CC BY
33УДК: 615.322:621.57
Диагностика плодово-ягодного сырья с помощью ДНК-тест-систем
Просеков Александр Юрьевич
ФГБОУВО "Кемеровский государственный университет" Адрес: 650000, город Кемерово, ул. Красная, д. 6 E-mail: aprosekov@rambler.ru
Голубцова Юлия Владимировна
ФГБОУ ВО "Кемеровский государственный университет" Адрес: 650000, город Кемерово, ул. Красная, д. 6 E-mail: ula.gol@mail.ru
В свете высокой востребованности многокомпонентных пищевых продуктов, в том числе содержащих растительные ингредиенты, становится актуальной проблема верификации сырья. В настоящей работе представлен метод идентификации плодово-ягодного сырья на основе определения ДНК. Описаны ДНК-тест-системы, представлены результаты их верификация и доказана высокая специфичность. ДНК-тест-система предполагает выделение ДНК из растительного сырья, реакцию амплификации и электрофоретическую детекцию. Образцы ДНК были выделены из свежего сырья. Материалом исследования стало сырье, хранившееся в течение 14 дней при комнатной температуре, замороженное сырье, а также готовые продукты из плодово-ягодного сырья (повидло, сок, напиток), прошедшие термическую обработку и содержащие сахар. Экспериментальные данные показали, что микробиологическая порча сырья, заморозка и термическая обработка (при температуре обычной для консервирования) не влияют на чувствительность предложенного метода детекции ДНК. Предложенные ДНК-тест-системы могут применяться для определения видовой принадлежности плодово-ягодного сырья в продуктах переработки вне зависимости от технологии их производства. Однако порог чувствительности предлагаемого метода различается для разных видов сырья. Высокий порог чувствительности ДНК-тест-систем был обнаружен при анализе ДНК малины, киви, банана, крыжовника, вишни, а также продуктах их переработки (повидло, сок), где продукты амплификации обнаруживались при разведении в 100 раз. ДНК земляники характеризуется наибольшей чувствительностью к механическим воздействиям (при заморозке) и действию высоких температур, что отрицательно сказывается на чувствительности ДНК-тест-систем. Также для шиповника майского характерен высокий уровень идентификации в сухих плодах, однако термическая обработка снижает порог аналитической чувствительности рассматриваемого метода.
Ключевые слова: детекция ДНК, амплификация, ПЦР, электрофоретическая детекция, хранение, заморозка, термическая обработка, плодово-ягодное сырье
Ягоды и фрукты являются ценным пищевым сырьем, так как содержащиеся в их мякоти биологические активные соединения благотворно влияют на здоровье человека. Высокой потребностью пищевой промышленности в плодово-ягодном сырье обусловлена необходимость изучения этих ценных ингредиентов с целью последующего использования в пищевом производстве (Левкис, 2012; Причко, 2015; Яшин, 2009).
В настоящее время актуальной является проблема верификации сырья в многокомпонентных пищевых системах (^оо^е, 2004). Особенно это
актуально в случае плодово-ягодного сырья, поскольку органолептически невозможно отличить продукт с использованием натуральных ингредиентов от продукта с ароматизаторами и красителями (Palmieri, 2009). Верификация сырья является принципиальным моментом, поскольку использование растительных ингредиентов не только улучшает вкусовые свойства продукта, но и значительно повышает его пищевую ценность. Объективные и достоверные данные о видовой принадлежности сырья можно получить с помощью основанного на ДНК-диагностике метода полимеразной цепной реакции (Мудрикова, 2012; Просеков, 2011; Зорина 2012; Negi, 2002)
Выбор метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) обусловлен его универсальностью и высоким уровнем воспроизводимости (Ребриков, 2009). Метод ПЦР широко востребован для диагностики компонентов пищевых продуктов и систем и постоянно совершенствуется (Berindean, 2012; Юдин, 2010; Боронникова, 2012; Olhak, 2007).
