CC BY
88
Таблица 4
Выраженность спаечного процесса в брюшной полости у крыс с экспериментальным распространенным перитонитом
Название группы Выраженность спайкообразования, усл.ед.
10-е сутки 14-е сутки
Интактная 3,8±0,1 3,7±0,2
Сравнения 3,4±0,5 3,3±0,5
Контрольная 4,4±0,8 4,6±1,1
Исследуемая 2,4±0,2*1-3 1,9±0,2*1-3
Примечание: 1. * - достоверность различий средних, р<0,05; 2. Цифры рядом со звездочкой обозначают, по отношению к какой группе эти различия достоверныъ
Из табл. 4 видно, что при использовании NaClO в геле выраженность спайкообразования была достоверно ниже. Большинство спаек были сальниковыми, рыхлыми, легко разделимыми. Наложения фибрина имелись только у 4 животных, абсцесс брюшной полости - в 1 случае. Послеоперационная летальность в интактной группе составила 41,3%, при использовании мази «Левомеколь» - 35,2%,
гипохлорита натрия - 33,8%, гипохлорита натрия,
иммобилизированного в геле метилцеллюлозы - 21,7%.
Выводы: Раствор NaClO в геле метилцеллюлозы обладает высокой противовоспалительной активностью ив 1,9 раза снижает уровень летальности при экспериментальном перитоните. Иммобилизированный в геле гипохлорит натрия уменьшает в 1,8 раза образование спаек в брюшной полости после операции у животных с распространенным перитонитом.
Литература
1.Брискин Б.С. и др.// Хирургия.- 2002.- №4.- С.69-74.
2.Гельфанд Б.Р. и др.// Consilium medicum.- 2000.- Т. 2, №9.- С.374-379.
3.ГостищевВ.К. и др. Перитонит.- М.: Медицина.- 2002.
4.Ерюхин И.А. и др.// Хирургия.- 2000.- №3.- С. 44-46.
5.Липатов В.А. и др.// Актуальные проблемы экологии, экспериментальной и клинической медицины.- Орел, 2001.-С.85-86.
УДК: 616.381-007.274-089:616-097]-092.9
ДИНАМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ РЕАКТИВНОСТИ ПРИ МОДЕЛИРОВАННОМ СПАЕЧНОМ ПРОЦЕССЕ В БРЮШНОЙ ПОЛОСТИ
М.С. ГОМОН, А.И. БЕЖИН, В.А. ЛИПАТОВ, А.Л. ЛОКТИОНОВ,
Б.С. СУКОВАТЫХ, М.А. КАСЬЯНОВА, А.И. КОНОПЛЯ,
А.В. БЕСЕДИН*
В современной литературе нет однозначных данных о состоянии иммунитета и факторов неспецифической защиты при спаечном процессе брюшной полости. В эксперименте на животных мы изучали кислородозависимую активность нейтрофилов по реакции восстановления нитросинего тетразолия, фагоцитарную активность нейтрофилов, гуморальный иммунный ответ по количеству антителообразующих клеток в селезенке на 3, 7, 14 сутки после моделирования спаечного процесса брюшной полости.
Одной из актуальных проблем хирургии является проблема формирования послеоперационных спаек брюшной полости и связанных с ними осложнений. По поводу спаечной болезни брюшины (СББ) ежегодно в хирургических отделениях лечится 1% прооперированных ранее больных: кишечная непроходимость развивается у 50-75% пациентов. Консервативное лечение СББ малоэффективно. После операций по поводу спаек брюшной полости рецидивы заболевания составляют 32-71%, летальность при спаечной кишечной непроходимости колеблется в пределах 13-55%, средства профилактики послеоперационного спаечного процесса брюшной полости (СПБП) до настоящего времени находятся на стадии разработки [2, 4, 7, 16-17].
* 305041, г. Курск, ул. К.Маркса, д.3, Курский ГМУ
Большинство авторов едины во мнении, что основным этиопатогенетическим фактором заболевания является повреждение мезотелия брюшины и воспаление с преобладанием его пролиферативной фазы. Немаловажным также считается возникновение послеоперационного пареза кишечника, в результате которого травмированная или воспаленная брюшина иммобилизируется и создаются условия для прогрессирования коллагенизации выпавшего в просвет брюшной полости фибрина. В работах [1,13, 18] указывают на возникновение расстройств у лиц с внутрибрюшным спайкообразовнием иммунологических.
