CC BY
27
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Экспериментальные модели Experimental models
бросаркомы in vivo. Кроме того, TNF способствует выживанию миелоидных клеток, а также играет важную роль в ангиогенезе и метастазировании.
Работа была осуществлена при поддержке гранта Президента РФ для ведущих научных школ НШ-10014.2016.4
ДЕФИЦИТ АРГИНИНА, ВЫЗВАННЫЙ АКТИВНОСТЬЮ СТРЕПТОКОККОВОЙ АРГИНИНДЕИМИНАЗЫ, СНИЖАЕТ ПРОДУКЦИЮ МАКРОФАГАМИ ОКСИДА АЗОТА
Головин А.С.1, Бурова Л.А.1, Соколов А.В.1, 2, Старикова Э.А.1, Фрейдлин И.С.1, 2' 3
1ФГБНУ«Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия
2 Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург, Россия
3 Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Ключевым компонентом врожденного иммунитета, контролирующим агрессию патогенных стрептококков (Streptococcus pyogenes) в организме, являются макрофаги. Одним из механизмов антибактериальной активности этих клеток служит продукция оксида азота (NO). Продукция оксида азота макрофагам опосредована ферментом NO-синтазой II, субстратом которого является аргинин. NO является важной внутри и межклеточной сигнальной молекулой, регулирующей пролиферацию и дифференцировку клеток адаптивного иммунитета, а также, обладает бактерицидной активностью. Аргинин используется в качестве субстрата бактериальным ферментом аргининдеиминазой (АД), который продуцирует S. pyogenes. Дефицит аргинина, вызванный действием ар-гининдеиминазы S. pyogenes, может приводить к дизрегу-ляции воспаления и нарушению формирования адекватного иммунного ответа.
Цель. Оценить влияние стрептококковой АД на продукцию NO макрофагами линии J774.
Материалы и методы. Эксперименты проводили на модельной системе мышиных макрофагов перевиваемой линии J774. В работе использовали супернатанты разрушенных ультразвуком S. pyogenes M49-16 и его изоген-ного мутанта с делецией гена АД M49-16delAD (любезно предоставлены проф. Суворовым А.Н., отдел молекулярной микробиологии, ФГБНУ «ИЭМ», Санкт-Петербург), содержащие биологически активные внутриклеточные компоненты бактерий. Клетки линии J774 вносили в планшет и добавляли в лунки супернатанты разрушенных стрептококков исходного или мутантного штамма. Для индукции синтеза NO в лунки планшета вносили ЛПС. В некоторые лунки вносили аргинин дополнительно. После 24 часов инкубации измеряли концентрацию оксида азота в надосадке с помощью реактива Грисса. Количество аргинина в экспериментальных пробах определяли с помощью модифицированной реакции Сукагуши.
Результаты. Предварительно проводили подбор концентрации супернатанта M49-16, в которой он обладал максимальной способностью гидролизовать аргинин. Для этого оценивали количество аргинина в экспериментальных пробах после инкубации с различными разведениями супернатанта исходного штамма. Для дальнейшей работы было выбрано оптимальное разведение супер-натантов разрушенных стрептококков 1 мкл/100 мкл культуральной среды. В этом разведении наблюдалось
достоверное снижение количества аргинина в экспериментальных пробах, содержащих супернатант исходного штамма (p < 0,001). Количество аргинина в пробах с су-пернатантом штамма M49-16delAD достоверно не снижалось. Исследование показало, что супернатант S. pyogenes M49-16 достоверно подавлял индуцированную ЛПС продукцию NO клетками линии J774 (p < 0,0001). При этом продукция NO в присутствии супернатанта S. pyogenes M49-16delAD не изменялась. Добавление аргинина приводило к трехкратному увеличению продукции NO клетками линии J774, инкубированными в присутствии су-пернатанта исходного штамма (p < 0,0001). Продукция NO клетками, инкубированными в присутствии суперна-танта M49-16delAD, при добавлении аргинина достоверно не отличалась от контрольного уровня.
Заключение. Полученные данные свидетельствуют о способности стрептококковой АД приводить к снижению продукции NO клетками линии J774 за счет депле-ции аргинина в культуральной среде.
Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РФФИ № 16-04-00150.
ОСОБЕННОСТИ РЕАКЦИИ МАКРОФАГОВ ПЕЧЕНИ НА ДЕЙСТВИЕ ВОДОРАСТВОРИМОГО СОЕДИНЕНИЯ КРЕМНИЯ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Гордова В.С., Григорьева Е.А., Сергеева В.Е., Смородченко А.Т.
ФГБОУ ВО «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова, Чебоксары, Россия Институт вегетативной анатомии, клиника Шарите, университет Гумбольдта, Берлин, Германия
Макрофаги печени — особая популяция резидентных макрофагов, которым в последнее время, в связи с изучением иммунных функций печени, уделяется большое внимание. Нами уже было изучено влияние длительного поступления в организм с питьевой водой соединения кремния на макрофаги тимуса, селезенки, лимфоидных узелков тонкого кишечника и прилежащих к ним кишечных ворсинок и показано, что макрофаги уменьшаются в размерах, в них меняется содержание нейромедиатор-ных биогенных аминов, на их цитоплазме увеличивается экспрессия MHC II. Однако вопрос, является ли действие кремния, поступающего с питьевой водой идентичным для всех популяций макрофагов, остается открытым.
Цель. Изучение макрофагов печени лабораторных крыс на длительном сроке поступления в организм водорастворимого соединения кремния.
Материалы и методы. Изучали печень 10 нелинейных крыс-самцов. Контрольная группа (5 крыс), получала ad libitum стандартизованную питьевую воду, подопытная (5 крыс), получала ad libitum ту же воду с добавлением де-вятиводного метасиликата натрия в концентрации 10 мг/л в пересчете на кремний. Через девять месяцев животные были выведены из эксперимента, макрофаги в парафиновых срезах печени выявляли непрямым иммуногисто-химическим методом. Первичные антитела — мышиные антитела против CD68 (clon ED1, Abcam, Cambrige, UK), вторичные антитела — меченные биотилином козьи антитела (Vector Laboratories, U.S.). Для визуализации позитивного окрашивания срезы инкубировались с авидин-биотиновым комплексом и диамино-бензидином (Vector Laboratories, U.S.). Изучали макрофаги в десяти полях зрения (х400, х900), о степени экспрессии CD68 судили
