CC BY
131
продукционный процесс и структура деревьев, древесин и древостоев
ЭФФЕКТИВНЫЙ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА ЯСЕНЯ ОБЫКНОВЕННОГО IN VITRO
В.Г. ЛЕБЕДЕВ, с. н. с. Филиала Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова, канд. биол. наук,
К.А. ШЕСТИБРАТОВ, с. н. с. Филиала Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова, канд. биол. наук
[email protected]; [email protected]
К роду Fraxinus относится около 70 различных видов ясеня, произрастающих в Европе, Азии и Северной Америке, и некоторые из них имеют большое экономическое значение. В Европе, и в частности в России, наиболее распространен ясень обыкновенный, или высокий (Fraxinus excelsior L.). Его древесина по прочности и твердости не уступает дубу, но превосходит его по длительной стойкости к деформациям и ударной вязкости. Благодаря этим качествам ясень используется для изготовления паркета, лестниц, мебели, а также спортивного инвентаря и рукояток инструментов.
Ясень обыкновенный также имеет ряд декоративных форм и широко используется в озеленении. Размножают ясень главным образом семенами, что не позволяет сохранять ценные качества исходных деревьев. Вегетативным способом ясень не размножают, так как отсутствуют надежные методы черенкования [13].
Декоративные формы размножают прививкой, но этот способ не подходит для массового производства. Выходом из положения может стать клональное микроразмножение, которое, кроме сохранения ценных свойств, обладает также большой производительностью и не зависит от времени года. Помимо быстрого размножения ценных генотипов, культура in vitro также необходима и для проведения генетических манипуляций. К настоящему времени исследования в данном направлении проводились как на ясене обыкновенном [5], так и с другими видами ясеня - F.americana [9], F.angustifolia [10],
F.pennsylvanica [7]. В странах СНГ работы по ясеню in vitro начались совсем недавно [1]. Целью настоящей работы была разработка эффективной системы клонального микроразмножения ясеня обыкновенного.
Материалы и методы
В качестве исходного материала использовали культуру in vitro ясеня обыкновенного, любезно предоставленную В.Е. Па-дутовым (Институт леса, Гомель, Беларусь) и полученную из вегетативного материала с деревьев старше 60 лет. Пролиферацию проводили на питательных средах, содержащих минеральные соли MS, WPM или DKW, 30 г/л сахарозы, 7 г/л агара, а также БАП, ИМК и ИУК в различных концентрациях. Растения выращивали в стеклянных банках на 330 мл, содержащих 50 мл среды. Через 4 недели после посадки учитывали количество выросших побегов, их высоту и количество междоузлий. По этим данным рассчитывали долю пазушных почек, давших побеги, и коэффициент размножения (отношение числа узлов на посаженных эксплантах к числу узлов на полученных побегах). Для укоренения использовали верхушки побегов длиной 15-25 мм, которые высаживали на питательные среды, содержащие минеральные соли MS или WPM с половинным составом макроэлементов, 10 г/л сахарозы, 7 г/л агара, а также НУК, ИМК или ИУК в концентрациях 0,2, 0,5 или 1 мг/л. Растения укореняли в пластиковых контейнерах на 250 мл, содержащих 50 мл среды. Через 2, 3 и 4 недели учитывали количество укоренившихся побегов, количество корней (2 мм и более), а также длину корней (через 4 недели). рН питательных сред доводили до 5,6-5,8 1 н КОН и автоклавировали в течение 20 минут при 121 °C. Регуляторы роста растений и витамины стерилизовали фильтрованием (Millipore, 0,22 мкм) и добавляли в среду после автоклавирования. Растения выращивали при температуре 23 ± 1 °С и 16 ч световом дне. Акклиматизацию растений in vitro проводили в зимней теплице при
112
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 3/2010
продукционный процесс и структура деревьев, древесин и древостоев
контролируемых параметрах температуры и влажности. Укоренные побеги высаживали в кассеты с субстратом торф:вермикулит (3:1) и выдерживали под укрытием при 90 % влажности 3-4 недели, после чего укрытие снимали. Выживание растений оценивали через 2 месяца после посадки, высоту растений через 1,5 месяца. Все варианты экспериментов включали четыре повторности, данные обрабатывали с помощью дисперсионного анализа.
