CC BY
10
МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ - В ПРАКТИКУ
© Коллектив авторов, 2016
В.И. Ашкинази, М.Ю. Лебедев, Е.И. Крестова, Э.Н. Федулова, Н.Ю. Широкова, О.А. Тутина
ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ФАКТОРОВ ЛЕЙКОЦИТМОДУЛИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ СЫВОРОТКИ КРОВИ У ДЕТЕЙ С ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ КИШЕЧНИКА
ФГБУ «Приволжский федеральный медицинский исследовательский центр» МЗ РФ, г. Нижний Новгород, РФ
Цель исследования: оценить диагностическое значение лейкоцитмодулирующей активности сыворотки (ЛМАС) крови у детей с воспалительными заболеваниями кишечника (ВЗК) и взаимосвязь с некоторыми медиаторами воспаления, влияющими на ее величину. Материалы и методы исследования: обследованы 99 пациентов в возрасте 5—17 лет, в т.ч. 49 детей, страдающих язвенным колитом (ЯК) и 50 — болезнью Крона (БК). Содержание растворимых молекул адгезии (бРЕСАМ, БР-Бв1ес1т), уровень провоспалительных цитокинов (ФНОа, ИЛ1р, ИЛ6), неоптерина, маннан-связывающего лектина, эластазы нейтрофилов оценивали с помощью иммуноферментного анализа. Кислородзависимый метаболизм нейтрофилов изучали с использованием хемилюминесцентных реакций. Результаты: наиболее высокие показатели ЛМАС крови у обследованных детей наблюдались в период обострения заболевания. Это согласовывалось с данными эндоскопии кишечника, где регистрировались выраженные воспалительные изменения. Установлена корреляционная зависимость между величиной ЛМАС крови и уровнем БР-Бе1ес1т, неоптерина, маннан-связывающего лектина, ФНОа, ИЛ1р, эластазы ней-трофилов, величиной спонтанной продукции кислородных радикалов. Заключение: показана взаимосвязь ЛМАС крови с периодом заболевания, что дает основания использовать данный показатель как маркер воспалительного процесса. Зарегистрированы факторы, вносящие свой вклад в ЛМАС крови у детей с ВЗК, что подтверждалось выявленными взаимосвязями с изученными медиаторами воспаления.
Ключевые слова: язвенный колит, болезнь Крона, флогогенный потенциал, медиаторы воспаления, дети, подростки.
Цит.: В.И. Ашкинази, М.Ю. Лебедев, Е.И. Крестова, Э.Н. Федулова, Н.Ю. Широкова, ОА. Тутина. Диагностическое значение факторов лейкоцитмодулирующей активности сыворотки крови у детей и подростков с воспалительными заболеваниями кишечника. Педиатрия. 2016; 95 (6): 44-49.
V.IAshkinazi, M.Y. Lebedev, E.I. Krestova, E.N. Fedulova, N.Y. Shirokova, O.A. Tutina
DIAGNOSTIC VALUE OF LEUKOCYTE MODULATING SERUM ACTIVITY FACTORS IN CHILDREN WITH INFLAMMATORY
BOWEL DISEASES
The Volga District Federal Medical Research Center, Nizhny Novgorod, Russia
44
Контактная информация:
Ашкинази Владимир Израильевич - к.б.н.,
старший научный сотрудник лаборатории
клинической иммунологии и молекулярной
диагностики ФГБУ «Приволжский федеральный
медицинский исследовательский центр» МЗ РФ
Адрес: Россия, 603155, г. Н. Новгород,
Верхневолжская набережная, 18
Тел.: (831) 436-62-40, E-mail: vladash58@yandex.ru
Статья поступила 26.09.16,
принята к печати 24.11.16.
Contact Information:
Ashkinazi Vladimir Izrailevich - Ph.D., senior
researcher at the Laboratory of Clinical Immunology
and Molecular Diagnostics, The Volga District Federal
Medical Research Center
Address: Russia, 603155, Nizhny Novgorod,
Verhnevolzhskaya Naberezhnaya, 18
Tel.: (831) 436-62-40, E-mail: vladash58@yandex.ru
Received on Sep. 26, 2016,
submitted for publication on Nov. 24, 2016.
