CC BY
86
Сравнение разных методов типирования КБ
Параметры Количественный анализ антибиотикограмм по эвклидовым расстояниям Анализ полиморфизма длин фрагментов рестрикции Серотипирование
Время,затрачиваемое на получение результата, ч 24 9 2
Относительная стоимость Умеренная Высокая Высокая
Простота Простой Сложный Умеренно простое
Воспроизводимость Хорошая Хорошая Хорошая
Необходимость в сложном оборудовании Умеренная Высокая Умеренная
Пригодность для рутинной диагностики Пригоден Непригоден Непригодно*
'Непригодно из-за трудности получения качественной антисыворотки
водимом дисково-диффузионным методом. По стоимости и возможностям такая схема типирования КБ сопоставима с мо-лекулярно-генетическим типированием посредством анализа полиморфизма длин фрагментов рестрикции гена flaA (анализ полиморфизма длин фрагментов рестрикции, таблица).
Хотя апробированный нами способ типирования КБ в ходе проведенного эксперимента давал воспроизводимые результаты, важно разработать систему контроля его показаний и стандартизировать методику проведения, включая питательные среды, набор референтных и контрольных штаммов КБ с известной чувствительностью к АП и т.д.
Фенотипирование КБ посредством количественного анализа антибиотикограмм обладает рядом преимуществ, которые позволяют получать с его помощью первичную внутривидовую характеристику изолятов КБ, что упрощает диагностику вспышек кампилобактериоза первичными диагностическими лабораториями. Специалисты лабораторий имеют большой опыт определения чувствительности изолятов бактерий к антибиотикам, а метод позволяет типировать все изоляты КБ, что значительно облегчит его освоение и применение. Количественный анализ антибиотикограмм позволит осуществлять мониторинг изменения чувствительности КБ к применяемым в животноводстве АП. Это особенно важно для C. jejuni, рост резистентности которого к антибиотикам в последнее время значительно ускорился.
Заключение
Фенотипирование C. jejuni и C. coli посредством количественного анализа антибиотикограмм — простой, недорогой и надежный метод типирования изолятов этих бактерий на внутривидовом уровне. Он будет полезен первичным диагностическим лабораториям, в которых нет возможностей для применения более сложных фенотипических и молекулярно-генетических способов типирования КБ. Его применение позволит быстро диагностировать кампилобактериоз и проводить мониторинг чувствительности КБ к АП.
БИБЛИОГРАФИЯ
1. Butzler J.P., Dekeyser P., Lafontaine T. Antimicrob Agents and Chemother, 1974, 5, 86—89.
2. Engberg J., Aarestrup P.M., Taylor D.E. et al. Emerg Inf Dis, 2001, 7, 24—34.
3. Lawes Agricultural Trust: Genstat V. Release 1.3. Rothamsted Exp. Station, England. 1990.
4. Moore J.E., Madden R.H., Kerr J.R. et al. Vet Rec, 1996, 138, 306—307
5. Moore J.E., Crowe M., Heaney N., Crothers E. J Antimicro Chemother, 2001.
6. Skirrow M.B., Benjamin J. J Clin Pathol, 1980, 33, 1122.
7. US National Committee for Clinical Laboratory Standards Performance standards for antimicrobial susceptibility testing. Second information supplement. NCCLS document M100-S2. Villanova, Pennsylvania, U.S.A., 1987.
J. Emoore, C.E. Goldsmith. Phenotyping of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli by a quantitative antibiogram [MIC] typing scheme using Euclidean distances. BMC Microbiology 1:13. OA.