Результаты
В первом эксперименте мы сравнивали влияние на пролиферацию побегов ясеня трех питательных сред - MS, WPM и DKW. Из полученных результатов следует, что среда MS обладала преимуществом над другими средами (табл. 1). Коэффициент размножения на этой среде при добавлении 2 и 4 мг/л БАП, составивший 5,6 и 5,9 соответственно, существенно превышал все остальные варианты, так как доля почек экспланта, развившихся в побеги, была максимальной - 83,0 и 91,1 % соответственно. Высота побегов и длина междоузлий, напротив, были минимальными по сравнению с другими средами. Высота побегов на среде с добавлением 2 и 4 мг/л БАП была почти одинаковой и существенно ниже, чем на среде с 1 мг/л БАП, но листья на среде с 4 мг/л БАП были заметно меньшего размера, чем в вариантах с 1 или 2 мг/л. Длина междоузлий на среде MS почти не изменялась при повышении концентрации БАП, тогда как на других средах она уменьшалась существенным образом.
На среде WPM коэффициент размножения был наименьшим по сравнению с другими средами и не превышал 3.4. Увеличение концентрации БАП с 1 до 4 мг/л хотя и несколько повысило долю пробудившихся почек (до 47.7 %), но это повышение было статистически несущественным. На среде же MS при 4 мг/л пробуждалось 91.1 % почек, а на DKW - 69.5 %. Среда WPM также отличалась более длинными побегами по сравнению со средой MS, а по некоторым вариантам - и DKW, а также самыми длинными междоузлиями в эксперименте. Кроме того, побеги на этой среде имели специфический вид - листья на них были зачаточными.
среда DKW занимала промежуточное положение: по коэффициенту размножения она приближалась к MS - 5.0 на 4 мг/л БАП, а по высоте побегов и длине междоузлий - к WPM. Побеги по внешнему виду были схожи с побегами на среде MS.
Интересно отметить, что на 1 мг/л БАП различия в пробуждении почек на разных средах не превышали 6 % и были статистически несущественными, тогда как на 4 мг/л они превысили 21 % и были статистически достоверны. В дальнейших экспериментах по мультипликации была использована среда MS.
Для оценки влияния ауксина на мультипликацию побегов мы использовали различные концентрации ИУК и ИМК, а также среду без ауксинов. Эксперимент показал, что эффект от исключения из среды ИУК или ее замены на ИМК был слабо выражен (табл. 2). В частности, тип ауксина или его отсутствие не оказывали существенного влияния на показатели мультипликации на концентрациях 1 или 2 мг/л БАП. В вариантах с добавлением 4 мг/л БАП среда без ауксина также не отличалась от среды с 0,1 мг/л ИУК, но она существенно превосходила среду с 0.1 мг/л ИМК по доле пробудившихся почек, и, как следствие, по количеству побегов на эксплант и коэффициенту размножения. Более высокий коэффициент размножения на среде без ауксинов по сравнению со средой с 0,1 мг/л ИУК (6,9 и
5,9 соответственно), был статистически недостоверным и, кроме того, листья на среде без ауксинов были меньшего размера. Повышение концентрации ИУК с 0,1 до 0,3 мг/л, а ИМК - с 0,1 до 0,2 мг/л не оказало существенного воздействия. В этом эксперименте не наблюдалось существенных различий между вариантами по высоте побегов и длине междоузлий.
Для оценки укоренения побегов ясеня мы использовали НУК, ИМК, ИУК в различных концентрациях, а также среду без ауксинов. Появление первых корней отмечалось через 9-10 дней после посадки побегов. Эксперимент показал, что на среде с половинным содержанием макросолей MS наиболее эффективным ауксином для укоренения побегов ясеня оказалась НУК (91-99 %), далее следовала ИМК (75-81 %) и ИУК (50-68 %) (табл. 3).
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 3/2010
113
продукционный процесс и структура деревьев, древесин и древостоев
Таблица 1
Влияние среды и регуляторов роста на размножение ясеня in vitro
Среда БАП, мг/л* Кол-во побегов на эксплант Высота побегов, мм Длина междоузлий, мм Пробудившиеся почки, % Коэффициент размножения
1 2,2 вг** 38,7 бвг 9,3 гд 45,1 г 3,8 вг
MS 2 3,7 аб 30,2 гд 8,9 д 83,0 аб 5,6 а
4 4,0 а 29,4 д 8,8 д 91,1 а 5,9 а
1 1,7 г 51,7 а 14,6 а 39,5 г 2,8 д
WPM 2 2,1 вг 44,8 аб 12,4 абв 45,2 г 3,2 гд
4 2,2 вг 39,8 бв 11,2 бвг 47,7 г 3,4 гд
1 2,3 вг 51,6 а 13,0 аб 51,9 вг 4,2 бвг
DKW 2 2,5 в 40,5 бв 10,6 вгд 58,6 вг 4,5 бв
4 3,2 б 33,8 вгд 9,3 гд 69,5 бв 5,0 аб
* - все варианты также содержали 0.1 мг/л ИУК;
