CC BY
0
| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2022; ТОМ 67; №2 |
Перфилова Е. А.1, Минаев М. С.2, Дьяконов Д. А.1, Росин В. А.1
ОЦЕНКА РОЛИ СБ163+ МАКРОФАГОВ И СБ15+ НЕЙТРОФИЛОВ В ПРОГНОЗЕ ТЕЧЕНИЯ НОДУЛЯРНОГО СКЛЕРОЗА
ЛИМФОМЫ ХОДЖКИНА
'ФГБУН «КНИИГиПК ФМБА России», 2ГБУЗ КО «ЦГКБ»
Введение. Лимфома Ходжкина (ЛХ) — В-клеточная лим-фома с выраженным реактивным полиморфноклеточным микроокружением. Наиболее частым гистологическим вариантом заболевания является нодулярный склероз. В настоящее время внимание ученых направлено на изучение опухолевого микроокружения и поиск новых терапевтических мишеней. Особый интерес представляют макрофагально-гистиоцитарные элементы и нейтрофилы. В отдельных работах отмечено, чтоувеличение содержания CD163+ макрофагов при классической ЛХ коррелирует с рецидивом заболевания и общей выживаемостью пациентов. Тем не менее данные противоречивы, носят описательный характер, а значимость CD163 в качестве маркера-предиктора течения ЛХ не доказана. Роль опухоль-ассоциированныхнейтрофилов (TAN) установлена при отдельных солидных опухолях. Однако данные, отражающие значение TAN при лимфопролиферативных заболеваниях, крайне ограничены.
Цель работы. Изучить роль CD163+ макрофагов и CD15+ ней-трофилов в прогнозе течения нодулярного склероза классической лимфомы Ходжкина.
Материалы и методы. Исследования выполнены на гистологических срезах лимфатических узлов 74 пациентов с нодулярным склерозом классической ЛХ. Все больные наблюдались в клинике ФГБУН «КНИИГиПК ФМБА России» в период с 2011 по 2018 г. Соотношение мужчин и женщин составило 45,9 и 54,1% соответственно; медиана возраста — 36 лет (28—44). Пациенты разделены на 2 группы: первая (п=34) — обследованные, достигшие ремиссии после проведения стандартной полихимиотерапии 1-й линии по схеме ВЕАСОРР (благоприятное течение). Вторую (п=40) — больные с ре-
фрактерностью к химиотерапии или минимальным ответом на лечение и пациенты, которым была проведена ауто- или алло-ТГСК (неблагоприятное течение). Иммуногистохимические реакции проводились по стандартной методике с применением моноклональных антител к маркерам CD15 (клон СатЪ-3, DAKO), CD163 (клон MRO-26, «Cell Marque», США). Для статистической обработки данных применялась программа Stadia.
Результаты и обсуждение. Установлено, что доля CD163+ макрофагов в группе 1 ниже, чем в группе 2: 6,0% (5,0—7,0) и 16,0% (8,0—19,0) соответственно, р <0,001. При проведении ROC-анализа определено пороговое значение CD163+ клеток, равное 7,0%. Низкий уровень экспрессии (<7,0%) CD163+ макрофагов чаще встречался у пациентов группы 1, чем группы 2: 77,8 и 22,2% соответственно, р<0,001. Количество CD15+ нейтрофилов в группе 1 до -стоверно отличалось от группы 2: 7,0% (7,0—8,0) и 21,0% (17,0—23,0) соответственно (р<0,001). При проведении ROC-анализа выявлено пороговое значение уровня экспрессии CD15+ нейтрофилов, равное 8,0%. Подпороговый уровень (<8,0%) CD15+ клеток чаще определялся у больных в группе 1, чем в группе 2: 90,0% и 10,0% (р<0,001). Между полученными показателями экспрессии CD163 и CD15 выявлена статистически значимая сильная прямая корреляционная зависимость (УКрамера=0,5бб; р<0,001).
Заключение. Повышение количества CD163+ макрофагов (>7%) и CD15+ нейтрофилов (>8%) связано с плохим ответом на терапию 1-й линии по схеме ВЕАСОРР. Относительное число этих клеток может быть использовано в качестве дополнительного морфологического критерия прогноза течения нодулярного склероза больных ЛХ.