Цель настоящей работы - провести верификацию ДНК в продуктах переработки плодово-ягодного сырья с помощью ДНК-тест-систем. Материалом исследования являлись образцы повидла (из малины, киви, банана, крыжовника, земляники), сока вишневого, сухих измельченных плодов шиповника, напитка из шиповника и муссов творожных с плодовыми наполнителями (киви и вишни).
Методика
На первом этапе исследования был создан положительный контрольный образец ДНК, выделенной из семи видов свежего плодово-ягодного сырья.
Выделение ДНК проводилось с помощью набора «Сорб-ГМО-А» в котором гуанидин хлорид выполняет функцию лизирующего агента. Данный реагент способствует максимальному выделению ДНК высокого качества из растительного сырья. Применение набора «Сорб-ГМО-А» позволяет сократить механическое и термическое воздействие на исследуемый материал, а также сократить временные затраты. Чистота выделенной ДНК, как для сырья, так и для продуктов его переработки составила 1,82-2,01 усл. ед., концентрация от 0,40 до 0,44 мг/г.
Для амплификации были разработаны олигонуклеотидные праймеры (Москвина, 2014), размер апмликона не превышал 300 пар нуклеотидов. Для разработки праймеров, как правило, используют гены рДНК (РНК) - 18S, 5.8S и 26S, что объясняется функциональной важностью данного участка генома, а также присутствием в нем эволюционно лабильных и консервативных областей в пределах одного повторяющегося участка (Бадаева, 2013; Пантюхина, 2012; Trontin, 1999; Winnepenninckx, 1996). Кроме того, были использованы отдельные участки рибосомального кластера (ITS2 rDNA, 26S rDNA), которые показательны в плане межвидовой дивергенции (Kress, 2005; Wallinger, 2012).
Детекцию результатов амплификации проводили с помощью электрофоретического разделения
продуктов амплификации в 3%-ном агарозном геле. Результаты создания положительного контрольного образец ДНК, выделенной из семи видов свежего плодово-ягодного сырья, отражены на рисунке 1. На электрофоретических дорожках присутствуют яркие, четкие полосы, их положение относительно ДНК маркера соответствует размерам ампликонов.
Рисунок 1. Электрофореграмма фрагментов видоспецифичной ДНК плодово-ягодного сырья, полученных при использовании разработанных ДНК-тест систем
Примечание: 1 - Земляника (Fragaria ananassa), 2 - Крыжовник (Ríbes úva-críspa), 3 - Вищня (Prunus fruticose), 4 - Малина (Rubus idaeus), 5 - Банан (Músa paradisiaca), 6 - Шиповник (Rosa majalis Herrm.), 7 - Киви (Actinidia deliciosa), 8 - отрицательный контроль, 9 - ДНК маркер (50-1000 п.о.).
Результаты
Анализ ДНК, выделенной из продуктов переработки плодово-ягодного сырья.
Проводилось тестирование плодово-ягодного сырья, хранившегося в течение 14 дней в разных условиях: при комнатной температуре и в замороженном состоянии.
Заморозка является основным способом длительного хранения свежих плодов и ягод, однако как замораживание, так и размораживание приводят к значительным химическим, физико-химическим и структурным изменениям (Abdolmaleki, 2014; Просеков, 2014; Amani, 2011).
Хранение при комнатной температуре в течение 14 суток привело к ухудшению органолептических показателей и микробиологической порче сырья, однако результаты электрофореза продуктов амплификации показывают, что отрицательного влияния на структуру молекул ДНК плодово-
ягодного сырья эти факторы в большинстве случаев не оказывают. Даже выраженная микробиологическая порча плодово-ягодного сырья и наличие микробной ДНК не приводила к снижению чувствительности ДНК-тест-систем .
Аналогично высокая чувствительность предложенного метода идентификации ДНК отмечалась и при исследовании замороженного сырья. В обоих случаях была идентифицирована видовую принадлежность гомогенизированного сырья - вишни, банана, киви, крыжовника, малины. Но если в случаях с перечисленными образцами плодово-ягодного сырья реакция амплификации проходила при разведениях экстрактов ДНК опытных образцов в 100 раз, то для земляники, хранившейся при комнатной температуре и в замороженном виде, продукты амплификации наблюдались в разведениях исходной ДНК в 50 раз (рисунок 2) и 10 (рисунок 3) соответственно.