Многие хирургические заболевания сопровождаются изменениями в иммунной системе, характеризующимися как состояние вторичного иммунодефицита. Этому способствует комплекс патологических факторов основного заболевания, стресс, обезболивание, операционная травма [6]. Повышение неспецифической резистентности организма является важным элементом в улучшении результатов лечения пациентов хирургического профиля. Попытки коррекции нарушений иммунного статуса у прооперированных больных показали, что применение иммуномодуляторов в комплексе современных методов лечения способствует коррекции послеоперационных осложнений, ускоряет регенерацию тканей, уменьшает время реабилитации больных после хирургических вмешательств и травм [1,14]. В современной литературе нет однозначных данных
о состоянии иммунитета и факторов неспецифической резистентности при СПБП и СББ. Выраженность воспалительной реакции зависит от состояния факторов неспецифической резистентности, клеточной и гуморальной форм иммунного ответа на местном и системном уровнях. Следовательно, интенсивность поствоспалительного (посттравматического) фиброза может коррелировать с изменениями иммунного статуса.
Ведущую роль в индукции воспаления играют полиморфно-ядерные лейкоциты. Они мигрируют из кровеносного русла в ткани и выполняют свои защитные функции. Продукты стимулированных нейтрофилов влияют на активность макрофагов, лимфоцитов, тромбоцитов; вызывают дегрануляцию тучных клеток; активируют системы комплемента, свертывания крови, фибринолиза в зоне травматического повреждения брюшины [3, 15].
Цель - анализ изменений иммунологической реактивности организма у животных при экспериментальном СПБП.
Материалы и методы. Эксперименты проводили на здоровых половозрелых крысах-самцах линии Вистар, массой 250-300 г, содержащихся на стандартном пищевом и питьевом рационе в условиях вивария КГМУ. Исследования выполняли по принципам, изложенным в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986). Животных (п=70) разделили на 3 группы: 1 - контрольная (здоровые) (п=10), 2 - лапаротомия без моделирования (п=30), 3 - моделирование спаечного процесса (п=30). В стерильных условиях под ромитаровым наркозом проводили моделирование СПБП собственным способом. После срединного лапаротомного разреза выполняли гидравлическое препарирование брюшины вентральной стенки, с ее последующим иссечением на площади 1x1 см, отступая 1 см от края срединной раны. Слепая кишка скарифицировалась на всей поверхности до появления «кровавой росы» [8,10].
Животные выводились из эксперимента путем передозировки наркоза на 3, 7 и 14 сутки. Изучались морфологические изменения в брюшной полости с использованием визуально-описательного метода и оценкой выраженности СПБП методом семантического дифференциала. Методика представляет собой систему перевода качественных характеристик СПБП в цифровые значения. Показатели (распространенность процесса, деформация органов брюшной полости и выраженность конкретных видов спаек в соответствии с собственной классификацией) оценивались десятью экспертами, не информированными о сущности опыта, но владеющими методикой оценки спайкообразования (слепое исследование). Полученные средние значения умножались на коэффициенты значимости одноименных показателей, произведения суммировались [8-9]. Органы, вовлеченные в СПБП изымались из трупов, фиксировались в 10% буферном растворе нейтрального формалина с изготовлением парафиновых срезов и их окраской гематоксилин-эозином, пикро-сириус красным и по Маллори в модификации Гайденгайна.
Кислородозависимую активность нейтрофилов определяли по реакции восстановления нитросинего тетразолия (НСТ). НСТ-тест основан на поглощении фагоцитами нитросинего тетразолия из среды и с его восстановлением внутри клетки до диформазана. Реакция с интактными нейтрофилами характеризует степень «функционального раздражения» этих клеток in vivo (НСТ-тест спонтанный); показатели НСТ-теста у нейтрофилов, стимулированных in vitro зимозаном, не- и опсонизированным, рассматриваются как критерий активности при напряжении их кислородозависимой функций Индекс стимуляции нейтрофилов на все виды зимозана (КАо, КАн, КО): отношение диформазан-позитивных клеток в стимулированной реакции к диформазан-позитивным клеткам в спонтанной реакции НСТ-теста [5].
Фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови оценивали по фагоцитарному показателю (ФП), фагоцитарному числу (ФЧ) и индексу активности фагоцитоза (ИАФ) [12]. Гуморальный иммунный ответ изучали по
количеству антителообразующих клеток (АОК) в селезенке животных [11]. Полученные в ходе экспериментов данные были обработаны с применением методов вариационной статистики с определением равномерности распределения выборочной совокупности по критерию Колмогорова, а в зависимости от типа распределения, достоверность различий оценивалась либо по критериям Вилкоксона и с помощью однофакторного дисперсионного анализа либо с применением критерия Манна-Уитни. Производился расчет средних величин (средняя арифметическая, мода, медиана, средняя ошибка средней), определение достоверности их различий - р (существенными считали если этот показатель был меньше или равен 0,05). Также использовался стандартный корреляционный анализ.
Результаты. При аутопсии в 3 группе (модель СПБП) деформированная слепая кишка фиксирована плоскостной спайкой к вентральной стенке в месте ее десерозирования (см. рис. 1 стр.4 обложки). У 36% особей в СПБП вовлекались петли кишечника, сальник и др. мобильные органы брюшной полости.
Выраженность СПБП снижалась к 14 суткам: на
3 сутки составила 2,3 5±0,22 балла, на 7 сутки отмечалось уменьшение его выраженности (p<0,05) до 2,09±0,14 баллов, к 14 суткам выраженность спайкообразования составила 1,87±0,16 баллов, но последнее не было статистически достоверным. При гистологическом анализе выявлены динамические изменения созревающей волокнистой соединительной ткани с явлениями затухания инфильтративных процессов и прогрессивным неоангиогенезом (см. рис.2 стр.4 обложки).
На 3 сутки после воспроизведения СПБП шло снижение показателей спонтанного НСТ-теста. Это косвенно говорило о присутствии в периферическом русле небольшого абсолютного количества клеток, что обусловлено массивной их миграцией из кровотока в очаг воспаления. К 7 суткам происходило стихание воспалительного процесса, соответственно параллельно замедлялся темп миграции нейтрофилов. После компенсаторной мобилизации костного мозга, в периферическом русле повышалось число полиморфно-ядерных лейкоцитов. Это обусловило и интегральное повышение кислородозависимой активности полинуклеаров в спонтанном НСТ-тесте, который нормализуется к 14 дню после моделирования СПБП.
В стимулированном НСТ-тесте неопсонизированным зимозаном на 3 сутки после операции наблюдалось его снижение. К 7 дню эксперимента - он не отличался от показателей здоровых животных, а к 14 суткам, вновь снижался. Несмотря на такую динамику, обращает на себя внимание тот факт, что на 7 и 14 сутки резерв клеточной активности нейтрофилов (КАн) в ответ на активацию неопсонизированным зимозаном прогрессирующе снижался. Это объясняется наличием в крови юных, функционально незрелых полиморфно-ядерных лейкоцитов, не способных адекватно отвечать на стимуляцию.
Формальный анализ НСТ-теста стимулированного опсонизированным зимозаном показал его спад на 3, 7 и 14 сутки после моделирования СПБП, но при анализе резерва клеточной активности на опсонизированный зимозан (КАо), оказалось, что изменения были такими же, как и при стимуляции неопсонизированным зимозаном.
Дискретная способность клеток отвечать на различные стимулы (КО) изменялась закономерно. На 3 сутки после моделирования не отмечалось явных отличий от контроля, т.к. в кровеносном русле присутствовали зрелые нейтрофилы, готовые к осуществлению своих функций. К 7 дню опыта отмечали «провал» показателей параметра, что предположительно обусловлено циркуляцией незрелых лейкоцитов. К 14 суткам регистрировалась стабилизация показателей КО (табл. 1).
