CC BY
44УДК: 615.361.018.5.013.8: 57.084.1.017.35:616-001.17
ВЛИЯНИЕ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНОЙ ФРАКЦИИ (ДО 5 кДа) КОРДОВОЙ КРОВИ НА РЕГЕНЕРАЦИЮ ОЖОГОВЫХ РАН У КРЫС
Современное состояние учения о ранах предполагает использование в качестве лечения средства, которые обладали бы комплексным воздействием на процессы заживления ран. Преимущества при этом имеют препараты, обладающие регулирующим влиянием на клеточные механизмы раневого процесса [1]. В клинической практике уже давно успешно применяются препараты, способствующие улучшению энергетических процессов на уровне клетки, такие как Актовегин («Nycomed», Австрия) и Солкосерил («Solco Basel AG», Швейцария). За происхождением эти препараты являются низкомолекулярными гемодериватами получаемыми из крови молочных телят [5].
На сегодняшний день в научной и клинической практике накоплена значительная информация об уникальном по своему составу и спектру действия источнике биологических веществ - кордовой крови [3]. Ранее в наших работах [2, 4] было показано, что введение низкомолекулярной фракции кордовой крови (до 5кДа) крысам после термокоагуляции способствует восстановлению биохимических, клинических и иммунологических показателей крови, однако их способность стимулировать непосредственно процессы тканевой репарации, не изучен.
Целью работы было изучение влияния низкомолекулярной фракции (до 5 кДа) выделенной из кордовой крови крупного рогатого скота на заживление ожоговых ран у крыс.
Материал и методы исследования. Выделение низкомолекулярных фракций с компонентами молекулярной массы (до 5 кДа) из криогемолизата кордовой крови проводилось методом ультрафильтрации с использованием оборудования фирмы “Sartorius” (Германия). Работа выполнена на половозрелых самцах беспородных крыс массой 160-180 гр. Ранозаживляющее действие изучалось на модели термического ожога ІІІ В степени по методу [8]. Экспериментальных животных подразделяли на 3 группы. Крысам после моделирования термического ожога IIIB степени ежедневно, начиная со следующего дня после нанесения ожога, на протяжении 14 суток в/м вводили: 1 группе - фармакологический препарат сравнения Актовегин, обладающий ранозаживляющим действием; 2 группе - низкомолекулярную фракцию до 5 кДа, полученную из кордовой крови крупного рогатого скота (ФКК), 3 группе (контрольной) - физиологический раствор. Дозы фракции рассчитывались исходя из терапевтической дозы Актовегина, и вводились из расчета 1,2 мг сухого веса на 100 г массы крысы.
Ранозаживляющее действие фракций изучали на 3, 7, 14 и 21 -е сутки по скорости заживления ожоговых ран и морфологическим показателям в области раны. Для морфологического исследования кожи взятой из области ожога готовили гистологические препараты по общепринятой методике [6,7].
Статистическая обработка экспериментальных данных производилась с помощью статистического программного пакета «STATGRAPHIC plus for Windows», версии 2.1 с использованием t-критерия Стьюдента.
Результаты исследования и их обсуждение. О процессе заживления ожоговых ран судили по скорости сокращения площади ожогов. Как показано на рис.1 введение низкомолекулярной фракции кордовой крови (ФКК) достоверно (р<0,05) по отношению к контролю, ускоряло сокращение площади ожоговых ран у крыс уже на 3-й сутки эксперимента. Введение Актовегина экспериментальным животным способствовало уменьшению площади раневой поверхности в более поздний период времени на 14-е сутки (рис.1).
Гистологическое исследование экспериментального материала показало, что у животных всех групп по мере увеличения сроков наблюдения активизировались процессы регенерации ран, однако выраженность репаративных процессов не была одинаковой. Так, в контрольной группе крыс на 3-и сутки после ожога в гистологических препаратах кожи,
регистрировались дистрофические и некротические изменения эпидермиса и дермы (рис.2). В десквамированном эпидермисе были выявлены клетки с пикнотичными ядрами и вакуолизированной оксифильно окрашенной цитоплазмой. В верхних слоях тканевых срезов наблюдались обширные участки эритроцитарного стаза (рис.2). В дерме можно было увидеть выраженный отек, воспалительную клеточную инфильтрацию из лейкоцитов, лимфоцитов, макрофагов и, как следствие этого, слабое развитие грануляционной ткани к 14-м суткам (рис.3).
Рис.1 Площадь сокращения раневой поверхности у крыс после термического ожога ШВ степени (* р<0,05 по
сравнению с контролем).