3(+) 3(к) 3(5) 3(ю) 3(50) 3(100) З(-) МВ
276 Ьр
Рисунок 2. Электрофореграмма продуктов амплификации ДНК земляники (Fragaria ananassa), хранившейся при комнатной температуре.
3(+) 3(з) 3(5) 3(10) 3(50) 3(100) З(-) МВ
276 Ьр
Рисунок 3. Электрофореграмма продуктов амплификации ДНК: земляники (Fragaria ananassa), хранившейся в замороженном виде
Возможно, что молекулы ДНК клубники отличаются высокой чувствительностью к действию низких температур и выраженной микробиологической порче ягод.
Таким образом, результаты электрофореза продуктов амплификации показывают, что условия хранения не влияют на структуру молекул ДНК малины, киви, банана, вишни, крыжовника, но отрицательно сказываются на ДНК земляники.
Оценка диагностической способности ДНК-
тест-систем для верификации продуктов переработки плодово-ягодного сырья.
Наиболее распространенным способом технологической переработки плодово-ягодного сырья является консервирование, в ходе которого происходит термическая обработка сырья и добавление сахара. Органические молекулы чувствительны к высоким температурам, что осложняет выделение ДНК из продуктов, прошедших температурную обработку (Атат, 2011).
В процессе пастеризации и стерилизации достигается температура, близкая к предельным значениям термоустойчивости ДНК, происходит денатурация молекул ДНК, в результате которой двухцепочечная структура молекулы ДНК распадается на две одноцепочечные. Однако негативное влияние на результат ДНК-диагностики оказывает только длительное воздействие высокой температуры, в ходе которого разрушаются одноцепочечные структуры ДНК (Кагт, 2013).
На рисунках 4-6 представлены результаты амплификации экстрактов ДНК исследуемого плодово-ягодного сырья, выделенных из повидла и сока прямого отжима. Электрофореграммы демонстрируют высокую специфичность разработанных ДНК-тест-систем, однако имеются отличия в аналитической чувствительности метода, обусловленной, по-видимому, различной видовой устойчивостью ДНК к механическим воздействиям и термообработке.
Положительная реакция была зафиксирована во всех тестируемых образцах, однако порог чувствительности метода различался в зависимости исследуемого материала.
Так, результаты сравнительного анализа подтверждают высокую устойчивость к высоким температурам ДНК малины, киви и банана. Продукты амплификации ДНК в повидле, приготовленных из этих продуктов, обнаруживаются при разведении экстрактов исходных образцов ДНК в 100 раз.
Электрофореграмма продуктов амплификации ДНК шиповника майского (рисунок 6) показывает высокий уровень идентификации в сухих плодах: искомая ДНК обнаруживается при разведении исходных экстрактов в 50 раз. Однако термическая обработка снижает порог аналитической чувствительности ДНК-тест-системы, и в напитке из шиповника ДНК уверенно идентифицируется в случае разведения экстракта исходного образца
Рисунок 4. Электрофореграмма продуктов амплификации ДНК в повидле:
А - малины (Rubus idaeus), Б - киви (Actinidia deliciosa ), В - банана (Músa paradisiaca).
Примечание: здесь и далее: (+) - положительный контроль, (к) - хранение при комнатной температуре, (5), (10), (50), (100) -разведение исходного экстракта ДНК исследуемого сырья
Рисунок 5. Электрофореграмма продуктов амплификации ДНК в продуктах переработки плодово-ягодного сырья: А - вишневый сок (Prunus fruticosa), Б - повидло крыжовника (Ríbes úva-críspa), В - повидло земляники (Fragaria ananassa).
только в 10 раз.
В повидле земляники продукты амплификации в разведениях ДНК не обнаружены. Это объясняется высокой чувствительностью ДНК земляники к механическим воздействиям и действию высоких температур.
