CC BY
38
DOI: 10.24411/0235-2451-2019-10813 УДК 636.2.082.12:612.017:636.234.1
Динамика иммунологических показателей коров голштинской породы в зависимости от срока стельности*
М. А. ЕРЕМИНА1, И. Ю. ЕЗДАКОВА2
Федеральный научный центр животноводства - ВИЖ имени академика Л. К. Эрнста, пос. Дубровицы, 60, Подольский р-н, Московская обл., 142132, Российская Федерация
2Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К. И. Скрябина и Я. Р. Коваленко, Рязанский просп., 24/1, Москва, 109428, Российская Федерация
Резюме. Работу проводили с целью изучения особенностей динамики показателей естественной резистентности в разные периоды стельности коров голштинской породы в условиях Московского региона для своевременной корректировки состояния здоровья животных. Работу выполняли в экспериментальном хозяйстве «Кленово-Чегодаево» (Москва), в котором применяют привязное содержание, и на племзаводе «Барыбино» (Московская область), где животных содержат беспривязно. Исследования проводили в период лактации первотелок голштинской породы в 2017-2018 гг. в разные сроки стельности: (36,50 ± 6,75) дней (N = 10); (89,80 ± 8,76) дней (N = 7); (151,30 ± 6,17) дня (N = 22); (264,00 ± 9,83) дня (N = 10). В сыворотке крови определяли количественное содержание IgG и IgM с использованием простой радиальной иммунодиффузии и клеточных факторов иммунитета (лейкоцитарная формула, фагоцитарная активность), между которыми определяли показатели корреляции в изучаемые периоды стельности у коров. Содержание IgG у коров с 36 к 264 дням стельности значительное снижается (на 8,19 мг/мл), что связано с колостральным синтезом IgG в молочной железе. Во все периоды стельности отмечена положительная корреляция IgG/IgM, что свидетельствует об активизации синтеза этих глобулинов и устойчивом состоянии иммунной системы организма животных вне зависимости от периода стельности. Наибольшее количество значимых корреляционных связей (7) к 90-дневному сроку стельности обусловлено развитием иммунной системы плода. Полученные данные могут быть полезными при коррекции факторов естественной резистентности в период стельности коров.
Ключевые слова: коровы, стельность, иммуноглобулины, нейтрофилы, базофилы, моноциты, фагоцитарная активность, лейкоформула, корреляция, период стельности.
Сведения об авторах: М. А. Еремина, доктор сельскохозяйственных наук, старший научный сотрудник (e-mail: eromaar@ yandex.ru); И. Ю. Ездакова, доктор биологических наук, зав. лабораторией (e-mail: ezdakova.i@viev.ru). Для цитирования: Еремина М. А., Ездакова И. Ю. Динамика иммунологических показателей коров голштинской породы в зависимости от срока стельности // Достижения науки и техники АПК. 2019. Т. 33. № 8. С. 59-62. DOI: 10.24411/02352451-2019-10813.
*Исследования проведены при поддержке Министерства науки и образования России, регистрационный номер темы № АААА-А18-118021590129-9.
Dependence of Immunological Characteristics Dynamics of Holstein Cows on the Pregnancy Stage
M. A. Eremina1, I. Yu. Ezdakova2
'Federal Scientific Center of Animal Husbandry - L. K. Ernst All-Russian Research Institute of Animal Husbandry, pos. Dubrovitsy, 60, Podol'skii r-n, Moskovskaya obl., 142132, Russian Federation
2Federal Scientific Center - K. I. Skryabin and Ya. R. Kovalenko All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine, Ryazanskii prosp., 24/1, Moskva, 109428, Russian Federation
Abstract. The work was conducted to study the dynamics of natural resistance in different pregnancy periods of Holstein cows under the conditions of the Moscow region for the timely treatment of the animals. The work was performed in the Klenovo-Chegodaevo experimental farms (Moscow) with tie-up housing and in the stud farm Barybino (Moscow region) with yard housing. The studies were conducted in the lactation period of the Holstein heifers in 2017-2018. The periods of pregnancy amounted to 36.50 ± 6.75 days (N = 10), 89.80 ± 8.76 days (N = 7), 151.30 ± 6.17 days (N = 22), and 264.00 ± 9.83 days (N = 10). It was determined the quantitative content of IgG and IgM in the serum using simple radial immunodiffusion and cellular immunity factors (leukogram and phagocytic activity). The correlation indices between the parameters were determined at the studied cows' pregnancy stages. The IgG content reduced significantly from the 36th to the 264th day of pregnancy (by 8.19 mg/mL) that was associated with colostral synthesis of IgG in the mammary gland. The positive IgG/IgM correlation was observed in all the pregnancy stages. This indicated the activation of the synthesis of these stable globulins and stable state of the animals' immune systems regardless of the pregnancy period. The largest number of significant correlations (7) by the 90-day pregnancy period was due to the development of the fetal immune system. The data obtained may be useful in correcting the factors of natural resistance during the cows' pregnancy period. Keywords: cows; pregnancy; immunoglobulins; neutrophils; basophils; monocytes; phagocytic activity; leukogram; correlation; pregnancy period.
