CC BY
144
examples in pediatrics . J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2010; 121(3-5): 520-7.
8. Fujita T. Mineralocorticoid receptors, salt-sensitive hypertension, and metabolic syndrome . Hypertension. 2010; 55(4): 813-8.
9. McDonald J.G., Matthew S., Auchus R.J. Steroid profiling by gas chromatography-mass spectrometry and high performance liquid
chromatography-mass spectrometry for adrenal diseases . Horm. Cancer. 2011; 2(6): 324-32.
10. Murphy R.C., ed. Mass spectrometry of phospholipids: Tables of molecular and product ions. Denver: Illuminati Press; 2012.
Поступила 24.05.13 Received 24.05.13
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014 УДК 614.31:634/.635]-078
Сергевнин В.И.1, ЛадейщиковаЮ.И.2, Сармометов Е.В.3, Подгорбунская И.Л.3, Кудреватых Е.В.2
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ВОЗМОЖНОСТИ ПРОНИКНОВЕНИЯ КИШЕЧНЫХ
вирусов в мякоть контаминированных овощей и фруктов с поверхности
[ГБОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия им. акад. Е.А. Вагнера» Минздравсоцразвития РФ, Пермь; 2ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Пермском крае», Пермь; 3Управление Роспотребнадзора по Пермскому краю, Россия
По результатам комплексного микробиологического исследования проб овощей, фруктов и винограда установлена значительная контаминация их условно-патогенными бактериями, антигенами кишечных вирусов и цистами кишечных простейших, что подтверждает эпидемиологическую роль этих продуктов как факторов передачи возбудителей острых кишечных инфекций. Выявлена рибонуклеиновая кислота кишечных вирусов в мякоти экспериментально инфицированных с поверхности помидоров и яблок, что указывает на возможность проникновения этих возбудителей внутрь овощей и фруктов через неповрежденную (не имеющую видимых повреждений) поверхность.
Ключевые слова: овощи и фрукты; контаминация возбудителями острых кишечных инфекций (ОКИ); проникновение кишечных вирусов через неповрежденную поверхность.
V I. Sergevnin1, Yu. I. Ladeyshchikova2, E. V Sarmometov3,1. L. Podgorbunskaya3, E. V Kudrevatykh — THE EXPERIMENTAL EVALUATION OF THE POSSIBILITY OF THE PENETRATION OF ENTERIC VIRUSES FROM THE SURFACE INTO THE PULP OF CONTAMINATED FRUITS AND VEGETABLES
1Perm State Medical Academy named after academician E. A.Vagner, Perm, Russian Federation, 614000; 2Centre of Hygiene and Epidemiology in the Perm region, Perm, Russian Federation, 614016; 3Directorate of the Federal Service for Supervision of Consumer Rights protection and Human Welfare in the Perm region, Perm, Russian Federation, 614016
According to the results of complex microbiological examination of samples of vegetables, fruits and grapes there was established significant contamination of them with opportunistic bacteria, antigens of intestinal viruses and cysts of intestinal Protozoa, that confirms the epidemiological role of these products as factors in transmission of acute intestinal infections. There was revealed ribonucleic acid of enteric viruses in experimentally infected pulp from the surface of tomatoes and apples, that indicates to the possibility of penetration of these pathogens into the fruits and vegetables through intact (having no visible damages) surface.
Key words: fruits and vegetables, contamination with agents ofacute intestinal infections (AII), the penetration of enteric viruses through the intact surface.
Опубликовано большое количество работ [2, 8-10], в которых приводятся результаты микробиологических и санитарно-паразитологических исследований овощей и фруктов на наличие возбудителей ОКИ. Однако эти исследования, как правило, ориентированы на выявление либо бактерий, либо простейших, либо отдельных вирусов, что затрудняет общую эпидемиологическую оценку названных продуктов как потенциальных факторов передачи ОКИ.
Известно, что кишечные вирусы могут проникать в мякоть овощных культур через корневую систему [7].
