CC BY
26
«Дни Иммунологии в Санкт-Петербурге 2015» Медицинская Иммунология
Immunology Days in St. Petersburg 2015 Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
нение ХС-9 нормализовали количество иммунных АОК на ЭБ в селезенке экспериментальных животных. При этом, все производные 3-ГП нормализовали развитие ГЗТ на ЭБ. Результаты функциональных проб на эндоте-лийзависимое и эндотелийнезависимое расслабление сосудов у животных с гепатобилиарной патологией на фоне лечения мексидолом, этоксидолом и ХС-9 позволили установить, что исследуемые препараты снижали КЭД. Максимальной эффективностью при всех видах патологии обладало соединение ХС-9, использование которого позволило нормализовать КЭД.
Заключение. Результаты указывают на выраженные иммуномодулирующие и эндотелиопретективные свойства производных 3-ГП (в большей степени «Этоксидола» и соединения ХС-9) в условиях токсического поражения печени, вызванного различными по природе и механизму действия гепатотропными токсикантами и экспериментального ОДП. Эффекты производных 3-ГП связаны с влиянием на выработку гуморальных факторов как им-муноцитами, так и клетками различных органов и тканей (в первую очередь, гепатоцитами) при измененной иммунной реактивности в условиях патологии, характеризующейся нарушением процессов перекисного окисления липидов и, как следствие, нарушением целостности клеточных мембран, развитием эндотелиальной дисфункции.
КОРРЕКЦИЯ НАРУШЕНИЙ В СИСТЕМЕ КОМПЛЕМЕНТА У ПАЦИЕНТОВ С ВНЕБОЛЬНИЧНОЙ ПНЕВМОНИЕЙ
Солошенко В.В., Поляков Д.В., Конопля А.И.
Курский государственный медицинский университет, Курск, Россия
Введение. Факторы врожденного иммунитета, в том числе включающие систему комплемента, являются системой «быстрого реагирования» при развитии инфекционного процесса, одним из которых является внеболь-ничная пневмония (ВП), представляющая объективные трудности как в диагностике, так и в определении обоснованной лечебной тактики. Основная роль системы комплемента при попадании в организм различных чужеродных агентов заключается в каскадной активации ее компонентов с последовательным образованием ферментативно активных форм путем расщепления молекул или объединением нескольких активных субъединиц в один мембраноатакующий комплекс, поражающий бактериальную клетку (Хаитов Р.М. и др., 2010). При этом нарушения в системе комплемента могут негативно сказываться на течении инфекционного процесса, приводя к его хронизации или генерализации.
Цель и задачи — изучение состояния системы комплемента и определение корригирующих эффектов дерина-та, эссенциале форте Н и мексидола у больных внеболь-ничной пневмонией.
Материалы и методы. Под постоянным наблюдением в МБУЗ «Городская клиническая больница №2» г. Белгорода находилось 42 пациента с ВП средней степени тяжести, средний возраст которых составлял 45,2±6,9. Все пациенты подвергались комплексному клиническому и лабораторно-инструментальному обследованию, кроме того, лечение проводилось в строгом соответствии с национальными рекомендациями (Российское респиратор-
ное общество/МАКМАХ, 2010), которое включало антибактериальные препараты, муколитики, инфузионную дезинтоксикационную и симптоматическую терапию. У половины больных исследуемой группы на основании информированного согласия дополнительно применяли сочетание деринат (1,5% - 5,0, внутримышечно, через 24 часа, №10), эссенциале форте Н (по 2 капс., перорально, через 6 часов, №42), мексидол (200 мг, внутривенно, через 24 часа, №10). При помощи наборов для ИФА в плазме крови больных ВП до и после различных методов лечения оценивали концентрацию компонентов системы комплемента (С3, С3а, С4, С5, С5а) и ее регуляторов (фактора Н и С1-ингибитора). Контрольная группа состояла из 12 здоровых доноров того же возраста.
Основные результаты. У больных ВП до начала лечения в плазме крови установлено повышение концентрации С5а-компонента системы комплемента, С1-ингибитора, снижение содержания С3, С3а, С4, С5-компонентов комплемента, при нормальном уровне С1-ингибитора и фактора Н. Лечение больных ВП по стандарту корригировало содержание С4, С5а-компонентов комплемента. Включение в комплексное лечение комбинации деринат, эссенциале форте Н и мексидола дополнительно нормализовало содержание С5а-компонента системы комплемента, в больше степени корригировало концентрацию С3, С5-компонентов комплемента.
