CC BY
4УДК 574.3:575.24/.25]:616.151.5(100)
И.Б. Моссэ, А.Л. Гончар, К.В. Жур, М.Д. Амельянович, П.М. Морозик
СРАВНЕНИЕ ПОПУЛЯЦИОННЫХ ЧАСТОТ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ РИСКА ИНФАРКТА МИОКАРДА С УРОВНЯМИ ЭТОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ В РАЗНЫХ СТРАНАХ ЕВРОПЫ
ГНУ «Институт генетики и цитологии НАН Беларуси» Республика Беларусь, 220072, г. Минск, ул. Академическая, 27
Введение
Инфаркт миокарда (ИМ) относится к муль-тифакториальным заболеваниям, зависящим как от факторов окружающей среды, так и от генетических особенностей организма. Взаимодействие экологических и приобретенных факторов риска с генетическими факторами усложняет определение предрасположенности к данного рода заболеваниям.
К настоящему времени выявлено несколько десятков генетических вариантов, носи-тельство которых ассоциировано с развитием протромботических сдвигов в системе гемостаза. Нами показано [1,2], что генетическими факторами риска артериальных тромбозов являются Лейденская мутация (генотипы A/A, G/A), а также генотипы Leu/Leu по полиморфизму Val34Leu XIII-го фактора свертываемости крови и 4G/4G по инсерции/делеции 4G/5G гена PAI-1.
Лейденская мутация V-го фактора свертывания крови является известным фактором предрасположенности к венозным тромбозам. Роль ее в артериальном тромбообразо-вании не выяснена. Фактор V свертывания крови является белковым кофактором при образовании тромбина из протромбина. Полиморфизм G1691A Leiden (аминокислотная замена Arg (R) -> Gln (Q) в позиции 506) является доминантной точечной (однонуклео-тидной) мутацией гена, кодирующего фактор V свертывания крови. Придает устойчивость активной форме фактора V к расщепляющему действию специализированного регулирующего фермента, С-белка, что приводит к гиперкоагуляции. Соответственно, риск образования тромбов повышается.
Нами выявлена повышенная в 2,3 раза частота мутации FactorV Leiden в группе пациентов с инфарктом миокарда по сравнению с контрольной группой, что свидетельствует о том, что данная мутация является фактором риска инфаркта миокарда [1].
XIII фактор свертывания крови - это гетеро-тетрамер, состоящий из двух каталитических субъединиц (альфа субъединицы) массой 83,2 килодальтона и двух неэнзиматических субъединиц (бета - субъединицы) массой 79,7 килодальтона, которые нековалентно объединены в тетрамерную молекулу массой 325,8 кило-дальтон. После активации тромбином, фактор XIII катализирует образование ковалентных связей между альфа- и гамма- цепями фибрина, стабилизируя таким образом фибриновый сгусток.
Фибриноген синтезируется в печени, его повышенные уровни в плазме крови могут отражать воспаленное состояние сосудистой стенки, и таким образом он может быть связан с риском возникновения сердечнососудистых заболеваний.
XIII фактор свертываемости крови является тромбин активируемым протеином, ответственным за сшивку гамма - цепей мономера фибрина и стабилизацию фибринового тромба. После активации тромбином, XIII фактор катализирует образование ковалентных мостиков между альфа - и гамма - цепями соседних мономеров фибрина, таким образом стабилизируя тромб.
Стабилизация фибринового сгустка выполняется посредством трансглутаминазной реакции, которая формирует ковалентные
мостики между лизиновым и глутаминовым сайтами цепи фибрина. В соответствии с тромб-стабилизирующей ролью, недостаточность XIII фактора оборачивается серьезными осложнениями, связанными с чрезмерным кровотечением.
Для альфа-субъединицы XIII фактора обнаружено 5 полиморфных вариантов. Наиболее известным является полиморфизм Val34Leu [3]. Он заключается в замене валина на лейцин во втором экзоне гена в позиции 34 полипептидной цепи, всего в трех аминокислотных остатках от сайта рестрикции.
Полиморфизм Val34Leu XШ-го фактора свертывания крови оказывает влияние на активность и структуру фибриногена — белка, участвующего в процессе тромбообразования на конечных стадиях коагуляционного каскада и, соответственно, влияющего на прочность и эластичность тромба [4-7].