сроки эксперимента, сутки
а Контроль —■—ФКК —о— Актовегин
Рис. 2 Гистологический срез кожи крысы с введением NaCL на 3-и сутки после ожога, окраска г.-э., (ув. 400).
Рис. 3 Гистологический срез кожи крысы с введением NaCL на 14-е сутки после ожога, окраска г.-э., (ув.400).
Рис. 4 Гистологический срез кожи Рис. 5 Гистологический срез кожи крыс с
контрольных крыс с введением низкомолекулярной введением Актовегина на 14-е сутки после ожога,
фракции кордовой крови на 14-е сутки после ожога, окраска г.-э. (ув. 400).
окраска г.-э. (ув. 400).
Динамика заживления ожоговых ран после введения экспериментальным животным ФКК существенно отличалась от контроля уже на 3-и сутки эксперимента. Так, несмотря на то, что в
гистологических срезах кожи наблюдались обширные участки эритроцитарного стаза и отек, воспалительная клеточная инфильтрация грануляционной ткани была более умеренной. В ней наблюдались признаки активизации фибробластов и новообразованные капилляры, в просветах некоторых из них имелись форменные элементы крови, что свидетельствовало о восстановлении кровообращения и трофики в исследуемых тканях. На 7-е сутки после ожога в области раневого дефекта обнаруживалась формирующаяся, а к 14-м суткам зрелая грануляционная ткань с большим количеством новообразованных сосудов (рис.4).
Введение экспериментальным животным Актовегина также способствовало уменьшению выраженности деструкции тканей, но в меньшей степени и в более поздние сроки после ожога, на 7-е сутки эксперимента (рис.5). Таким образом, согласно данным морфологического исследования, при заживлении ожоговых ран у контрольных животных до 7-х суток включительно преобладали деструктивные процессы и только к 14-м суткам после ожога наблюдались морфологические признаки заживления раны. Введение ФКК снижало проявление воспалительной реакции и ускоряло формирование зрелой грануляционной ткани в области раневого дефекта в более ранние сроки после ожога по сравнению с Актовегином.
Низкомолекулярная фракция (до 5кДа) кордовой крови ускоряет заживление ожоговых ран. Исходя из гистологических исследований экспериментального материала данный эффект ранозаживляющего действия ФКК вероятно связан с усилением васкуляризации и более быстрым восстановлением микроциркуляции в зоне ишемии, что является ключевым моментом для стимуляции регенерации поврежденных тканей в условиях гипоксии.
Перспективы дальнейших исследований данном направлении. Планируется выяснить механизмы влияния низкомолекулярной фракции кордовой крови (до 5кДа) на процессы регенерации ткане.
1. Актовегин. Новые аспекты клинического применения / [под ред. С.А. Румянцевой] - М., 2002. - 280 с.
2. Биологическая активность фракции до 5 кДа кордовой крови / Гулевский А. К., Моисеева Н. Н., Никольченко А. Ю., Щенявский И. И. // Тр. XIV Российского Национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2007. - С. 52.
3. Властивості і перспективи використання кордової крові в клінічній практиці / О. К. Гулевський, В. І. Грищенко, А. Ю. Нікольченко, Н. М. Моісєєва // Український журнал гематології та трансфузіології 2005. -Т 1, № 5. - С.5-14.
4. Влияние фракции кордовой крови (до 5 кДа) крупного рогатого скота на биохимические показатели крови при экспериментальной субхронической язве желудка у крыс / Гулевский А. К., Абакумова Е. С., Моисеева Н. Н., Долгих О. Л. // Укр. біох. журнал - Т. 80, №2. - 2008. - С. 92 - 99.
5. Громова О. А. Нейрохимические аспекты механизма действия современных нейропротекторов природного происхождения: актовегина и церебролизата (элементный анализ и ферментативная антиокислительная активность) / О. А. Громова, О. М. Панасенко, А. В. Скальный // Сборник статей. -Алмата, 2000. - ^ 24-27.
6. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия / Лилли Р. - М.: Мир, 1969. -624 с.
7. Пирс Э. Г истохимия / Пирс Э. - М: Медицина, 1962. - 365 с.
8. Хакимов З. З. Фармакодинамика лекарственных веществ, метаболизирующихся в печени, при ожоговой травме у крыс / Хакимов З. З., Наджимутдинов К. Н., Мавлянов И. Р. // Фармакология и токсикология. - 1985. - № 2. - С. 103-106.
ВПЛИВ НИЗЬКОМОЛЕКУЛЯРНОЇ ФРАКЦІЇ (ДО 5 К ДА) КОРДОВОЇ КРОВІ НА ПРОЦЕСИ РЕГЕНЕРАЦІЇ ОПІКОВИХ РАН У ЩУРІВ Моісєєва Н.М.
