CC BY
22
ститута. ФГБНУ «Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт»; ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет». 2016. С. 95-97.
7. Семененко М.П. Использование природных бентонитов для коррекции минерального обмена у высокопродуктивного молочного скота. Труды Кубанского государственного аграрного университета. 2012. № 36. С. 213-216.
8. Тяпкина Е., Хахов Л., Семененко М., Кузьминова Е., Антипов В., Трошин А.,
Ферсунин А. Рациональное использование лекарственных препаратов в ветеринарии. Краснодар. 2014.
9. Ферсунин А.В., Семененко М.П., Кузь-минова Е.В. Комплексное использование минерального и растительного сырья для производства лекарственных средств в ветеринарной медицине. Труды Кубанского государственного аграрного университета. 2014. № 51. С. 97-99.
DOI: 10.34617/bj07-3649 УДК 619:615.9:616-099
ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПАРАМЕТРОВ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ФАРМАКОКОРРЕКЦИИ ТЕПЛОВОГО СТРЕССА
Рудь Екатерина Николаевна, аспирантка Кузьминова Елена Васильевна, д-р вет. наук Абрамов Андрей Андреевич, канд. вет. наук Василиади Ольга Игоревна, аспирантка
ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии», г. Краснодар, Российская Федерация
В статье приведены данные по изучению на лабораторных животных параметров острой токсичности препарата для фармакокоррекции теплового стресса - флавобети-на. В результате установлено, что пероральное введение нелинейным крысам флаво-бетина в дозе 6000 мг/кг массы тела переносится ими без видимых последствий. С учетом этого он классифицируется как малотоксичный и по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» относится к 4 классу опасности (вещества малоопасные).
Ключевые слова: доклинические исследования; острая токсичность; флавобе-тин; бетаин; лабораторные крысы
PRE-CLINICAL STUDIES OF THE PARAMETERS OF ACUTE TOXICITY OF THE PREPARATION FOR PHARMACOLOGICAL CORRECTION OF HEAT STRESS
Rud Ekaterina Nikolaevna, PhD student Kuzminova Elena Vasilyevna, Dr. Vet. Sci. Abramov Andrey Andreevich, PhD Vet. Sci. Vasiliadi Olga Igorevna, PhD student
Krasnodar Research Centre for Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Krasnodar, Russian Federation
The article presents data on the study of the parameters of acute toxicity of the flavobetin preparation for pharmacological correction of heat stress in laboratory animals. As a result, it was found that oral administration of flavobetin to nonlinear rats at a dose of 6000 mg / kg of body weight has no negative consequences. Taking this into account, it is classified as a low-toxic preparation and according to GOST 12.1.007-76 "Harmful substances" belongs to the 4th hazard class (low-hazard substances).
Key words: preclinical studies; acute toxicity; flavobetin; betaine; laboratory rats
Одной из проблем летнего периода для животноводов является тепловой стресс животных, вызывающий существенное падение продуктивности, проблемы со здоровьем и ухудшение показателей воспроизводства. Выраженность теплового стресса у крупного рогатого скота зависит от температуры воздуха и его влажности. Комфортным диапазоном температур для них является интервал от +4 до +20 °С, а для высокопродуктивных коров - от +9 до +16 °С. С повышением относительной влажности воздуха действие теплового стресса усиливается. Несмотря на то, что влияние теплового стресса более ощутимо в регионах с жарким климатом, молочные коровы в северных странах также могут испытывать состояние перегрева, главным образом из-за высокого индекса влажности [1, 4, 8].
Для фармакологической коррекции теплового стресса у животных в ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии» разработан комплексный препарат флавобетин, в котором ведущим действующим веществом является бетаин.
Бетаин - это продукт полного метилирования аминокислот, представляющий собой молекулу глицина с тремя присоединенными к ней метильными группами. Бетаин активирует синтез фосфолипидов мембран клеточных структур, выступая в качестве альтернативного донора ме-тильных групп в реакциях превращении метионина из гомоцистеина, что способствует заполнению дефектов в реакциях метилирования, вызванных нарушением функционирования фолатного цикла и недостатком витамина В12.
Бетаин также может заменять S-аденозилметионин как донор метильных
групп для прямого метилирования фос-фатидидил-этаноламина. Благодаря вовлечению бетаина в эти две реакции, он оказывает значительное влияние на процессы, контролирующие межуточный метаболизм организма. Помимо этого, бетаин обладает осмопротекторным, холеки-нетическим и холеретическим действием, способствуя снижению содержания жиров в гепатоцитах, нейтрализации токсических веществ и улучшению работы печени [2, 7].