Objective of the research — to assess diagnostic value of leukocyte modulating serum activity factors in children with inflammatory bowel diseases (IBD) and their relationship with some inflammatory mediators that affect its value. The study included 99 patients aged 5-17 years, including 49 children with ulcerative colitis (UC), and 50 with Crohn's disease (CD). Content of soluble adhesion molecules (sPECAM, sP-selectin), level of pro- and anti-inflammatory cytokines, neopterin, neutrophil elastase were evaluated by ELISA. Oxygen-dependent metabolism of neutrophils was studied with chemiluminescent reactions. The highest rates of leukocyte modulating serum activity (LMSA) in examined children were observed during exacerbation period. It was consistent with bowel endoscopy data, where expressed inflammatory changes were recorded. The study revealed correlation between LMSA value and level of neopterin, sP-selectin, FNOa, ILip, IL4 (in patients with UC), TFRpi, neutrophil elastase, level of oxygen radicals spontaneous production. It also proved interrelation LMSA with disease period, which gives reason to use this index as an inflammatory process marker. The study revealed factors contributing to LMSA in children with IBD, which was confirmed by identification of linkages to known inflammation mediators. Keywords: ulcerative colitis, Crohn's disease, leukocyte modulating serum activity, inflammation mediators, children, adolescents.
Quote: V.I. Ashkinazi, M.Y. Lebedev, E.I. Krestova, E.N. Fedulova, N.Y. Shirokova, OA. Tutina. Diagnostic value of leukocyte modulating serum activity factors in children with inflammatory bowel diseases. Pediatria. 2016; 95 (6): 44-49
Воспалительные заболевания кишечника (ВЗК), к которым относятся язвенный колит (ЯК) и болезнь Крона (БК), являются хроническими процессами, протекающими у генетически предрасположенных детей и взрослых на фоне дисбаланса врожденного и адаптивного иммунитета. Ведущую роль при ВЗК играют реакции Т-лимфоцитов, прежде всего СБ4+Т-клеток (Т-хелперы, ТЪ) - доминирующей субпопуляции воспалительного процесса, а также регуляторных Т-клеток (Treg), несущих противовоспалительную функцию. У пациентов с ЯК воспаление в целом развивается по ТЪ2-пути, которое реализуется в виде повышенной продукции интерлейкинов (ИЛ) ИЛ4, ИЛ 5, ИЛ 13, растворимых молекул межклеточной адгезии и др. Определяющим типом иммунного ответа при БК считается ТЪ1-опосредованный ответ, связанный с продукцией интерферона у (ИФНу), ИЛ1Р, ИЛ2, ИЛ6, ИЛ12, ИЛ18, фактора некроза опухоли а (ФНОа) и других факторов [1, 2]. Последними исследованиями показано, что у больных ВЗК слизистая оболочка (СО) массивно инфильтрирована еще одной категорией СБ4+Т-хелперных лимфоцитов - ТЪ17-клетками, продуцирующих провоспалительные цитокины ИЛ17А, ИЛ^, ИЛ21, ИЛ23, ИЛ6, ФНОа [3-5].
Известно, что в развитии воспаления, кроме указанных Т-лимфоцитов, принимают участие другие клетки (фагоциты, тучные клетки, эози-нофилы, тромбоциты, В-лимфоциты, фибро-бласты), а также продуцируемые ими факторы (медиаторы воспаления). Весь арсенал медиаторов - преформированных (т.е. возникающих на ранних этапах созревания клеток) и адаптивных, образующихся в клетках только при активации воспалительного процесса, составляют воспалительный «потенциал», который формируется не только локально, но и системно, обнаруживаясь и активно проявляя себя в сыворотке крови. При этом оценить вклад всех сывороточных факторов (цитокины, лейкотри-ены, эйкозаноиды, компоненты комплемента, факторы свертывания и фибринолиза, острофа-
зовые белки, эндогенные антимикробные пептиды и белки, активные формы кислорода и др.) в общую воспалительную реакцию весьма непросто, поскольку в исследуемом субстрате может быть повышена активность одних компонентов и снижена - других. К тому же определение всех этих факторов по отдельности не под силу даже самой современной лаборатории. В связи с этим для интегративной (комплексной) оценки воспалительного процесса в кишечнике целесообразно использовать определение лейкоцитмодулиру-ющей активности сыворотки крови (ЛМАС) [6]. Предлагаемый подход позволяет зарегистрировать все основные события, которые развиваются в организме при воспалении.
