищенной и нагретой до 80-900С. Смесь оставляли для набухания. После понижения температуры смеси до 18-200С, добавляли еще 100 мл воды очищенной, имеющей комнатную температуру, перемешивали до однородности. Полученный гель фильтровали и разливали во флаконы по 150 мл, укупоривали и стерилизовали при 1200С в течение 8 мин. Затем к 150 мл 3% геля метилцеллюлозы добавляли 50 мл 0,12% раствора ЫаСЮ. Концентрация ЫаСЮ в растворе снижалась до 0,03% и соответствовала рекомендованной для внутриполостного применения. Исследования велись на крысах-самцах линии Вистар массой 200250г. Перитонит моделировался по разработанной нами методике пункционным введением в брюшную полость 10% каловой взвеси. Через 24 часа в стерильных условиях экспериментальной операционной лапаротомировали под эфирным наркозом.
Крысы выводились из эксперимента путем передозировки эфирного наркоза по 10 животных из каждой группы на 1, 4, 7, 10 и 14 сутки после операции. Перед выводом из эксперимента производился забор крови для ее общего анализа и подсчета лейкоцитарного индекса интоксикации (ЛИИ) по Кальф-Калифу. Вскрывалась брюшная полость. Оценивался характер и количество выпота. Экссудат брался на бактериологический посев с подсчетом числа микроорганизмов в 1 мл выпота. Выраженность спаечного процесса оценивали визуально (распространение спаечного процесса в целом и по каждому виду спаек, деформация органов, вздутие кишечника) и с помощью методики семантического дифференциала (по 5-балльной шкале) [5] (табл. 1).
Таблица 1
Распределение экспериментальных животных по сериям опытов
Название группы Характер эксперимента Кол-во
Интактная Промывание брюшной полости физ. раствором 50
Сравнения Санация брюшной полости мазью «Левомеколь» 50
Контрольная Санация брюшной полости 0,06% ЫаСЮ 50
Исследуемая Санация брюшной полости иммобилизированным гипохлоритом натрия в геле метилцеллюлозы 50
Изучаемый объект фотографировали. Париетальная брюшина и органы брюшной полости подвергались гистологическому исследованию по общепринятой методике с фиксацией препаратов в нейтральном формалине, заливкой в парафин и окраской срезов гематоксилин-эозином и по Ван-Гизону (пикро-фуксином). Данные обработаны статистически: рассчитаны
средние величины (ср. арифметическая, мода, медиана), максимальное и минимальное значение, среднее отклонение, достоверность результатов. Все способы санации достоверно снижали уровень контаминации брюшной полости микроорганизмами. Самое слабое антибактеральное действие имела мазь «Левоме-коль», т.к. входящий в ее состав антибиотик левомицетин бакте-риостатически действует в отношении многих грамположитель-ных и грамотрицательных бактерий, слабоактивен в отношении кислотоустойчивых бактерий, синегнойной палочки и анаэробов.
Таблица 2
Динамика показателей эндогенной интоксикации у животных с экспериментальным перитонитом
Показатели Сроки после операции, сут Группы животных
1 2 3 4
Лейкоциты *103/мл 1 18,2±0,8 17,4±0,7 16,5±0,6 15,9±0,6
(здоровые животные 4 16,1±0,7 14,8±0,4 15,2±0,4 9,5±0,5*
- 8,8±0 ,4) 7 13,2±0,4 10,4±0,3* 9,3±0,3* 9,3±0,3*
10 11,4±0,2 9,1±0,2* 8,4±0,3* 8,0±0,3*
14 10,1±0,3 8,2±0,2* 8,3±0,2* 8,2±0,2*
ЛИИ, усл.ед. 1 6,6±0,4 5,8±0,4 5,2±0,4 4,4±0,5*
(здоровые животные 4 5,8±0,4 4,7±0,4 4,1±0,4* 1,9±0,4*
- 1,1±0 ,3) 7 5,1±0,3 3,4±0,3* 2,0±0,3* 1,1±0,4*
10 3,2±0,3 2,1±0,2* 1,2±0,3* 1,2±0,3*
14 2,9±0,3 1,6±0,3* 1,3±0,3* 1,1±0,3*
Примечание: * - р<0,05 в сравнении с показателями первой группы
Результаты. При изучении показателей эндогенной интоксикации установлено, что в 1-й группе лейкоцитоз и высокий ЛИИ на 1-е сутки уменьшались к 14-м суткам, оставаясь при этом выше нормы (табл. 2).
В группах 2, 3 и 4 воспалительные изменения в крови регрессировали значительно быстрее. При этом нормализация лейкоцитоза и ЛИИ в группе с использованием гипохлорита натрия в геле наступила уже на 4-е сутки после операции, в то время как в других - только на 7-е. Кроме этого повышенный ЛИИ при использовании мази «Левомеколь» сохранялся вплоть до 10-х суток послеоперационного периода. Бактериологический анализ экссудата из брюшной полости проводили только на 1-е и 4-е сутки послеоперационного периода, т.к. на более поздних сроках выпот в брюшной полости, как правило, отсутствовал (табл. 3).