Петинати Н. А.1, Давыдова Ю. О.1, Никифорова К. А.1, Бигильдеев А. Е.1, Арапиди Г. П.2, Кузьмина Л. А.1, Дризе Н. И.1, Паровичникова Е. Н.1
ДИНАМИКА ИЗМЕНЕНИЙ КОНЦЕНТРАЦИИ Т-КЛЕТОК И ЦИТОКИНОВ В КРОВИ ПАЦИЕНТОВ ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ МУЛЬТИПОТЕНТНЫХ МЕЗЕНХИМНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ РАЗВИТИЯ ОСТРОЙ РЕАКЦИИ
ТРАНСПЛАНТАТ ПРОТИВ ХОЗЯИНА
'ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России, 2ФНКЦ ФХМ
Введение. Мультипотентые мезенхимные стромальные клетки (МСК) активно применяются для лечения и профилактики реакции трансплантат против хозяина (РТПХ) — частого осложнения трансплантации аллогенных гемопоэтических клеток (алло-ТГСК). Развитие РТПХ связано с иммунными клетками донора, активация которых в организме реципиента модулируется МСК. Что происходит в организме после введения МСК, изучено недостаточно.
Цель работы. Проследить за динамикой изменения субпопуляций Т-клеток памяти и цитокинов в крови пациентов после введения МСК.
Материалы и методы. Пациенты после алло-ТГСК были ран-домизированы на 2 группы, которым вводили и не вводили МСК в день восстановления лейкоцитов до 1000 в мкл. В этот день (день 0) пациентам одной группы вводили МСК. У больных обеих групп в день 0 через 3 и 30 дней забирали периферическую кровь, выделяли лимфоциты и анализировали иммунофенотипически субпопуляции Т-клеток памяти. Концентрацию 27 цитокинов и хемо-кинов в крови определяли с помощью набора Bio-Plex Pro Human Cytokine Panel.
Результаты и обсуждение. Основные изменения происходят через 30 дней после введения МСК, несмотря на то что введенные МСК в этот момент уже не обнаруживаются в организме. Концентрация всех изученных цитокинов, хемокинов и факторов роста у пациентов была ниже и сильнее варьировала чему доноров. Это подтверждает неполное восстановление иммунной и кроветворной системы в течение как минимум 2 месяцев после алло-ТГСК. К 30-му дню в сыворотке крови пациентов, которым вводили МСК, достоверно повышается концентрация регулиру-
ющих иммунный ответ про- и противовоспалительных цитокинов — IL-6, IL-8, IL-17, TNF-a и IFN-g. В группе пациентов, ко-
Таблица. Динамика изменений количества лимфоцитов в субпопуляциях клеток памяти у пациентов после алло-ТГСК и введения МСК
Numberofcells, x 10Ó/L
день 0 день 3 день 30
Без МСК МСК Без МСК МСК
CD4*SCM 2,62±0,63 4,27±1,80 4,46±1,50 1,69±0,52 1,86±0,45
CD4*NV 22,09±3,22 33,56±11,24 35,86±9,39 31,97±9,73 34,34±8,41
CD4*CM 22,69±4,51 25,87±6,36 27,40±5,27 28,79±7,34 30,30±6,38*
CD4*TE 1,32 ±0,48 1,46±0,54* 1,62±0,47 3,27±1,42 3,55±1,26
CD4*TM 35,56±5,41 45,02±10,10 46,96±8,39* 86,67±29,28 89,44±26,18
CD4*EM 2,80±1,21 3,32±2,51 3,45±2,10 21,40+13,41^ 20,08±11,87
CD8*SCM 6,14±1,50 24,17±8,41* 29,18±7,65* 11,84±4,34 12,23±3,86
CD8*NV 0,79±0,17 5,20±4,64* 5,41 ±3,88* 0,56±0,23 0,58±0,21
CD8*CM 1,55±0,33 6,32±2,74* ^42±2,44* 2,90±0,77 2,81 ±0,69
CD8*TE 23,ó4±ó,48 133,20±51,50 148,25±43,64* 117,12+33,03« 116,64±29,57Ф
CD8*TM ló,99±4,23 96,12+44,11 113,47±38,39* 84,22±45,70ф 80,74±40,97ф
CD8+EM 13,50±3,43 96,18±39,65 103,80±33,50* 291,52±201,9Ф 267,64±180,06«
Treg 9,65±1,51 11,67±3,03 12,56±2,54 8,61 ±2,23 9,26±1,93
CD4*HLA-DR* 10,40±2,58 15,31+6,64 15,48±5,57 59,52±28,26ф 57,67±25,25
CD4*PD1* ó,2ó±l,14 12,65 ±3,53 12,32±2,98 44,08±17,92ф 46,72±16,03ф
CD4*CD25+ 2ó,39±5,13 33,65±9,58 35,96±8,11 18,88±5,39ф 20,30±4,68*
CD8*HLA-DR* 29,14±10,09 34,69±13,93 34,50±11,69 303,22±171,9Ф 281,48±153,85ф