Замена валина на лейцин ассоциирована с повышенной активацией XIII фактора тромбином и повышенной линкерной активностью. Полиморфизм Val34Leu не меняет уровень концентрации XIII фактора, однако изменяет его активность.
Замена валина на лейцин является малозначащей - единственная разница между этими аминокислотами заключается в дополнительной СН2 группе в боковой цепи лейцина - полиморфизм Val34Leu оказывает значительный эффект на функцию XIII фактора.
Изоформа 34Leu быстрее активируется тромбином, обладает повышенной в 2,5 раза каталитической эффективностью и сокращенным временем образования тромба по сравнению с изоформой 34Val (с 0,2 М за секунду у Уа134 до 0,5 М за секунду у Leu34) [8].
Механизм, благодаря которому замена вали-на на лейцин в 34 положении полипептидной цепи ускоряет активацию тромбином, пока не выяснен. БаёаБ^ап и Уее проанализировали взаимодействие между тромбином и полипептидом XIII фактора с помощью рентгено-структурной кристаллографии и подтвердили важную роль в этом взаимодействии аминокислотного остатка в положении 34 полипептидной цепи [6].
Выявленное нами увеличение в 2,5 раза частоты гомозигот по аллелю 34Leu у пациентов, перенесших инфаркт миокарда, по сравнению
с контрольной группой может свидетельствовать о повышенном риске этого заболевания у людей с генотипом LL [9].
Полиморфизм 40/50 гена РА1-1 (ингибитора активатора плазминогена 1, одного из основных компонентов тромболитической плазминоген-плазминовой системы) широко изучается в связи с риском развития острой сосудисто-коронарной патологии, венозного тромбоза, эклампсии и других сосудистых расстройств.
Показано, что уровень РАН в плазме крови ассоциирован с полиморфизмом в области промотора гена РАН, представляющего собой однонуклеотидную делецию/инсерцию гуанина (40/50). Люди, гомозиготные по 40 аллелю, обладают более высоким уровнем содержания РАН в плазме, а гомозиготные по 50 аллелю, более низким. Механизм, лежащий в основе аллельных различий в уровне синтеза РАН, был установлен после обнаружения того, что оба аллеля могут связываться с активатором транскрипции гена, тогда как аллель 50 также имеет сайт связывания с транскрипционным репрессором. Отсутствие действия репрессора и обеспечивает более высокий уровень транскрипции гена РАН с аллелем 40.
В норме в крови находится неактивный предшественник плазмина плазминоген. Активаторов плазминогена в организме достаточно много. Одним из основных компонентов антисвертывающей системы крови является ингибитор активатора плазминогена (РАН) [10]. Этот белок регулирует тканевый и уро-киназный активаторы плазминогена РАЫ, обеспечивает до 60% общей ингибиторной активности в отношении активатора плазми-ногена в плазме и тем самым играет важную роль в регуляции фибринолиза. Повышение уровня РАЫ связано с увеличением риска тромбозов [11].
Влияние 40/50 полиморфизма гена РА[-1 на риск развития инфаркта миокарда до сих пор точно не установлено. Некоторые результаты свидетельствуют о том, что генотип 40/40 обуславливает повышенный риск инфаркта миокарда [12], но в то же время имеются сообщения, что этот генотип является нейтральным [13] или даже протекторным [14].
В целом отмечена тенденция к увеличению доли гомозигот по «тромбофильному» аллелю
(4G/4G) среди больных по сравнению с контрольной выборкой [15]. Вариант 4G приводит к повышенной экспрессии гена и, следовательно, к повышенному уровню PAI1 в крови. Следовательно, тромболитическая система заторможена и риск тромбообразования возрастает.
Нами показано, что генотип 4G/4G гена PAI-
1 может являться предрасполагающим к возникновению ОИМ, а 5G/5G-протекторным [2].
Целью данной работы является сравнение частот выявленных генетических факторов риска в популяциях разных стран Европы с уровнем заболеваемости инфарктом миокарда в этих странах.
Материалы и методы
Для определения частот полиморфных аллелей генов риска в популяции Беларуси была сформирована группа в количестве 150 человек. В качестве биологического материала для исследования была использована ДНК, экстрагированная из пятен крови, высушенных на специальных бланках.