НАША СПРАВКА
УДК 619:616.98:578.842.1
Диагностика кампилобактериозов
Б.Ф.Шуляк, РВЖ СХЖ
Сокращения: КБ — кампилобактерии
В 1886 г Т. Эшерих обнаружил в фекалиях ребенка некультивируемую спиральную бактерию, которую назвал Vibrio felinus. В 1963 г. этот микроорганизм и ряд других морфологически сходных с ним бактерий пищеварительного тракта животных и человека объединили в отдельный род Campylobacter. В настоящее время последний входит в состав рода Campylobacter класса e-Proteobacteria. Число видов этого рода постоянно растет: в настоящее время валидными признают по меньшей мере 22 вида кампилобак-терий (КБ): C. canadensis, C. coli, C. concisus, C. cuniculor-um, C. curvus , C. faecalis, C. fetus (подвиды fetus и venerea-lis), C. gracilis, C. helveticus, C. hominis, C. hyointestinalis (C. hyointestinalis subsp. hyointestinalis, C. hyointestinalis subsp. lawsonii), C. insulaenigrae, C. jejuni (подвиды. doylei
и jejuni), C. lanienae, C. lari(dis), C. lawrenceae, C. mucosa-lis, C. peloridis, C. rectus, C. showae, C. sputorum (подвиды bubulus и sputorum) и C. upsaliensis. Наиболее изучены 3 вида КБ, наиболее опасные для человека, — С. upsaliensis, С. jejuni и C. coli.
У с/х животных кампилобактериозы обычно протекают бессимптомно. Поэтому основу их диагностики составляют лабораторные методы обнаружения КБ. Серологическими методами диагностики кампилобактериозов в ветеринарии не пользуются.
КБ проявляют высокую чувствительность к сопутствующей кишечной микрофлоре и ее кислым продуктам метаболизма, а также обычным атмосферным условиям. Поэтому пробы фекалий должны доставляться в лабораторию в охлажденном виде (4...6 °С) в течение срока, не превышающего 1 ч после совершения животным акта дефе-
кации. В качестве альтернативы можно брать у животных, подозреваемых в заражении КБ, смывы из прямой кишки (у птиц — из клоаки). При необходимости более длительной транспортировки (до 24 ч) патологического материала применяют транспортные среды: тиогликолятно-цистеи-новую, Керри-Блеера и др. Они не только поддерживают жизнеспособность КБ, но и задерживают рост сопутствующей микрофлоры.
Методы обнаружения КБ
Бактериоскопия. Для обнаружения КБ микроскопию мазков фекалий проводят посредством темнопольной и фазово-контрастной микроскопии. Исследуют разведенные пробы фекалий. Их визуальной идентификации в препаратах способствует характер двигательной активности и форма бактериальной клетки. Окраску мазков фекалий лучше всего проводить карболфуксином.
Эти бактерии представляют собой тонкие изогнутые (от легкого загиба до спирали) палочки — само название «Campylobacter» означает «загнутая палочка». Концы бактериальных клеток обычно утончены. В мазках из культур КБ располагаются одиночно, в цепочках зигзагообразной или спиральной формы разной длины, а также парами в форме буквы S или крыльев летящей чайки. При контакте с воздухом, воздействии повышенной температуры и старении культур появляются сферические бактериальные клетки [6].
Размер C. jejuni и C. coli составляет 0,5...5,0 х 0,2...0,5 мкм, C. upsaliensis — 1,2.3,0 х 0,3.0,4 мкм. Они несут на одном или обоих полюсах по жгутику, обеспечивающему в жидких средах стремительные движения по винтообразной траектории, которые можно наблюдать с помощью фазово-контрастного микроскопа. Снятые с поверхности плотных сред КБ совершают колебательные движения. Около 10.15 % штаммов C. jejuni неподвижны из-за отсутствия жгутиков [5]. Кроме того, стареющие и подвергнутые воздействию неблагоприятных факторов КБ разных видов могут частично или полностью утрачивать подвижность.
Поверхность КБ имеет морщинистый вид. Спор они не образуют, грамотрицательны. Для контрастного окрашивания КБ лучше всего подходит 0,5 %-й раствор карболфуксина или кристалвиолета.