Однако теоретически можно предположить и другой путь проникновения кишечных вирусов внутрь овощей
для корреспонденции: Сергевнин Виктор Иванович, viktor-sergevnin@mail . ru
и фруктов - через неповрежденную (не имеющую видимых повреждений) поверхность. Этот вопрос пока что не изучен.
Цель настоящей работы - комплексная микробиологическая оценка контаминации овощей, фруктов и ягод возбудителями бактериальных, вирусных и протозой-ных кишечных инфекций и экспериментальная оценка возможности проникновения кишечных вирусов в мякоть овощей и фруктов с их поверхности.
Материалы и методы
В течение года в торговых точках Перми для исследования отбирали по 1,5 кг помидоров, капусты, зелени, яблок, бананов и винограда. Общее количество проб продуктов составило 57, в том числе помидоров - 13, капусты - 5, зелени - 6, яблок - 14, бананов - 9, винограда - 10. Каждую пробу делили на 3 части по 0,5 кг. Первую
99
гиена и санитария
3/2014
часть исследовали на шигеллы, сальмонеллы и условно-патогенные бактерии (УПБ), вторую - на цисты кишечных простейших, третью -на антигены вируса гепатита А, ротавируса и РНК энтеровирусов типа Коксаки, ЕСНО. Во всех случаях исследовали смыв с поверхности овощей и фруктов. Исследование на шигеллы и сальмонеллы проводили традиционными методами. Смывы и их исследование на цисты осуществляли в соответствии с методическими указаниями [4]. Подготовку проб продуктов к вирусологическим исследованиям осуществляли в соответствии с методическими рекомендациями [3]. Антиген вируса гепатита А (антиген ВГА) выявляли в иммуноферментном анализе (ИФА) с использованием тест-систем «Вектогеп А-антиген-стрип» ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирская область). Ротаантиген определяли в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с тест-системой «Ротатест» производства НИИ «Темп-2» (Ростов-на-Дону). Выявление РНК энтеровирусов проводили методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) с помощью тест-системы «АмплиСенс Enterovirus-207» ГИСК им. Л.А. Тарасеви-ча (Москва).
Для эксперимента по оценке возможности проникновения кишечных вирусов через неповрежденную поверхность овощей и фруктов было взято 26 помидоров и 26 яблок, выросших в личном хозяйстве на участке земли, на котором исключалось попадание в почву фекальных стоков. На наличие кишечных вирусов предварительно были взяты смывы с поверхности и мякоть 2 помидоров и 2 яблок партии. Далее поверхность 12 помидоров и 12 яблок была контаминирована вакцинным штаммом вируса полиомиелита (Sabin II, № 599), а поверхность других 12 помидоров и 12 яблок - энтеровирусом ECHO7, выделенным из сточных хозяйственно-бытовых вод. Выбор указанных вирусов в качестве модельных был обусловлен тем, что из числа кишечных они отличаются особенно высокой устойчивостью на объектах окружающей среды, в том числе на поверхности овощей [1].
Суспензию модельных вирусов с помощью стерильного тампона наносили на очерченную площадь поверхности помидоров и яблок размером 4 см2. После инфицирования овощи и фрукты помещали в 4 продезинфицированные ультрафиолетом картонные коробки, имеющие ячейки для каждого плода (по 12 плодов в коробке). Коробки экспонировали в течение 8 дней в холодильнике. Через 1, 2, 3, 4, 5 и 8 сут после инфицирования исследовали смывы с поверхности и мякоть помидоров и яблок на кишечные вирусы.
Отбор смывов в ходе эксперимента с каждого плода проводили дважды. Первое исследование осуществляли для контроля эффективности заражения плодов, второе -для контроля отсутствия вирусов на поверхности после дезинфекционной обработки перед подготовкой проб мякоти.