Для определения аллелей полиморфизма XIII фактора свертываемости крови Val34Leu была разработана методика на основе принципа Tetra-primer ARMS, суть которой заключается в использовании двух пар праймеров -внешних и внутренних. Внутренние праймеры являются аллель-специфичными, а внешние ограничивают сайт мутации таким образом, что при разделении продуктов ПЦР с помощью электрофореза разным аллелям соответ-
ствуют полосы различной длины [9]
Идентификацию мутации Factor V Leiden (FVL) проводили методом ARMS. Разделение продуктов ПЦР осуществляли с помощью электрофореза в 2-процентном агарозном геле с последующим окрашиванием бромистым этидием [1].
Для анализа полиморфизмов 4G/5G промо-торной области гена PAI-1 была разработана оригинальная методика с использованием автоматического капиллярного электрофореза с полихромным лазерным сканированием [2].
Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета анализа данных Microsoft Excel. Для определения взаимосвязи между двумя параметрами рассчитывали ко -эффициент корреляции.
Результаты и обсуждения
Популяционное распределение генотипов и аллелей полиморфизма Val34Leu
Исследовано 110 образцов крови контрольной группы (220 хромосом). Обнаружено 43,6 %
гомозиготных и 52,7 % гетерозиготных носителей аллеля V. В то же время частоты аллелей полиморфизма Val34Leu составили 69,1 % аллеля V и 30,9 % аллеля L (таблица 1).
Таблица 1
Частоты генотипов и аллелей полиморфизмов Val34Leu
Группы Генотип Аллели
VV VL LL V L
контрольная группа N=110 N=220
48 (43,6%) 58 (52,7%) 4 (3,7%) 152 (69,1%) 68 (30,9%)
Определение частоты мутации Factor V Leiden
Поиск мутации Factor V Leiden выполнен в группе, состоящей из 100 человек, было обна-
ружено 3 гетерозиготных носителя данной мутации, то есть частота мутации Factor V Leiden составила 3 % (таблица 2). Гомозиготных носителей данной мутации выявлено не было.
Таблица 2
Частоты генотипов и аллелей Factor V Leiden
Группы Генотип Аллели
GG GA AA G A
контрольная группа N=100 N=200
97 (97%) 3 (3%) 0 (0%) 197 (98,5%) 3 (1,5%)
Популяционное распределение генотипов и аллелей гена РА1-1
Исследована контрольная группа из 150 человек (300 хромосом). Частота аллеля 40 составила 54,1 %. Выявлено 43 (28,7 %) го-
мозиготных носителя и 75 (50 %) гетерозиготных носителей данного аллеля. Частота аллеля 50 составила 46,3 %. В гомозиготном состоянии он был выявлен у 32 (21,3 %) человек (таблица 3).
Таблица 3
Частоты генотипов и аллелей полиморфизмов 4G/5G гена PAI-1
Группы Генотип Аллели
4G/4G 4G/5G 5G/5G 4G 5G
контрольная группа N=150 N=300
43 (28,7%) 75 (50,0%) 32 (21,3%) 161 (54,1%) 139 (45,9%)
Сравнение частоты исследованных генетических факторов риска в популяциях Беларуси и разных стран Европы с уровнем заболеваемости инфарктом миокарда в этих странах Проведено сравнение популяционных частот генотипов и полиморфных аллелей Val34Leu XIII-го фактора свертывания крови, 4G/5G гена PAI-1 и мутации Factor V Leiden V-го фактора свертывания крови в разных странах Европы с уровнем заболеваемости инфарктом миокарда в этих странах. Частота возникновения инфаркта миокарда в странах Европы
представлена на графике, изображенном на рис. 1. Данный график построен на основании проанализированных данных сайта Всемирной Организации Здравоохранения [16].
Самая низкая частота инфаркта миокарда выявлена в Испании, она составляет 0,78 %, самая высокая частота - 2,31% обнаружена в популяции России. Для Греции, Швеции, Италии и Беларуси характерен средний уровень возникновения инфаркта миокарда, в то время как для Польши и Хорватии - ниже среднего.
Рис. 1. Частота возникновения инфаркта миокарда среди жителей ряда стран Европы по данным на 2008 год
(в процентах) [16].
На основании проведенного анализа литературных данных, получены следующие частоты генотипа Leu/Leu, представленные на рис.