Author Details: M. A. Eremina, D. Sc. (Agr.), senior research fellow (e-mail: eromaar@yandex.ru); I. Yu. Ezdakova, D. Sc. (Biol.), head of laboratory (e-mail: ezdakova.i@viev.ru).
For citation: Eremina M. A., Ezdakova I.Yu. Dependence of Immunological Characteristics Dynamics of Holstein Cows on the Pregnancy Stage. Dostizheniya naukii tekhnikiAPK. 2019. Vol. 33. No. 8. Pp. 59-62 (in Russ.). DOI: 10.24411/0235-2451-2019-10813.
Увеличение молочной продуктивности коров влечет за собой проблему снижения их воспроизводительных качеств, решение которой возможно на основе глубокого понимания эндокринных, клеточных и молекулярных факторов, контролирую-
щих эту функцию, и разработки скоординированных систем репродуктивного менеджмента.
Один из физиологических аспектов системы репродуктивного менеджмента - влияние материнского организма на развивающийся плод в связи
с тем, что активность реакций иммунной системы постоянно меняется в течение стельности. В свою очередь, плод находится в непосредственном контакте с материнскими эффекторными клетками, большинство из которых - клетки врожденного иммунитета. Исследования, проведенные на человеке, показали, что знание фенотипов и функций иммунных клеток матери при нормальных и патологических беременностях может улучшить понимание биологии нормального течения этого процесса в целом и обеспечить подходы к исследованию его динамики [1]. Установлено, что количество децидуальных клеток, формирующихся в начальные недели беременности, снижается с увеличением ее срока [2, 3].
Уровень содержания нейтрофилов, которые служат первым фактором клеточной защиты, значительно варьирует в зависимости от их экспрессии у стельных коров, по сравнению с нестельными [4, 5]. Это позволяет предположить, что врожденный иммунитет не индифферентен в отношении плода и может служить не только для защиты от патогенов, но и обеспечивать условия, при которых происходит благополучное его вынашивание [6].
При 1...2 недельной стельности в крови коров увеличивается количество лейкоцитов, эозинофилов, сегментоядерных нейтрофилов. Уровень изменений общей реактивности организма из-за антигенного воздействия плода отражает величина лейкоцитарных соотношений, в число которых входят: количество ней-трофилов/количество лимфоцитов, количество лимфоцитов/количество эозинофилов. При 3.4-недельной стельности появляются признаки угнетения иммунной реактивности организма на фоне его толерантности к развивающемуся плоду, обнаруживаемые по уменьшению количества лейкоцитов, нормализации числа эозинофилов и приросту лимфоцитов [7, 8].
В период стельности животных установлено снижение уровня содержания 1дО и 1дМ в сыворотке крови, начиная с восьмой недели перед отелом и на четвертой после него. После отела уровень 1дО, в основном, восстанавливается, а концентрация 1дМ остается низкой. Такие особенности следует рассматривать в качестве определенной адаптационно-трофической функции материнского организма, направленной на обеспечение потребностей развивающегося плода, а степень снижения содержания 1дО в крови перед отелом связана также с концентрацией его в молозиве [9].
Поддержание концентрации глобулинов в сыворотке крови на достаточном уровне имеет большое значение при развитии физиологически протекающей стельности, так как именно эта фракция обеспечивает механизмы естественной резистентности. Кроме того, на воспроизводительные качества может оказывать влияние и возраст матери. Например, наиболее коротким сервис-периодом обладали потомки коров-матерей, отелившихся в первый раз [10].