Реакция непрямой иммунофлюоресценции. Более чувствительным и специфичным методом обнаружения КБ в натив-ном материале служит РНИФ. Но даже этот метод нередко дает неспецифические отрицательные результаты при низкой концентрации КБ в фекалиях. Поэтому бактериоскопию и РНИФ используют в основном, как ориентировочные экспресс-методы диагностики кампилобактериозов. Изоляция возбудителя. КБ — микроаэрофилы и капнофилы: оптимальное содержание O2 в окружающей среде для большинства из них колеблется от 3 до 10 %, а CO2 — от 10 до 21 %, но есть виды, способные расти как в микроаэрофильных, так и в анаэробных условиях.
C. jejuni, C. upsaliensis и C. coli термофильны, поскольку лучше всего растут при температуре 37.43 °С.
Длительное время КБ считали некультивируемыми. Культивировать ин витро их удалось сравнительно недавно: в 1977 г. английским микробиологом М.В. Скирроу для изоляции и репродукции C. jejuni был с успехом использован кровяной агар с антибиотиками.
В работе с КБ применяют транспортные и 3 типа питательных сред: обогатительные, селективные и ростовые. Многие из них (например, среды Скирроу, Бутцлера, Престона) выпускаются промышленным способом. Готовые среды в процессе хранения абсорбируют кислород, поэтому предпочтительнее их использовать сразу же после приготовления. В противном случае их следует хранить в герметично
закрытых контейнерах, а при наличии в их составе светочувствительных компонентов (гемина и др.) — в защищенном от света месте. В таких условиях они обычно сохраняют ростовые свойства на протяжении 2 мес. Добавление в питательные среды кислородсвязывающих компонентов, таких как гемин, кровь или древесный уголь, повышает их ростовой потенциал для КБ.
Из сред обогащения при работе с КБ чаще всего пользуются средами Джефри, Абейта-Хант-Барка, обогатительным бульоном с оксидазой, обогатительными бульонными средами Болтона, Весли, Престона. Состав обогатительных сред обеспечивает КБ преимущества в росте и размножении перед многими другими бактериями-контаминантами.
Ростовые и селективные среды в свою очередь можно разделить на 2 группы — содержащие (среда Скирроу и др.) и не содержащие (среды Кармаля и Болтона) кровь. Отсутствие крови в последних двух средах не оказывает отрицательного влияния на их ростовые качества для С. je-juni. Напротив, за счет более эффективной задержки роста посторонней микрофлоры для КБ создаются весьма благоприятные условия. С. upsaliensis в отличие от С. jejuni растет на бульонных средах только в присутствии сыворотки крови овцы или плода коровы.
Для ингибиции роста посторонней микрофлоры в селективные среды добавляют цефоперазон, цефалотин, цефазолин, эритромицин, колистин, бацитрацин, полимиксин В, новобио-цин, колимицин, ванкомицин, рифампицин, амфотерицин В. Лучшими средствами подавления грибов служат амфотери-цин В и циклогексемид. Антимикробные препараты входят в состав сред в определенных комбинациях, предназначенных для эффективного подавления грамположительных и грамот-рицательных, а также грибковых контаминантов, имеющихся в изобилии в фекалиях животных. Цефалотин, колистин и полимиксин В проявляют ингибирующее действие на некоторые виды C. jejuni и C. coli. Поэтому в селективные среды, предназначенные для изоляции этих бактерий, перечисленные антибиотики не вносят.
Добавление в транспортные среды антибиотиков, к которым эти агенты проявляют резистентность, позволяет уже до начала проведения исследований снизить степень контаминации патологического материала другими микроорганизмами. Окончательно это достигается посевом исследуемого материала на селективные среды и инкубированием посевов при 37.42 °С в микроаэрофильных условиях в течение 10.14 дн. Если тестируемая на наличие КБ проба была взята не более, чем за 10 дн. до исследования (или это молочный продукт), ее инкубируют в микроаэрофильных условиях в обогатительной среде при 37 °C в течение 4 ч. В остальных случаях ее выдерживают при 30 °C 3 ч или при 37 °C 2 ч. Затем в обоих случаях температуру повышают до 42 °C и инкубируют пробу 23.24 ч.
