CC BY
26
ФАРМАЦЕВТИЧН1 НАУКИ
УДК 615.03+615.038
DOI: 10.15587/2313-8416.2015.47015
ДОСЛ1ДЖЕННЯ ПРОТИПУХЛИННО1 Д11 ТАБЛЕТОК ЖУВАЛЬНИХ НА ОСНОВ1 СУХОГО ЕКСТРАКТУ В1ВСА ТА КВЕРЦЕТИНА
© Я. Р. Андршчук, Л. Л. Давтян
Розробка нових лтарських 3aco6ie - одна i3 найважливших задач вiтчизняноi фармацевтично'1' науки. Так було створено лтарських заабу формi таблеток жувальних на основi сухого екстракту вiвса та кверцети-ну. Була до^джена протипухлинна активтсть лiкарського засобу. Експериментально було доказано на-явтсть протипухлинноi дИ до^джуваного лкарського засобу на основi сухого екстракту вiвса та кверце-тину
Ключовi слова: жувальт таблетки, екстракт вiвса, кверцетин, протипухлиннi агенти, карцинома легень, розробка лкарського засобу
One of the main goals of domestic pharmaceutical science is development of new medicines. Thus, new tablet drug was created based on dry oat extract and quercetin. Investigation of antineoplastic activity was performed. Antineoplastic activity of investigational drug based on dry oat extract and quercetin was experimentally proved Keywords: chewing tablets, oat extract, quercetin, antineoplastic agents, lung carcinoma, drug development
1. Вступ
Фармаколопчш дослщження е невщ'емно! скла-довою розробки будь-якого лжарського засобу. Так, нами було розпочато створення нового вичизняного лжарського засобу на основi сухого екстракту вiвса та кверцетину. Вивчення протипухлинно! активносп лжарського засобу - стратепчний елемент у подальшш розробщ лжарського засобу.
2. Постановка проблеми
Оскшьки не мае жодних лтгературних даних щодо наявносп протипухлинно! активносп лжарських засобiв, яш б мютили сухий екстракт вiвса та кверцетин - до-слщження протипухлинно! активносп лжарського засобу е актуальним та перспективним. Метою нашо! роботи стало дослвдження фармаколопчно! активносп препарату у формi таблеток жувальних з сухим екстрактом вiвса та кверцетином, який розробляеться на базi ПАТ НВЦ «Борщапвський ХФЗ».
3. Лiтературний огляд
Так, розробка лжарського засобу е поетапним процесом, що включае отримання даних щодо його безпеки та оцiнку ефективностi препарату на тваринах i людях. Завдання доклiнiчно! оцiнки безпеки зазви-чай включають характеристику токсичного впливу на органи-мшеш, дозозалежнiсть, взаемозв'язок з експо-зицiею, i, за необхiдностi, потенщал зворотностi ди. Цi данi використовуються для встановлення безпечно! стартово! (початково!) дози, дiапазону доз для ктшчних випробувань, а також визначення пара-метрiв клiнiчного монiторингу потенцiйних побiчних ефектiв.
Сучасне сустльство прагне гумашзувати нау-ков1 дослвдження, заохочуе зменшення шлькосп тва-рин, як1 використовуються в експериментах, та за-стосування альтернативних метод1в. Але використання традицшних експерименпв на тваринах складае значну частину дослщжень у фармакологи [1]. Ц випробуван-ня проводяться з урахуванням етичних та морально-правових принцитв, яш гарантують захист штереав суб'екпв дослщження, тобто забезпечення гуманного поводження з експериментальними тваринами та ращональне !хне використання з науковою та навчаль-ною метою [2].
В Укра!ш доклшчш дослщження проводяться вщповвдно до статп 6 закону Укра!ни «Про лжарсьш засоби» [3], «Порядку проведення доктшчного вивчення лжарських засоб1в та експертизи матер1ал1в до-клшчного вивчення лжарських засоб1в» [4] та наста-нови з належно! лабораторно! практики [5].