Обсуждение
Результаты эксперимента свидетельствуют о высокой специфичности разработанных ДНК-тест-систем и надежности разработанного метода идентификации плодово-ягодных добавок в продуктах питания. Однако выявлена различная аналитическая чувствительность ДНК-тест-систем для исследуемого плодово-ягодного сырья.
Экспериментальная оценка возможности видовой идентификации плодово-ягодного сырья в продуктах их переработки (сухом перемолотом шиповнике, напитке из шиповника, повидле из малины, киви, банана, крыжовника, земляники, соке вишневом) методом ПЦР показала высокую специфичность разработанных ДНК-тест-систем; однако выявлены отличия в аналитической чувствительности метода, обусловленные, по-видимому, различной видовой устойчивостью ДНК к механическим воздействиям и термообработке.
Наиболее высокая стабильность ДНК характерна для малины, киви и банана - продукты амплификации ДНК в повидле обнаруживаются при разведении исходных экстрактов ДНК в 100 раз. При исследовании повидла из крыжовника, вишневого сока и сухого перемолотого шиповника реакция амплификации проходила при разведениях исходных ДНК в 50 раз, а в повидле
видовой идентификации плодово-ягодного сырья. Разный порог чувствительности разработанных ДНК-тест-систем применительно к разным видам плодово-ягодного сырья не ограничивает возможность их использования для верификации пищевых продуктов в промышленном производстве. Данные по различной чувствительности ДНК-тест-систем могут быть использованы при проведении анализа конкретного вида плодово-ягодного сырья.
Рисунок 6. Электрофореграмма продуктов амплификации ДНК шиповника майского (Rosa majalis Herrm): А - сухие плоды, Б - напиток.
Примечание: (+) - положительный контроль, (5), (10), (50), (100)
- разведения исходного экстракта ДНК исследуемого сырья, (-)
- отрицательный контроль
земляники продукты амплификации в разведениях исходной ДНК не обнаружены. Полученные экспериментальные данные свидетельствуют, что ДНК земляники характеризуется наибольшей чувствительностью к механическим воздействиям и действию высоких температур.
Заключение. Основным способом длительного хранения свежих плодов и ягод является заморозка. Замораживание и размораживание вызывают в биологических объектах значительные химические, физико-химические и структурные изменения. Также для сохранности плодово-ягодного сырья используются технологии, основанные на применении сахара и высоких температур, что делает неинформативными физико-химические и органолептические методы верификации использованного сырья.
В результате проведенных экспериментов было установлено, что метод идентификации на основе ПЦР может применяться для определения видовой принадлежности плодово-ягодного сырья в продуктах переработки вне зависимости от технологии их производства. Разработанные ДНК-тест-системы показали достаточно высокий уровень определения ДНК плодово-ягодного сырья в продуктах, подвергшихся микробиологической порче, замороженных продуктах и продуктах, подвергшихся термической обработке.
Были разработаны олигонуклеотидные праймеры и показана возможность их использования для
Литература
Бадаева Е.Д. Структура генома и хромосомный анализ растений // Вавиловский журнал генетики и селекции. 2013. № 4-2. С. 1017-1043.
Боронникова С.В. Молекулярно-генетическая идентификация и паспортизация редкого вида растений Пермского края Adenophora Lilifolia (L.) А. DC. // Вестник Пермского университета. Серия: биология. 2012. Вып. 1. С. 41-44.
Зорина В.В. Основы полимеразной цепной реакции. М., 2012
Левкис, З. Инновационные подходы в переработке плодов и ягод // Наука и инновации. 2012. № 6. С. 20-21.
Мудрикова О.В. Экспериментальные исследования основных параметров процесса проведения ПЦР для видовой идентификации // Современные проблемы науки и образования. 2012. № 3. С. 310-318.
Москвина Н.А. Использование нуклеотидных последовательностей фрагмента генома плодов и ягод для определения филогенетического родства // Техника и технология пищевых производств. 2014. № 3. С. 141-144.
Пантюхина В.А., Новиков Д.В., Савиных Н.П., Новиков В.В. Сравнительный анализ первичной структуры гена 18s рРНК представителей разных экобиоморф рода Veronica l. (Scrophulariaceae) // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского. 2012. № 2-3. С. 169-173.