Заключение. Таким образом, у больных ВП наблюдается снижение концентрации в плазме крови большинства исследованных компонентов системы комплемента, что можно связать с инфекционной природой самого заболевания, поскольку в основе его патогенеза лежит воспалительная реакция. Лечение согласно существующим рекомендациям включает препараты, обладающие только антибактериальной и противовоспалительной активностью, в то время как лабораторные изменения, определяемые у больных с ВП, требуют дополнительного включения в схему лечения препаратов, обладающих и иммуномодулирующей, антиоксидантной и мембра-нопротекторной активностью. В этой связи стандартное лечение только корригировало отдельные показатели системы комплемента. Более эффективно в коррекции нарушенных показателей оказалось сочетание дерината, эссенциале форте Н и мексидола, что обосновывает их включение в комплексное лечение больных ВП.
АНАЛИЗ БИОХИМИЧЕСКОЙ И БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АРГИНИНДЕИМИНАЗЫ STREPTOCOCCUS PYOGENES
Старикова Э.А., Соколов А.В., Власенко А.Ю., Бурова Л.А., Фрейдлин И.С.
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины"
Введение. Метаболизм аргинина играет важную роль в регуляции функций эукариотических клеток. Многие патогены используют метаболические пути аргинина организма хозяина для успешной инвазии и диссеми-нации (Priyanka Das, 2010). Одним из бактериальных ферментов, метаболизирующих аргинин, является арги-ниндеиминаза (Manuel Zuniga, 2002). Показано, что ар-гининдеиминаза патогенных микрорганизмов M. arginini и P. aeruginosa подавляют пролиферативную активность
2015, Т. 17, № 4 2015, Vol. 17, No 4
«Дни Иммунологии в Санкт-Петербурге 2015» Immunology Days in St. Petersburg 2015
эукариотических клеток, а также ингибируют процесс ангиогенеза (I.-S. Park, 2003; R.H. Kim, 2009). Пиогенный стрептококк относится к патогенам, которые вызывают тяжелые инфекционные заболевания у человека, часто приводящие к развитию осложнений (Cunningham M.W, 2000). Роль аргининдеиминазы в патогенезе стрептококковой инфекции остается слабо изученной. Цель данного исследования состояла в выделении из продуктов разрушения пиогенного стрептококка и последующем проведении анализа биохимической и биологической активности АД S. pyogenes, серологической группы А, тип М22, штамм AL168.
Материалы и методы. В экспериментах использовали супернатант разрушенных ультразвуком стрептококковых клеток. Для выделения аргининдеиминазы последовательно использовали ионообменную хроматографию на UNO-sphere Q, гель-фильтрацию на Sephacryl S-200 HR и аффинную хроматографию на аргинин-сефаро-зе. Отбирали фракции, которые обладали способностью снижать концентрацию гуанидиновых групп аргинина и вызывали подавление пролиферации эндотелиальных клеток линии EA.hy926 не менее чем на 50% при разведении фракции в 25 раз. Идентификацию аргининдеимиазы проводили с помощью масс-спектрометрии фрагментов трипсинолиса, полученные пептидные фингерпринты анализировали on line при помощи программы MASCOT (http://www.matrixscience.com). Для определения гуани-диновых групп аргинина использовали модифицированную реакцию Сукагучи. Пролиферативную активность клеток оценивали по их распределению по фазам клеточного цикла, а также с использованием спектрофото-метрического метода (путем окрашивания монослоя красителем кристаллическим фиолетовым). Статистический анализ данных проводили c использованием t-критерия Стьюдента. Результаты. При SDS-электрофорезе в ПААГ во фракциях с антипролиферативной активностью был выявлен белок с M около 40 kDa, который был подвергнут масс-спектрометрическому анализу фрагментов трипсинолиза. Были найдены от 9 до 10 пептидов, соответствующих аргининдеиминазы из различных штаммов S. pyogenes серотипов M1, М2, М3, М4, М5, М6, M12, M18, M28, M49. Выделенный фермент отличался высокой процессивностью (число оборотов 35/c) и оптимумом pH — 6,8 — наиболее близким к рН плазмы крови (7,4). Его удельная активность составляла 46,7 мкмоль Agr/мин/мг белка. Изучение биологической активности аргининдеиминазы показало достоверное дозозависимое снижение пролиферативной активности эндотелиальных клеток до 60% (3 мкг аргининдеиминазы/мл), что соответствовало биологической активности супернатанта разрушенных ультразвуком стрептококков при разведении 1/50. При добавлении в культуральную среду экзогенного L-Arg в нарастающей концентрации способность фермента подавлять пролиферацию клеток частично снижалась, но полного восстановления пролиферативной активности клеток до уровня контроля не происходило, предположительно из-за появления в среде токсичного метаболита L-Arg — аммиака.