Для удаления вирусов с поверхности плодов перед исследованием мякоти кожуру обрабатывали стерильной водой, а затем 5 раз 6% раствором перекиси водорода отдельными тампонами и, кроме того, обжигали
Таблица 1
Результаты исследования смывов с овощей, фруктов и винограда на наличие бактерий и простейших
Продукты Кол-во проб Выделены
кишечная палочка, клебсиелла, протей цисты кишечной амебы бластоцисты
абс. % абс. % абс. %
Помидоры 13 5 38,5 ± 14,0 0 0 i 7,7 ± 2, 4
Капуста 5 0 0 1 20,0 ± 20,0 0 0
Зелень 6 0 0 1 16,7 ± 16,4 0 0
Яблоки 14 2 14,3 ± 9,6 0 0 0 0
Бананы 9 1 11,1 ± 11,1 0 0 0 0
Виноград 10 4 401 ± 6,3 0 0 0 0
Итого 57 12 21,1 ± 5,4 2 3,5 ± 2,2 1 1,8 ± 1,8
спиртом. Далее снимали кожуру и готовили пробу мякоти согласно методическим рекомендациям [3].
Смывы и мякоть исследовали методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) с помощью тест-системы «АмплиСенс Enterovirus-207» (ЦНИИ эпидемиологии) и на культуре ткани RD [5]. При этом сначала исследовали в ПЦР пробы нативного материала, далее мякоть обрабатывали хлороформом и антибиотиками и заражали культуру клеток. После заражения исследовали в ПЦР обогащенный материал - инфицированную культуру ткани, затем делали пассаж и определяли цитопатическое действие по деградации клеток.
Статистическую обработку результатов проводили с применением критерия соответствия (%2) .
результаты и обсуждение
По результатам комплексной микробиологической оценки контаминации овощей, фруктов и ягод возбудителями бактериальных, вирусных и протозойных кишечных инфекций оказалось, что с поверхности овощей, фруктов и винограда патогенная микрофлора не была выделена (табл. 1). УПБ (кишечная палочка, клебсиелла, протей) были обнаружены в 21,1 ± 5,4% случаев. Помидоры оказались инфицированными в 38,5 ± 14,0% случаев, виноград - в 40 ± 16,3%, яблоки - в 14,6 ± 9,6%, бананы - в 11,1 ± 11,1%. По данным санитарно-паразитологических исследований, инфицированность поверхности овощей и плодов простейшими составила 5,3 ± 2,9%. В 3,5 ±,2% случаев была выделена кишечная амеба (с капусты и зелени), в 1,8±1,8% - бластоцисты (с помидоров).
Антигены и РНК кишечных вирусов в смывах с овощей, фруктов и винограда были обнаружены в 15,8
Таблица 2
результаты исследования смывов с овощей, фруктов и винограда на антигены и рнК кишечных вирусов
Продукты Кол-во проб Выделены
антиген ВГА ротаантиген РНК энтерови- русов всего
абс. | % абс. % абс. | % абс. %
Помидоры 13 0 0 i 7,7 ± 7,7 2 15,4 ± 3,2 3 23,1 ± 12,1
Капуста 5 0 0 0 0 0 0 0 0
Зелень 6 0 0 1 16,7 ± 16,7 2 33,3 ± 21 3 50,0 ± 22,3
Яблоки 14 0 0 1 7,1 ± 7,1 2 14,3 ± 9,6 3 21,4 ± 11,3
Бананы 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Виноград 10 0 0 0 0 0 0 0 0
Итого 57 0 0 3 5,3 ± 2,9 6 10,5 ± 3,9 9 15,8 ± 4,8
100
Таблица 3
Результаты исследования мякоти помидоров и яблок, поверхность которых была инфицирована кишечными вирусами
Овощи и фрукты Тест-вирус Кол-во инфици- рованных плодов Кол-во плодов, у которых в мякоти выявлена РНК вирусов, по срокам от момента инфицирования поверхности
1-е сут 2-е сут 3-и сут 4-е сут 5-е сут 8-е сут всего
абс. | % ± m
Помидоры Полиовирус 12 0 0 0 i 0 i 2 16,7 ± 10,7
Энтеровирус 12 0 0 0 2 2 2 6 50,0 ± 14,4
Всего 24 0 0 0 3 0 3 8 33,3 ± 9,6
Яблоки Полиовирус 12 0 0 0 0 0 i i 8,3 ± 7,9
Энтеровирус 12 0 0 0 i 0 i 2 16,7 ± 10,7
Всего 24 0 0 i 0 2 3 12,5 ± 6,7
Итого Полиовирус 24 0 0 0 i 0 2 3 12,5 ± 6,7
Энтеровирус 24 0 0 0 3 2 3 8 33,3 ± 9,6
Всего 48 0 0 0 4 2 5 ii 22,9 ± 6,1
± 4,8% случаев (табл. 2). Ротаантиген в смывах с плодоовощной продукции был выделен в 5,3 ± 2,9 %, в том числе с зелени - в 16,7 ± 16,7%, с помидоров - в 7,7 ± 7,7%, с яблок - в 7,1 ± 7,1%. РНК энтеровирусов была обнаружена в 10,5 ± 3,9% проб, в том числе с зелени - в
33.3 ± 21,0%, с помидоров - в 15,4 ± 3,2%, с яблок - в
14.3 ± 9,6%. Антиген ВГА не был выявлен.