** - здесь и далее разными буквами обозначены варианты, отличающиеся на 5 % уровне значимости.
Таблица 2
Влияние ауксинов на размножение ясеня in vitro
БАП, мг/л Ауксин, мг/л Кол-во побегов на эксплант Высота побегов, мм Длина междоузлий, мм Пробудившиеся почки, % Коэффициент размножения
1 0.1 ИУК 2,2 е 38,7 9,3 45,1 е 3,8 д
2 0.1 ИУК 3,7 бв 30,2 8,9 83,0 бв 5,6 бв
2 0.3 ИУК 3,1 вгд 35,1 9,4 67,8 вгд 5,0 бвг
4 0.1 ИУК 4,0 аб 29,4 8,8 91,1 аб 5,9 аб
4 0.3 ИУК 3,9 аб 28,3 8,2 85,0 бв 5,9 аб
1 0.1 ИМК 2,2 де 38,5 9,5 50,8 де 4,1 гд
1 0.2 ИМК 2,7 где 40,9 10,1 58,0 где 4,7 вгд
2 0.1 ИМК 3,3 бвг 29,1 7,6 73,0 вг 4,9 бвгд
4 0.1 ИМК 3,4 бвг 25,6 7,5 77,0 вг 5,8 б
1 - 2,7 где 39,1 9,5 60,0 где 4,9 бвгд
2 - 3,1 бвг 38,2 9,4 67,1 вгде 5,4 бв
4 - 4,6 а 27,9 7,9 100,8 а 6,9 а
Таблица 3
Укоренение побегов ясеня на среде с 1/2 макросолей MS
Ауксин Концентра- Укоренение, % Кол-во корней на побег Длина
ция, мг/л 2 нед. 3 нед. 4 нед. 2 нед. 3 нед. 4 нед. корней, мм
б/г - 21,4 гд 41,7 е 47,6 е 1,5 вг 1,4 гд 1,4 гд 22,5 аб
0.2 66,7 а 89,3 б 90,5 б 1,6 бв 1,6 вг 1,6 вг 24,6 а
НУК 0.5 52,4 б 89,3 б 92,9 б 1,9 аб 2,0 б 1,9 б 22,1 аб
1 16,7 д 95,2 а 98,8 а 2,1 а 2,8 а 2,9 а 19,8 бвг
0.2 36,9 в 67,9 вг 75,0 вг 1,4 вгд 1,5 г 1,4 гд 21,9 аб
ИМК 0.5 52,4 б 77,4 в 81,0 в 1,7 бв 1,8 бв 1,8 бв 23,2 аб
1 52,4 б 74,6 в 80,7 в 1,9 аб 1,9 б 1,9 бв 19,9 бвг
0.2 19,0 д 39,3 е 50,0 де 1,1 де 1,1 е 1,2 д 20,5 бв
ИУК 0.5 22,6 гд 47,6 де 63,1 гд 1,1 е 1,1 де 1,2 д 17,9 вг
1 33,3 вг 59,9 гд 67,6 г 1,2 где 1,4 где 1,4 гд 16,6 г
На безгормональной среде укоренялось 47,6 % побегов, что почти совпадало с укоренением на 0.2 мг/л ИУК. Преимущество НУК
выражалось и в скорости укоренения побегов - практически все способные укореняться побеги образовали корни уже через 3 недели.