4. Експериментальш фармаколог1чн1 досл1д-ження протипухлинноТ ди таблеток жувальних на основ1 сухого екстракту в1вса та кверцетену
Об'ектами наших дослщжень е жувальш таблетки з сухим екстрактом в1вса пос1вного та кверцетином. В проведених дослвдженнях протипухлинну дш Кверцетину вивчали з використанням карциноми легеш Лью!с (КЛЛ або LLC). Дана модель е метастазуючою та достат-ньо рефрактерною до традицшно! цитотоксично! терапп. Високометастатичний вихщний вар1ант карциноми легеш Лью!с е експериментальною пухлинною моделлю з мета-статичним потенщалом, що регламентовано Державним Експертним центром МОЗ Укра!ни для проведення до-клшчних дослщжень протипухлинних агенпв.
Дослвдження проводились на мишах-самцях лши C57/BL6 розводки в1вар1ю 1ЕПОР, вшом 2-2,5 Mic., вагою 19-23 г. Bci дослвдження на тваринах було виконано зпдно правил, прийнятих Етичним Комiтетом 1ЕПОР.
Bci тварини були одержат з розплшника вiварiю 1ЕПОР iM. Р. £. Кавецького НАН Укра!ни. Утримання мишей та робота з ними здшснювались у вщповщносп до мiжнародних прийнятих правил проведения робiт з експериментальними тваринами.
Характеристика лiнiй мишей [6]: утримання мишей та робота з ними проводилися у вшповшносп до загальноприйнятих мiжнародних правил виконання робiт з експериментальними тваринами [7].
В якосл експериментальних пухлинних моделей було використано культуру клггин LLC.
Пухлиннi клiтини культивувалися у повному по-живному cередовищi RPMI 1640 (Sigma, США), що мicтило 10 % ембрюнально! сироватки телят велико! рогато! худоби (Sigma, США), 2 мМ L-глутамiну (Sigma, США) i 40 мкг/мл сульфату гентамiцину за стандартних умов при 37оС, 5 % СО2, 100 % вологоcтi.
Для отримання експериментальних пухлинних моделей клтгини LLC iнокулювали мишам внутршнь-ом'язово в праве стегно тварин у шлькосп 1,0х106 клiтин в 0,1 мл розчину Хенкса.
В процес дослвдження проводили монiторинг фiзiологiчного стану та контроль ваги тварин ^H4i на тиждень).
5. Апробащя результа^в дослвдження
В даному екcпериментi було дослщжено проти-пухлиннi ефекти викликанi застосуванням дослщжува-ного препарату в монорежимi у тварин з перещепле-ною карциномою легет Лью!с. Годування таблетками з кверцетином та екстрактом вiвcа починали на 10-ту добу шсля перещеплення пухлинних клiтин (1х106 ПК/тварину), коли пухлинний вузол добре вiзуалiзувавcя. Дослщжуваний лiкарcький заciб давали протягом 14-ти дтв iз розрахунку 13 мг препара-ту/тварину на одне введення, що вiдповiдало (0,5 мг препарату). Забш тварин проводили на 26-ту добу тсля перещеплення пухлинних клгшн (2-га доба пicля зашн-чення терапi! препаратом).
При аиалiзi середньо! маси пухлин на момент забою було встановлено, що вживання таблеток з квер-цетином та екстрактом вiвcа призвело до вiрогiдного зменшення маси пухлинного вузла, що вказуе на на-явтсть протипухлинно! дi! застосованого препарату (табл. 1).
Середня кiлькicть метаcтазiв була однаковою в до-cлiджуваних групах i становила: 6,8±1,39 шт/тварину - у контролi пухлинного росту та 6,4±2,16 шт/тварину - у тварин, як отримували кверцетин. У тварин, якi отри-мували кверцетин об'ем метастатичного враження був у
два рази нижчим порiвняно з контрольною групою i ста-новив 27,43±15,93 мм3/тварину - у тварин, яш отримували кверцетин та 57,58±16,99 мм3/тварину - у тварин контрольно! групи. Таки чином, з отриманих даних встанов-лено, що використання кверцетину мало значну проти-пухлинну дш, що проявлялась у затримцi розвитку пер-винного пухлинного вузла та у зменшент об'ему метастатичного враження тварин.