CD8*CD25* 3,21 ±0,66 3,28±1,22 4,00+1,11 2,88±1,05 3,00±0,94ф
CD8*PD1* 3,06±0,77 4,46±1,71 4,14±1,44 35,23±18,89ф 32,70±17,00ф
Достоверные различия (р<0,05) день 0 — деньЗ *; день 0 — день 30 0;си без МСК ♦
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
торым не вводили ЖСК, повышается только концентрация К 30-му дню после введения ЖСК также увеличивается концентрация ростовых факторов О-СЗЕ, ОМ-С8Е, РООЕЬЬ, РОРЬ и 1Ь-5. Уровни 0-С8Р и РБОРЬЬ также повышаются у пациентов контрольной группы, однако в меньшей степени. Через 3 суток после введения ЖСКувеличивается только количество С08+ эффек-торных клеток (С08+ТЕ, С08+ТМ, С08+ЕМ). Через 30 суток после введения ЖСК увеличивается количество С04+СЖ и активированных клеток СВ4+СБ25+. При этом изменяется направление
и скорость восстановления субпопуляций Т-клеток по сравнению с контрольной группой (табл.). Корреляции между концентрациями провоспалительных цитокинов и представленностью отдельных субпопуляций Т-клеток выявлено не было.
Заключение. Показано, что введение ЖСК положительно влияет на восстановление иммунной системы пациентов после ал-ло-ТГСК.
Работа была выполнена при поддержке гранта РФФИ 19-29040-23.
Петинати Н. А., Капранов Н. М., Давыдова Ю. О., Бигильдеев А. Е., Пшеничникова О. С., Карпенко Д. В., Дризе Н. И., Кузьмина Л. А.,
Паровичникова Е. Н., | Савченко В. Г. |
ИММУНОФЕНОТИПИЧЕСКИЕ РАЗЛИЧИЯ МУЛЬТИПОТЕНТНЫХМЕЗЕНХИМНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК ЭФФЕКТИВНЫХ И НЕЭФФЕКТИВНЫХ ПРИ ПРОФИЛАКТИКЕ ОСТРОЙ РЕАКЦИИ ТРАНСПЛАНТАТ ПРОТИВ ХОЗЯИНА
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Жультипотентные мезенхимные стромальные клетки (ЖСК) здоровых доноров применялись для профилактики развития острой реакции трансплантат против хозяина (РТПХ) после аллогенной трансплантации костного мозга. Введение ЖСК пациентам было не всегда эффективно.
Цель работы. Изучение различий между эффективными и неэффективными в профилактике РТПХ образцами ЖСК.
Материалы и методы. Исследовали вводимые ЖСК и те же клетки, культивированные в присутствии лимфоцитов стороннего донора или обработанные провоспалительными цито-кинами, — IL-lb, IFNg и TNF. С помощью проточной цитомет-рии определяли иммунофенотип ЖСК без воздействия, после ко-культивирования с лимфоцитами или воздействия цитокинов, а также долю CD25, CD146, CD69, HLA-DRh PD-1 положительных CD4+ и CD8+ клеток и распределение различных субпопуляций эффекторных клеток и клеток памяти в лимфоцитах, ко-культивированных с ЖСК.
Результаты и обсуждение. Выявлены отличия в иммунофе-нотипе эффективных и неэффективных ЖСК. В эффективных образцах достоверно выше средняя интенсивность флуоресценции (СИФ) HLA-ABC, HLA-DR, CD105 и CD146. После обработки ЖСК IFNg или ко- культивирования с лимфоцитами сильнее повышается СИФ HLA-ABC, HLA-DR, CD90 и CD54 в эффективных ЖСК, что указывает на повышение иммуномодулирующей активности этих клеток. При кокультивировании лимфоцитов с эффективными ЖСК достоверно меньше снижается пропорция CD4+CM, CD8+CM и больше увеличивается доля CD8+CD146+ лимфоцитов, по сравнению с субпопуляциями лимфоцитов, коку льтивированных с неэффективными в профилактике РТПХ
образцами ЖСК, тогда как пропорция С08+ЕМ лимфоцитов при ко-культивировании с эффективными образцами ЖСК снижается, а с неэффективными увеличивается. Пропорция СВ4+СБ14б+ лимфоцитов возрастает только при ко-культивиро-вании с неэффективными образцами.