В качестве индикаторов воспаления при этом используются фагоциты (в первую очередь нейтрофилы) здоровых доноров, которые наиболее существенно меняют свою функциональную активность in vitro под влиянием всей совокупности факторов, находящихся в сыворотке крови, что позволяет суммировать разнонаправленные эффекты отдельных медиаторов и оценить общий доминирующий вектор развития воспалительного процесса [7]. Эффективность подобного исследования для общей оценки воспаления была продемонстрирована при различных патологиях: остром коронарном синдроме [8], одонтодонных флегмонах челюстно-лице-вой области [9], при микст-инфекции клещевого энцефалита и иксодового клещевого бореллиоза [10], муковисцидозе [11].
Цель исследования: оценить диагностическое значение ЛМАС крови у детей с ЯК и БК и взаимосвязь с некоторыми медиаторами воспаления, влияющими на ее величину.
Материалы и методы исследования
Обследованы 99 пациентов в возрасте 5-17 лет с ВЗК, в т.ч. 49 детей, страдающих ЯК, и 50 - БК. У детей с ЯК на основании педиатрического индекса активности ЯК - PUCAI (Pediatric Ulcerative Colitis Activity Index) в 30 случаях отмечалось обострение заболевания, в 19 - кли-
45
ническая ремиссия. У 28 пациентов с БК согласно педиатрического индекса активности БК -PCDAI (Pediatric Crohn,s Disease Activity Index) регистрировалось обострение заболевания, у 22 - клиническая ремиссия. Полученные результаты исследований сравнивали с аналогичными показателями 20 условно-здоровых детей того же возраста, которые составили контрольную группу.
Респираторный метаболизм нейтрофилов в спонтанном (с раствором Хенкса) и индуцированном (с использованием зимозана, опсонизированного пулом сывороток здоровых доноров) тестах исследовали в реакциях люминолзависимой хемилюминесценции [12] на хемилюминометре Luminoscan Ascent (Thermo Scientific, Швеция). Результаты выражали в относительных световых единицах (1 световая единица соответствует 1х104 импульсов (квантов)/с). На основе полученных результатов рассчитывали индекс стимуляции - отношение индуцированной реакции к спонтанной, который выражали в условных единицах.
ЛМАС крови изучали с помощью люминолзави-симой хемилюминесценции с использованием лейко-взвеси здоровых доноров. С этой целью утром натощак из локтевой вены доноров забирали 4-5 мл крови, стабилизировали гепарином (конечная концентрация в крови - 10 ед./мл) и разводили физиологическим раствором в соотношении 1:1. Затем в центрифужные пробирки последовательно вносили 4 мл разведенной крови и 1,75 мл 3,42% раствора декстрана Т-500 и выдерживали 90-120 мин при температуре 20 0С в штативе под углом 450. Надосадок (лейковзвесь) отбирали, дважды в течение 5 мин отмывали при 1500 об/мин и взвешивали в растворе Хенкса без фенолового красного в концентрации 1х106 клеток/ мл. Лейковзвесь в объеме 100 мкл вносили в лунки 96-луночного планшета, добавляли 100 мкл люми-нола (10-3М, «Sigma») и помещали инкубироваться (для стабилизации реакции) в режиме автоматического встряхивания на 15 мин (37 0С) в микропланшетный люминометр. Затем к реакционной смеси добавляли либо 50 мкл сыворотки больного (индуцированная реакция), либо 50 мкл раствора Хенкса (спонтанная реакция) и продолжали инкубацию в люминометре в течение 60 мин, при этом прибор автоматически производил измерения каждые 2 минуты. Под влиянием совокупности воспалительных факторов, содержащихся в сыворотке больного, лейкоциты доноров активируются и образуют в результате респираторного взрыва активные формы кислорода, которые окисляют люминофор (люминол) с выделением квантов света, что немедленно регистрируется прибором. Наиболее характерна такая реакция для нейтрофилов, все другие лейкоциты окисляют люми-нол многократно слабее. Чем выше воспалительная активность сыворотки, тем выше показатели хемилю-минесценции в индуцированной пробе по сравнению со спонтанной и наоборот. По окончании исследования рассчитывали индекс стимуляции (отношение индуцированной реакции к спонтанной), который в дальнейшем мы расценивали как показатель ЛМАС крови [7, 8].