114
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 3/2010
продукционный процесс и структура деревьев, древесин и древостоев
Таблица 4
Укоренение побегов ясеня на среде с 1/2 макросолей WPM
Ауксин Концентра- Укоренение, % Кол-во корней на побег Длина корней,
ция, мг/л 2 нед. 3 нед. 4 нед. 2 нед. 3 нед. 4 нед. мм
б/г - 29,8 где 47,6 еж 52,4 г 1,4 вгд 1,4 гд 1,4 де 14,2 гд
0.,2 75,0 а 88,1 аб 88,1 аб 1,9 бв 2,0 бв 2,1 бв 17,4 бв
НУК 0,5 71,4 аб 89,3 аб 89,3 аб 2,2 аб 2,3 б 2,4 б 23,3 а
1 21,4 е 91,7 а 94,0 а 2,5 а 3,2 а 3,4 а 19,6 б
0,2 40,5 г 67,9 вгд 78,6 бв 1,3 гд 1,4 гд 1,4 де 15,6 вг
ИМК 0,5 54,8 в 75,0 вг 78,6 бв 1,7 бвгд 1,7 вг 1,7 гд 15,4 вг
1 63,1 бв 81,0 бв 81,0 б 1,8 бвг 1,8 в 1,8 вг 16,9 бвг
0,2 27,4 де 54,8 деж 61,9 г 1,2 гд 1,3 д 1,3 е 16,9 бвг
ИУК 0,5 29,8 где 46,4 ж 54,8 г 1,2 д 1,3 д 1,2 е 18,0 бв
1 36,9 гд 61,9 где 66,7 вг 1,4 вгд 1,4 гд 1,4 де 12,9 д
Таблица 5
Акклиматизация укорененных растений ясеня в теплице
Исходная среда Исходный ауксин Выживание, % Высота, мм
НУК 77,1 а 29,0 а
MS ИМК 36,5 в 24,5 б
ИУК 46,9 бв 18,2 в
НУК 76,2 а 25,6 аб
WPM ИМК 66,0 аб 28,1 аб
ИУК 22,9 в 13,8 г
MS+WPM б/г 64,6 аб 27,5 аб
Стоит отметить, что хотя через 3 и 4 недели после посадки максимальное укоренение отмечалось на среде с 1 мг/л НУК, но через 2 недели на этой же среде количество укорененных побегов было минимальным среди всех вариантов. Через 2 недели после посадки на средах с ИМК и ИУК с увеличением концентрации ауксина наблюдалось повышение укореняемости, тогда как на среде с НУК повышение концентрации вызывало снижение укоренения.
НУК обладала преимуществом над другими ауксинами и в отношении количества корней на побег, в 1,5 раза превосходя ИМК, и в 2 раза - ИУК, при концентрации 1 мг/л. Этот показатель почти не изменялся с течением времени на всех вариантах, за исключением 1 мг/л НУК. Длина корней почти не отличалась существенным образом в вариантах с НУК, ИМК и без ауксинов, самые короткие корни наблюдались на среде с ИУК.
На среде с 1/2 макросолей WPM частота укоренения была весьма схожей с аналогичными вариантами на среде 1/2 макросоли MS (табл. 4). На двух средах также совпада-
ло и количество корней на одном побеге, за исключением вариантов с НУК: на среде 1/2 WPM количество корней было больше на всех концентрациях НУК. Среда 1/2 WPM также характеризовалась более короткими корнями - в некоторых вариантах они были в 1.5 раза короче по сравнению со средой 1/2 MS. Однако такое укорочение корней в наименьшей степени коснулось побегов в вариантах с НУК.
В табл. 5 представлены результаты эксперимента по адаптации растений в теплице, в котором высадка была проведена в конце ноября. Максимальное выживание в теплице через 2 месяца отмечалось для растений, которые укоренялись на среде с НУК - Тб-77 %. Далее следовали побеги, находившиеся на безгормональной среде и среде WPM с добавлением ИМК - 65-66 %. Остальные варианты продемонстрировали значительно худшую выживаемость. высота побегов довольно сходна у растений, которые укоренялись на средах с НУК или ИМК, а также без ауксинов, и значительно меньше - у растений после среды с ИУК.
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 3/2010
115
продукционный процесс и структура деревьев, древесин и древостоев
Рис. 1. Побеги ясеня, выросшие на среде MS (А) или WPM (Б)
В аналогичном эксперименте, в котором растения были высажены в теплицу в начале сентября, наблюдались сходные результаты по вариантам, но доля выживших растений была выше на 10-15 % (данные не показаны).
Обсуждение
В своих исследованиях по ясеню in vitro авторы в качестве исходного материала использовали как семена [8, 9], так и вегетативный материал [11]. Последнее является более предпочтительным, так как позволяет сохранить свойства исходных деревьев. Кроме того, поскольку отбор деревьев по хозяйственно-ценным признакам проводят в достаточно зрелом возрасте, целесообразно именно их использовать для введения в культуру in vitro. Однако микроразмножение именно зрелых древесных растений труднее по сравнению с ювенильным растительным материа-
лом [2]. Учитывая все вышесказанное, мы в исследованиях использовали культуру ясеня in vitro, полученную из почек деревьев 60летнего возраста.