При подозрении на инфекцию С. upsaliensis вместо часто применяемых в работе с другими КБ селективных сред, в состав которых входят цефалотин и налидиксовая кислота, используют среды с цефаперазоном (32 мкг/мл), ванко-мицином (20 мг/мл) и циклогексемидом (100 мкг/мл) или цефоперазоном (8 мкг/мл), амфотерицином (10 мкг/мл) и гейкопланином (4 мкг/мл) [1]. Попытки создания селективной среды без крови для этой КБ пока не увенчались успехом.
Безусловно, антимикробные препараты, добавляемые в транспортные и селективные среды в той или иной степени снижают в тестируемом материале титр живых КБ. Если к этому добавить не всегда достаточно высокую величину последнего в фекалиях животных, то становится понятной необходимость использования на первом этапе бактериологического исследования обогатительных сред. Обычно перед проведением бактериологического анализа пробы патологического материала разбавляют
ими в соотношении 1:10. Это повышает эффективность действия антибиотиков на постороннюю микрофлору и облегчает утилизацию КБ кислорода из микроаэрофильных субстратов.
Суспензию материала в обогатительной среде инкубируют при 37 °С в микроаэрофильных условиях 8...48 ч. Применение такого типа сред повышает результативность исследования на 35.40 % [1].
Дальнейший этап бактериологического анализа предусматривает использование 1 из 2 (или одновременно обоих) методов: фильтрационного и посева на селективные среды.
Фильтрационный метод предназначен для концентрирования и очистки КБ от посторонней микрофлоры без использования антибиотиков с помощью бактериальных фильтров с порозностью 0,45.0,65 мкм. Нитратцеллюлезные фильтры задерживают значительную часть (до 90 %) КБ [21], поэтому вместо них предпочтительнее пользоваться ацетилцеллюлез-ными или ядерными фильтрами. Но и в таком случае исследовать материал с титром КБ ниже 105 живых бактерий/г фильтрационным методом не удается [1]. Тем не менее этот метод дает дополнительные преимущества при изоляции КБ, отличающихся повышенной чувствительностью к антимикробным препаратам, например C. upsaliensis. Фильтрат материала, подозреваемого на наличие КБ, высевают на описанные выше ростовые среды. Посевы инкубируют одновременно в двух температурных режимах — 42 и 37 °С.
Второй метод предусматривает непосредственный посев патологического материала на селективные среды, содержащие компоненты, которые задерживают рост посторонней микрофлоры, не оказывая существенного влияния на размножение КБ.
При работе с селективными средами избегают действия ультрафиолетовых и прямых солнечных лучей. Чашки с посевами переносят в анаэростаты (оптимально до половины их высоты) и помещают последние в термостат с микроаэро-фильными условиями при 42 °C (параллельно посевы можно культивировать при 37 °C, однако термофильные КБ быстрее растут при более высокой температуре). Посевы ежедневно просматривают на наличие роста. Не допускается подсушивание поверхности сред, т.к. это ведет к ингибиции роста КБ.
Из имеющих типичную морфологию колоний делают мазки на предметном стекле, которые исследуют в темном поле или в капле масла фазово-контрастным микроскопировани-ем. Для облегчения визуализации КБ мазки можно красить. Простой способ окраски состоит в эмульгировании взятой бактериологической петлей части колонии в 0,1 мл раствора кристалвиолета или карболового фуксина. Окрашенные мазки просматривают под световым микроскопом с масляной иммерсией при увеличении х1000.
При обнаружении в мазках типичных бактерий делают пересев культуры на агар Абейта-Хант-Барка или другую ростовую среду без антибиотиков. Пересевы инкубируют в указанных выше условиях в течение суток или большего срока до появления выраженного роста КБ.
Все процедуры с культурами следует проводить быстро или в микроаэрофильных условиях для уменьшения воздействия на посевы атмосферного кислорода. При невозможности немедленного проведения бактериоскопии выросших колоний чашки с посевами хранят в холодильнике.