Уровень цитокинов ФНОа, ИЛ1Р, ИЛ6 исследовали с использованием тест-систем «Вектор-Бест»,
Россия. Содержание неоптерина определяли при помощи набора Neopterin ELISA (IBL, Германия). Концентрацию маннан-связывающего лектина с использованием тест-системы «Human MBL ELISA» («Hycult biotech», Нидерланды). Активность растворимых молекул адгезии - sP-selectin (soluble platelet selectin) и sPECAM-1 (soluble platelet-endothelial cell adhesion molecule 1) и эластазы полиморфнонукле-арных лейкоцитов оценивали с помощью наборов (Bender Medsystems, Австрия). Для оценки активности воспалительного процесса в кишечнике одновременно проводили эндоскопию с использованием видеоколоноскопа «PENTAX» (EC- 3830F) и морфо-метрию полученных биоптатов СО кишки с выделением клеток стромы и инфильтрата.
Обработку полученных данных выполняли с помощью пакета прикладных программ STATISTICA 6.0. Описательная статистика признака включала определение медианы (Ме), первого и третьего квартилей (Q25-Q75). При проверке гипотез использовали тест Манна-Уитни и корреляционный анализ по Спирмену (R). Статистическими значимыми считали различия между показателями при р<0,05.
Результаты и их обсуждение
Установлено, что наиболее высокие (статистически значимые) показатели ЛМАС крови у обследованных детей наблюдались в период обострения (табл. 1). Клинически у пациентов с ЯК это проявлялось в виде усиления болей в животе, учащения стула и появления в нем слизи, метеоризма, ухудшения показателей копрограммы, интоксикации, синдрома гемоколита, воспалительных изменений крови. Эндоскопически воспалительно-деструктивный процесс в толстой кишке у таких детей сопровождался гиперемией, отеком СО, отсутствием сосудистого рисунка. Регистрировались множественные микроабсцессы, поверхностные язвы неправильной формы, прокрытые фибрином и контактная кровоточивость СО различной интенсивности.
У детей с БК отмечались болевой абдоминальный синдром, синдром гемоколита, повы-
Таблица1
ЛМАС крови у наблюдаемых детей с ВЗК
Нозологические группы ЛМАС, у.е.
Ме (Q25-Q75)
Контрольная группа (n=20) 0,054 (0,02-0,21)
ЯК Обострение (n=30) 0,441 2 (0,2-0,63)
Клиническая ремиссия (n=19) 0,15 (0,07-0,28)
БК Обострение (n=28) 0,631 2 (0,34-1,09)
Клиническая ремиссия (n=22) 0,19 (0,08-0,27)
Здесь и в табл. 2-5: Статистически значимо относительно контрольной группы, 2статистически значимо относительно
клиническои ремиссии.
46
шенная температурная реакция организма, сдвиг «влево» в гемограмме. Воспалительный процесс в этот период по данным эндоскопии мог локализоваться практически в любом отделе желудочно-кишечного тракта, однако чаще всего отмечался в терминальном отделе подвздошной кишки и в прямой кишке. Наблюдалось сочетание измененной СО и неизмененной, наличие афт, язв и свищей, глубоких продольных язв, деформирующих складок или гаустр. Кроме того, отмечались хронические, глубокие, безболезненные анальные трещины.