Таблица 3
Результаты бактериологического исследования выпота из брюшной полости у крыс с экспериментальным перитонитом
Название группы Количество микроорганизмов, КОЕ *103/мл
1-е сутки 4-е сутки
Интактная 120,4±9,2 49,8±4,8
Сравнения 85,6±6,4*‘ 24,9±4,2*1
Контрольная 65,8±4,3*‘-2 19,7±2,8*1
Исследуемая 52,1±3,7*1А3 11,2±2,5*1А3
Примечание: 1. * - достоверность различий средних, р<0,05;
2. Цифры рядом со звездочкой обозначают, по отношению к какой группе эти различия достоверны
ЫаСЮ оказывал более выраженный антимикробный эффект на 1-е сутки послеоперационного периода. Но к 4-м суткам после операции количество микробов в 1 мл экссудата при использовании левомеколя и ЫаСЮ не отличалось статистически, что связано с кратковременным действием гипохлорита натрия, ограниченном временем санации брюшной полости и быстрой его инактивацией. Наиболее выраженный статистически достоверный бактерицидный эффект имелся при использовании ЫаСЮ, иммобилизированном в геле метилцеллюлозы. При использовании этого раствора в брюшной полости обеспечивалось постоянное и постепенное высвобождение ЫаСЮ в течение 24-48 часов и тем самым пролонгирование его антимикробного действия.
Выраженность спаечного процесса оценивалась визуально и методом семантического дифференциала на 10-е и 14-е сутки после операции. Патоморфологическая картина у животных первой группы, а также при использовании левомеколя и ЫаСЮ была представлена в виде разной степени выраженности конгломератов, располагающихся в большинстве случаев в верхнем и среднем этажах брюшной полости и состоящих из большого сальника, петель тонкого и толстого кишечника, париетальной брюшины. Сращения характеризовались высокой плотностью, фибринозными наложениями, разделялись с трудом. Это особенно проявлялось после санации брюшной полости гипохлоритом натрия, и было обусловлено повреждающим действием антисептика на мезотелий брюшины. В группе с левомеколем сращения были менее плотные, чему способствовала гидрофильная основа мази. Но достоверных отличий в распространенности и выраженности спаечного процесса обнаружено не было.
При разделении сращений у 9 животных контрольной группы обнаружен гной (абсцессы). При использовании левомеколя и ЫаСЮ аналогичные образования - абсцессы брюшной полости - выявлены в 4 случаях из каждой серии.
Таблица 4
Выраженность спаечного процесса в брюшной полости у крыс с экспериментальным распространенным перитонитом
Название группы Выраженность спайкообразования, усл.ед.
10-е сутки 14-е сутки
Интактная 3,8±0,1 3,7±0,2
Сравнения 3,4±0,5 3,3±0,5
Контрольная 4,4±0,8 4,6±1,1
Исследуемая 2,4±0,2*1-3 1,9±0,2*1-3
Примечание: 1. * - достоверность различий средних, р<0,05; 2. Цифры рядом со звездочкой обозначают, по отношению к какой группе эти различия достоверныъ
Из табл. 4 видно, что при использовании NaClO в геле выраженность спайкообразования была достоверно ниже. Большинство спаек были сальниковыми, рыхлыми, легко разделимыми. Наложения фибрина имелись только у 4 животных, абсцесс брюшной полости - в 1 случае. Послеоперационная летальность в интактной группе составила 41,3%, при использовании мази «Левомеколь» - 35,2%,
гипохлорита натрия - 33,8%, гипохлорита натрия,
иммобилизированного в геле метилцеллюлозы - 21,7%.
Выводы: Раствор NaClO в геле метилцеллюлозы обладает высокой противовоспалительной активностью и в 1,9 раза снижает уровень летальности при экспериментальном перитоните. Иммобилизированный в геле гипохлорит натрия уменьшает в 1,8 раза образование спаек в брюшной полости после операции у животных с распространенным перитонитом.
Литература
1.Брискин Б.С. и др.// Хирургия.- 2002.- №4.- С.69-74.
2.Гельфанд Б.Р. и др.// Consilium medicum.- 2000.- Т. 2, №9.- С.374-379.
3.Гостищев В.К. и др. Перитонит.- М.: Медицина.- 2002.
4.Ерюхин И.А. и др.// Хирургия.- 2000.- №3.- С. 44-46.
5.Липатов В.А. и др.// Актуальные проблемы экологии, экспериментальной и клинической медицины.- Орел, 2001.-С.85-86.
УДК: 616.381-007.274-089:616-097]-092.9
ДИНАМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ РЕАКТИВНОСТИ ПРИ МОДЕЛИРОВАННОМ СПАЕЧНОМ ПРОЦЕССЕ В БРЮШНОЙ ПОЛОСТИ
М.С. ГОМОН, А.И. БЕЖИН, В.А. ЛИПАТОВ, А.Л. ЛОКТИОНОВ,
Б.С. СУКОВАТЫХ, М.А. КАСЬЯНОВА, А.И. КОНОПЛЯ,
А.В. БЕСЕДИН*
В современной литературе нет однозначных данных о состоянии иммунитета и факторов неспецифической защиты при спаечном процессе брюшной полости. В эксперименте на животных мы изучали кислородозависимую активность нейтрофилов по реакции восстановления нитросинего тетразолия, фагоцитарную активность нейтрофилов, гуморальный иммунный ответ по количеству антителообразующих клеток в селезенке на 3, 7, 14 сутки после моделирования спаечного процесса брюшной полости.