На плотных питательных средах КБ очень медленно (в течение 5.14 дн.) образуют слегка приподнятые над поверхностью среды, имеющие гладкие края мелкие колонии: их размер у С. upsaliensis варьирует от точечного до 0,5.1 мм, а у С. jejuni и C. coli от 1 до 2 мм. Они слизистые, гладкие, сероватые (С. upsaliensis), светло-коричневые или бесцветные (С. jejuni и C. coli), полупрозрачные, блестящие. Помимо описанной формы С. jejuni и C. coli могут образовывать также плоские, влажные, с нечетко контурированными краями, крупные (диаметром 5.7 мм) колонии [1].
Растущие колонии скапливаются по линии посева, образуя на средах с увлажненной поверхностью небольшие группы или пленку.
Для выращивания С. upsaliensis подходят среды, содержащие картофельный крахмал. Добавление 1 % глицерина, 1,5 % NaCl и 1 % желчи ингибирует рост микроорганизма, в то время как внесение в среду 1 % глицина существенного влияния не оказывает.
На среде МакКонки C. upsaliensis (в отличие от C. coli и С. jejuni) культивировать не удается.
Небольшое количество штаммов КБ вызывает а-гемолиз, причем его выраженность коррелирует с рН среды. Типичные зеленоватые зоны а-гемолиза появляются вокруг колоний на плотной среде с кровью кролика (рН 6,0.6,5) при температуре 37 °C через 48 ч. В большинстве сред с кровью рН выше, поэтому такой тип гемолиза регистрируют крайне редко.
р-гемолиз, сопровождающийся формированием четких зон лизиса эритроцитов в плотных средах с кровью, дает значительно большее количество штаммов КБ, включая а-гемолитические штаммы. Он проявляется при температуре 37 и 42 °C через 6 и 3 дн., соответственно. Зоны р-гемолиза не увеличиваются в диаметре с течением времени. В агароз-ных средах срок появления зон р-гемолиза сокращается до 24 ч [15]. Около 92 % штаммов С. jejuni проявляют гемолитические свойства на четвертые сутки культивирования при 42 °С. При тестировании гемолитической активности КБ наиболее точные и воспроизводимые результаты дают среды с кровью на агарозной, а не агаровой основе. Минимальный гемолитический титр живых культур КБ обычно составляет 1:64. Освобожденная от бактерий питательная среда гемолитическую активность не проявляет. Единственной известной субстанцией, способной вызывать лизис эритроцитов, является гемолитический цитотоксин С. jejuni. Попытки выделить другие гемолизины КБ в чистом виде пока не увенчались успехом, что может быть объяснено его (их) чувствительностью к кислороду и необходимостью проведения работ в анаэробных или микроаэрофильных условиях.
КБ, как и многим другим патогенным грамотрицательным бактериям, присуща спонтанная агглютинация, но она вариабельна для разных штаммов. Ее в большей мере проявляет суточная культура КБ, ресуспендированная в фосфатно-бу-ферном растворе при 25 °С. Аутоагглютинация бактерий зависит от температуры среды и ингибируется проназой, а также кислым глицином (pH 2,2). Добавление в суспензию бактерий липазы, ДНК-азы или метапериодата натрия существенного влияния на этот процесс не оказывает. Между экспрессией жгутиковых протеинов и агглютинабельностью КБ проявляется положительная корреляция.
C. helveticus весьма сходна в биохимическом плане с C. upsaliensis — их дифференцируют по морфологии колоний на плотных питательных средах: колонии C. helveticus плоские и гладкие. Дополнительным критерием служит неспособность C. helveticus расти на средах с картофельным крахмалом [20].
Полимеразная цепная реакция. Первоначально этот тест проводили на основе амплификации генов 16S рРНК. По чувствительности такой вариант реакции превосходит куль-туральный метод, но не позволяет проводить межвидовую дифференциацию КБ [23].
После обнаружения у термофильных КБ специфического участка 23S рРНК олигонуклеотидные праймеры последнего были с успехом использованы для обнаружения в фекалиях и дифференциации этих микроорганизмов [7].