Причко Т. Г., Дрофичева Н. В. Моделирование рецептурных композиций функциональных продуктов питания из плодово-ягодного сырья //Пищевая промышленность. 2015. № 7. С. 18 -20.
Просеков А.Ю. Методы ДНК-технологии для идентификации растительного
сырья в молочных продуктах //Молочная промышленность. 2011. № 12. С. 62- 63.
Просеков А.Ю. Влияние технологической обработки продовольственного сырья на эффективность видовой идентификации //
Пищевая промышленность. 2014. № 6. С. 8 -10.
Ребриков Д.В., Саматов Г.А., Трофимов Д. ПЦР «в реальном времени» - М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2009.- 215 с.
Юдин М.С. Исследование методов Полимеразной цепной реакции для определения сырьевых компонентов в готовых продуктах // Международный журнал экспериментального образования. 2010. № 8. С. 77-79.
Яшин Ю. И., Рыжнев В. Ю., Яшин А. Я. и др. Природные антиоксиданты. Содержание в пищевых продуктах и влияние их на здоровье и старение человека. - М.: ТрансЛит, 2009.
Abdolmaleki F., Assadi M. M., Ezzatpanah H., Honarvar M. Impact of fruit processing methods on DNA extraction from transgenic frozen banana products. European Food Research and Technology, 2014, no.239(3), pp.509-517
Amani, J. A simple and rapid leaf genomic DNAextraction method for polymerase chain reaction analysis. Iranian journal of biotechnology, 2011, v. 9, pp. 69-71.
Berindean I.V., Cardei E., Roman G., Sturzeanu M., Pamfil D. PCR Protocol Optimization for Genetic Diversity Assessment and Molecular. Characterization of Sour Cherry Cultivars. Bulletin UASVM Horticulture, 2012, vol. 69, no.1, pp. 71-80.
Karni, M. Thermal Degradation of DNA. DNA and CELL biology, 2013, vol. 32, no. 6, pp. 1-4.
Kress W.J. Use of DNA barcodes to identify flowering
plants. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2005, vol. 102, no. 23, pp. 8369-8374.
Negi M.S. Length and sequence heterogeneity in 5S rDNA of Populus deltoids. Genome, 2002, vol. 45, no. 6, p. 1181-1188.
Olhak D. O., Arslan, A. Odentification of Meat Species by Polymerase Chain Reaction (PCR) Technique. Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences, 2007, no.31(3), pp.159-163.
Palmieri L.Soft fruit traceability in food matrices using real-time PCR. Nutrients, 2009, no. 1, pp. 316-328.
Trontin J.F. Two highly divergent 5S rDNA unit size classes occur in composite tandem
array in European larch (Larix decidua Mill.) and Japanese larch (Larix kaempferi). Genome, 1999, vol. 42, pp.837-848.
Wallinger C, Juen A, Staudacher K, Schallhart N, Mitterrutzner E, Steiner E-M, et al. Rapid Plant Identification Using Species- and Group-Specific Primers Targeting Chloroplast DNA. PLOS ONE, 2012, no. 7(1), e29473 10.1371/journal. pone.0029473.
Winnepenninckx B. 18S rRNA alignments derived for different secondary structure models can produce alternative phylogenies. Journal of Zoological Systematics and Evolutionary Research, 1996, vol. 34, no. 3, pp. 135-143.
Woolfe M. Food forensics: using DNA technology to combat misdescription and fraud. Trends Biotechnol, 2004, no. 22, pp. 222-226.