Заключение. Анализ биохимической и биологической активности аргинидеиминазы S. pyogenes, M22 показал, что фермент обладает активностью, сравнимой с изученными ферментами других микроорганизмов, и может играть важную роль в патогенезе стрептококковой инфекции.
ПОКАЗАТЕЛИ ИММУННОГО И ОКСИДАНТНОГО СТАТУСА ПРИ ДИАГНОСТИКЕ ОСТРОГО ПАНКРЕАТИТА БИЛИАРНОЙ И НЕБИЛИАРНОЙ ЭТИОЛОГИИ
Суняйкина О.А., Конопля А.И., Локтионов А.Л., Быстрова Н.А., Микаелян П.К., Азарова Ю.Э.
Курский государственный медицинский университет, Курск, Россия
Введение. Использование общепринятых лабораторных методов определения тяжести течения и эффективности лечения многих заболеваний не приносит нужного результата и в основном играет роль скринингового исследования. В этой связи весьма перспективен дифференцированный подход построения диагностического алгоритма в зависимости от этиологии острого панкреатита (ОП), в частности билиарной или небилиарной (ОБП и ОНБП) этиологии.
Цель и задачи — разработка дифференцированных подходов к лабораторной диагностике острого отечного и деструктивного билиарного и небилиарного панкреатита.
Материалы и методы. Под постоянным наблюдением в течение 6 лет в хирургическом отделении ОБУЗ «Курская городская клиническая больница №4» находилось 282 пациента в возрасте от 24 до 70 лет с различными формами ОБП и ОНБП, из которых 120 больных с отечной формой ОП (из них 62 с ОБП не оперированных и оперированных по поводу желчнокаменной болезни и ее осложнений и 58 с ОНБП) и 65 пациентов с деструктивным ОП (25 — с ОБП и 40 — с ОНБП) с прогнозируемым легким течением (менее 6 баллов по шкале APACHEII), в хирургическом лечении которых были исключительно использованы малоинвазивные методики. Уровень в сыворотке крови TNF, IL-1ß, IL-2, IL-6, IL-8, IL-18, G-КСФ, IFNa, IFNy, IL-4, IL-10, РАИЛ, С3, С4-компонентов комплемента, фактора Н и С1-ингибитора, определяли с помощью наборов реагентов методом твердофазного иммуноферментного анализа. Выраженность перекисно-го окисления липидов оценивали по концентрации ацил-гидроперекисей (АГП) и малоновогодиальдегида (МДА). Кроме этого, определяли активность каталазы и суперок-сиддисмутазы (СОД), общую антиокислительную активность (ОАА), содержание стабильных метаболитов оксида азота (CMNO). Активность и интенсивность фагоцитоза нейтрофилов, выделенных из периферической крови, оценивали по фагоцитарному индексу, фагоцитарному числу и индексу активности фагоцитоза. Активность кис-лородзависимых систем нейтрофилов оценивали по реакции восстановления нитросинеготетразолия, спонтанного и стимулированного зимозаном с расчетом функционального резерва нейтрофилов. В полученных по методу E. Beutler эритроцитах определяли уровень АГП, МДА, CMNO, ОАА, активность СОД и каталазы. Кроме этого, оценивали общую сорбционную способность эритроцитов и сорбционную емкость их гликокаликса. Мембраны эритроцитов получали методом G.T Dodge, электрофорез мембранных белков проводили по методу U.K.Laemmli. Белки окрашивали Кумасиголубым R-250 по модифицированной методике G. Fairbanks. Липиды мембран выделяли методом тонкослойной хроматографии.
Основные результаты. При отечной форме ОП установлены максимально измененные до стандартного лечения показатели иммунного статуса у больных с ОНБП
