CC BY
221
ПРИМЕНЕНИЕ БЕТУЛИНА-ПГ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ НАПРЯЖЕННОСТИ ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПРОТИВ РОЖИ И ЦИРКОВИРУСНОЙ
ИНФЕКЦИИ СВИНЕЙ
Земляницына И.Ю.
Резюме
Применение Бетулина-ПГ с вакцинами против рожи и цирковирусной инфекции свиней активизирует гуморальные и клеточные факторы иммунитета, повышая его напряженность.
APPLICATION BETULIN-PG TO INCREASE THE VOLTAGE OF POSTVACCINATION IMMUNITY AGAINST ERYSIPELAS AND CIRCOVIRUS INFECTION
PIGS
Zemlianitsyna I.Y.
Summary
Vaccination is not always effective because not enough homogeneous immune response of animals to the introduction of antigen. So you need to use of immunomodulatory drugs, one of which is betulin. Its use during vaccination activates the synthesis of antibodies, increases the activity of immune cells through the activation of blood phagocytic cells of the immune system.
УДК 638.15-07
ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ НОЗЕМАТОЗА ПЧЁЛ
Зинатуллина З.Я. - к.б.н., с.н.с.; *Жигилева О.Н. - к.б.н., доцент;
**Игнатьева А.Н. - м.н.с.; , **Токарев Ю.С. - к.б.н., с.н.с.
ГНУ ВНИИВЭА Россельхозакадемии, г.Тюмень * Тюменский государственный университет **ГНУ ВИЗР Россельхозакадемии, г. Санкт-Петербург e-mail: [email protected]
Ключевые слова: диагностика, Nosema apis, Nosema ceranae.
Keywords: diagnostics, Nosema apis, Nosema ceranae.
Оценивая результаты зимовки, пчеловоды нередко обнаруживают ослабленные пчелиные семьи, сырость внутри гнезда, опоношенность внутренних стенок улья, а в некоторых случаях гибель маток. Причиной такого состояния может быть бактериальная кишечная инфекция, недоброкачественные корма в период зимовки, а также классическое
проявление нозематоза. Для уточнения диагноза необходимо исследовать пробы пчел на нозематоз, а корма на падь и наличие веществ токсичных для пчел.
Впервые на возбудителя этого заболевания обратил внимание Денгофф-Лейкарт, который в 1857 году принял их за споры грибов. В 1863 году Лейдик выявил их сходство по форме со спорами пебрины шелковичного червя - Nosema bombycis. В 1906 и 1907 гг. почти одновременно возбудителем заинтересовались английские исследователи и Е. Цандер [7]. В 1909 году Е. Цандер опубликовал статью с описанием возбудителя Nosema apis (Zander, 1909). До 70-х годов было проведено много исследований вышеназванного патогена пчёл. В 1996 г. был описан новый возбудитель нозематоза - Nosema ceranae (Fries et al., 1996), выделенный из дальневосточной пчелы Apis cerana. С начала 2000 годов по всему миру прокатилась волна гибели пчелиных семей (Higes et al., 2005; Chauzat, 2007). В России на эту проблему пчеловоды обратили внимание в 2002 году [5], когда на многих пасеках наблюдался «осенний слет» пчел. При анализе причин такого явления наряду с варроатозом, вирусными заболеваниями и отравлениями, не исключалось патогенное воздействие нового возбудителя нозематоза - N. ceranae (Higes et al., 2005). N. ceranae распространен почти во всем мире (Higes et al., 2005; Chauzat, 2007; Paxton et al., 2007; Chen et al., 2008; Fries et al., 2010). Исследования показывают, что N. ceranae уже длительное время существовал на пасеках: в США с 1995 года (Chen et al., 2008), в Европе (Финляндии) с 1998 года (Paxton et al., 2007).
В настоящее время в России в ветеринарных лабораториях нозематоз диагностируют в соответствии с «Методическими указаниями по лабораторным исследованиям на нозематоз медоносных пчёл», утвержденными 25 апреля 1985 года.
При работе с пчелами, зараженными возбудителями нозематоза, мы обнаружили, что споры различаются по форме и размерам, и предположили их принадлежность к двум разным видам. В связи с этим мы провели их морфометрию и генотипирование.