Таблиця 1
Середня маса первинного пухлинного вузла у тварин з _перещепленою карциномою легет Лью!с_
Маса пухлинного вузла, г
Контроль ПР 7,36±0,54
Кверцетин 3,98±0,40
При дослщжент внутрiшнiх оргашв дослiдних тварин, вiзуальних порушень не було виявлено. Ваговi показники оргашв наведено в табл. 2.
Таблиця 2
Середня маса внутрштх оргашв мишей-самщв з
перещепленою карциномою легет Лью!с
Органи Контроль ПР Кверцетин
Легет 0,21±0,02 0,25±0,024
Серце 0,11±0,01 0,12±0,003
Печшка 1,1±0,07 1,14±0,095
Органи Контроль ПР Кверцетин
Селезшка 0,21±0,01 0,26±0,023
Нирки 0,1±0 0,11±0,01
Як видно з табл. 2, у тварин, яш отримували препарат вшбулося незначне збшьшення маси, вах внутрштх органiв. Але при подальшому аналiзi було встановлено, що збшьшення масових показнишв вшбуло-ся за рахунок зб№шення загально! маси тварин, оскшьки у дослiджуваних тварин спостер^али менш виражену iнтоксикацiю. Середня маса дослшних тварин становила 23±0,58 г -у контрлi пухлинного росту та 24±0,58 г - у тварин, яш отримували таблетки з кверцетином та екстрактом вiвса.
При дослщжент окремих протипухлинних реакцiй було встановлено, що у тварин, яш отримували таблетки з кверцетином та екстрактом в1вса в бшьшш мiрi стимульо-вана функцiональна активн1сть шунних клiтин (табл. 3).
При аналiзi отриманих даних було встановлено, що у тварин, яш отримували таблетки з кверцетином та екстрактом вiвса значно зб№шеш показники антитшоза-лежно! цитотоксично! активностi лiмфоцитiв та макро-фагiв. Активацiя цитотоксично! активностi призвела до виражено! протипухлинно! дй' у дослвдних тварин на термiнальних етапах пухлинного росту (табл. 4).
Таблиця 3
Функцюнальна активтсть iмунних клiтин тварин з перещепленою карциномою легет Лью!с_
Конроль ПР Кверцетин
Цитотоксична активнiсть Лф 73,73±18,88 92,11±15,91
Антитшозалежна цитотоксична активнiсть Лф 14,81±8,20 75,28±14,20
Цитотоксична активтсть Мф 15,15±1,47 15,84±1,35
Антитшозалежна цитотоксична активтсть Мф 42,79±5,79 75,31±6,47
Таблиця 4
Показники морфологiчного стану кровi мишей -самок при нанесент препарату на шюру
Назва иоказиикш Контроль ПР Кверцетин 1нтакт
Гемоглобiн, г/л 54±9 89±21 124±4
Еритроцити, х106/мл 4,28±0,83 6,55±1,67 9,03±0,28
Лейкоцити, х103/мл 4,35±0,55 13±3,2 11,1±0,6
Тромбоцити, х106/мл 196±0 333±67 556±40
Лiмфоцити, % 51,35±5,95 59,4±8,4 64,5±4,6
Моноцити, % 15,65±1,55 17,55±1,85 14±0,3
Гранулоцити, % 21,9±3,6 21,8±1,6 21,85±3,95
Аналiзуючи, отриманi данi було встановлено, що у тварин з пухлинним процесом на термiнальних стадях пухлинного процесу розвиваеться анемiя, яка тддаеться корекцi! за рахунок постшного прийому препарату у тварин з пухлинним процесом. Анемiя розвиваеться за рахунок зменшення штоксикацп спричи-нено! пухлинним процесом.
6. Висновки
Таким чином отримаш данi вказують на те, що дослщжуваний препарат проявляе виражену протипух-линну дш, що проявляеться у гальмуванш розвитку первинного пухлинного вузла та в затримщ розвитку метаcтазiв з вихщним варiантом карциноми легеш Лью!с.
Лiтература
1. Добреля, Н. В. Розвиток европейського законодав-ства в cферi викориcтаиия тварии у наукових експериментах [Текст] / Н. В. Добреля, С. В. Стрелков, Т. А. Бухтаарова // Фармакологш та лжарська токсиколопя. - 2014. - № 2. -С. 88-91.