Факторы врожденного иммунитета также оказывают влияние на воспроизводительные функции коров, их своевременный учет способствует коррекции патологий стельности. Так, при изучении взаимосвязей между клеточными компонентами крови выявлена устойчивая отрицательная корреляция между содержанием нейтрофилов и лимфоцитов и слабая положительная - между концентрациями 1дО и 1дМ, что в совокупности свидетельствует о довольно высоком уровне здоровья животных [11].
Использование этих показателей позволяет дополнить отбор быков и коров учетом иммунологических факторов при оценке их воспроизводительных качеств [12].
Цель работы - исследовать особенности динамики показателей естественной резистентности в разные периоды стельности коров голштинской породы в условиях Московского региона для своевременной корректировки состояния здоровья животных.
Новизна исследований состоит в том, что впервые изучены параметры иммунного профиля коров на основе показателей клеточного и гуморального иммунитета, а также ответных реакций организма в разные периоды стельности.
Условия, материалы и методы. Исследования проведены в экспериментальном хозяйстве «Кленово-Чегодаево» (Москва), в котором животных содержали на привязи, и наплемзаводе«Барыбино» (Московская область), где используется беспривязное содержание, на первотелках голштинской породы в 2017-2018 гг.
Для определения составляющих лейкоцитарной формулы, фагоцитарной активности, содержания IgG и IgM коров-первотелок разделили на 4 группы соответственно срокам стельности. Первая группа со сроком (36,50 ± 6,75) дней (к концу этого периода эмбрион уже считается плодом); N = 10, по 5 коров из каждого хозяйства. Во второй группе срок стельности составил (89,80 ± 8,76) дней (у плода можно установить принадлежность к группе крови и резус-фактор) N = 7 - 4 и 3 коровы по хозяйствам соответственно. В третьей группе срок (151,30 ± 6,17) дня (у плода активно развивается иммунная система, выделяются иммуноглобулин и интерферон) N = 22 - 10 и 12 гол. по хозяйствам соответственно. В четвертую группу отобрали коров в период сухостоя: (264,00 ± 9,83) дня; N = 10, по 5 гол. из каждого хозяйства.
Кровь брали из подхвостовой вены. В ее сыворотке определяли количественное содержание IgG и IgM с применением моноспецифических антисывороток. В цельной крови изучали содержание показателей лейкоцитарной формулы с использованием простой радиальной иммунодиффузии по методу G. Manchini et al. [13]. Фагоцитарную активность определяли по методике И. Ю. Ездаковой, М. Н. Лощинина, Е. Е. Грушиной [14].
Иммунологические исследования проведены в Федеральном научном центре - Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии имени К. И. Скрябина и Я. Р. Коваленко.
Для определения степени иммунологической нагрузки на организм животных были рассчитаны корреляции между показателями клеточного и гуморального иммунитета животных [11].
Для обработки данных по исследуемым периодам стельности у первотелок использовали методы, входящие в пакет программ MS Excel. Корреляцию рассчитывали с использованием методики К. Пирсона. Достоверность различий определяли по критерию Стьюдента.
Результаты и обсуждение. К концу стельности (264 дня), по сравнению с начальным ее периодом (36 дней), в крови лактирующих коров отмечено снижение содержания лимфоцитов на 2,2 %, моноцитов - на 4,89 %, эозинофилов - на 2,72 %, фагоцитарной активности - на 4 %, но эти изменения не были достоверны_ Достижения науки и техники АПК. 2019. Т 33. № 8
Таблица 1. Клеточные и гуморальные факторы иммунитета в зависимости от срока стельности коров
нейтрофилы
Лейкоцитарная формула, %
палочкоя-дерные
сегменто-ядерные
лимфоциты
моноциты
эозино-филы
базофи-лы
Фагоцитарная активность, %
Содержание IgG, мг/мл
Содержание 1дМ, мг/мл
Стельность в среднем 36,50 ± 6,75дней ^ = 10 гол.)
7,28 ± 0,68 25,70 ± 3,28 48,2 ± 3,29 13,29 ± 3,48 9,89 ± 2,08 1,16 ± 0,16 34,0 ± 6,00 28,60 ± 0,78 1,32 ± 0,39
Стельность в среднем 89,80 ±8,76 дней ^ = 7 гол.)