Третий вариант реакции основан на использовании в качестве праймера участка размером 153 нуклеотида одного из доменов ГТФ-азы C. jejuni. Тест позволяет дифференцировать все термотолерантные виды КБ [22].
Иммуноферментный анализ. Тест предназначен для быстрого обнаружения в фекалиях антигенов КБ. Для его проведения выпускают коммерческий набор реагентов ProSpecT Campylobacter Microplate Assay. Чувствительность метода составляет 89.99 %, но он не позволяет дифференцировать между собой термофильные виды КБ [11].
Западный блотинг. Дает возможность обнаружить 7 антигенов КБ, имеющих молекулярную массу от 14 до 67 кД. Наибольшую диагностическую ценность имеет выявление антигенов с молекулярной массой 29, 37 и 43 кД [13].
Идентификация КБ
Идентификация КБ основана на характере их культураль-ных и биохимических свойств, результатах серотипирования, фаготипирования и анализа генома.
Типирование по культуральным свойствам
Термофильные КБ в отличие от остальных представителей рода Campilobacter способны расти при температуре 42 °С, но их рост прекращается при температуре 24 °С и ниже. По этому критерию их удается отличить от остальных представителей рода.
При анализе культурально-морфологических свойств КБ принимают во внимание подвижность, форму и размер бактериальных клеток, рост на средах без крови, при 25, 37 и 42 °С, в присутствии 3,5 % NaCl или 1 % глицина, морфологию колоний.
Высевы на среду МакКонки, как упоминалось раньше, позволяют дифференцировать C. jejuni и C. coli от С. upsaliensis, которая на ней не растет.
Кроме того, специально проводят тестирование изолятов на чувствительность к цефалотину. Большая часть (70.93 %) штаммов C. upsaliensis в отличие от C. jejuni и C. coli проявляют чувствительность к цефалотину [16].
Биохимический метод типирования
Отсутствие способности к активному метаболизму углеводов затрудняет использование биохимических маркеров для дифференциации КБ. Тем не менее, по совокупности культуральных и биохимических свойств можно первоначально идентифицировать выделенные изоляты КБ. Биохимические идентификационные тесты рекомендуется проводить в следующей последовательности: определение каталазной и оксидазной активности, способности гидро-лизовать гиппурат натрия, образовывать сероводород (на среде с цистеином) и индол, ферментировать углеводы и восстанавливать нитраты.
Серотипирование
Серотипировать КБ можно по их термолабильному поверхностному антигену HL в реакции агглютинации [14], растворимому термостабильному (О-антигену) в реакции непрямой гемагглютинации или РА [9], а также жгутиковому антигену flaA.
Систему типирования изолятов КБ по О-антигену называют по имени автора «пеннеровской». Предложившие ее исследователи первоначально считали О-антиген липооли-госахаридом или липополисахаридом бактерий [19]. Позднее биохимический и генетический анализы показали, что О-антиген является капсулярным [4].
По термолабильному антигену различают по меньшей мере 108 серогрупп C. jejuni и C. coli (суммарно), а по О-анти-гену 47 и 18 серогрупп соответственно. Количество идентифицированных в разных странах flaA-типов КБ также весьма велико. Так, например, в 1996 г. в США циркулировало около 50 flaA-типов, из которых на долю 15 типов приходилось 75 % всех изолятов, а на долю 7 из них (типов 1.7) — почти треть изолятов КБ [17].
Основным недостатком серотипирования является большое количество нетипируемых штаммов КБ: в Европе около 18 % [12], в Китае 58,8 % и Японии 13 % [18], а в Африке порядка 63,4 % [3].
Кроме того, для проведения названных тестов не выпускают коммерческих препаратов. При проведении реакции ингибиции гемаглютинации отмечена недостаточно высокая воспроизводимость результатов, связанная со свойствами антигена (концентрация и т.д.) и эритроцитов (возраст донора и т.д.) [8].