2. Russel, W. M. The principles of humane experimental technique. London: Methuen & Co. Ltd. 1959 [Text] / W. M. Russel, R. L. Burch // Universities Federation for Animal Welfare, Herts, England, 1992. - 238 p.
3. Закон Укра!ни «Про лжарсью засоби» N 124/96-ВР ^i змшами) [Текст] // В1домосп Верховно! Ради Укра!ни (ВВР). - 1996. - № 22.
4. Наказ мшстерства охорони здоров'я Укра!ни ввд 14.12.09 № 944 «Про затвердження Порядку проведення до-клшчного вивчення лгкарських засобгв та експертизи ма-терiалiв доклiиiчиого вивчення лгкарських заcобiв», за-реестрований в Мгшстермш юстици Укра!ни вiд 19.01.2010 р. за № 53/17348.
5. Стефанов, О. Настанова. Лжарсью засоби. Надежна лабораторна практика [Текст] / О. Стефанов, Т. Бухларова, В. Коваленко та ш. - Ки!в, МОЗ Укра!ни, 2009
6. Медведев, Н. Н. Линейные мыши [Текст] / Медведев Н. Н. - Ленинград: Медицина, 1964. - 179 с
7. Кожем'якш, Ю. М. Науково-практичш рекомен-дацп з утримання лабораторних тварин та роботи з ними [Текст] / Ю. М. Кожем'якш, О. С. Хромов, М. А. Фшоненко, Г. А. Сайфетдшова. Держ. фармакол. центр. - К. : Вид. дiм "Авщена", 2002. - 155 с.
References
1. Dobrelja, N. V., Strjelkov, Je. V., Buhtiarova, T. A. (2014). Rozvytok jevropejs'kogo zakonodavstva v sferi vykorystannja tvaryn u naukovyh eksperymentah. Farmakologija ta likars'ka toksykologija, 2, 88-91.
2. Russel, W. M., Burch, R. L. (1992). The principles of humane experimental technique. London: Methuen & Co. Ltd. 1959. Universities Federation for Animal Welfare, Herts, England, 238.
3. (1996). Zakon Ukrai'ny «Pro likars'ki zasoby» N 124/96-VR (zi zminamy). Vidomosti Verhovnoi' Rady Ukrai'ny (VVR), 22.
4. (2010). Nakaz ministerstva ohorony zdorov'ja Ukrai'ny vid 14.12.09 № 944 «Pro zatverdzhennja Porjadku provedennja doklinichnogo vyvchennja likars'kyh zasobiv ta ekspertyzy materialiv doklinichnogo vyvchennja likars'kyh zasobiv», zarejes-trovanyj v Ministerstvi justycii' Ukrai'ny vid 19.01.2010 r. za № 53/17348.
5. Stefanov, O., Buhtiarova, T., Kovalenko, V. et. al (2009). Nastanova. Likars'ki zasoby. Nalezhna laboratorna praktyka. Kyi'v, MOZ Ukrai'ny.
6. Medvedev, N. N. (1964). Lynejnye myshy. Lenyngrad: Medycyna, 179.
7. Kozhem'jakin, Ju. M., Hromov, O. S., Filonenko, M. A., Sajfetdinova, G. A. (2002). Naukovo-praktychni rekomendacii' z utrymannja laboratornyh tvaryn ta roboty z nymy. Derzh. farmakol. centr. Kyiv : Vyd. dim "Avicena", 155.
Дата находження рукопису 18.06.2015
Давтян Лена Левошвна, доктор фармацевтичних наук, професор, зав1дувач кафедри, кафедра фармацевти-чно! технолог^ та бюфармаци, Нацiональна медична академiя пiслядипломно! освгги iм. П. Л. Шупика, вул. Дорогожицька, 9, м. Ки!в, Укра!на, 04112 E-mail: [email protected]
Андрiйчук Ярослав Ростиславович, кафедра фармацевтично! технологй' та бюфармаци, Нацюнальна медична академия пiслядипломно! освiти iм. П. Л. Шупика, вул. Дорогожицька, 9, м. Ки!в, Укра!на, 04112 E-mail: [email protected]