8,25 ± 1,03 28,75 ± 1,93 44,8 ± 4,26 11,20 ± 2,49 5,80 ± 2,05 не опре- 37,5 ± 2,50 28,00 ± 1,08 2,11 ± 0,63
делены
Стельность в среднем 151,30 ± 6,17 дней ^ = 22 гол.)
9,25 ± 1,09 29,90 ± 1,82 46,25 ± 2,93 11,25 ± 1,75 9,30 ± 1,30 не опре- 31,66 ± 3,81 28,50 ± 0,52 1,82 ± 0,38
делены
Стельность в среднем 264,00 ± 9,83 дней ^ = 10 гол.)
6,83 ± 1,58 29,67 ± 7,35 46,00 ± 4,77 8,40 ± 1,50 7,17 ± 1,49 1,80 ± 0,37 30,00 ± 4,47 20,41* ± 2,26 2,12 ± 0,27
*р < 0,05, по сравнению с первым сроком стельности
ми (табл. 1). Уровень концентрации 1дМ варьировал по периодам стельности: к 90 дню он повысился на 0,79 мг/мл; к 151 дню уменьшился на 0,29 мг/мл и к 264 дню снова увеличился на 0,3 мг/мл. Однако разница не достигала достоверных различий. Содержание 1дО к 264 дням стельности снизилось, по сравнению с 36 днями, на 8,19 мг/мл (р < 0,05). Это закономерно, так как к концу стельности в молочной железе формируется запас 1дО, который переходит в молозиво.
Клеточные компоненты иммунной системы функционируют не одновременно, а в зависимости от нагрузки на организм [11]. Такой нагрузкой в наших исследованиях можно считать период лактации и стельность животных.
Исследование корреляций между клеточными факторами иммунитета определяет факторы нагрузки. Проведенным расчетом установлено, что показатель корреляции сегментоядерные нейтрофилы
Таблица 2. Корреляции клеточных факторов иммунитета у коров в разные периоды стельности
Стельность Стельность Стельность Стельность
Корреляция 36,50 ± 89,80 ± 151,30 ± 264,00 ±
6,75 дней 8,76 дней 6,17 дней 9,83 дней
IgG/нейтрофилы сегментоядерные 0,018 -0,028 0,154 -0,708*
IgG/лимфоциты 0,345 0,959** -0,022 0,760*
IgG/моноциты -0,051 -0,647** -0,058 -0,041
^/эозинофилы 0,177 -0,616** 0,209 0,471
IgG/фагоцитарная активность -0,114 -0,500 0,045 -0,132
Нейтрофилы сегментоядерные/лимфоциты -0,789* -0,660* -0,661* -0,967**
Нейтрофилы сегментоядерные /моноциты -0,060 -0,142 0,154 -0,402
Нейтрофилы сегментоядерные /эозинофилы -0,479* -0,957** -0,186 -0,290
Нейтрофилы сегментоядерные /фагоцитарная
активность -0,844* -0,185 -0,108 -0,354
Моноциты/эозинофилы -0,561* -0,097 -0,360 -0,818***
Моноциты/фагоцитарная активность 0,387 -0,188 0,017 -0,121
Лимфоциты/моноциты 0,640* -0,103 -0,573* 0,153
Лимфоциты/эозинофилы 0,337 -0,420 -0,076 0,468
Лимфоциты/фагоцитарная активность -0,027 0,474 0,324 0,359
Фагоцитарная активность/эозинофилы 0,327 -0,518** -0,125 0,400
0,900*** 0,699* 0,775** 0,179
*р < 0,05; **р < 0,01; ***р < 0,001
К 151 дню стельности, по сравнению с 36 днями, установлено недостоверное повышение уровня содержания палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофи-лов - на 1,97 и 4,2 % соответственно, что может быть связано с развитием кроветворной системы плода. Фагоцитарная активность крови варьировала в зависимости от увеличения срока стельности коров: с 36 до 90 дней - повысилась на 3,5 %; с 90 до 151 дня - снизилась на 5,84 % и со 151до 264 дней - уменьшилась на 1,66 %. Однако различия были недостоверны. Несмотря на это, такие результаты могут свидетельствовать о возможности несбалансированного распада фагоцитов, нарушении подвижности и поглощения ими инородного тела, что, в конечном итоге, может привести к снижению устойчивости организма против инфекции.