Заключение. Впервые найдены отличия между эффективными для профилактики РТПХ и неэффективными образцами ЖСК, указывающие на возможный механизм иммуносупресси-рующего действия этих клеток при клиническом применении. Таким образом, показано, что от индивидуальных особенностей популяции ЖСК зависит их иммуномодулирующая активность.
Работа была выполнена при поддержке гранта РФФИ 19-29040-23.
Таблица Изменение иммунофенотипа МСК при кокультивировании с лимфоцитами
1 сутки 4 суток
эффективные неэффективные эффективные неэффективные
Изменения в экспрессии поверхностных антигенов на МСК при ко-культивировании с лимфоцитами
HLA-ABC 1,90+0,11 1,53±0,30 1,90±0,15 1,67±0,33
CD90 0,95±0,04 0,79±0,06* 0,55±0,04 0,49±0,10
HLA-DR 134,37±63,90 654,74±363,49 682,42±326,38 151,88±96,44
CD105 1,08±0,06 0,98±0,14 0,64±0,05 0,42±0,07
CD146 0,82±0,07 0,86±0,30 22,16±16,28 0,81 ±0,21
CD54 60,59±12,29 44,76±8,84 33,08±5,30 23,19±7,64
CD274 434,ó4±93,5ó 1,27±0,28* 573,44±172,78 319,25±233,40
CD73 1,05±0,08 0,5ó±0,13* 150,36±103,94 1,60±0,54
Достоверные отличия между эффективными и неэффективными МСК
Петренко А. А., Кислова М. И., Дмитриева Е. А., Никитин Е. А., Виноградова О.Ю., Птушкин В. В.
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВЕНЕТОКЛАКС-СОДЕРЖАЩИХ СХЕМ У ПАЦИЕНТОВ С ХЛЛ ПРИ РЕФРАКТЕРНОСТИ К ИБРУТИНИБУ
ГБУЗ «ГКБ им. С.П. Боткина ДЗМ», Москва, Россия
Введение. Оптимальная тактика ведения пациентов с прогрессией на ибрутинибе не разработана. Терапией спасения для этих пациентов является венетоклакс (VEN), однако вопрос о необходимости использования его в сочетании с моноклональными антителами не разрешен. Использование моноклональных антител может быть причиной тяжелых инфекций, поэтому этот вопрос имеет принципиальное значение.
Цель работы. Провести сравнение монотерапии венетоклак-сом и его комбинации с моноклональными антителами к CD20 у больных с рефрактерностью к ибрутинибу.
Материалы и методы. В наблюдательное исследование были включены пациенты, у которых во время лечения ибрутинибом наблюдалось прогрессирование в соответствии с критериями íwCLL 2018. Ни один из пациентов не прекращал прием ибрути-ниба до перехода на VEN. Согласно внутреннему протоколу прием ибрутиниба продолжался до полного ответа, определяемого как три последовательных с интервалом в 3 месяца отрицательных
результата исследования минимальной остаточной болезни (ЖОБ (-)) методом проточной цитофлуометрии, или неопределенно долго. Пациенты получали моноклональные антитела на протяжении б месяцев, в то время как прием VEN продолжался. Терапия VEN могла быть прекращена, если у пациента определялась ЖОБ (-) на фоне полной ремиссии, сохраняющаяся в течение 12 месяцев.
Результаты и обсуждение. Всего в исследование включено 66 пациентов, 19 — получали VEN в монорежиме (VENmono), 47 — VEN в комбинации с анти-СЛ20 моноклональными антителами (VENcombo). Характеристика пациентов представлена в таблице. Среди пациентов в когорте VENcombo: 37 получали обинутузумаб, 10 — ритуксимаб. При сравнении исходных биологических характеристик среди пациентов, получавших VENmono или VENcombo, были отмечены значимые различия в показателе ECOG, а также в частоте синдрома Рихтера (CP). Обе группы обогащены случаями с делецией 17р и комплексным кариотипом. В группе VENmono ВВП была значимо ниже, чем в группе VENcombo (4,5 против 26,8