2: Испания - 3,6 % [17], Хорватия - 7 % [18], Греция - 6 % [19], Швеция - 7,1 % [20], Италия - 6,5 % [21], Беларусь - 6 % [2].
Рис. 2. Сравнительный анализ распределения частоты генотипа Leu/Leu в ряде стран Европы (в процентах).
Данные по частотам мутации Factor V Leiden в популяциях разных стран представлены на рис. 3: Испания - 2 % [22], Хорватия - 3,9 % [23], Греция - 5 % [24], Швеция -11% [25], Италия - 3 % [26], Беларусь - 2,6%
[1], Россия - 2,6 % [27].
Частоты генотипа 40/40 представлены на рисунке 4: Швеция - 11 % [28,29], Италия -3% [30], Беларусь - 2,6 % [2], Россия - 2,6 % [31], Польша - 3 % [32,33].
Рис. 3. Сравнительный анализ распределения частоты мутации Factor V Leiden в ряде стран Европы (в процентах).
Сравнивая частоты выявленных генетических факторов риска в популяциях разных стран Европы, можно отметить, что в Беларуси частоты генотипов риска для полиморфных
вариантов Val34Leu (рис. 2) и 4G/5G (рис. 4) находятся на среднем для Европы уровне, а частота мутации Factor V Leiden - на уровне ниже среднего (рис. 3).
Рис. 4. Сравнительный анализ распределения частоты генотипа 4в/4в в ряде стран Европы (в процентах).
На рис. 5 представлен сравнительный анализ частот генотипов риска ИМ с уровнями этого заболевания в в ряде стран Европы. В ходе статистического анализа данных была выявлена достоверная положительная корреляционная зависимость между частотой заболеваемости ИМ и частотой генотипа 4G/4G (r=0,8871, Р<0,0447).
Таким образом, при сравнении генетических данных показано, что более высокая частота генотипа 4G/4G в популяции соответствует более высокой частоте заболевания ИМ, что свидетельствует о том, что данный генотип вносит существенный вклад в развитие заболевания, что согласуется с данными литературы по другим странам. Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что генотип 4G/4G гена РА1-1 является наиболее информативным для определения генетической предрасположенности к ИМ.
В то же время для частот генотипов и полиморфных аллелей Val34Leu XIII-го фактора свертывания крови и мутации Factor V Leiden V- го фактора свертывания крови достоверной
корреляции с частотой возникновения инфаркта миокарда не наблюдалось.
Так, в России при высокой частоте ИМ только частота генотипа 40/40 из рассматриваемых нами полиморфных вариантов превышает среднеевропейский уровень.
В то же время в Швеции при более высокой частоте генетических факторов риска наблюдаемая частота ИМ даже ниже, чем в Беларуси.
Известно, что в возникновении инфаркта миокарда большое значение имеют средовые факторы риска, такие как гиподинамия, стрессы, курение, диабет, гипертония и другие. Большинство перечисленных факторов связаны с уровнем социального и экономического развития страны, поэтому частота заболеваний во многом зависит от образа жизни людей в разных странах и может не совпадать с частотой генетических факторов риска.
Понятно, что к серьезному увеличению риска инфаркта миокарда приводят не отдельные аллели, а их сочетание в генотипе индивидуума, а также взаимодействие со средовыми факторами.
□ ИМ ■ Leu/Leu ■ FactorV Leiden ■ 4G/4G
Рис. 5. Сравнение частот генотипов риска ИМ с уровнями этого заболевания в разных странах (в процентах).
Заключение
В результате проведенного исследования установлены популяционные частоты генотипов и полиморфных аллелей риска ИМ: Val34Leu XIII-го фактора свертывания крови, 4G/5G гена PAI-1 и мутации Factor V Leiden V- го фактора свертывания крови в популяции Беларуси.
В Беларуси частоты генотипов риска для полиморфных вариантов Leu34Leu и 4G/4G находятся на среднем для Европы уровне, 6 % и 28,9% соответственно, а частота мутации Factor V Leiden на уровне ниже среднего - 2,6%.
Полученные данные по частотам генотипов риска ИМ в Беларуси соотнесли с частотами возникновения инфаркта миокарда в Беларуси и сравнили с соответствующими данными других стран Европы. Самая низкая частота инфаркта миокарда выявлена в Испании, она составляет 0,78 %, самая высокая частота -2,31% - обнаружена в популяции России. Для Греции, Швеции, Италии и Беларуси характерен средний уровень возникновения инфаркта миокарда, в то время как для Польши и Хор -ватии - ниже среднего.