Одной из актуальных проблем хирургии является проблема формирования послеоперационных спаек брюшной полости и связанных с ними осложнений. По поводу спаечной болезни брюшины (СББ) ежегодно в хирургических отделениях лечится 1% прооперированных ранее больных: кишечная непроходимость развивается у 50-75% пациентов. Консервативное лечение СББ малоэффективно. После операций по поводу спаек брюшной полости рецидивы заболевания составляют 32-71%, летальность при спаечной кишечной непроходимости колеблется в пределах 13-55%, средства профилактики послеоперационного спаечного процесса брюшной полости (СПБП) до настоящего времени находятся на стадии разработки [2, 4, 7, 16-17].
* 305041, г. Курск, ул. К.Маркса, д.3, Курский ГМУ
Большинство авторов едины во мнении, что основным этиопатогенетическим фактором заболевания является повреждение мезотелия брюшины и воспаление с преобладанием его пролиферативной фазы. Немаловажным также считается возникновение послеоперационного пареза кишечника, в результате которого травмированная или воспаленная брюшина иммобилизируется и создаются условия для прогрессирования коллагенизации выпавшего в просвет брюшной полости фибрина. В работах [1,13, 18] указывают на возникновение расстройств у лиц с внутрибрюшным спайкообразовнием иммунологических.
Многие хирургические заболевания сопровождаются изменениями в иммунной системе, характеризующимися как состояние вторичного иммунодефицита. Этому способствует комплекс патологических факторов основного заболевания, стресс, обезболивание, операционная травма [6]. Повышение неспецифической резистентности организма является важным элементом в улучшении результатов лечения пациентов хирургического профиля. Попытки коррекции нарушений иммунного статуса у прооперированных больных показали, что применение иммуномодуляторов в комплексе современных методов лечения способствует коррекции послеоперационных осложнений, ускоряет регенерацию тканей, уменьшает время реабилитации больных после хирургических вмешательств и травм [1,14]. В современной литературе нет однозначных данных о состоянии иммунитета и факторов неспецифической резистентности при СПБП и СББ. Выраженность воспалительной реакции зависит от состояния факторов неспецифической резистентности, клеточной и гуморальной форм иммунного ответа на местном и системном уровнях. Следовательно, интенсивность поствоспалительного (посттравматического) фиброза может коррелировать с изменениями иммунного статуса.
Ведущую роль в индукции воспаления играют полиморфно-ядерные лейкоциты. Они мигрируют из кровеносного русла в ткани и выполняют свои защитные функции. Продукты стимулированных нейтрофилов влияют на активность макрофагов, лимфоцитов, тромбоцитов; вызывают дегрануляцию тучных клеток; активируют системы комплемента, свертывания крови, фибринолиза в зоне травматического повреждения брюшины [3, 15].
Цель - анализ изменений иммунологической реактивности организма у животных при экспериментальном СПБП.
Материалы и методы. Эксперименты проводили на здоровых половозрелых крысах-самцах линии Вистар, массой 250-300 г, содержащихся на стандартном пищевом и питьевом рационе в условиях вивария КГМУ. Исследования выполняли по принципам, изложенным в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986). Животных (n=70) разделили на 3 группы: 1 - контрольная (здоровые) (n=10), 2 - лапаротомия без моделирования (n=30), 3 - моделирование спаечного процесса (n=30). В стерильных условиях под ромитаровым наркозом проводили моделирование СПБП собственным способом. После срединного лапаротомного разреза выполняли гидравлическое препарирование брюшины вентральной стенки, с ее последующим иссечением на площади 1x1 см, отступая 1 см от края срединной раны. Слепая кишка скарифицировалась на всей поверхности до появления «кровавой росы» [8,10].
Животные выводились из эксперимента путем передозировки наркоза на 3, 7 и 14 сутки. Изучались морфологические изменения в брюшной полости с использованием визуально-описательного метода и оценкой выраженности СПБП методом семантического дифференциала. Методика представляет собой систему перевода качественных характеристик СПБП в цифровые значения. Показатели (распространенность процесса, деформация органов брюшной полости и выраженность конкретных видов спаек в соответствии с собственной классификацией) оценивались десятью экспертами, не информированными о сущности опыта, но владеющими методикой оценки спайкообразования (слепое исследование). Полученные средние значения умножались на коэффициенты значимости одноименных показателей, произведения суммировались [8-9]. Органы, вовлеченные в СПБП изымались из трупов, фиксировались в 10% буферном растворе нейтрального формалина с изготовлением парафиновых срезов и их окраской гематоксилин-эозином, пикро-сириус красным и по Маллори в модификации Гайденгайна.