В даній роботі вивчена ранозагоююча дія низькомолекулярної фракції (до 5 кДа) кордової крові. Гістологічне дослідження експериментального матеріалу показало, що
THE INFLUENCE OF A LOW MOLECULAR FRACTION (LESS THAN 5 KD) FROM CORD BLOOD ON REGENERATION PROCESSES IN BURN WOUNDS IN RATS Moiseyeva N.N.
Wound healing activity of low molecular fraction less than 5 kD from cord blood has been studied in the work. Histological analysis of the experimental data showed that injections of cord
введення ФКК стимулює процеси регенерації в опікових ранах і прискорює їх загоєння в більш ранні терміни експерименту у порівнянні з препаратом порівняння Актовегіном.
Ключевые слова: опікові рани,
низькомолекулярна фракція кордової крові до 5 кДа, регенерація, Актовегін.
blood low molecular fraction stimulated regeneration processes in burn wounds and accelerated their healing in comparison with actovegin.
Key words: burn wounds, low molecular fraction less than 5 kD from cord blood, regeneration, Actovegin.
УДК616.833.24.+616.833.5]-002-031.63-008.6-018-08:615.216/.217:678.048:612.-086
СТРУКТУРНІ ЗМІНИ НЕЙРОНІВ СПИННОМОЗКОВИХ ВУЗЛІВ ПРИ КОРІНЦЕВО-
СУДИННОМУ СИНДРОМІ
Дана робота пов’язана з плановою науково-дослідною роботою кафедри гістології, цитології та ембріології Національного медичного університету імені О. О. Богомольця: «Вивчення морфологічних змін органів нервової, імунної систем та серця за умов впливу екзогенних та ендогенних чинників».
Однією з проблем сучасної медицини є хвороби і травми, які спричиняють ушкодження спинного мозку, його корінців та нервів, викликаючи при цьому так звані корінцево-судинні синдроми (КСС). За статистичними даними МОЗ, в Україні щорічно отримують травму хребта та спинного мозку біля 2 200 осіб, що становить приблизно 1,8% від усіх уражень нервової системи, причому кількість таких уражень в порівнянні з минулими роками збільшується [1]. Корінцеві синдроми становлять 10% усіх вертеброневрологічних захворювань. Крім того, на них припадає від 70 до 86 % загальної кількості втрат робочого часу з непрацездатності при захворюваннях нервової системи [2].
Метою роботи було визначення морфологічних змін у складі спинномозкових вузлів (СМВ), що виникають за умов запропонованої експериментальної моделі - корінцево-судинного синдрому.
Матеріал та методи дослідження. Для вивчення морфологічних змін у складі органів нервової системи була розроблена модель КСС, яка була помірно травматичною для тварин, зрозумілою, простою у відтворенні і не потребувала спеціального складного інструментарію або приладів. Модель полягає у перев’язці спинномозкового нерва та прилеглих кровоносних судин, шляхом хірургічного втручання. На експериментальну модель КСС отримано патент на корисну модель № 27769 [3].
Для гістологічного та електронно-мікроскопічного дослідження забирали матеріал спинномозкових гангліїв. Одержані гістологічні препарати всіх серій досліду аналізували на світловому мікроскопі Olympus BX51 з цифровою камерою С-4040гоот та персональним комп’ютером. Для вивчення змін у складі СМВ на світлооптичному рівні були обрані наступні показники: діаметр перикаріонів нейронів, діаметр ядер нейронів, об’єм перикаріонів, об’єм ядер, об’єм цитоплазми перикаріонів, ядерно-цитоплазматичне відношення (ЯЦВ).
Вимірювання діаметрів перикаріонів та ядер нейронів здійснювалось за допомогою комп’ютерної програми WCIF ImageJ (version 1.24о) при збільшеннях ок.х10, об.х20. Статистичну обробку результатів вимірювань здійснювали методами варіаційної статистики. Для оцінки статистичної достовірності відмінностей між вибірками використовували t-тест Стьюдента. Статистично достовірними вважали відмінності при рівні значущості p<0,05. Ядерно-цитоплазматичне відношення (ЯЦВ) визначали за формулою: ЯЦВ = (V^-Vя)/Vя , де Vк - об’єм клітини, Vя - об’єм ядра.
Результати дослідження та їх обговорення. У даній роботі ми класифікували нервові клітини СМВ щурів за їх морфологічними ознаками. За нашими спостереженнями у структурі ганглія інтактного щура, загалом, можна виділити три основні групи клітин: великі світлі клітини, середні світлі клітини та менші темні клітини.