Разработка любого лекарственного препарата включает в себя несколько этапов, первый - доклинические испытания, которые позволяют оценить эффективность, качество и безопасность. Для оценки безопасности, в первую очередь, проводят исследование острой токсичности - характеристика лекарственного препарата, определяющая его способность вызывать гибель животных при однократном введении или при многократном введении через короткие интервалы времени в течение суток.
Путь введения препарата животным зависит от рекомендуемого способа использования при применении его в ветеринарной клинической практике. Острая токсичность изучается с целью установления безвредных, токсических, летальных доз вещества. В случае определения летальных доз, в ходе доклинических испытаний, определяют причину гибели животных [3, 5, 6].
Цель работы - в рамках доклинических исследований флавобетина изучить его острую токсичность на лабораторных животных.
Методика исследований. Предварительно, используя литературные источники, была определена токсичность
компонентов, входящих в состав флавобе-тина - все компоненты относятся к 4 классу опасности.
Изучение острой токсичности препарата флавобетин проводилось на белых нелинейных крысах в соответствии с «Методическими рекомендациями по ток-сико-экологической оценке лекарственных средств, применяемых в ветеринарии» и согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», под общей редакцией проф. Р.У. Хабриева (2005), при соблюдении правил, предусмотренных «Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, которые используются с экспериментальной и научной целью» (ETS № 123, Страсбург, 18.03.1986).
Крысы содержались в виварии Краснодарского НИВИ в соответствии с ГОСТ 33216-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными». Предварительно животные были помещены в изолированные боксы на 14-дневный карантин, при раздельном содержании самцов и самок. Кормление крыс осуществлялось ежедневно дважды в сутки в одно и то же время сбалансированным многокомпонентным кормом, доступ к автоматическим поилкам не ограничивался. Опытные и контрольные животные содержались в одинаковых условиях, получая одинаковый рацион.
Для проведения опыта были отобраны крысы с учетом физиологического со-
стояния, возраста, пола, массы тела, из которых по принципу аналогов были сформированы опытная и контрольная группы, по 5 самцов и самок в каждой (п=10). Масса животных в опытной группе составила 226,8±5,8 г., в контрольной -222,6±4,2 г.
Использование разработанного препарата в ветеринарной клинической практике предполагается при перораль-ном способе введения, поэтому при определении острой токсичности флавобетина его вводили в виде 20 % суспензии однократно в желудок при помощи атравма-тичного зонда. Для приготовления суспензии использовали дистиллированную воду.
Перед вводом образца препарата животных не кормили в течение 12 часов, поение прекращали за 4 часа до начала эксперимента. Крысам контрольной группы внутрижелудочно вводилась дистиллированная вода в той же дозировке, что и образец флавобетина.
Количество вводимого образца фла-вобетина рассчитывали с учетом превышения верхней границы 4 класса опасности для фармакологических веществ (ГОСТ 12.1.007-76), составляющей 5000 мг/кг массы тела, для чего в дизайне эксперимента использовали дозу « 6000 мг/кг массы тела животного. Объем вводимой суспензии составил 5,44 мл, соответственно в среднем крысам вводили -1360,8 мг/жив флавобетина (табл. 1).
Таблица 1 - Определение острой токсичности флавобетина на лабораторных крысах
при внутрижелудочном способе введения (п=10)
Группы Доза на животное, мл Масса тела, г Доза препарата, мг/жив Доза препарата, мг/кг Пало, гол Клиника интоксикации
Опытная 5,44 226,8±5,8 1360,8 6000,0 - Реакция на введение
Контрольная 5,44 222,6±4,2 - - - Реакция на введение
Наблюдение за крысами проводили после введения образца флавобетина в непрерывно на протяжении первого дня желудок. Согласно общепринятой в токси-
кологии концепции острым считается воздействие изучаемого объекта в течение 14 суток, с учетом этого состояние животных отмечали дважды в сутки в течение двух недель.
Критериями оценки острой токсичности является количество павших животных и сроки гибели, клиническая картина интоксикации, поведенческие реакции, интенсивность и характер двигательной активности, координации движений, тонус скелетных мышц, реакция на тактильные, болевые, звуковые и световые раздражители, частота и глубина дыхательных движений, сердечные сокращения, состояние волосяного и кожного покрова, окраска слизистых оболочек, размер зрачка, положение хвоста, количество и консистенция фекальных масс, частота мочеиспускания и окраска мочи, потребление корма и воды, изменение массы тела.
Результаты исследований и их обсуждение. В результате проведенных исследований установлено, что, как в опытной, так и в контрольной группах у животных сразу после введения и в последующие три часа происходило снижение двигательной активности и реакций на внешние раздражители. В целом, развивалось кратковременное и слабовыра-женное угнетение при увеличении частоты дыхания. Также через 30-50 минут после введения образца наблюдался повы-
шенный диурез, связанный с введением большого объема дистиллированной воды. В течение первых суток описанные симптомы проходили, двигательная активность восстанавливалась. В опытной группе в течение первых двух дней регистрировали некоторое снижение аппетита.