При оценке микробной контаминации плодоовощной продукции по сезонам года оказалось, что бактерии выделялись в разные периоды времени с одинаковой частотой Простейшие были обнаружены только весной и летом. Инфицированность овощей, фруктов и винограда вирусами нарастала весной. В этот период антигены и РНК кишечных вирусов были выделены в 37,5 ± 12,5% смывов, тогда как в другие сезоны - в среднем лишь в 7,3 ± 3,9% (Х2 = 6,4242, p = 0,0120). Причем весенний пик вирусной контаминации овощей и фруктов был обусловлен как ротаантигеном, который выделялся в это время в 12,5 ± 8,4% смывов, так и РНК энтеровирусов, частота обнаружения которой в весенний сезон составила 25,0 ± 11,2%. Возможно, что увеличение вирусного загрязнения овощей и фруктов в весенние месяцы является, в частности, следствием обработки их водой централизованного водоснабжения, которая в этот период в результате паводка оказывается инфицированной кишечными вирусами чаще, чем в другие сезоны года [6].
Проведенное комплексное микробиологическое исследование свидетельствует о значительной контаминация овощей, фруктов и винограда антигенами кишечных вирусов и цистами кишечных простейших, что подтверждает эпидемиологическую значимость этих продуктов как факторов передачи возбудителей вирусных и протозойных ОКИ.
В ходе экспериментальной оценки возможности проникновения кишечных вирусов в мякоть овощей и фруктов было выявлено, что контрольные исследования смывов с поверхности неинфицированных помидоров и яблок, а также инфицированных плодов после дезинфекционной обработки их поверхности до исследования мякоти во всех случаях были отрицательными. Напротив, анализы смывов с кожуры искусственно инфицированных плодов выявили наличие экспериментальных вирусов в культуре клеток и их РНК - в ПЦР.
Результаты культурального исследования проб мякоти плодов во всех случаях оказались отрицательными. В то же время выделение РНК вирусов в ПЦР из мякоти наблюдалось достаточно часто. В целом из 48 поверхностно инфицированных овощей и фруктов 11 плодов, т. е. 22,9%,
оказались внутренне контаминированными РНК модельных вирусов (табл. 3). Количество помидоров, в мякоти которых была выделена вирусная РНК (33,3 ± 9,6%), оказалось в 2,7 раза больше, чем яблок (12,5 ± 6,7%). Чаще в мякоти плодов обнаруживали РНК энтеровируса (в 33,3 ± 9,6% случаев), чем РНК полиовируса (в 12,5 ± 6,7%). Следует подчеркнуть, что в мякоти помидоров РНК полиовируса была выделена лишь на 4-е и 8-е сутки, РНК энтеровируса - на 4, 5 и 8-е сутки. В яблоках РНК полиовируса была обнаружена на 8-е сутки, энтеровируса - на 4-е и 8-е сутки. При этом из 11 плодов, в мякоти которых обнаружена РНК кишечных вирусов, в 9 случаях (81,8%) последняя была выявлена в ПЦР из обогащенного материала и лишь в 1 случае (9,1%) - в ПЦР из необогащенного материала и в 1 случае (9,1%) - одновременно в ПЦР из обогащенного и необогащенного материала.