В начальный период стельности состояние иммунной системы коров отражает совокупность процессов реактивности организма по отношению к зародышу. С увеличением ее сроков процесс толерантности к плоду усиливается, что отражается в меньшем варьировании величин показателей клеточных факторов иммунитета [10].
/лимфоциты имел отрицательные значения во все периоды стельности (табл. 2). Сохранение обратной зависимости корреляционной пары нейтрофилы (клетки врожденного иммунитета) и лимфоциты (клетки адаптивного иммунитета) демонстрирует сбалансированность работы иммунной системы организма животных.
К 90-дневному периоду стельности у коров установлено наибольшее (7) количество значимых показателей корреляций, что может быть обусловлено развитием у плода системы врожденного иммунитета.
Сильная положительная связь между 1дО и 1дМ у животных на разных сроках стельности демонстрирует активизацию их синтеза в этот период. Низкие коэффициенты корреляции между 1дО и 1дМ перед отелом свидетельствуют о переходе иммунной системы на обеспечение роста плода и формирование колострального иммунитета.
Усиление связей: моноциты/эозинофилы, лим-фоциты/эозинофилы, 1дО/нейтрофилы сегментоядерные, 1дО/лимфоциты, 1д0/эозинофилы от раннего
срока к концу стельности отражает сохранение адап- несбалансированностью распада фагоцитов, что не
тивных возможностей показателей гуморального способствует сохранению здоровья материнского
иммунитета в связи с полной толерантностью к плоду организма.
со стороны организма материи. Обратная корреляция между содержанием ней-
Выводы. В результате проведенных исследо- трофилов и лимфоцитов (от -0,661 до -0,967), а
ваний по изучению динамики естественных фак- также положительная - между концентрациями IgG
торов иммунитета у первотелок в период стель- и ^М указывают на устойчивое состояние иммунной
ности установлено снижение содержания IgG к системы организма животных вне зависимости от
264 дням, по сравнению с 36 днями стельности, периода стельности. Наибольшее количество (семь)
на 8,19 мг/мл (p < 0,05), связанного с усилением значимых корреляционных связей иммунологических
синтеза иммуноглобулинов и накоплением их в показателей у коров отмечено к 90-дневному сроку
молочной железе. Показатели клеточных факторов стельности, что связано с увеличением на этом этапе
иммунитета (содержание нейтрофилов, моно- фетального развития числа структурных компонентов
цитов, лимфоцитов, эозинофилов) варьировали врожденной иммунной системы у плода. Получен-
в связи с общим формированием кроветворной и ные данные могут быть полезными при коррекции
иммунной системы у плода. Некоторое изменение факторов естественной резистентности в период
фагоцитарной активности может быть связано с стельности коров.
Литература.
1. Савченко А. А., Борисов А. Г. Основы клинической иммунометаболомики. Новосибирск: Наука, 2012. 263 с.
2. Ездакова И. Ю. Рецепторы иммунного узнавания у животных. М: КомпанияСпутник+, 2008. 88 с.
3. Бурместер Г.-Р., Пецутто А. Наглядная иммунология/пер. с англ. Т. П. Мосоловой. Изд. 4-е, под ред. Л. В. Козлова. М.: Лаборатория знаний, 2018. 320 с.
4. Koga K., Mor G. Toll-like receptors at the maternal-fetal interface in normal pregnancy and pregnancy disorders //Am. Journal Reprod. Immunol. 2010. V. 63, No 6. P. 587-600.
5. Bulmer J. N., Williams P. J., Lash G. E. Immune cells in the placental bed//Inttrnational Journal of Devtlopmental Biology. 2010. V. 54. P. 281-294.
6. Neutrophil gene dynamics and plasma cytokine levels in dairy cattle during peri-implantation period / P. Manjari, S. Reddi., M. Alhussien, et al. // Veterinary Immunology and Immunopathology. 2016. V. 173. P. 44-49.
7. Роль клеток врожденного иммунитета в обеспечении успеха беременности на ранних сроках гестации / Н. Ю. Сотникова, Ю. С. Анциферова, Н. В. Кошкина, и др. // Журнал акушерства и женских болезней. 2013. Т. LXII. Вып. 2. С. 151-159.