Молекулярные способы типирования
Анализ генома позволяет точнее и быстрее дифференцировать КБ, чем сравнение их фенотипа. Из разных методов молекулярной гибридизации при КБ нашли применение в основном южный и дот блотинги.При проведении южного блотинга геном изолята фрагментируют рестриктазами на участки определенной длины. Их разделяют в электрофорезе в соответствии с размером и переносят с геля на фильтр. После этого осуществляют гибридизацию фрагментов. Постановка дот блотинга предусматривает извлечение нуклеиновой кислоты из бактериальной клетки, перенос ее на фильтр и проведение холодными (т.е. нерадиоактивными) зондами гибридизации.
Риботипирование по локусам 5S, 16S и 23S рРНК оказалось наиболее удобным для типирования изолятов C. jejuni и C. upsaliensis, которых не удается идентифицировать по фенотипу [10]. В то же время относительно низкий дискриминационный уровень риботипирования не позволяет применять его в качестве рутинного метода генетического анализа КБ.
БИБЛИОГРАФИЯ
1. Воробьев А.А. и соавт. ЖМЭИ, 2000, 1, 95—103.
2. Aspinall S.T. , Wareing D.R., Hayward P.G. et al. J Clin Path, 1993, 46, 829—831.
3. Asrat D.A., Hathaway A., Sjqgren E. et al. Epidemiol Inf, 1997, 118, 91—95.
4. Bacon D.J., Szymanski C.M., Burr D.H.. et al. Mol Micr, 2001, 40, 769—777.
5. Barret T.J., Patton C.M., Morris G.K. et al. Lab Med, 1988, 19, 961102.
6. Blaser M.J., Hardesty H.L., Powers B., Wang W.-L.L. et al. J Clin Micr, 1980, 27, 309—313.
7. Eyers M., Chapelle S., van Camp G. et al. J Clin Micr, 1993, 31, 3340—3343.
8. Fricker C.R., Alemohammad M.M., Park R.W. Can J Micr, 1987, 33, 33—39.
9. Frost J.A., Oza A.N., Thwaites R.T., Rowe B. J Clin Micr, 1998, 36, 2, 335—339.
10. Goossens H., Giesendorf B.A., Vandamme P. et al. J Inf Dis, 1995, 172, 1298—1305.
11. Hindiyeh M., Jense S., Hohmann S. et al. J Clin Micr, 2000, 38, 3076—3079.
12. Jacobs-Reitsma W.F., Maas H.M., Jansen W.H. et al. J Appl Bact, 1995, 79, 286—291.
13. Janvier B., Ayraud S., Beby-Defaux A. et al. FEMS Imm Med Micr, 2000, 27, 3, 263—268.
14. Lior H., Woodward D.L., Edgar J.A. et al. J Clin Micr, 1982, 15, 761—768.
15. Misawa N., Hirayama K., Itoh K., Takahashi E. J Clin Micr, 1995, 33, 729-731.
16. Nachamkin I. In: Murrary P.R. et al (Eds.). Manual of Clinical Microbiology. 6th Ed. ASM Press, Washington D.C., 1995, 483-489.
17. Nachamkin I. et al. J Clin Micr, 1996, 34, 2277—2281.
18. Nishimura M., Nukina M., Yuan J.M. et al. FEMS Micr Lett, 1996, 142, 133—138
19. Penner J.L., Hennessy J.N., Congi R.V. Eur J Clin Micr, 1983, 2, 378—383.
20. Stanley J., Burnens A.P., Linton D. et al. J Gen Micr, 1992, 138, 2293—2303.
21. Steele T.W., McDermott S.N. Pathology, 1984, 16, 263—265.
22. Van Doorn L.-J., Verschuuren-van Haperen A., Burnens A. et al. J.Clin Micr, 1999, 37, 6, 1790—1796.
23. Vanniasinkam T., Lanser J.A., Barton M.D.. Lett Appl Micr, 1999, 28, 1, 52—56.
B.F. Schuljak. Diagnostic of campylobacterioses.