Морфометрические исследования окрашенных мазков из водной суспензии брюшек пчел показали наличие двух отчетливо различимых типов спор микроспоридий. Первый тип спор - широкие, овальные, 4,92 х 2,78 мкм (n=100). Споры второго типа узкие, овальные, некоторые с заостренным концом, 4.24 х 2.16 мкм (n=80). Пробы ДНК, выделенные из спор первого типа, дают положительную реакцию с праймерами Apis 312-F/R (Martín-Hernández, 2007) и не реагируют с праймерами Mitoc 218-F/R (Martín-Hernández, 2007), что соответствует диагнозу N. apis. Размер амплифицированного фрагмента соответствует ожидаемому - около 300 п.н. И, наоборот, пробы ДНК спор второго морфотипа дают положительную реакцию с праймерами Mitoc 218-F/R и не дают с
праймерами Apis 312-F/R, что соответствует диагнозу N. ceranae. Размер амплифицированного фрагмента также соответствует ожидаемому - около 200 п.н. Для верификации диагноза, поставленного с помощью видоспецифичных праймеров, полученные ПЦР-продукты были секвенированы. Последовательность нуклеотидов рибосомальной ДНК спор первого морфотипа показала строгое соответствие сиквенсу N. apis, депонированному в Генбанке под номером U97150, и отличие от сиквенса N. ceranae (номер U26533) на 8,4%. Аналогично, последовательность нуклеотидов рДНК спор второго типа показала строгое соответствие сиквенсу N. ceranae депонированному в Генбанке под номером U26533, и отличие от сиквенса N. apis (номер U97150) на 15,7%. Таким образом, подтверждена пригодность метода видоспецифичной ПЦР-диагностики для наших исследований [2].
На основании полученных данных нами были разработаны «Методические наставления по дифференциальной диагностике Nosema apis и Nosema ceranae у медоносной пчелы (Apis mellifera L.)», утвержденные 25 октября 2011 года отделением ветеринарии Россельхозакадемии [3].
В Тюменской области нозематоз регистрировали в течение длительного времени. В частности, в середине 70-х годов выявление нозематоза на пасеках в этом регионе проводил с.н.с. ВНИИВЭА Н.Г. Сидоров. В период с 2005 по 2010 гг. нами были исследованы пробы пчел с пасек Тюменской области на наличие возбудителей нозематоза. В результате проведённой работы было выявлено 76,5 % неблагополучных пасек из 106 обследованных. В 20% проб выявлена легкая степень поражения нозематозом, в таком же объеме зарегистрирована средняя степень и в 6% - сильная степень поражения пчелиных семей (Домацкая и
др., 2010).
В 2012 году нами исследована 221 проба пчел от 34 пасек Тюменской области. В 40,8 % пробах пчёл с 22 пасек обнаружили возбудителей нозематоза. На 9 пасеках Тюменского, Аромашевского, Исетского, Вагайского районов выявили возбудителя Nosema apis, на 9 пасеках Тюменского, Заводоуковского, Ярковского районов обнаружили микроспоридии Nosema ceranae, на 4 пасеках Исетского, Тюменского и Нижнетавдинского районов зарегистрировали обоих возбудителей нозематоза пчёл.
На некоторых пасеках установили источники возникновения заболевания пчелиных семей. Например, пасека в п. Боровский была основана в 1985 году при завозе пчелопакетов из пасек Краснодарского края. С тех пор и до настоящего времени нозематоз регистрируется на пасеках в данном населенном пункте. На ст. Подъём образованию пасеки способствовала поимка роя с соседней пасеки в 1985 году, где ежегодно отмечают клинические признаки нозематоза у 10-20% семей. Пасеку в д.
Дубровное в 2008 году пополнили пчелопакетами из Пермского края [6], где впоследствии через три недели отмечали вспышку нозематоза в конце июня. До сих пор остается неясным вопрос, какая популяция возбудителя дала вспышку: местная или завезенная с пакетами. В д. Кулига в 2005 году пасеку восстановили пчелопакетами. В 2007 году в д. Кулига провели обследование пасеки и отбор проб пчел. В 54% проб от 24 пчелиных семей были обнаружены споры возбудителя нозематоза с разной степенью поражения пчёл.