8. Чуличкова С. А. Роль клеток крови в иммунной перестройке организма коров на ранних сроках стельности // Известия Оренбургского государственного аграрного университета: теоретический и научно-практический журнал. 2016. № 2 (58). С. 165-167.
9. Herr M., Bostedt H., Failing K. IgG and IgM levels in dairy cows during the periparturient period// Theriogenology. 2011. No 75 (2). P. 377-385.
10. Вильвер Д. С. Анализ воспроизводительной способности коров разного возраста в зависимости от влияния па-ратипических факторов//Известия Оренбургского государственного аграрного университета: теоретический и научно-практический журнал. 2015. № 2. С. 138-140.
11. Ездакова И. Ю. Использование иммунологических маркеров в качестве возможных диагностических ориентиров определения состояния здоровья животных// Ветеринария и кормление. 2017. № 3. С.40-41.
12. Еремина М. А., Ездакова И. Ю. Неспецифическая резистентность и показатели продуктивности первотелок-дочерей быков разных генетико-иммунологических групп//Молочное и мясное скотоводство. 2018. № 1. С. 19-22.
13. Иммунологические методы/под ред. Х. Фримель. М: Мир, 1979. 518 с.
14. Ездакова И. Ю., Лощинин М. Н., Грушина Е. Е. Изучение функциональной активности фагоцитов крови животных // Труды ВИЭВ. 2016. Т. 79. С. 190-195.
References
1. Savchenko AA, Borisov AG. Osnovy klinicheskoi immunometabolomiki [The basis of clinical immunometabolomics]. Novosibirsk (Russia): Nauka; 2012. 263 p. Russian.
2. Ezdakova IYu. Retseptory immunnogo uznavaniya u zhivotnykh [Animal immune recognition receptors]. Moscow: KompaniyaSputnik+; 2008. 88 p. Russian.
3. Burmester GR, Petsutto A. Naglyadnaya immunologiya [Visual immunology]. 4th ed. Mosolova TP, translator; Kozlov LV, editor. Moscow: Laboratoriya znanii; 2018. 320 p. Russian.
4. Koga K, Mor G. Toll-like receptors at the maternal-fetal interface in normal pregnancy and pregnancy disorders. Am. Journal Reprod. Immunol. 2010;63(6):587-600.
5. Bulmer JN, Williams PJ, Lash GE. Immune cells in the placental bed. Inttrnational Journal of Devtlopmental Biology. 2010;54:281-94.
6. Manjari P, Reddi S, Alhussien M, et al. Neutrophil gene dynamics and plasma cytokine levels in dairy cattle during periimplantation period. Veterinary Immunology and Immunopathology. 2016;173:44-9.
7. Sotnikova NYu, Antsiferova YuS, Koshkina NV, et al. [Role of innate immunity cells in ensuring pregnancy success in early gestation]. Zhurnal akusherstva i zhenskikh boleznei. 2013;LXII(2):151-9. Russian.
8. Chulichkova SA. [Role of blood cells in the immune rearrangement of cows in early pregnancy]. Izvestiya Orenburgskogo gosudarstvennogo agrarnogo universiteta: teoreticheskii i nauchno-prakticheskii zhurnal. 2016;58(2):165-7. Russian.
9. Herr M, Bostedt H, Failing K. IgG and IgM levels in dairy cows during the periparturient period. Theriogenology. 2011;75(2):377-85.
10. Vil'ver DS. [Analysis of the reproductive ability of cows of different ages depending on the influence of paratypic factors]. Izvestiya Orenburgskogo gosudarstvennogo agrarnogo universiteta: teoreticheskii i nauchno-prakticheskii zhurnal. 2015;2:138-40. Russian.
11. Ezdakova IYu. [Use of immunological markers as possible diagnostic guidelines for determining the health status of animals]. Veterinariya i kormlenie. 2017;3:40-1. Russian.
12. Eremina MA, Ezdakova IYu. [Nonspecific resistance and productivity indicators of first-calf daughters of bulls of different genetic and immunological groups]. Molochnoe i myasnoe skotovodstvo. 2018;1:19-22. Russian.
13. Frimel' Kh, editor. Immunologicheskie metody [Immunological methods]. Moscow: Mir; 1979. 518 p. Russian.
14. Ezdakova IYu, Loshchinin MN, Grushina EE. [Study of the functional activity of animal blood phagocytes]. Trudy VIEV. 2016;79:190-5. Russian.