В период ремиссии (табл. 1) величина ЛМАС крови у детей с ВЗК стабилизировалась (снижалась) и значимо не отличалась от показателей здоровой группы. В большинстве случаев у пациентов отсутствовали вышеперечисленные клинические и эндоскопические признаки, характерные для воспаления. В частности, у пациентов с ЯК, по данным эндоскопии, исчезали гиперемия и отек СО, ее вид становился бледно-розовым, ровным, блестящим. Нормализовался сосудистый рисунок, отсутствовала контактная кровоточивость СО. Что касается больных БК, то у них отмечались лишь постязвенные руб-цовые деформации СО кишки и псевдополипы, возникающие на месте язвенных дефектов. Результаты эндоскопии в этот период наглядно подтверждались морфометрическими исследованиями биоптатов СО кишечника, где отмечались слабовыраженные воспалительные изменения. Так, у пациентов с БК в собственной пластинке СО наблюдалась невысокая клеточная плотность инфильтрата с присутствием единичных эоэинофилов и нейтрофилов на фоне снижения содержания клеток лимфоплазмоцитарного ряда. Одновременно отмечался рост клеток со структурообразующей функцией в виде зрелых фибробластов и фиброцитов.
У детей с ЯК в собственной пластинке СО также наблюдалась выраженная положительная динамика, заключающаяся в снижении выраженности и активности воспалительного процесса, с сохранением несколько повышенного количества эозинофильных гранулоцитов.
Следовательно, изучение величины ЛМАС крови позволяет дифференцировать период заболевания у детей с ЯК и БК.
В ходе исследования также была показана информативность определения ЛМАС крови для оценки эффективности лечения. На фоне проводимой терапии у пациентов с ВЗК в 87,5% случаев отмечалась положительная клиническая
динамика, которая выражалась в улучшении состояния больного, нормализации эндоскопической и морфологической картины СО толстой кишки и сопровождалась значимым снижением показателя ЛМАС (до начала лечения в общей группе - 0,54 (0,22-0,89) у.е., по окончании лечения - 0,18 (0,08-0,31) у.е., р=0,0017). В пользу сказанного также свидетельствовала корреляционная взаимосвязь между величиной ЛМАС и периодом заболевания (И=0,32; р=0,0073). Таким образом, определение ЛМАС крови больного ребенка с целью оценки развития воспалительного процесса позволяет, с нашей точки зрения, значительно сократить количество традиционно используемых лабораторных тестов.
Определяя факторы, способные внести свой вклад в ЛМАС крови у детей с ВЗК, мы опирались на собственные данные обследования больных БК и ЯК [13, 14], где было установлено повышенное содержание растворимых форм молекул клеточной адгезии вР-ве^с^п и вРЕСАМ-1 и выявлена их взаимосвязь с некоторыми маркерами воспаления (продукты респираторного метаболизма нейтрофилов, неоптерин, маннан-связывающий лектин, провоспалительные цито-кины). Основываясь на полученных результатах, нами проанализирована связь ЛМАС с активностью упомянутых индикаторов воспаления. В период обострения зарегистрирована корреляция с уровнем вР-ве1есип (табл. 2) - адгезивных молекул, обеспечивающих движение лейкоцитов вдоль эндотелия сосудов, при их миграции в очаг воспаления (И=0,39; р=0,043), величиной спонтанной продукции кислородных радикалов в реакции люминолзависимой хемилюминесцен-ции нейтрофилов (табл. 3). Являясь мощными окислителями, кислородные радикалы способны не только участвовать в воспалительных реакциях, обеспечивая на 85-90% биоцидный потенциал фагоцитов, но и, что очень важно, инициировать перекисное окисление липидов клеточных мембран, разрушать пептидные связи в белках, расщеплять нуклеиновые кислоты, декарбок-силировать аминокислоты, тем самым участвуя в уничтожении патогенов (И=0,34; р=0,042). Выявлена взаимосвязь показателя ЛМАС крови с концентрацией неоптерина (табл. 2) - чувствительного индикатора воспаления, уровень которого коррелирует с тяжестью и активностью заболевания и резко повышается при состояниях, связанных с активацией клеточного звена иммунитета (например, в случае затяжных бак-
Таблица 2
Содержание БР-Бе^сИп, бРЕСАМ-1 и неоптерина в сыворотке крови у наблюдаемых детей с ВЗК
Показатели БР-селектин, нг/мл бРЕСАМ-1, нг/мл Неоптерин, нмоль/мл
Контрольная группа БК ЯК Контрольная группа БК ЯК Контрольная группа БК ЯК
Медиана 95,05 377,011 242,451 49,7 88,851 91,11 6,28 10,221 8,71
Квартили 25% 84,77 180,14 117,09 43,2 79,9 71,1 3,3 8,75 6,51
75% 109,38 854,91 594,56 54,6 132,61 151,47 7,43 11,7 10,31
47
Таблица 3
Уровень спонтанной люминолзависимой хемилюминесценции и индекс стимуляции нейтрофилов крови у наблюдаемых детей с ВЗК
Показатели Люминолзависимая хемилюминесценция
Спонтанная реакция, отн. свет. ед. Индекс стимуляции, у. е.