Нами было проведено исследование проб пчел с пасек различных регионов России, результаты которых представлены в таблице 1. В результате проведенных исследований нами выявлено широкое распространение обоих возбудителей на пасеках России. При этом отмечено значительное количество пчелиных семей, пораженных нозематозом (49,9%), из них в 51,6% проб обнаружены Nosema apis, а в 48,4% - Nosema ceranae.
1. Распространение возбудителей нозематоза на пасеках России
Субъект РФ Количество Из них заражено возбудителями
исследованных нозематоза
проб пчёл Nosema apis Nosema ceranae
Тюменская область 241 50 55
Ленинградская область 72 22 14
Новгородская область 31 19 0
Псковская область 3 0 0
Тверская область 3 0 1
Смоленская область 4 0 0
Республика Татарстан 3 1 1
Нижегородская область 3 0 2
Тамбовская область 1 0 1
Брянская область 6 0 1
Липецкая область 18 1 10
Краснодарский край 4 0 3
Алтайский край 7 2 1
Итого 396 95 89
Таким образом, проведенные нами исследования позволили выявить два вида возбудителя нозематоза пчел на пасеках России. В России в ветлабораториях проводят диагностику нозематоза методом световой микроскопии и при обнаружении Nosema-подобных спор патоген определяют как Nosema apis. Для понимания картины распространения обоих патогенов на территории России и связанной с ними опасности для пчеловодства необходимо продолжение исследований. В связи с этим, мы предлагаем заинтересованным пчеловодам отправлять нам пробы пчел для исследования распространения возбудителей нозематоза медоносных пчел
на пасеках России.
Исследования поддержаны грантом РФФИ № 12-04-90727-моб_ст.
ЛИТЕРАТУРА: 1. Методические указания по лабораторным исследованиям на нозематоз медоносных пчёл. Утв. ГУВ МСХ СССР 25.04. 1985 г. - М., 1985. - 3 с. 2. Зинатуллина, З.Я. Методические наставления по дифференциальной диагностике Nosema apis и Nosema ceranae у медоносной пчелы (Apis mellifera L.) / З.Я. Зинатуллина, О.Н. Жигилева, Ю.С. Токарев и др. // Сб. науч. тр. ВНИИВЭА. - Вып.51. -Тюмень, 2011. - С. 286-300. 3. Зинатуллина, З.Я. «Азиатский» нозематоз в России / З.Я. Зинатуллина, А.Н. Игнатьева, О.Н. Жигилева, Ю.С. Токарев / Пчеловодство. - 2011. - № 10. - С. 24-26. 4. Домацкая, Т.Ф. Основные болезни медоносных пчел на пасеках Тюменской области (эпизоотология, диагностика, профилактика, меры борьбы) / Т.Ф. Домацкая, Н.М. Столбов, О.А. Модин и др. // Тюмень: ООО «Делс», 2010. - С. 31. 5. Сотников, А.Н. Причины гибели пчел / А.Н. Сотников, О.Ф. Гробов // Пчеловодство. -2003. - №7. - С. 30-32. 6. Токарев, Ю.С. Молекулярная диагностика нозематоза / Ю.С. Токарев, А.Н. Игнатьева, З.Я. Зинатуллина // Пчеловодство. - 2010. - № 10 - С. 18-19. 7. Цандер, Е. Болезни и вредители пчёл / Е. Цандер. - М.: Новая деревня, 1927. - С 30-40.
ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ НОЗЕМАТОЗА ПЧЁЛ
Зинатуллина З.Я., Жигилева О.Н., Игнатьева А.Н., Токарев Ю.С.
Резюме
Применение методов молекулярной диагностики (амплификация и секвенирование рибосомальной ДНК) позволило провести дифференциальную диагностику возбудителей нозематоза - Nosema apis и Nosema ceranae. Результаты исследования свидетельствуют о том, что оба вида встречаются с одинаковой частотой в пчелиных семьях.
DIFFERENTIAL DIAGNOSTICS OF BEES NOSEMATOSIS CAUSATIVE AGENT
Zinatullina Z.Ya., Zhigilyeva O.N., Ignatyeva A.N., Tokaryev Yu.S.
Summary
Methods of molecular diagnostics (amplification and sequencing of ribosomal DNA) were used for differential diagnosis of nosema pathogens: Nosema apis и Nosema ceranae. Our data suggest that both species occur with equal frequency in honey bee colonies.