В работе мы сравнивали три среды, которые и использовались, главным образом, для мультипликации ясеня обыкновенного, а также и других видов ясеня - MS, DKW и WPM. Ряд авторов сообщал, что на среде MS по сравнению с другими средами (QL, WPM, DKW) наблюдался хлороз [11] или даже гибель побегов [5] ясеня обыкновенного. Возможно, это связано с видовыми особенностями, так как негативного воздействия среды MS не отмечалось в работах с другими видами ясеня - F.angustifolia [10], F.pennsylvanica [8]. В наших экспериментах среда MS, наоборот, превосходила другие среды по коэффициенту размножения. Кроме того, она отличалась от других сред более короткими побегами, а также тем, что с увеличением концентрации БАП междоузлия на ней практически не изменялись, тогда как на других - уменьшались существенным образом.
Ясень обыкновенный успешно размножали на среде WPM, отмечая при этом более высокие побеги [11]. У нас же эта среда показала наихудшие результаты: низкий коэффициент размножения (табл. 1) и зачаточные листья (рис. 1).
О таком воздействии среды WPM, когда листья на ней были в 2-4 раза меньше, чем на MS и DKW, сообщали для ореха черного [3]. Такой эффект, по-видимому, связан с ее низкосолевым составом. Среда WPM содержит 2.5 г/л солей, что в 1.8 и 2.2 раза ниже, чем среды MS (4.4 г/л) и DKW (5.6 г/л), соответственно. Основное отличие от среды MS в сниженном в 4 раза содержании нитратного и аммонийного азота при одинаковом их соотношении. схожие, хотя и уступающие среде MS показатели размножения на среде DKW, также могут быть объяснены пониженным содержанием в ней азота, несмотря на общее высокое содержание солей. стоит отметить, что различия между средами по количеству побегов на эксплант и пробуждению почек были несущественными на 1 мг/л БАП и увеличивались с повышением его концентрации. Мы сделали вывод, что лучше вести размно-
116
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 3/2010
продукционный процесс и структура деревьев, древесин и древостоев
жение на среде MS с 2 мг/л БАП, так как более высокий коэффициент размножения на 4 мг/л БАП был статистически недостоверным, а высокие дозы цитокининов в культуре in vitro нежелательны.
Среди цитокининов в культуре ткани растений наиболее широко используется БАП, и ясень не является исключением. Разброс используемых концентраций в различных работах был довольно значительным: от 0.002 мг/л [9] до 18 мг/л [8]. Низкие концентрации БАП (до 1 мг/л) были малоэффективны, чаще всего использовали 2-4 мг/л. Сообщалось, что высокие концентрации БАП - 5 и 10 мг/л - вызывали гибель ясеня обыкновенного на среде MS, но эти и более высокие концентрации никак не сказывались на Epenmylvanica [8], что говорит о видовой специфичности. Мы ограничились 4 мг/л БАП, так как известно, что высокие концентрации цитокининов способствуют индукции не только пазушных, но и адвентивных почек, а это повышает вероятность сомаклональной изменчивости. Следует избегать этого явления, если целью размножения является сохранение генетической идентичности. Кроме того, общеизвестно, что высокие дозы цитокининов могут служить причиной витрификации. В ряде работ с ясенем использовали и ТДЗ - отдельно [8] или в сочетании с БАП [9]. ТДЗ, как более мощный цитокинин, в тех же концентрациях обладал преимуществом над БАП. Но в то же время его применение может вызвать ряд нежелательных эффектов [6]. Например, отмечалось ненормальное утолщение побегов
F.americana на 2 мг/л ТДЗ [9].
Как правило, наилучшие результаты по пролиферации побегов ясеня были получены при использовании высоких концентраций БАП с низкими концентрациями ауксинов, чаще всего ИМК - 3 БАП + 0.01 ИМК, 4 БАП + 0,03 ИМК [11]. В нашей же работе, наличие ИМК, ИУК или их отсутствие не оказало существенного влияния на мультипликацию на 1 и 2 мг/л БАП, а на 4 мг/л безауксиновая среда обладала преимуществом над средой с добавлением 0,1 мг/л ИМК. Повышение концентрации ауксинов с 0,1 до 0,2 и 0,3 мг/л не оказывало существенного воздействия на мультипликацию.