Контрольная группа БК ЯК Контрольная группа БК ЯК
Медиана 2,0 71 111 16,47 25,23 28,12
Квартили 25% 1,0 5 9 9,67 11,49 14,54
75% 2,0 10,5 17 23,19 43,42 48,58
Таблица 4
Содержание эластазы нейтрофилов и маннан-связывающего лектина в сыворотке крови
у наблюдаемых детей с ВЗК
Показатели Эластаза нейт] эофилов, нг/мл Маннан-связывающий лектин, нг/мл
Контрольная группа БК ЯК Контрольная группа БК ЯК
Медиана 76,16 349,271 287,271 2,4 5,741 6,021
Квартили 25% 37,23 161,49 149,32 1,94 4,19 3,52
75% 113,41 634,71 494,18 2,91 9,53 8,94
Таблица 5
Содержание ФНОа, ИЛ1р, ИЛ6 в сыворотке крови у наблюдаемых детей с ВЗК
Показатели ФНОа, пг/мл ИЛ1р, пг/мл ИЛ6, пг/мл
Контрольная группа БК ЯК Контрольная группа БК ЯК Контрольная группа БК ЯК
Медиана 43,5 77,631 791 28,4 62,11 91,251 17 26,6 25,9
Квартили 25% 39,8 31,24 29,6 24,4 32 30,5 12,5 11,3 15,3
75% 50 153,5 123,6 32 184,3 634,5 18,5 40,8 43,8
териальных инфекций [15] (К=0,38; р=0,04). Зарегистрирована корреляция ЛМАС крови с содержанием маннан-связывающего лектина (МБЬ) (табл. 4), играющего важную роль во врожденном иммунитете (И=0,31; р=0,029). Являясь острофазовым белком, МБЬ образуется в печени в ответ на «аварийную» ситуацию (инфекцию) по сигналу, подаваемому провос-палительными цитокинами. МБЬ распознает углеводный паттерн (остаток маннозы и фуко-зы) на поверхности патогенов бактериального и грибкового происхождения, а также некоторых простейших, тем самым облегчая их поглощение фагоцитами. Кроме того, связывание МБЬ с микроорганизмами приводит к активации лек-тинового пути системы комплемента [16].
Одновременно изучена взаимосвязь ЛМАС с концентрацией провоспалительных цитокинов (табл. 5), вносящих важнейший вклад в ЛМАС крови. Установлено, что в период обострения регистрируется корреляция с уровнем ФНОа и ИЛ1Р (соответственно: И= 0,33; р=0,042; И=0,30; р=0,039) Этот факт подтверждается результатами собственных морфологических исследований, свидетельствующих о том, что при ВЗК в СО кишки наблюдается резкое повышение количества активированных лимфоцитов, макрофагов и нейтрофильных гранулоцитов, способных усиленно продуцировать цитокины. При этом важно иметь в виду, что одними из ключевых индукторов синтеза цитокинов (так же, как и
инициаторов респираторного метаболизма фагоцитов) служат компоненты клеточных стенок бактерий: липополисахариды, мурамилдипеп-тиды и пептидогликаны, обильно заселяющие толстую кишку у пациентов с ЯК и БК [17, 18]. Это согласуется с современными представлениями о патогенезе ВЗК, согласно которым одной из главных причин развития ВЗК служат генетические дефекты, приводящие к тому, что иммунная система СО лишается толерантности к нормальной интестинальной микрофлоре, реагируя на нее чрезмерной активацией, ведущей к хроническому воспалению [19, 20].