В ходе статистического анализа данных была выявлена достоверная положительная корреляционная зависимость между частотой заболеваемости ИМ и частотой генотипа 4G/4G. В то же время для частот генотипов и полиморфных аллелей Val34Leu XIII-го фактора свертывания крови и мутации Factor V Leiden V- го фактора свертывания крови достоверной корреляции с частотой возникновения инфаркта миокарда не наблюдалось.
Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что генотип 4G/4G гена РАН является наиболее информативным для определения генетической предрасположенности к ИМ.
Известно, что в возникновении инфаркта миокарда большое значение имеют средовые факторы риска, такие как гиподинамия, стрессы, курение, диабет, гипертония и другие. Большинство перечисленных факторов связаны с уровнем социального и экономического развития страны, поэтому частота заболеваний во многом зависит от образа жизни людей в разных странах и может не совпадать с частотой генетических факторов риска.
Список использованной литературы
1. Ассоциация полиморфных вариантов гена PAI-1 и мутации Factor V Leiden с генетической предрасположенностью к инфаркту миокарда / А.Л. Гончар [и др.] // Молекулярная и прикладная генетика. - 2009. - № 1. - С. 114-120.
2. Полиморфные варианты генов системы тромбообразования и их роль в развитии инфаркта миокарда / А. Л. Гончар [и др.] // Артериальная гипертензия. - 2009. - Т. 15, № 4. - С. 466-469.
3. Modulation of the risk of coronary sclerosis/ myocardial infarction by the interaction between factor XIII subunit A Val34Leu polymorphism and fibrinogen concentration in the high risk Hungarian population / E. Balog [et al.] // Thrombosis Research. - 2007. - Vol. 120. - P. 567-573.
4. Factor XIII Val34Leu variant and the risk of myocardial infarction: a meta-analysis / M. Shafey [et al.] // PubMed. - 2007. - Vol. 97.- P. 635-641.
5. Factor ХШ Val34Leu polymorphism and the risk of myocardial infarction / L. S. Rallidis, M. // Thromb. Haemost. - 2008. - Vol. 99. - P. 1085-1089.
6. Sadasivan, C. Interaction of the factor ХШ activation peptide with thrombin / C. Sadasivan, V C.
Yee // J Biol Chem. - 2000. - Vol. 275. - P. 362-368.
7. Joint linkage and association of six single-nucleotide polymorphisms in the factor XIII-A subunit gene point to Val34Leu as the main functional locus / M. de Lange [et al.] // Arteriosclerosis, thrombosis and vascular biology. -2006. - Vol. 26. - P. 1914-1919.
8. Mansilha, A. The association between the Val34Leu mutation in the factor XIII gene and deep venous thrombosis in young people / A. Mansilha, F. Araujo // Dialnet. - 2009. - Vol. 12. - P. 5-8.
9. Молекулярно-генетический анализ полиморфизмов Т^312Ак и Val34Leu как факторов риска инфаркта миокарда / А.Л. Гончар [и др.] // Молекулярная и прикладная генетика. - 2008. - С. 75-80.
10. Saksela, O. Cell-associated plasminogen activation:regulation and physiologic functions / O. Saksela, D.B. Rifkin // Annu Rev Cell Biol. -1988. - № 4. - Р. 93-126.
11. Increased type 1 plasminogen activator inhibitor gene expression in atherosclerotic human arteries / J. Schneiderman [et al.] // Proc Natl
Acad Sci USA. - 1992. - № 89. - Р. 6998-7002.
12. Allele specific increase in basal transcription of the plasminogen activator inhibitor-1 gene is associated with myocardial infarction / P. Eriksson [et al.] // Proc Natl Acad Sci USA. - 1995. - № 92. - P. 1851-1855.
13. Genetic variation in coagulation and fibrinolytic proteins and their relation with acute myocardial infarction: a systematic review / S.M. Boekholdt [et al.] // Circulation. - 2001. -№ 104. - Р. 3063-3068.
14. The 4G/5G polymorphism in the plasminogen activator inhibitor-1 gene is not associated with myocardial infarction / C.J. Doggen [et al.] // Thromb Haemost. - 1999. - № 82. - P. 115-120.