У крыс на 3 сутки после моделирования СПБП отмечено достоверное снижение всех показателей фагоцитоза: ФП - в 1,2; ФЧ - в 1,3; ИАФ - в 1,5; ИЗФ - 1,2 раза. Вероятно, это связано с выраженным воспалительным процессом в брюшной полости, куда мигрировало большое количество активных нейтрофильных гранулоцитов, при этом, в результате компенсаторной активации костного мозга, периферическое кровеносное русло наполнилось юными, функционально незрелыми нейтрофилами. На 7 день в тех же группах ФП, ФЧ и ИАФ нормализовались. Однако все еще низким оставался ИЗФ. Это объясняется стиханием воспаления в брюшной полости, прекращением миграции нейтрофилов к очагам воспаления и стабилизацией клеточного состава крови. На 14 сутки показатели не отличались от группы здоровых животных, что свидетельствовало об отсутствии воспалительного процесса в брюшной полости (табл. 2).
Количество АОК в селезенке крыс с моделируемой спаечной болезнью брюшины на 3 сутки не отличалось от показателей здоровых животных. В остальные временные промежутки наблюдалось снижение показателя с максимально выраженной супрессией на 14 день заболевания (табл. 3).
Таблица 2
Изменение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови у крыс с моделируемой спаечной болезнью
Сут. ФП ФЧ ИАФ ИЗФ
Здоровые — 49,4±2,9 1,9±0,2 0,9±0,1 85,1±1,6
Модель СБ 3 41,7±1,2* 1,5±0,1 0,6±0,2 75,2±3,0
Лапаротомия без модели 45,7±1,8 1,9±0,1 0,7±0,3** 82,9±6,4
Модель СБ 7 46,1±1,1 * 1,9±0,1 0,9±0,2 69,9±5,8*
Лапаротомия без модели 48,1±2,2 1,9±0,1 0,9±0,3 82,3±7,9**
Модель СБ 14 49,6±3,1* 2,2±0,3 1,0±0,1 88,8±7,5
Лапаротомия без модели 50,2±3,6 2,0±0,2 1,1±0,2** 82,9±7,6
Примечание: достоверные отличия (р<0,05) между показателями: * -между здоровыми животными и животными опытной группы; ** - между животными опытной группы и лапаротомия без моделирования
По отношению к показателям здоровых животных на 3 сутки отмечалось снижение КЗА и фагоцитоза, нормальные показатели АОК, к 14 суткам нормализация КЗА и ФА, но падение АОК. По отношению к показателям особей с лапаротомией без модели при моделировании выявлены более выраженные иммунологические изменения.
Таблица 1
Изменение кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови у крыс с моделируемым СПБП
Сут. mOD НСТ-сп. mOD НСТ-ст. (н/з) mOD НСТ-ст. (о/з) КАо оз/с КАн нз/с КО оз/нз
Здоровые — 1,35±0,16 1,76±0,14 2,31±0,12 1,71 ±0, 13 1,30±0,06 1,31±0,11
Модель спаечной болезни 3 0,78±0,07 p<0,05* 1,40±0,18 p<0,05* 1,95±0,07 p<0,05* 2,50±0,06 p<0,05* 1,79±0,03 p<0,05* 1,39±0,08 p>0,05*
Лапаротомия без модели 0,92±0,09 p>0,05** 1,34±0,17 p>0,05** 1,96±0,3 p>0,05** 2,33±0,23 p>0,05** 1,59±0,07 p>0,05** 1,35±0,08 p>0,05**
Модель спаечной болезни 7 1,81±0,11 p>0,05* 1,88±0,18 p>0,05* 1,94±0,08 p>0,05* 1,07±0,06 p<0,05* 1,04±0,07 p<0,05* 1,03±0,06 p<0,05*
Лапаротомия без модели 1,66±0,11 p>0,05** 1,25±0,06 p<0,05** 1,51±0,11 p<0,05** 1,97±0,08 p<0,05** 1,94±0,04 p<0,05** 1,26±0,06 p>0,05**
Модель спаечной болезни 14 1,45±0,09 p>0,05* 1,51±01,04 p>0,05* 1,87±0,12 p<0,05* 1,29±0,26 p<0,05* 1,04±0,09 p<0,05* 1,24±0,15 p>0,05*
Лапаротомия без модели 1,31±0,24 p>0,05** 1,39±0,09 p>0,05** 1,89±0,12 p>0,05** 1,59±0,24 p>0,05** 1,18±0,03 p>0,05** 1,28±0,07 p>0,05**
Примечание: достоверность различий между показателями кислородозависимой активности нейтрофилов определялась: * - между здоровыми животными и животными опытной группы; ** - между животными опытной группы и лапаротомия без моделирования
Таблица 3
Изменение количества антителообразующих клеток у крыс с моделируемой спаечной болезнью
Группа животных Сутки АОК (тыс./селезенку)
Здоровые — 36,2 ± 9,1
Модель СБ 3 38,9 ± 1,9
Лапаротомия без модели 37,8 ± 3,3
Модель СБ 7 13,8 ± 9,4*
Лапаротомия без модели 21,2 ± 8,5
Модель СБ 14 2,4 ± 0,6*
Лапаротомия без модели 24,8 ± 0,8**
Примечание: достоверные отличия (p<0,05) между показателями: * -
между здоровыми животными и животными опытной группы;
** - между животными опытной группы и лапаротомия без моделирования
Достоверной корреляционной зависимости между
выраженностью СПБП и изменениями иммунологического статуса нами не выявлено (г = 0,23; 0,33 и 0,09 соответственно).