Diagnosis of Fruit and Berry Raw Materials Using
DNA-Test Systems
Aleksandr Yu. Prosekov
Kemerovo State University 6 Krasnaya str., Kemerovo, 650000, Russian Federation E-mail: aprosekov@rambler.ru
Yulia V. Golubtsova
Kemerovo State University 6 Krasnaya str., Kemerovo, 650000, Russian Federation
E-mail: ula.gol@mail.ru
Due to high demand for multicomponent food products, including plant ingredients, the problem of verification of raw materials becomes urgent. This paper presents a method of identification of fruit and berry raw materials based on the definition of DNA. The DNA test systems are described, the results of their verification are presented and theirs high specificity is proved. DNA test system involves the extraction of DNA from plant materials, amplification reaction and electrophoretic detection. DNA samples were extracted from fresh raw materials. The material of the study was raw materials stored for 14 days at room temperature, frozen raw materials and final products from fruit and berry raw materials (jam, juice, drink), that were heat-treated and containing sugar. Experimental data showed that microbiological spoilage of raw materials, freezing and heat treatment (at a temperature normal for preservation) do not affect the sensitivity of the proposed method of DNA detection. The proposed DNA test systems can be used to determine the species of fruit and berry raw materials in final products, regardless of the technology of their production. However, the sensitivity threshold of the proposed method varies for different types of raw materials. A high threshold of sensitivity of DNA test systems was found in the analysis of DNA of raspberries, kiwi, banana, gooseberries, cherries, as well as products of their processing (jam, juice), where amplification products were detected during breeding 100 times. DNA of strawberry is more sensitive to mechanical stress (when frozen) and high temperatures, that adversely affects the sensitivity of DNA test systems. Also rosehip is characterized by a high level of identification in dry fruits, but heat treatment reduces the threshold of analytical sensitivity of the method.
Keywords: DNA detection, amplification, PCR, electrophoretic detection, storage, freezing, heat treatment, fruit and berry raw materials
References
Abdolmaleki F., Assadi M. M., Ezzatpanah H., Honarvar M. Impact of fruit processing methods on DNA extraction from transgenic frozen banana products. European Food Research and Technology, 2014, no.239(3), pp.509-517
Amani, J. A simple and rapid leaf genomic DNAextraction method for polymerase chain reaction analysis. Iranian journal of biotechnology, 2011, v. 9, pp. 69-71.
Badaeva E.D., Salina E.A. Struktura genoma i khromosomnyy analiz rasteniy [Genome structure and chromosome analysis in plants]. Vavilovskiy zhurnal genetiki i selektsii, 2013, no. 4-2, pp. 10171043.
Berindean I.V., Cardei E., Roman G., Sturzeanu M., Pamfil D. PCR Protocol Optimization for Genetic Diversity Assessment and Molecular.
Characterization of Sour Cherry Cultivars. Bulletin UASVM Horticulture, 2012, vol. 69, no.1, pp. 71-80.
Boronnikova S.V., Nechaeva Yu.S. Molekulyarno-geneticheskaya identifikatsiya i pasportizatsiya redkogo vida rasteniy Permskogo kraya Adenophora Lilifolia (L.) A. DC. [The molecular-genetic identification and sertification of rare species of plants of Perm krai Adenophora lilifolia (L.) A. DC.]. Vestnik Permskogo universiteta. Seriya: biologiya, 2012, iss. 1, pp. 41-44.
Karni, M. Thermal Degradation of DNA. DNA and CELL biology, 2013, vol. 32, no. 6, pp. 1-4.
Kress W.J. Use of DNA barcodes to identify flowering plants. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2005, vol. 102, no. 23, pp. 8369-8374.
Levkis Z. Innovacionnye podhody v pererabotke plodov i yagod [Innovative approaches in the processing of fruits and berries]. Nauka i innovacii, 2012, no. 6, pp. 20-21.
Moskvina, N.A. Ispol'zovanie nukleotidnyh posledovatel'nostej fragmenta genoma plodov
i yagod dlya opredeleniya filogeneticheskogo rodstva [The use of the nucleotide sequences of a fragment of the genome of fruit and berries to determine the phylogenetic relationship] // Tekhnika i tekhnologiya pishchevyh proizvodstv [Equipment and technology of food production]. 2014, no. 3, pp. 141-144.
Mudrikova O.V. EHksperimental'nye issledovaniya osnovnyh parametrov processa provedeniya PCR dlya vidovoj identifikacii [Experimental studies of the main parameters of the process of carrying out PTSD for species identification] // Sovremennye problemy nauki i obrazovaniya [Modern problems of science and education], 2012, № 3, pp. 310-318.