Что касается активности ИЛ6, который секретируется в организме позже, чем ИЛ1 и ФНОа и потому относится к цитокинам, завершающим развитие воспаления, то в пределах нашей выборки его величина у больных детей в период обострения значимо не отличалась от показателей контрольной группы и не коррелировала с уровнем ЛМАС крови.
Отдельно следует отметить вклад в ЛМАС крови такого медиатора воспаления, как эластаза полиморфноядерных лейкоцитов (табл. 4), которая в настоящее время рассматривается как маркер острого и/или хронического воспаления различной этиологии. Являясь основной сериновой протеиназой человека, эластаза способна расщеплять (гидролизовать) широкий спектр белков, в т.ч. эластин, коллагены 3-го, 6-го, 8-го типов, протеогликаны, гистоны, основной белок миели-
48
на, гемоглобин, белки плазмы крови, которые в итоге теряют свои биологические свойства и тем самым способствуют развитию патологического процесса (в т.ч. и абсцессов). Кроме того, эла-стаза нейтрофилов не только повреждает ткани, но и активирует систему комплемента, которая в свою очередь также подключается к реализации воспаления [7]. Подтверждением сказанному служит установленная в ходе исследования связь показателя ЛМАС крови с уровнем данного фермента (И=0,371; р=0,027). Одновременно эластаза участвует в формировании растворимых мембранных антигенов посредством протео-литического отщеплении с поверхности клеток внеклеточной части мембранных белков. Таким способом, в частности, образуется рассматриваемый нами вР-ве^с^п, играющий важную роль в реализации воспалительных реакций, что подтверждается наличием корреляции между концентрацией вР-ве1есип и активностью протеина-зы (И=0,39; р=0,003).
Заключение
У детей с ВЗК зарегистрирована корреляционная зависимость между величиной ЛМАС крови и уровнем неоптерина, вР-ве1есип, ман-нан-связывающего лектина, ФНОа, ИЛ1р, эла-стазы нейтрофилов, величиной спонтанной про-
дукции кислородных радикалов - факторов, вносящих свой вклад в воспалительную активность сыворотки крови. Показана взаимосвязь ЛМАС крови с периодом заболевания, что дает основания использовать анализируемый показатель как маркер воспалительного процесса. Однако следует помнить, что ЛМАС отражает воспалительные явления, вызванные как основным заболеванием, так и сопутствующей патологией (холецистит, пиелонефрит, гастродуоденит и др.) и потому не может рассматриваться как специфический маркер. В этой связи хотелось бы отметить, что у 4 пациентов с клинически выраженным активным воспалительным процессом ЛМАС крови не отличалась от значений здоровых детей. Это могло быть связано с факторами, которые подавляют активность лейкоцитов (антиоксиданты, противовоспалительные цитокины, ингибиторы протеаз и комплемента и др.). Кроме того, у таких больных нельзя исключить развития гипореактивности клеток, продуцирующих медиаторы воспаления,вследствие применения медикаментозных средств (в т.ч. глюкокортикоидов, препаратов 5-аминосалици-ловой кислоты и др.).
Конфликт интересов: авторы сообщили об отсутствии конфликта интересов.
Литература
1. Fina D, Palloue F. What is the role of cytokines and chemokines in IBD? Inflammatory Bowel Disease. 2008; 2: 117-119.
2. Sanchez-Munoz F, Dominguez-Lopez A, Yamamoto-Furusho JK. Role of cytokines in inflammatory bowel disease. World J. Gastroenterol. 2008; 14 (27): 4280-4288.