Выводы. На 3 сутки после моделирования спаечной болезни в периферической крови отмечается снижение фагоцитарной и кислородозависимой активности нейтрофилов, за исключением коэффициентов активации, которые повышаются или остаются такими же, как и у здоровых крыс, что связано с массивной миграцией клеток в очаг воспаления, присутствием в кровеносном русле зрелых нейтрофилов, ростом резерва клеточной активности, при этом нет изменений показателей гуморального иммунного ответа.
К 7-м суткам идет частичная нормализация фагоцитарной и истощение резерва кислородзависимой клеточной активности, что обусловлено компенсаторной активацией костного мозга и появлением в крови юных, функционально незрелых нейтрофилов, наблюдается снижение числа АОК в селезенке.
На 14-е сутки происходит полная нормализация фагоцитарной и частичная - кислородзависимой активности полиморфно-ядерных лейкоцитов, что связано со стиханием воспалительных процессов в брюшной полости, но идет по максимуму снижение гуморального иммунного ответа.
Литература
1Анцупова В.С. и др.// Мат-лы IV Всерос. университет. научно-практ. конф. молодых ученых по медицине.- Тула, 2005.-С. 218-219.
2.Воробьев А.А. и др. // Хир.- 1998.- N 2.- С. 65-86.
3.Долгушин И.И. и др // Вестн. РАН.- 2000.- №2.- С. 14-19.
4Женчевский Р.А. Спаечная болезнь.- М.: Медицина,
1989.- 186 с.
5.Зинкин В. Ю., Годков МА. // Клин. лаб. диагностика.-
2004.- №1.- С. 26.
6. Конопля А.И.и др. // Совр. проблемы науки и образ-я.-
2005.-№ 2.- С. 53-55.
7.Кургузов О.П. и др. // Хир.- 1990.- № 10.- С. 153-159.
8.Липатов В.А. Обоснование применения геля метилцеллюлозы для профилактики послеоперационного спаечного процесса брюшной полости (экспериментальное исследование): Дис. ... канд. мед. наук.- Курск, 2004.- 148 с.
9.Липатов В. А. и др. // Мат-лы 2-й Рос. научно-практ. конф. «Актуальные проблемы экологии, экспериментальной и клинической медицины».- Орел, 2001.- С. 85-86.
10.Липатов В. А. и др. // Мат-лы 67-й межвуз. науч. конф. студентов и молодых ученых.- Ч. 1.- Курск: КГМУ, 2002.-С. 177-178.
11Медведев АН., Чаленко В.В.// Лаб. дело.- 1991.- №2.-С. 19-20.
12.Парахонский А.П. Иммунный дисбаланс при опухолевых заболеваниях и его коррекция // Материалы Международного конгресса «Иммунитет и болезни: от теории к терапии».- 2005.-С. 251-258.
13.Тотолян А.А. и др. Клетки иммунной системы.- СПб.: Наука, 2000.- 231 с.
14.Филенко Б.П. Возможности профилактики и лечения острой спаечной кишечной непроходимости: Автореф. дис. д-ра мед. наук.- М., 2000.- 298 с.