Выявление РНК кишечных вирусов в мякоти инфицированных с поверхности помидоров и яблок свидетельствует о том, что проникновение кишечных вирусов внутрь овощей и фруктов через неповрежденную (не имеющую видимых повреждений) поверхность возможно. Вместе с тем выявление вирусной РНК в мякоти плодов главным образом лишь в пробах материала, обогащенного на культуре ткани, указывает на минимальное количество вирусных частиц, проникающих в плоды. Следовательно, эпидемиологическое значение вирусной контаминации мякоти овощей и фруктов с неповрежденной (не имеющей видимых повреждений) поверхности, скорее всего, невелико.
выводы. 1. Проведенное комплексное микробиологическое исследование проб овощей, фруктов и винограда свидетельствует о значительной контаминации их условно-патогенными бактериями, антигенами кишечных вирусов и цистами кишечных простейших, что подтверждает эпидемиологическую роль этих продуктов как факторов передачи возбудителей острых кишечных инфекций.
2. Выявление рибонуклеиновой кислоты кишечных вирусов в мякоти экспериментально инфицированных с поверхности помидоров и яблок указывает на возможность проникновения этих возбудителей внутрь овощей и фруктов через неповрежденную (не имеющую видимых повреждений) поверхность.
Литер атур а (пп. 8-10 - см. References)
1. Багдасарьян ГА., Влодавец В.В., Дмитриева Р.А., Ловцевич Е.Л. Основы санитарной вирусологии. М.: Медицина; 1977.
2. Дранкин Д.И. Продукты питания и инфекция. ч.2. Саратов: Изд-во Саратовского университета; 1984.
101
[гиена и санитария 3/2014
3. Методические рекомендации по санитарно-вирусологическому контролю объектов окружающей среды. М.; 1982.
4. МУК 4.2.1881-04. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Санитарно-паразитологические исследования плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции: Методические указания. М.; 2004.
5. МУК 4.2.2029-05. Санитарно-вирусологический контроль водных объектов: Методические указания. М.; 2005.
6. Сергевнин В.И. Эпидемиология острых кишечных инфекций. Пермь; 2008.
7. Спыну К.И. Энтеровирусы в окружающей среде и их эпидемическая значимость. Кишинев: штиинца; 1991.
References
1. Bagdasar’yan G.A., Vlodavets V.V., Dmitrieva R.A., Lovtsevich E.L. Fundamentals of health virology [Osnovy sanitarnoy viru-sologii]. Moscow: Meditsina; 1977. (in Russian)
2. Drankin D.I. Food and infection [Produkty pitaniya i infehtsiya]. Part
2. Saratov: Izd-vo Saratovskogo mrversilela; 1984. (in Russian)
3. Guidelines for the sanitary-virological monitoring of the environment [Metodicheshie rehomendatsii po sanitarno-virusolog-icheshomu hontrolyu ob"ehtov ohruzhayushchey sredy]. Moscow; 1982. (in Russian)
4. MUK 4.2.1881-04. Methods of control. Biological and microbiological factors. Sanitary and parasitological studies of fruit and vegetable products: Guidelines [MUK 4.2.1881-04. Metody hon-
trolya. Biologicheshie i mihrobiologicheshie fahtory. Sanitarno-parazitologicheshie issledovaniya plodoovoshchnoy, plodovo-yagodnoy i rastitel’noy produhtsii: Metodicheshie uhazaniya]. Moscow; 2004. (in Russian)
5. MUK 4.2.2029-05. Sanitary and virological monitoring of water objects: Guidelines. [Sanitarno-virusologicheshiy hontrol ’ vod-nyhh ob"ehtov: Metodicheshie uhazaniya]. Moscow; 2005. (in Russian)
6. Sergevnin VI. Epidemiology of acute intestinal infections. [Epi-demiologiya ostryhh hishechnyhh infehtsiy]. Perm’; 2008. (in Russian)
7. Spynu K.I. Enteroviruses in the environment and their epidemiological significance. [Enterovirusy v ohruzhayushchey srede i ihh epidemicheshaya znachimost’]. Kishinev: Shtiintsa; 1991. (in Russian)
8. Brandl M. T. Plant lesions promote the rapid multiplication of Escherichia coli O157:H7 on postharvest lettuce. Appl. Environ. Microbiol. 2008; 74(17): 5285-9.