3. Raza A, Yousaf W, Giannela R, Shata MT. Th17 cell: interaction with predisposing factor in the immunopathogenesis of inflammatory bowel disease. Expert. Rev. Clin. Immunol. 2012; 8 (2): 161-168.
4. Monteleone L, Pallone F, Monteleone G. Th17-related cytokines new players in the control of chronic intestinal inflammation. BMC Medicine. 2011; 9: 122-129.
5. Конович ЕА, Халиф И.Л., Шапина М.В. Иммуно-патогенез воспалительных заболеваний кишечника. Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопрокто-логии. 2013; 4: 69-78.
6. Маянский Д.Н., Царендоржиев Д.Д., Макарова О.П. Диагностическая ценность лейкоцитарных тестов. Определение биоцидности лейкоцитов: Методические рекомендации. Новосибирск, 1996: 19-22.
7. Маянский Д.Н. Лекции по клинической патологии. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008: 79-95.
8. Маянский Д.Н., Маянская С.Д., Царендоржиев Д.Д., Мышкин А.В. Определение лейкоцитмодулирующей активности сыворотки крови при остром коронарном синдроме. Клиническая лабораторная диагностика. 1999; 7: 21-23.
9. Дурново ЕА., Ашкинази В.И., Высельцева Ю.В., Мишина Н.В., Хомутинникова Н.Е. Клинико-иммуно-логические особенности осложненного течения одонтоген-ных флегмон челюстно-лицевой области. Стоматология. 2010; 2: 29-31.
10. Поповникова Т.В., Бедарева Т.Ю., Вахрамеева Т.Н. Суммарная флогогенная активность сыворотки крови и лик-вора при микст-инфекции клецевого энцефалита и иксодо-вого клещевого боррелиоза у детей. Бюллетень сибирской медицины.2008; Приложение 1: 7-11.
11. Успенская И.Д., Жукова ЕА., Ерзутова М.В., Маянская И.В., Ашкинази В.И., Толкачева Н.И., Коркоташвили Л.В., Колесов СА Флогогенный потенциал и метаболиты оксида азота у детей со смешанной формой муковисцидоза. Педиатрия. 2014; 93 (4): 17-23.
12. Маянский А.Н., Невмятуллин А.Л., Чеботарь И.В. Реактивная хемилюминесценция в системе фагоцитоза. Журнал микробиологии, эпидемиологии иммунобиологии. 1987; 1: 109-115.
13. Ашкинази В.И., Маянская И.В., Толкачева Н.И. Федулова Э.Н., Широкова Н.Ю, Тутина ОА., Шумилова О.В. Молекулы адгезии при деструктивно-воспалительном процессе в кишечнике у детей с язвенным колитом. Вопросы современной педиатрии. 2013; 12 (4): 52-56.
14. Ашкинази В.И., Маянская И.В., Толкачева Н.И., Широкова Н.Ю., Федулова Э.Н., Васильева Е.А., Кропотов В.С., Тутина О.А., Шумилова О.В. Растворимые молекулы адгезии в патогенезе болезни Крона у детей. Педиатрия. 2014; 93 (6): 31-35.
15. Yadav AK, Sharma V, Jha V. Association between serum neopterin and inflammatory ас^айоп in chronic kidney disease. Mediators Inflamm. 2012; 476979. doi: 10.1155/2012/476979.
16. Worthley DL, Bardy PG, Mullighan CG. Mannose-binding lectin: biology and clinical implications. Intern. Med. J. 2005; 35 (9): 548-555.
17. Fava F, Danese S. Intestinal microbiota in inflammatory bowel disease: friend of foe? World J. Gastroenterol. 2011; 17 (5): 557-567.
18. Loh G, Blaut M. Role of commensal gut bacteria in inflammatory bowel disease. Gut Microbes. 2012; 3 (6): 544-555.
19. Kaser A, Zeissig S, Blumberg RS. Inflammatory bowel desiase. Annu. Rev. Immunol. 2010; 28: 573-621.
20. Henderson P, van Limbergen JE, Wilson DC. Genetics of childhood onset inflammatory bowel disease. Inflamm. Bowel Dis. 2011; 17 (1): 346-361.
4
49