15.Peritoneal adhesions: etiology, pathophysiology, and clinical significance // Digestive Surgery.- 2001.- №18.- P. 260-273.
16.Thompson J. // Digestive Surgery.- 1998.- Vol. 15, № 2.-P. 153-157.
THE DYNAMIC CHANGES OF IMMUNOLOGIC REACTIVITY AT STIMULATION OF ADHRSIVE PROCESS IN ABDOMEN CAVITY
M.S. GOMON, V.A. LIPATOV, B.S. SUKOVATYKH,
A.I. BEZHIN, A.L. LOKTIONOV, M.A. KAS’YANOVA, A.I. KONOPLYA, A.V. BESEDIN
Summary
In the modern literature there are no unequivocal data about a condition of immunity and factors of nonspecific protection at adhesive process of the abdomen cavity. In experiment on animals we studied oxygenic activity of the neutrophiles on reaction of restoration of the nitroblue tetrazol (NBT-TEST), phagocytic activity of the neutrophiles, the humoral immune answer by quantity of the antibodyproductive cells in the spleen for 3, 7, 14 day after modelling adhesive process of the abdomen cavity. As a result for 3 day decrease in parameters of the NBT-TEST and phagocytic activity was defined, normal parameters APC, by 14 day were normalized oxygenic and phagocytic activity of the neutrophiles, but quantity APC decreased Key words: antibodyproductive cells, phagocytic activity
УДК 611. 127-018-091-08
ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКАЯ КАРТИНА МИОКАРДА КРОЛИКОВ НА ПОЗДНИХ СРОКАХ ДЕЙСТВИЯ ОБЩЕЙ ВИБРАЦИИ (56 ДНЕЙ)
А. Т. АБДУЛЛИН*
Вибрационная болезнь (ВБ) возникает вследствие длительного воздействия на организм производственной вибрации (В) при функционировании различных машин и механизмов. Значительная часть всего работающего населения подвергается действию В. [4, 8]. На современном этапе
регистрируется нарастание количества пациентов с начальными, латентно протекающими формами ВБ, а также учащение регистрации среди данной категории лиц артериальной гипертензии, ишемической болезни сердца и различных нарушений ритма [7]. Анализ публикаций показывает, что изучение миокарда при ВБ проводились чаще в клиническом и патофизиологическом аспектах, что указывает на важность гистологических исследований, направленных на выяснение сущности происходящих в нем структурных изменений [3, 5].
Цель работы - анализ ультраструктурных патологических процессов в сократительных и проводящих кардиомиоцитах и микроциркуляторном русле на поздних сроках действия В.
Материалы и методы. Кроликов-самок породы «серая шиншилла» в возрасте 4-5 мес. массой 2-2,5 кг подвергали действию общей вертикальной В частотой 8 Гц длительностью 1 час в течение 56 дней ежедневно на промышленной установке УВ 70/200. Животных выводили из эксперимента созданием воздушной эмболии. Кусочки миокарда фиксировали в 2,5% растворе глутаральдегида с постфиксацией в 1% растворе четырехокиси осмия. Материал обезвоживали в спиртах по общепринятой методике и заливали в аралдит. Ультратонкие срезы готовили на ультратоме ЬКБ III, контрастировали растворами уранилацетата и цитрата свинца и просматривали с помощью трансмиссионного электронного микроскопа ШМ-1011 при ускоряющем напряжении 80 кВ.
Результаты. Проведенные исследования показали, что после 56 дней действия В на всех электронограммах (ЭГ) выявляются картины деструкции миокарда, однако зоны некроза и глубокой дистрофии чередуются с очагами менее выраженных патологических изменений. Просветы большинства сосудов микроциркуляторного русла резко расширены, в отдельных случаях наблюдается спазм артериол. Эндотелиоциты имеют множественные отростки, набухшую цитоплазму с пиноцитозными пузырьками различных размеров, гиперхромные пикнотичные ядра с распределением хроматина по периферии и в виде крупных глыбок. Базальные мембраны значительно набухшие, расслоенные, неравномерной электронной плотности,
*
Кировская ГМА Росздрава, г. Киров, 610000, ул. К. Маркса, д.112