9. Butot S . , Putallaz T. , Sanchez G . Effects of sanitation, freezing and frozen storage on enteric viruses in berries and herbs . Int. J. Food Microbiol. 2008; 26(1-2): 30-5.
10. Greene S.K., Daly E.R., Talbot E.A., Demma L.J., Holzbauer S., Patel N.J. et al. Recurrent multistate outbreak of Salmonella Newport associated with tomatoes from contaminated fields, 2005. Epidemiol. Infect. 2008; 136(2): 157-65.
Поступила 14.12.12 Received 14.12.12
Информация
УДК 614.7:061.3(470+571) «2013»
Итоги проведения всероссийской научно-практической конференции с международным участием “Актуальные направления развития социально-гигиенического мониторинга и анализа риска здоровью”
15-17 мая 2013 г. в Перми прошла Всероссийская научнопрактическая конференция с международным участием «Актуальные направления развития социально-гигиенического мониторинга и анализа риска здоровью», в которой приняли участие более 200 специалистов органов и организаций Роспотребнадзора, научных институтов и учреждений системы здравоохранения из 69 регионов Российской Федерации, Казахстана и США. Свои регионы на конференции представляли руководители высшего и среднего звена управлений Роспотребнадзора, главные врачи и заместители главных врачей центров гигиены и эпидемиологии, руководители и специалисты подразделений социально-гигиенического мониторинга, директора и специалисты научно-исследовательских институтов, медицинских академий и институтов, региональных и муниципальных учреждений здравоохранения, других организаций, связанных с обеспечением санитарно-эпидемиологического благополучия населения.
45 пленарных и секционных, а также 19 постерных докладов соответствовали основным направлениям деятельности Роспотребнадзора на современном этапе, свидетельствовали о развитии теоретической и методической базы службы, расширении практики применения методов оценки риска в надзорной деятельности при обосновании принятия управленческих решений по улучшению санитарно-эпидемиологической ситуации в регионах.
В рамках конференции прошел конкурс молодых ученых и специалистов Роспотребнадзора, в котором почетными дипломами и призами были отмечены участники из Омска, Улан-Удэ, Пскова, Перми.
По результатам работы конференции участники констатировали, что в условиях, когда санитарно-гигиенические проблемы
в ряде регионов Российской Федерации продолжают оставаться актуальными, методология оценки риска здоровью населения востребована органами и организациями Роспотребнадзора и является эффективной при выполнении системного анализа санитарно-эпидемиологической ситуации, обосновании программ минимизации рисков и профилактики нарушений здоровья населения и работающих.
В резолюции конференции в качестве приоритетных направлений развития гигиенической науки и практики на предстоящий период указаны: развитие государственной системы социальногигиенического мониторинга на базе внедрения новых научнометодических подходов, информационных баз данных и программных средств; совершенствование нормативно-методической базы оценки рисков возникновения массовых неинфекционных заболеваний, связанных с условиями труда; развитие клеточных и цитогенетических методов исследований протеомного и метаболомного профиля человека при проведении гигиенических расследований, исследований, экспертиз, формировании доказательной базы в системе среда-здоровье; развитие системы информирования о рисках как важной составляющей управления рисками; тиражирование передового опыта регионов, накопленного по оценке и управлению рисками здоровью населения и обеспечение более широкой направленной подготовки специалистов Роспотребнадзора в части освоения современных методов оценки риска, аналитических, геоинформационных систем, методов и программных средств математического моделирования.
Зам. директора по науке ФБУН «ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения» доктор биол. наук, профессор Май И.В.
102