В экспериментах по укоренению мы протестировали три наиболее распространенных ауксина в различных концентрациях, а также вариант без регуляторов роста. Появление первых корней нами отмечалось на 9-10 день культивирования, что раньше, чем для F.pennsylvanica, когда корни были видимы на 10-15 день [7]. На обоих использованных нами средах самым эффективным ауксином оказался НУК, затем ИМК и затем ИУК, причем повышение концентрации усиливало укоренение. НУК также способствовал быстрому укоренению. На безгормональной среде побеги укоренялись с частотой около 50 %, что было наихудшим показателем.
Работ по сравнению различных ауксинов на ясене немного: ИМК и НУК вызывали одинаковую частоту укоренения на F.pennsylvanica, но в варианте с НУК корни были толще и в 5-10 раз короче [7]. Автор также сообщал об большом количестве зачаточных (до 0.5 мм) корней, индуцированных НУК. С этим эффектом НУК в нашей работе связано и низкое укоренение на 1 мг/л НУК через 2 недели после посадки. Мы наблюдали зачаточные корни на большом числе побегов, но так как учет велся только для корней длиной не менее 2 мм, то частота укоренения оказалась низкой. В нашей работе наиболее слабым ауксином оказалась ИУК. Этот препарат почти не встречается в работах по укоренению ясеня, но в работе Du and Pijut (2008) сообщалось, что добавление ИУК к ИМК существенно улучшило частоту укоренения. Данные по укоренению ясеня на безгормональной среде противоречивы: побеги F.pennsylvanica на такой среде не укоренялись [4], а укоренение F.angustifolia варьировало в зависимости от состава среды для мультипликации - 26-73 % [10] или укоренения - 25 или 65 % [12]. В нашем эксперименте состав среды не повлиял на укоренение в безгормональном варианте. Мы наблюдали увеличение частоты укоренения с повышением концентрации ауксинов, но Perez-Paron et al. [10] отмечал, что при добавлении ИМК в концентрации до 1 мг/л максимальное укоренение F.angustifolia отмечалось на 0.1 или 0,2 мг/л ИМК, хотя количество корней было максимальным на 0.8 и 1 мг/л ИМК.
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 3/2010
117
продукционный процесс и структура деревьев, древесин и древостоев
Рис. 2. Укоренение растений ясеня in vitro
Мы не обнаружили существенных различий по укоренению и количеству корней между средами 1/2 MS и 1/2 WPM, за исключением большего количества корней в вариантах с НУК на 1/2 WPM по сравнению с 1/2 MS. Однако на 1/2 WPM растения продуцировали более короткие корни. Также известно немного работ по сравнению сред для укоренения на ясене: укоренение на 1/2 DKW или полной WPM было сходным, как и длина корней, но на 1/2 DKW корней было меньше [12].
Для улучшения укоренения растений in vitro часто используют темновую индукцию корнеобразования. Ясень, например, выдерживали 7-10 дней в темноте, а затем выставляли на свет [4]. Влияние этого приема было различным: без него растения или вообще не укоренялись [4], или укоренение снижалось незначи-
тельно [9]. Мы не использовали такой способ обработки, так как и без него были получены вполне удовлетворительные результаты.
По опубликованным данным, максимальное укоренение микропобегов ясеня обыкновенного составило около 80 % [5], F.angustifolia - 92 % [10], и 100 % для F.americana [9] и F.pennsylvanica [7]. Нам же удалось достичь почти 100 % укореняемости для ясеня обыкновенного (рис. 2).
Результаты акклиматизации в теплице показали, что выживание было выше у растений, укоренявшихся на средах с добавлением НУК - 76-77 %. Наихудшие результаты как по выживанию, так и по высоте растений были показаны на средах с ИУК (рис. 3).
Другие авторы сообщали о схожих результатах адаптации к внешним условиям: у F.angustifolia выживало 80 % [12] или 6585 % побегов [10], для F.pennsylvanica сообщалось и о 100 % акклиматизации [4]. Стоит отметить, что на акклиматизацию растений большое влияние может оказывать время года. Это воздействие мы наблюдали даже в условиях зимней теплицы, позволяющих регулировать температуру и освещенность. Выживание растений, проходивших адаптацию в декабре-январе, было ниже на 10-15 % по сравнению с растениями, высаженными на
2,5 месяца раньше.
Рис. 3. Акклиматизация растений ясеня in vitro, укорененных на среде с НУК (А) или ИУК (Б)
с/
118
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 3/2010