Пальпация брюшной полости болевых ощущений не вызывала.
Частота дыхания зависит от многих экзогенных и эндогенных факторов и интегрально отражает состояние организма и обменных процессов. Отсутствие токсического влияния флавобетина подтверждалось физиологическими параметрами дыхательного ритма. На фоне введения образца сразу частота дыхания у лабораторных крыс составляла, в среднем, 128,6±4,7 в минуту, однако через 3 часа данные параметры нормализовались и составили 103,7±5,8 в минуту. Сходная клиническая картина была отмечена и в контроле.
Случаев патологических изменений кожи, волосяного покрова, видимых слизистых в ходе 2-недельного эксперимента во всех группах не наблюдали.
Гравиметрическими исследованиями, которые проводили 3 раза - фоновые, через 7 дней и по окончании опыта установлено, что увеличение массы на 14 день эксперимента в опытной группе составило 9,9 %, а в контрольной - 11,4 %.
Таблица 2 - Динамика массы тела крыс при изучении острой токсичности
флавобетина (п=10Л
Группа Масса тела, г прирост, %
на 1 день на 7 день на 14 день
Опытная 226,8±5,8 231,4±2,5 149,2±2,2 9,9
Контрольная 222,6±4,2 238,8±1,6 247,9±3,8 11,4
По истечении срока наблюдений из опытной группы животных из эксперимента было выведено 3 крысы, которых подвергли эвтаназии методом усыпления эфиром с соблюдением принципов биоэтики для учета патологоанатомических изме-
нений внутренних органов. В ходе исследований установлено, что внутренние органы подопытных крыс обычных размеров и не имели внешних признаков отклонений от нормы.
Выводы. Таким образом, перораль-ное введение лабораторным крысам фла-вобетина в дозе 6000 мг/кг массы тела переносится ими без видимых последствий, с учетом этого он классифицируется как малотоксичный и по ГОСТ 12.1.00776 «Вредные вещества» относится к 4 классу опасности (вещества малоопасные).
Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 20-316-90009.
Список литературы
1. Короткий В.П. Терморегулирующая кормовая добавка для КРС - новый подход в кормлении в летний период // В.П. Короткий, Н.П. Буряков, Ю.Н. Прытков // FARM NEWS. 2019. № 7. С. 24-30.
2. Микелов В.А. Бетаины как лекарственные средства / В.А. Микелов, А.Ш. Кайшев и др. // В сборнике: Беликовские чтения. материалы V Всероссийской научно-практической конференции. 2017. С. 55-60.
3. Семененко М.П. Доклиническое изучение гепатозащитного средства / М.П. Семененко, Е.В. Кузьминова, Е.В. Тяпкина,
О.А. Фомин // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. 2015. № 2. С. 141-143.
4. Тимошенко В. Тепловой стресс у коров. Как сохранить продуктивность? /В. Тимошенко, А. Музыка, А. Москалев // Белорусское сельское хозяйство. 2016. № 7. С. 4247.
5. Тяпкина Е. Рациональное использование лекарственных препаратов в ветеринарии / Е. Тяпкина, Л. Хахов, М. Семенен-ко, Е. Кузьминова и др. / Краснодар. 2014. 57 с.
6. Тяпкина Е.В. Основные принципы терапии животных при отравлениях /Е.В. Тяпкина, Л.А. Хахов, М.П. Семененко, Е.В. Кузьминова и др. // Краснодар. 2014. 29 с.
7. Харченко Н.В. Печеночные и внепе-ченочные эффекты лечебного комплекса с L-аргинином и бетаином у больных метаболическим синдромом / Н.В. Харченко, Г.А. Анохина, В.В. Харченко // Современная гастроэнтерология. 2015. № 3(83). С. 42-49.
8. Юрков В.М. Микроклимат животноводческих ферм и комплексов / В.М. Юрков // М. 1985. 223 с.
DOI: 10.34617/00ys-4n34 УДК 631.42:546.4/8:633.2
ТЯЖЕЛЫЕ МЕТАЛЛЫ ПОЧВ И СОДЕРЖАНИЕ ИХ В КОРМОВЫХ ТРАВАХ СЫРЬЕВОЙ ЗОНЫ СКОТОВОДСТВА
Синельщикова Ирина Алексеевна, канд. с.-х. наук Головко Елена Николаевна, д-р биол. наук Забашта Николай Николаевич, д-р с.-х. наук Андросова Анастасия Николаевна, соискатель Марченко Александра Юрьевна
ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии», Краснодар, Российская Федерация,
Представлены результаты исследования содержания тяжелых металлов/металлоидов в составе почв и кормовых трав сырьевой зоны откорма скота