Negi M.S. Length and sequence heterogeneity in 5S rDNA of Populus deltoids. Genome, 2002, vol. 45, no. 6, p. 1181-1188.
Olhak D. O., Arslan, A. Odentification of Meat Species by Polymerase Chain Reaction (PCR) Technique. Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences, 2007, no.31(3), pp.159-163.
Palmieri L.Soft fruit traceability in food matrices using real-time PCR. Nutrients, 2009, no. 1, pp. 316-328.
Pantyukhina V.A., Novikov D.V., Savinykh N.P., Novikov V.V. Cravnitel'nyy analiz pervichnoy struktury gena 18s rRNK predstaviteley raznykh ekobiomorf roda Veronica L. (Scrophulariaceae) [A comparative analysis of the primary structure of the 18S rRNA gene of different ecobiomorph representatives of the genus Veronica L. (Scrophulariaceae)]. Vestnik Nizhegorodskogo universiteta im. N.I. Lobachevskogo, 2012, no. 2-3, pp. 169-173.
Prichko T. G., Droficheva N. V. Modelirovanie recepturnyh kompozicij funkcional'nyh produktov pitaniya iz plodovo-yagodnogo syr'ya [Modeling of compounding compositions of functional food products from fruit and berry raw materials] // Pishchevaya promyshlennost', 2015, no. 7, pp. 18 -20.
Prosekov, A.YU. Metody DNK-tekhnologii dlya identifikacii rastitel'nogo syr'ya v molochnyh produktah [Methods of DNA technology to identify plant material in milk products] // Molochnaya promyshlennost', 2011, no. 12, pp. 62- 63.
Prosekov, A.YU. Vliyanie tekhnologicheskoj obrabotki prodovol'stvennogo syr'ya na ehffektivnost' vidovoj identifikacii [Influence of technological processing of food raw materials on the efficiency of species identification] // Pishchevaya promyshlennost', 2014, no. 6, pp. 8-10.
Rebrikov D.V., Samatov G.A., Trofimov D.Yu. et al. PTsR «v real'nom vremeni» [PCR «in real time»]. Moscow: BINOM. Laboratoriya znaniy, 2009.
Trontin J.F. Two highly divergent 5S rDNA unit size classes occur in composite tandem
array in European larch (Larix decidua Mill.) and Japanese larch (Larix kaempferi). Genome, 1999, vol. 42, pp.837-848.
Wallinger C, Juen A, Staudacher K, Schallhart N, Mitterrutzner E, Steiner E-M, et al. Rapid Plant Identification Using Species- and Group-Specific Primers Targeting Chloroplast DNA. PLOS ONE, 2012, no. 7(1), e29473 10.1371/journal. pone.0029473.
Winnepenninckx B. 18S rRNA alignments derived for different secondary structure models can produce alternative phylogenies. Journal of Zoological Systematics and Evolutionary Research, 1996, vol. 34, no. 3, pp. 135-143.
Woolfe M. Food forensics: using DNA technology to combat misdescription and fraud. Trends Biotechnol, 2004, no. 22, pp. 222-226.
Yudin M.S., Zubareva K.Yu. Issledovanie metodov polimeraznoy tsepnoy reaktsii dlya opredeleniya syr'evykh komponentov v gotovykh produktakh [Research by method polimeraznoj chain reaction to determine the raw material components in the finished products]. Mezhdunarodnyy zhurnal eksperimental'nogo obrazovaniya, 2010, no. 8, pp. 77-79.
Yashin Yu. I., Ryzhnev V. Yu., Yashin A. Ya. i dr. Prirodnye antioksidanty. Soderzhanie v pishchevyh produktah i vliyanie ih na zdorov'e i starenie cheloveka [Natural antioxidant. The content of food and their impact on human health and aging]. - M.: TransLit, 2009.
Zorina V.V. Osnovy polimeraznoj cepnoj reakcii [Basics of polymerase chain reaction]. Moscow, 2012.