15. 4G/4G genotype of PAI-1 gene is associated with reduced risk of stroke in elderly / T. Hoekstra [et al.] // Stroke. - 2003. - № 34. - P. 2822-2828.
16. Сайт Всемирной Организации Здравоохранения [Электронный ресурс] / Европейская база данных «здоровье для всех». -Минск. - 2010. - Режим доступа: http://www. euro.who.int/hfadb?language=Russian.
17. Corral, J. Factor ХПГVal34Leupolymorphism in primary intracerebral haemorrhage / J. Corral, J. A. Iniesta // The hematology journal. - 2000. -Vol. 1. - P. 269-273.
18. Factor XIII Val34Leu Polymorphism in Croatian Population / A. Bronic [et al.] // XX Congress of the International Society on Thrombosis and Haemostasis, Sydney, 06.12.08.2005 - Sydney, 2005. - С. 69-75.
19. Mutations and Polymorphisms in Genes Affecting Haemostasis Components in Children with Thromboembolic Events / A. Komitopouloua [et al.] // Pathophysiol. Haemos. Thromb. - 2006. - Vol. 35. - P. 392-397.
20. The genetics of haemostasis: a twin study / M. de Lange [et al.] // The Lancet. - 2004. -Vol. 357. - P. 101-105.
21. Polymorphisms in the Coagulation Factor VII Gene and the Risk of Myocardial Infarction / L. Iacoviello [et al.] // The new England journal of medicine. - 2000. - Vol. 338. - P. 79-85.
22. Lucotte, G. Population genetics of factor V Leiden in Europe / G. Lucotte, G. Mercier // Blood cells, molecules and diseases. - 2001. -Vol. 27. - P. 362 - 367.
23. -455G/A [beta]-fibrinogen gene
polymorphism, factor V Leiden, prothrombin G20210A mutation and MTHFR C677T, and placental vascular complications / R. S. Camilleri [et al.] // Blood coagulation and fibrinolysis. -
2004. - Vol. 15. - P. 139-147.
24. Prevalence of prothrombotic polymorphisms in Greece / A. Gialeraki [et al.] // Genetic testing. - 2008. - Vol. 12. — P. 541-547.
25. Factor V Leiden gene mutation and thrombin generation in relation to the development of acute stroke / A. Catto [et al.] // Arteriosclerosis, thrombosis and vascular biology. - 2004. -Vol. 17. - P. 783-785.
26. World distribution of factor V Leiden / D. C. Rees [et al.] // The Lancet. - 2002. - Vol. 346. - P. 1133-1134.
27. Age as a risk factor for myocardial infarction in Leiden mutation carriers / S. Baranovskaya [et al.] // Molecular genetics and metabolism. - 2006. - Vol. 84. - P. 155-157.
28. Fibrinolytic gene polymorphism and ischemic stroke / K. Jood [et al.] // Stroke. -
2005. - № 36ю - P. 2077-2081.
29. Cohorts replicated findings in two nested case-control studies based on independent plas-minogen activator inhibitor-1 4G/5G polymorphism and risk of stroke / P.-G. Wiklund [et al.] // Stroke. - 2005. - № 36. - P. 1661-1665.
30. The PAI-1 gene locus 4G/5G polymorphism is associated with a family history of coronary artery disease / M. Margaglione [et al.] // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 1998. - № 18. -P. 152-156.
31. Капустин, С.И. Молекулярно-генети-ческие аспекты патогенеза венозного тром-боэмболизма: автореф. дис. д-ра биол. наук.: 14.00.29; 03.00.04 / С.И. Капустин; Рос. науч.-исслед. ин-т гематологии и трансфузиологии РФ. - СПб., 2007. - 294 с.
32. Plasminogen-activator-inhibitor-1 promoter polymorphism as a risk factor for adult periodontitis in non-smokers / L. Izakovicova-Holla [et al.] // Genes and Immunity. - 2002. -№ 3. - P. 292-294.
33. Blasiak, J. Plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) gene 4G/5G promoter polymorphism is not associated with breast cancer / J. Blasiak, B. Smolarz // Acta Biochimica Polonica. - 2000. - № 47. - P. 191-199.
Дата поступления статьи 16 июля 2010 г.
